Transcripción en Células Procariotas

 La expresión génica se concretiza por la transformación de la información genética desde

moléculas de ADN a moléculas de ARN y desde estas hasta los poli péptidos
correspondientes.
 Las moléculas de ARN son sintetizadas usando como molde a segmentos específicos de
ADN,

Debemos tener en cuenta antes de sumergirnos en el proceso de transcripción:

A) Los precursores en la síntesis de ARN (unidades estructurales) son cuatro

ribonucleótidos trifosfatados: rATP; rCTP; rGTP; rUTP

B) La secuencia de bases, del ARN a polimerizar, esta determinada por medio de la

secuencia de bases de la molécula de ADN utilizada como molde para su síntesis. He ahí que se
la denomine Cadena Molde de ADN.

C) La cadena de ARN crece en dirección 5’ – 3’.

Esta dirección coincide con la síntesis de ADN.

D) La ARN polimerasa, a diferencia de la ADN polimerasa, es capaz de iniciar su

síntesis sin la presencia de ningún tipo de molécula cebadora.

Etapas en la síntesis del ARN mensajero

1° etapa- UNIÓN de la ARN polimerasa al ADN

2° etapa- INICIACIÓN de la síntesis

3° etapa- ELONGACIÓN de la cadena de ARN mensajero

4° etapa- TERMINACIÓN de la síntesis y liberación de la cadena de ARNm.

 Características de la ARN polimerasa procariota

 enzimas más grandes que se conoce. Consta de cinco sub-unidades: dos alfa (α), beta (β),
beta prima (β’) y sigma (σ). La enzima completa es denominada Holoenzima y se divide en
dos componentes principales:

• La enzima central, denominada Core, formada por las sub unidades 2α, β y β’

• El Factor Sigma ( el polipéptido σ)

 la Holoenzima tiene la capacidad de unirse a la cadena molde de ADN e iniciar la

transcripción;
 factor σ el que le da la capacidad a la ARN polimerasa para poder iniciar la síntesis del
ARN mensajero en el sitio apropiado.
 La Holoenzima reconoce un sitio de unión específico en el ADN, este sitio es denominado
Promotor.Como consecuencia de lo dicho, la ADN polimerasa puede encontrarse en
dosestados:

1) Un estado apropiado para la unión con el Promotor: “estado de iniciación” u Holoenzima.

2) Un estado apropiado para la elongación: Core de la enzima

La unión de la Holoenzima con el promotor, determina el Complejo Promotor Abierto

El Promotor Procariota: la señal de inicio

El ARN polimerasa se une un sitio específico delADN denominado Promotor. La enzima es capaz
de reconocer este sitio del ADN y, convenientemente, abrir localmente las cadenas de ADN para
poder leer la cadena molde. Es de esperarse entonces que, el sitio de contacto con la Holoenzima
tuviese regiones comunes a todos los Promotores. “Secuencias de Consenso”.

la transcripción de un gen determinado es hacia la derecha. Al punto en el cual se inicia este

proceso selo denomina “punto 0”.
La secuencia de consenso es TATAAT y se la denomina “TATA box o Caja Pribnox”. Esta caja es
Responsable de orientar a la ARN polimerasa en la dirección de síntesis de ARN y es la región en la
cual la doble hélice se abre para formar el Complejo Promotor Abierto.

INICIACIÓN de la síntesis del ARN mensajero

 La iniciación se produce mediante la unión de la ARN polimerasa (Holoenzima) al ADN de

doble cadena.
 las dos cadenas de ADN deben separarse.
 El desenrollamiento es local y se produce cuando la Holoenzima contacta con la TATABox.
 Una vez que el complejo promotor se encuentra abierto, la ARN pol. Comienza la síntesis.
 La fase de iniciación no se completa hasta que se hallan polimerizado los primeros seis
ribonucleótidos.

ELONGACIÓN de la cadena:

 Después que se han colocado los primeros seis ribonucleótidos, la ARN polimerasa sufre
un cambio en su conformación, perdiendo la sub unidad σ.
 Se continúa la síntesis en el estado de Core
 El Core se mueve a lo largo del ADN colocando los ribonucleótidos complementarios a la
cadena de ADN molde, abriendo la hélice a medida que se desplaza.
 Los ribonucleótidos se unen al extremo 3’ de la cadena de ARN en crecimiento,
formándose un Híbrido ARN-ADN en la región desenrollada, el cual se mantiene
estabilizadomediante enlaces puente de Hidrógeno. (longitud aproximada de 12Pb) y el
nuevo ARN es liberado de estas uniones cuando el ADN recupera su estado de doble hélice
por desplazamiento del Core.

TERNINACIÓN y LIBERACIÓN del ARN sintetizado

 La terminación ocurre en una secuencia determinada del ADN, denominada Secuencia

Ternimadora.
 la enzima deja de añadir los ribonucleótidos a la cadena de ARN en crecimiento, liberando
el producto terminado y disociándose del ADN.
 La terminación requiere que todos los enlaces Puente de Hidrógeno, que mantenían al
Híbrido ARN – ADN, se rompan volviéndose a reconstituir el ADN dúplex.

