DETERMINACIÓN DE LA TASA ESPECIFICA DE CRECIMIENTO DE UN CULTIVO

PURO DE Bacillus sp EN CALDO ALMIDÓN EXTRACTO DE LEVADURA (CAEL)

I. OBJETIVO

- Determinar la tasa especifica de crecimiento de un cultivo puro de Bacillus sp en Caldo

Almidon Extracto de Levadura (CAEL)

II. INTRODUCCIÓN

El crecimiento es el incremento ordenado de los constituyentes químicos de los

microorganismos en el número de células o en la masa celular y la Tasa de crecimiento es el
cambio en el número de células o masa celular por unidad de tiempo (John,2004).

El crecimiento de organismos puede verse como el incremento de material celular expresado

en términos de masa o número de células y procede de una serie de pasos biológicos
coordinados y muy complicados catalizados enzimáticamente. El crecimiento dependerá de la
disponibilidad y transporte de nutrientes necesarios para la célula y su subsiguiente captación
y del mantenimiento óptimo de los parámetros medioambientales tales como la temperatura,
el pH y la aireación (John,2004).

La tasa específica de crecimiento = μ , es la tasa (velocidad) a la cual una población microbiana

se duplica en un tiempo determinado (fase Exponencial)( Antibiot,2008).

El género Bacillus, perteneciente a la familia Bacillaceae, y sus especies más representativas:

B. subtilis, B. brevis, B. cereus, B. pumilus, B. licheniformis y B. amyloliquefaciens ofrecen una
importante alternativa como agentes de control biológico (BCAs) gracias a su ubicuidad en el
suelo, a la producción de esporas resistentes a la desecación, calor, irradiación UV y solventes
orgánicos; por ser promotor de crecimiento en plantas; a su sistema de resistencia inducida
(ISR), además de la producción de sustancias de tipo enzimático (Quitinasa, β-1,3 glucanasa,
xilanasa) y antibiótico (Iturinas, surfactinas y fengicinas) (Brock,2010).
III. MATERIALES

3.1 Material Biológico

- Cultivo puro de 72h de Bacillus sp
3.2 Medios de cultivo
- Caldo de almidon Extracto de levadura ( CAEL) a diferentes concentración de
almidon ( 0.25 , 0.5, 0.75, 1.0 %)
3.3 Reactivos
- Set de gran
- Aceite de cedro
3.4 Material de vidrio

- 70 placas Petri (estériles)

- 04 matraces de 250 ml ( con 45 ml de CAEL a diferente concentración de
almidon
- 04 matraces de 500 ml( con 450 ml de PCA)
- 04 tubos de ensayo de 16 x 150 mm ( con 0.9 ml de SSFE)
- 160 frascos de penicilina ( con 4.5 ml de SSFE)
- 04 frascos de vidrio de 200 ml ( con 100 ml de ADE)
- 20 pipetas serologícas de 1 ml ( estériles)
- 16 pipetas seologicas de 5ml ( estériles)
- 02 asas bacteriológicas
- 02 mecheros de ron
- 04 laminas portaobjetos
- Tubo N°03 de Mc Farland

3.5 Equipos
- 01 microscopio de luz compuesto
- 01 incubadora calibrada a 35°C
- 01 contadora de colonias
- 01 cocina eléctrica

3.6 Otros
- Pabilo
- Algodón
- Papel de molde
- Plumón de tinta indeleble
IV.PROCEDIMIENTO
4.1 Del desarrollo del cultivo puro de Bacillus sp en agar nutritivo 72h hacer una
suspensión turbia igual al tubo N°3 de Mac Farland. Comprobar pureza de la
suspensión bacteriana (Col de Gram y hacer la observación a mayor aumento)
4.2 De la suspensión anterior, hacer una dilución 10 e inocular 5 ml en cada uno de los 4
matraces conteniendo 45 ml de CAEL con diferente concentración de almidón (0.25,
0.5 0.75 y 1.0 % )
4.3 Llevar a incubar a 35°C y hacer las tomas de muestra a las 0,4, 8 , 12 y 24 horas. Hacer
diluciones, según cuadro, y hacer los recuentos microbianos por el método del
recuento en placa por incorporación.
4.4 Después de incubar por 48 horas, hacer los recuentos de colonias e informar del
numero de unidades formadoras de colonias (UFC/ml)
4.5 Hacer un ploteo del numero de UFC/ml versus tiempo y obtener las tasas especificas
de crecimiento en cada una de las concentraciones de almidón
4.6 Graficar los inversos de las tasas de crecimiento versus los inversos de las
concentraciones de sustrato y obtener Ks, U máx , S a cualquier u , etc

