PRACTICA N°5.
EXTRACCION Y procesos de regulación, defensa, catálisis,
DETERMINACION DE PROTEINAS
Nathalie Sadjey Dávila Roa
Cristian Camilo Arévalo López
Dany Sebastián Pérez Ramírez
RESUMEN
Las proteínas son moléculas formadas por
aminoácidos que están unidos por un tipo de
enlaces conocidos como enlaces peptídicos.
El orden y la disposición de los aminoácidos
dependen del código genético de cada
persona. Todas las proteínas están
compuestas por: Carbono, Hidrógeno,
Oxígeno, Nitrógeno; la mayoría contiene
además azufre y fósforo.
Existen varios métodos para la
determinación de proteínas y estos se basan
principalmente en reacciones químicas del
grupo arilo o alquilo de los aminoácidos.
La reacción del biuret es una reacción
coloreada (violeta) debido a la formación del
complejo Cu en un medio alcalino con
compuestos que poseen grupos -CO-NH.
La ninhidrina es específica para aminoácidos
y proteínas, para diferenciar entre
carbohidratos y aminoácidos y proteínas.
Reacciona con todos los α-aminoácidos
contenidos en la proteína.
Mediante pruebas químicas cualitativas se
logró observar las diferencias en las
proteínas mediante, la prueba de biuret y la
prueba de ninhidrina, esto se hizo mediante
sustancias o reactivos químicos con los
cuales se ha logrado observar la coloración
azul en la mayoría de los tubos ya que esta
coloración nos identifica la presencia de
proteínas.
INTRODUCCION
El nombre proteína deriva del griego
“proteios”, que significa la primera
importancia son los componentes esenciales
de la estructura, están relacionados con los
coagulación, etc. Función diferente de los
carbohidratos y las grasa que proporcionan
energía. Este laboratorio es elaborado con el
fin de determinar las proteínas con reactivos
químicos, las proteínas tienen 4 niveles.
Primario es aquel que los aminoácidos
conforman la molécula y se puede separar
por cromatografía después de hidrolizar los
enlaces peptídicos.
Secundario es aquel que tiene relaciones
espaciales do los aminoácidos colocados
junto al nivel primario.
Terciario es un espacio de hélices en forma
tridimensional de las moléculas.
Cuaternario está compuesta por dos o más
cadenas polipeptídicas.
Las sustancias o reactivos químicos usados
para poder determinar si es positivo o
negativo la presencia de proteínas y estos
son las pruebas de biuret y ninhidrina.
PRUEBA DE BIURET
Esta sustancia es un compuesto de color
violeta que es positiva el cual me muestra
que si hay presencia de proteínas y una
coloración azul que me determina que es
negativa.
PRUEBA DE NINHIDRINA
Este reactivo es muy similar a la prueba de
biuret ya que también muestra la presencia
de proteínas solo que este da una coloración
violeta azulejó el cual dice que la muestra es
positiva y una coloración amarilla o café en la
que indica que la muestra es negativa.
El objetivo con el cual se realizó esta práctica
fue determinar y realizar la extracción de la
presencia de proteínas en diferentes
sustancias, utilizando otros tipos de métodos
químicos.