Las secuencias terminadoras muestran las siguientes similitudes:

i) Todas contienen secuencias Palindrómicas justo antes del punto de terminación.

ii) La secuencia palindrómica continúa con una secuencia de pares A-T, las cualesproducen en el
ARN mensajero una secuencia de 6 a 8 Uracilos en el extremotranscripto.
La secuencia de Uracilos suministra la señal que permite a la ARN polimerasa disociarse del ADN
molde.

ESTRUCTURA DEL ARN mensajero PROCARIOTA

 Un ARNm que codifica para una cadena polipeptídica simple se denomina ARNm
Monocistrónico.
 En células Procariotas es común hallar ARNm que codifican para varias cadenas
polipeptídicas diferentes, en este caso esta molécula se denomina ARNm Policistrónico.
 Todo ARNm contiene dos tipos de regiones, una codificante y otra no codificante.
 Los ARNm Policistrónicos presentan secuencias de longitud variable que separan las
regiones codificantes o Cistrones, estas se denominan regiones espaciadoras
 Por lo general las proteínas codificadas por un ARNm Policistrónico, participan en una
misma vía metabólica

Esquema del ARNm policistrónico:

Transcripción en Células Eucariotas

La estructura de los ARNm y el proceso de transcripción en las células eucariotas, es similar a lo

expresado anteriormente para las células procariotas. Sin embargo hay las siguientes diferencias:

a) Las células eucariotas poseen tres clases de ARN polimerasas (I, II y III), las cuales se utilizan
para sintetizar los distintos tipos de ARN existentes.

b) Los extremos 3’ y 5´ de los ARNm están modificados. En el caso del extremo 5’ encontraremos
una estructura denominada CAP y, en el correspondiente extremo 3’, se encuentra adherido una
larga secuencia denucleótidos cuya base nitrogenada es la Adenina (Cola Poly A)

c) Las moléculas de ARNm, luego de ser sintetizas, son modificadas. Los “transcriptos primarios”
eucariotas sufren un proceso por el cual determinadas secuencias (Intrones) son eliminadas.

d) Los ARNm eucariotas son Monocistrónicos.

Las ARN polimerasas eucariotas:

Ya se ha mencionado que, en las células del tipo Eucariota, encontramos tres tipos de ARN
polimerasa las cuales se denominan: ARN polimerasa I, ARN polimerasa II y ARN polimerasa III.

El Promotor Eucariota para la ARN Polimerasa II

Los promotores de la ARN Polimerasa II muestran una mayor variación en secuencia y la enzima es
incapaz de iniciar la transcripción sola, sino que requiere de una serie de factores de transcripción,
los cuales son los encargados del reconocimiento de un promotor particular. Recordemos que, en
las células Procariotas, el factor sigma es el que le confiere a la ARN Polimerasa la capacidad de
seleccionar a cada uno de los promotores.
En Eucariotas, al igual que en los Procariotas, las homologías en las regiones próximas al punto de
inicio están restringidas a secuencias relativamente cortas. La mayoría de los promotores tienen
una secuencia denominada TATA box o CajaHogness,

Los EXALTADORES o ENHACERS

Los promotores Eucariotas no trabajan solos para asegurar una transcripción eficaz. En algunos
genes o tipos celulares, la actividad de un promotor está aumentada por la presencia de otra
secuencia conocida como Exaltador o Enhacer. Las características de los Exaltadores son las
siguientes:

 Están formados por cientos de bases

 Generalmente incluyen secuencias repetidas
 Actúan a distancia, miles de bases del promotor.
 Son activos en cualquier orientación respecto al promotor, incluso suele encontrárselos
dentro del mismo gen.

Los exaltadores, entonces, actúan como reguladores de la expresión génica. No está claro aún el
mecanismo de acción de los exaltadores, más aún cuando estos se encuentran localizados a
cualquier distancia (1000 a 2000 Pb) y dirección del mencionado promotor.

El ARN mensajero en Eucariotas:

Si bien la síntesis y estructura de los ARN mensajeros en Eucariotas es similar a las Procariotas,
deben mencionarse las siguientes diferencias:

a) Ambos extremos están modificados, el 5’ presenta una estructura denominada CAP

(caperuza) y el 3’ contiene una secuencia de Ácido Poliadenílico denominada Cola Poly A.

b) La molécula que sirve de molde para la síntesis de proteína (ARNm maduro) es más corta que
el ARN mensajero recién sintetizado (Pre – ARN mensajero). Esto se debe a que los últimos
sufren un proceso de eliminación de secuencias no codificantes. Dicho proceso se denomina
Splicing.