VII. DISCUSIÓN

La tasa de crecimiento realizada en el laboratorio no es la misma con la que se está

elaborando los datos debido a posibles fallas en el recuento, diluciones al tiempo, medio
de cultivo, homogenización, etc.. Según la elaboración de los datos, la bacteria alcanza
su tasa de crecimiento máxima (1,136) al 1,23 gr de almidón en el biorreactor.

VIII. CONCLUSIONES

Se logró determinar la tasa especifica de crecimiento de un cultivo puro de Bacillus sp

en Caldo Almidon Extracto de Levadura (CAEL).

IX. BIBLIOGRAFIA
- J. Antibiot. 2008. Cultivo de microorganismos. Universidad Pública de Navarra.
- John E. 2004.Smith. Biotecnología Editorial Acribia.
- Brock,T.D & M.T. Madigan.2010. Microbiología. Editorial Hispanoamericana.
México
 PRACTICA 02: “DESARROLLO DE INOCULO DE Saccharomyces cerevisiae A NIVEL
DE LABORATORIO”

I. INTRODUCCIÓN

Un inoculo microbiano es una preparación solida o líquida la cual contiene una gran cantidad de
microorganismos, como bacterias y hongos. Estos microorganismos se encuentran activados, es
decir son viables y están listos para ser, como su nombre lo dice, inoculados en un medio de
cultivo o en un biorreactor. Se toman en cuenta diferentes aspectos como la cantidad de
inoculo y la concentración del microorganismo en el inoculo, esto con el fin de que el medio y
los requerimientos que el microorganismo necesite, sean los necesarios y no le haga falta nada
para su correcto crecimiento (Hernández,2000)

El crecimiento de un microorganismo se define como un incremento progresivo de células

cuando se les proporciona un sustrato adecuado rico en nutrientes, vitaminas y minerales.
Durante este proceso, muchos microorganismos son capaces de usar estos nutrientes para
llevar a cabo sus procesos celulares y muchos de sus funciones eliminando productos de
desecho al medio. Existen modelos matemáticos que permiten predecir la velocidad de
crecimiento de los microorganismos bajo determinadas condiciones ambientales (Serna,2005)

La biotecnología moderna está compuesta por una variedad de técnicas derivadas de la

investigación en biología celular y molecular, las cuales pueden ser utilizadas en cualquier
industria que utilice microorganismos o células vegetales y animales. Levadura es un nombre
genérico que agrupa a una variedad de organismos unicelulares, incluyendo especies patógenas
para plantas y animales, y especies no solamente inocuas sino de gran utilidad (González y
Valenzuela, 2003), Saccharomyces cerevisiae es una levadura que constituye el grupo de
microorganismos más íntimamente asociado al progreso y bienestar de la humanidad; su nombre
deriva del vocablo Saccharo (azúcar), myces (hongo) y cerevisiae (cerveza), (Hernández, 1999).

Los cultivos de levaduras Saccharomyces cerevisiae presentan varias características importantes:

No son patógenos, ni tóxicos, no se absorben en el tracto digestivo, no dejan residuos en los
tejidos animales, se utilizan en pequeñas cantidades, Proliferan in vivo e in vitro, promueven el
crecimiento de bacterias celulolíticas., son estables a temperaturas elevadas y no causan
mutación

Las levaduras requieren para su óptimo crecimiento un ambiente acuoso, pH con rango de 3.5 a
5.0, posiblemente debido a que la actividad de las proteínas plasmáticas de las levaduras en los
límites de su membrana se da en estos valores de pH (Dawson, 1990). en estas condiciones de
pH requerido para el crecimiento de la levadura, la actividad bacteriana a nivel ruminal
tendríaconsecuencias detrimentales para los microorganismos y para los rumiantes; aunque las
levaduras mantienen su actividad metabólica y resisten el estrés físico asociado con el secado,
calentamiento y exposición al pH ácido en condiciones anaeróbicas.El rango de temperatura
óptima para el crecimiento de las levaduras es de 28 a 30 ºC, con sobrevivencia a 37 ºC por medio
de la formación de ascosporas, aunque a 39 ºC que es la temperatura del ambiente ruminal, se
ve afectado su crecimiento y disminución de la viabilidad de la levadura a 48 h de incubación
(Dawson, 1990).
II. MATERIALES Y MÉTODOS