PROCEDIMIENTO
ACTIVIDAD 1. Extracción de caseína
1. Se colocaron 200 mL de leche descremada
en un vaso de 400 mL. Calentándola
utilizando la plancha de calentamiento
durante 5 minutos a 40°C.
2. Posteriormente se añadieron por el
método gota a gota el ácido acético al 10%.
Agitando continuamente la mezcla
3. Agitando la caseína se logra evidenciar la
forma de una gran masa.
4. Separando la caseína por filtración con
ayuda de un colador.
5. Posteriormente se procedió a pesar la tapa
de la caja de Petri. Para luego, colocar el
sólido obtenido (caseína) a la tapa en la caja
de Petri pesada.
6. Dejando la caja de Petri con el sólido en un
horno de secado durante 24 horas a 60 °C.
7. 8 días después de la práctica se procedido
al pesaje de la caja Petri con el sólido seco
(Frío) para así lograr determinar el
rendimiento de extracción de la caseína.
ACTIVIDAD 2. Extracción de albúmina de
clara de huevo
1. Se extrajo cuidadosamente un vaso de 150
mL la clara de un huevo de gallina.
2. Se tomaron 2 g con ayuda de la pipeta,
desechando la clara de huevo restante. Se
adicionaron posteriormente a los 2 g de clara
de huevo 20 mL de tampón fosfato
3. Con ayuda de la varilla de vidrio se
procedió a agitar la mezcla hasta que se
logró obtener una mezcla homogénea.
4. Se distribuyó la muestra en dos tubos de
centrífuga
5. Se procedió a colocar los tubos en la
centrifuga a velocidad máxima durante 10
minutos.
6. Posteriormente al cumplirse el tiempo,
con ayuda de la pipeta se retiró el
sobrenadante cuidadosamente en un vaso
de precipitado, desechando los flósculos y
sedimentos. El sobrenadante resultante es
una solución proteica de albúmina de
aproximadamente 10 mg/mL. Rotule esta
muestra como MAH (Muestra de albumina
de huevo)
Actividad 3. Precipitación de proteínas.
Dicha actividad se efectuó con la disolución
de albúmina obtenida (MAH).
1. Se rotularon cinco tubos de ensayo del 1 al
5, añadiendo a cada uno 1 mL de la
disolución MAH.
2. Cada tubo fue expuesto a diferentes
factores con el fin de observar los cambios
ocurridos en cada uno de la siguiente
manera:
a) Calor: tubo 1 a baño maría (ebullición)
durante 5 min.
b) Medio ácido: tubo No 2, 1 mL de ácido
tricloroacético al 10 %. Posteriormente se
agito hasta la obtención total de la mezcla
c) Medio básico: No 3, 1 mL de hidróxido de
sodio al 10 %. Posteriormente se agito
hasta la obtención total de la mezcla
d) Disolventes orgánicos: tubo No 4, 2 mL de
acetona. Posteriormente se agito hasta la
obtención total de la mezcla
 e) Cationes pesados: tubo No 5, 1 mL de (MAH) 2
acetato de plomo. Posteriormente se R. Biuret 1 1 1 1 1 1
agito hasta la obtención total de la mezcla
AGITA
R
Actividad 5. Preparación de extractos
CuSO4 al 5 1 1 1 1 1 1
%