- Frascos de penicilia
- Matraz 250 ml
- Bioreactor
- Microscopio
- Placas Petri

El procedimiento para preparar el inóculo incluye tres etapas: la recuperación

de la cepa, el crecimiento del microorganismo en un medio de cultivo sólido y
el crecimiento del microorganismo en un medio de cultivo líquido.
El crecimiento en un medio de cultivo sólido: Una vez preparada la suspensión
de microorganismos, se toma una asada (muestra) y se siembra en un medio
de cultivo sólido en el interior de tubos de agar inclinado. Se incuba a la
temperatura y el tiempo adecuados.
El crecimiento en un medio de cultivo líquido
Se toma una asada del crecimiento del microorganismo en el medio de cultivo
sólido y se introduce en matraces Erlenmeyer de 100 o 250 mL de capacidad,
que contienen un medio de cultivo líquido (en una cantidad que varía del 10 al
20% de su capacidad). Luego, se esterilizan y se incuban, de acuerdo con los
requerimientos ambientales del microorganismo.
IV. COMENTARIO

Los aspectos por considerar en la preparación del inóculo, es la cantidad de inoculo

que se prepara y se agrega, en la mayoría de los casos, es el 10% del volumen total de
trabajo: si se va a trabajar con un volumen final de un litro, se debe preparar 100
mililitros de inoculo. En el caso de que el volumen requerido sea muy grande, el
inoculo se debe prepara en varias etapas. Durante la preparación del inoculo, se
recomienda mantener condiciones estrictas de higiene y esterilidad en los equipos,
así como hacer varias pruebas de pureza, porque el cultivo se puede contaminar en el
paso de una etapa a otra.

La concentración de microorganismos también es un parámetro vital que se debe

conocer en un proceso de fermentación, pues suministra datos no solo relacionados
con la curva de crecimiento del microorganismo, sino con la cantidad de
microorganismos con la que se debe iniciar el proceso. Cuando el producto deseado
es la biomasa, la concentración de microorganismos representa la eficiencia del
proceso. Si el interés va dirigido hacia los metabolitos, el mismo parámetro (la
concentración de microorganismos) es una medida indirecta de su producción.

Los Biorreactores son los equipos donde se realiza el proceso de cultivo (también
comúnmente denominado “fermentador”), sea en estado sólido o líquido. Su diseño
debe ser tal que asegure homogeneidad entre los componentes del sistema y
condiciones óptimas para el crecimiento microbiano y la obtención del producto
deseado. Algunos de los factores principales que afectan el crecimiento microbiano
en ciertos sustratos son la temperatura y el pH, por lo cual deben tenerse en cuenta
para lograr una determinada predicción.

V. BIBLIOGRAFIA

- Dawson, K. A. Newman, K.E y Boling, J.A. 1990. Effects of microbial supplements

containing yeast and lactobacilli on roughage-fed ruminal mi-crobial activities. J. Anim.
Sci. 68:3392-3398.
- González, A., Valenzuela, L. 2003. Saccharomyces cerevisiae. La levadura Saccha-
romyces cerevisiae: un modelo de estudio desde hace más de cien años. Temas de
ciencia y tecnología. Vol. 11 Numero 32 p. 51-62.
- Hernández, D. R.1999. Efecto de un cultivo de Saccharomyces cerevisiae en
consumo, digestibilidad y variables rumínales en borregos alimentados con pasto
ovillo (Dactylis glomerata) cosechado a dos intervalos de rebrote. Tesis de maestría
en ciencias. Colegio de Posgraduados, Montecillo Méx.74 p.
- Hernández Alicia, Alfaro Ileana, Arrieta Ronald, 2000. Microbiología Industrial. Ed.
Universidad Estatal. España. pp. 27-29.
- Serna Cock,2005. Producción Biotecnológica de Ácido Láctico. Redalyc