1. Uno a uno se procedió al pesaje deNaOH

la 30 % 1 1 1 1 1 1
papa, del cítrico y la carne. Tabla 1, Clasificación de tubos prueba biuret
Posteriormente se procedió a licuar
por separado cada uno de los
materiales con 100 mL de agua 2. Después de observar la
destilada. coloración de las soluciones. Se
evidencio una coloración azul la
2. Se filtraron las muestras con la ayuda
cual indica presencia de
de un colador. Conservando los
proteínas, entre más intenso sea
líquidos en diferentes vasos de el color, indica mayor contenido
precipitado. de proteínas.
3. Se pesaron 30 g de muestra de
harina de leguminosa en un vaso de
precipitado, se agregó agua destilada Actividad 7. Prueba de Ninhidrina
hasta que se cubrió completamente, 1. Se prepararon los siguientes tubos
agitando durante 5 minutos. con un orden especifico el cual fue:
Conservando el líquido obtenido.
(Filtrado de leguminosa)
4. Para el caso de la caseína, se 2. Homogenizando cada tubo con sus
colocaron una pequeña porción en respectivos elementos, se calentaron
un tubo de ensayo con la ayuda de la a baño maría durante 10 minutos.
espátula, agregando 6 mL de agua
destilada y agitándola suavemente. 3. Se realizó el respectivo análisis
(Sln caseína) cualitativo para cada tubo
Actividad 6. Reconocimiento de sustentando lo ocurrido; para los
casos en que ocurra una reacción
proteínas:
química describir la respectiva
1. se prepararon los siguientes ecuación y donde no ocurrió dicha
tubos con un orden especifico el reacción, justificar conceptualmente.
cual fue: La aparición de coloración azul indica
Tubo 1(mL 2(mL) 3(mL 4(mL 5(mL 6(mL la presencia de proteínas o
) ) ) ) ) aminoácidos libres.
Cítrico 2
F.carne 2
F. de papa 2
F.leguminos 2
a
Sln caseína 2
ANALISIS DE LOS RESULTADOS
FIGURA 1. Extracción caseína.
Se puso a calentar 200ml de leche
descremada en un vaso precipitado durante
10 minutos hasta alcanzar una temperatura
de 40°C, luego se aplicaron gotas de ácido
acético al 10% hasta que no se precipito más
la caseina, luego se agita hasta observar una
masa amorfa la cual se separó con ayuda del
colador. Luego de hacer el todo el
procedimiento para obtener la caseína de la
leche este fue el resultado; esta muestra se
colocó en proceso de secado durante ocho
días.
FIGURA 2. Secado de la caseína.
Luego de ocho días en la cámara de secado la
caseína se deshidrato dando un peso final de
52.6g
FIGURA 3. Primer set de tubos con la
albumina después de haber sido
centrifugados.
Se colocó la clara de huevo en 2 tubos los
cuales fueron llevados a la centrifuga
durante 10 minutos para obtener la
albumina, se rotularon 5 tubos para los
cuales el procedimiento sería diferente.
Tubo1. Lo llevamos a baño de maría hasta el
punto de ebullición en este tubo la albumina
se coagulo y tomo un color blanco
Tubo 2. Se añadió 1ml de ácido
tricloroacetico al 10% y se agito; este tomo
una coloración blanca
Tubo 3. Se añadió 1ml de hidróxido de sodio
al 1% y se agito; este no tomo ninguna
coloración
Tubo 4. Se le añadieron 2ml de acetona y se
agito; este tomo una coloración blanco
traslucido
Tubo 5. Se añadió 1ml de acetato de plomo y
se agito; presento una coloración blanca
 FIGURA 6. Se procedió a agregar 1ml en
cada tubo de NaOH al 30% dando como
FIGURA 4. Sed de tubos con filtrados de los
resultado una coloración azulada en la
productos.
mayoría de tubos.
En este sed de tubos se observa el líquido
resultante de la filtración de cada uno de los
Tubo con caseína: este tubo reacciona a la
productos (carne, caseína, albumina, arveja,
prueba tomando una coloración azul rey
limón, papa)
indicando una gran concentración de
proteínas. Tubo con albumina: su reacción da
Tubo con caseína: presento una coloración
como resultado un color azul petróleo lo que
violeta clara
indico una mayor concentración de proteína
Tubo con albumina: presento una coloración
que la caseína.
violeta traslucido
Tubo con arveja: su tonalidad final fue un
Tubo con arveja: tomo una coloración doble
azul un poco más claro que el de la albumina
en la parte de arriba da una tonalidad café y
dando como resultado una concentración
en la parte inferior da como resultado un
mayor que la proteína y que la albumina.
color violeta pálido
Tubo con limón: la tonalidad final de este
Tubo con limón: su coloración fue un verde
producto dio como resultado una tonalidad
claro un poco traslucido
verde aguamarina que indico su baja
Tubo con papa: su tonalidad fue un café
concentración de proteína.
traslucido casi sucio
Tubo con papa: su coloración fue más o
Tubo con carne: su coloración es de un rojo
menos igual que el de la caseína esto nos
sangre
indicó que pueden tener la misma
concentración de proteína.
Tubo con carne: este producto da como
resultado un tono mucho más oscuro que los
anteriores, podemos concluir que su
concentración de proteína es la más elevada proteínas en los diferentes productos dando
en comparación con los demás. así un resultado en la carne mayor
concentración de estas.

CONCLUCIONES

 Los resultados de este laboratorio

nos permitieron visualizar la
concentración de proteínas en
diferentes productos; estos dan
como resultado diferentes
tonalidades de color siendo un color
oscuro el de mayor concentración y
un color claro o pálido el de menor
concentración proteica.
 Se pudo comprobar que en la
mayoría de sustancias hubo
presencia de proteínas

FIGURA 7. Se agregó 1ml de ninhidrina en BIBLIOGRAFIA

etanol al 1%,
 Angel Gil. Tratado de nutrición /
inicialmente esta no tubo reacción alguna al
Nutrition Treatise: Composición Y
contacto con los productos (carne, papa,
Calidad Nutritiva
arveja, albumina, caseína, limón)
 Armstrong, F. Bioquímica.
Editorial Reverte, S.A. Barcelona –
España. 1982.
 Martha Isabel Martínez Martínez
y Ana Elvira Ortiz Amaya. Manual
de laboratorio bioquímico.
Fundación universitaria Juan de
Castellanos
 González Rodríguez, Lucia.
Manual de Laboratorio
Bioquímica I. Facultad de
Medicina Veterinaria y Zootecnia,
Universidad Nacional de
Colombia. Bogotá, 1997.
 Miguez, J. Bioquímica. Instituto
Universitario Juan de Castellanos.
Tunja, 1995.
 BOHINSKI Bioquímica. Editorial
Pearson. 1995 GARZON,
Guillermo.
FIGURA 8. Transcurridos los 10 minutos
La reacción de cada tubo fue una coloración
más oscura, esto evidencio la cantidad de
 Fundamentos de Química
General. Editorial McGraw Hil.
2000.
 CAMPBELL, Mary y FARREL,
Shawn. Bioquímica. Editorial
Thomson. México. 2004
 PACHECO LEAL, Daniel.
Bioquímica Médica. Editorial
Limusa. México. 2005