Modificaciones de los extremos del ARN mensajero Eucariota:

El extremo 5’ contiene dos nucleótidos conectados que siempre están metilados (-
CH3). La reacción de la incorporación del CAP ocurre inmediatamente después de
iniciada la transcripción y siempre precede a cualquier modificación que se le realice
al ARN m precursor.
Splicing de los precursores de ARNm en Eucariotas:
 Los Pre- ARN m en Eucariotas, contienen largas secuencias no codificantes
que corresponden a la transcripción de regiones del gen conocidas como
Intrones.

 Todos los genes Eucariotas poseen una organización particular, en ellos se

distinguensecuencias que se expresan (Exones) y secuencias no codificantes
o que no tienen sucontrapartida con la proteína traducida (Intrones).

 Todos los Pre- ARN m sufren un proceso denominado Splicing, que tiene como
finalidad eliminar a los Intrones (secuencias no codificantes). Este proceso
ocurre en elnúcleo y da origen al ARN m que será desplazado al citoplasma,
para ser partícipe delproceso de Traducción.

 La reacción de Splicing es realmente precisa, esta precisión se basa en el

reconocimiento de secuencias de bases particulares ubicadas en la zona de
unión entre el Intrón y el Exón adyacente. En las zonas de corte o escisión se
puede encontrar Secuencias de Consenso.

La reacción de Splicing puede dividirse en dos etapas.

 En la primera se produce el corte en el extremo 5´del Intrón. El mismo extremo
a su vez se une a una secuencia del Intrón denominada Punto de
Ramificación, formando así un Lazo. Como consecuencia de este primer paso
se obtienen dos moléculas, las cuales son: el Exón 5’ libre y el Intrón-Lazo-
Exón 3’.
 En la segunda etapa de corta el Exón que permanecía unido al Intrón-Lazo y
se une al Exón 5’. En la reacción de Splicing participan pequeñas partículas
ibonucleoproteicas, las sn RNP (smoll nuclear RiboNucleoProteínas).
 Regulación de la Transcripción
Dentro del metabolismo celular, encontraremos enzimas que son necesarias en forma
continua y otras que solo se necesitan en determinadas circunstancias. Las primeras
se sintetizan siempre, mientras que las segundas solo son sintetizadas en
determinadascondiciones. Es decir que, la célula, debe contar con mecanismos que le
permitanregular esta síntesis, ya que sería un gasto de energía innecesario el
transcribir y traduciruna proteína que luego no ha de ser utilizada.
Es así como, la célula podrá “elegir” qué genes transcribe y cuáles no, dependiendo
de las necesidades metabólicas reinantes en ese momento.

Un Operón está constituido por: un Promotor, un Operador y Genes Estructurales. El

Promotor, según vimos en el apartado anterior, es el lugar del ADN en el cual se une
la ARN polimerasa para iniciar la transcripción. El operador es una secuencia de
nucleótidos que se encuentra interpuesto entre el promotor y los genes estructurales.
Los Genes Estructurales son las porciones de ADN que codifican para la síntesis de
las proteínas asociadas metabólicamente.

La transcripción de los Genes Estructurales depende de la actividad de otro gen

denominado Gen Regulador. El gen Regulador codifica para una proteína que tiene
afinidad para unirse al operador. Siempre que el represor se encuentre unido a esta
proteína, se verá boqueada la unión de la ARN polimerasa al promotor, inhibiéndose
así la transcripción de los Genes estructurales. Por el contrario, cuando el operador se
encuentre libre, la ARN polimerasa podrá formar el Complejo Promotor Abierto y la
transcripción será un hecho.

Veamos ahora dos modelos específicos en la regulación de la Transcripción: El

Modelo del Operón Lac y el Operón Triptofano.

Operón Lac:
Los genes que intervienen en la producción de las enzimas responsables del
catabolismo de la lactosa se encuentran asociados, respondiendo al modelo del
Operón. Contiguo a estos genes encontraremos entonces el operador y el sitio
promotor.
Ante la alta concentración de glucosa, sería un gasto de energía innecesario que la
célula sintetice las enzimas pertenecientes a la vía degradativa de la Lactosa; más
innecesario aún sería que estas enzimas fuesen sintetizadas ante la ausencia de la
misma lactosa. Por esto, cuando la concentración de lactosa es baja o la de la
glucosa es alta, el gen regulador sintetizará una proteína, el represor, que se unirá al
operador. Por lo dicho con anterioridad, al quedar el operador ocupado, la ARN
polimerasa se verá imposibilitada de unirse al sitio promotor y, la transcripción de los
genes estructurales se verá inhibida. En el caso en el que la concentración de
Glucosa sea baja y la de la Lactosa sea alta, el regulador se unirá a una molécula
inductora de la transcripción de los genes estructurales para la síntesis de las enzimas
de gradativas de dicho disacárido. El represor entonces no podrá unirse al operador.
Por consiguiente, al quedar este último libre, la ARN polimerasa formará el Complejo
Promotor Abierto pudiéndose producir la transcripción de los genes estructurales.
Ahora bien, la molécula inductora deberá marcar la presencia de Lactosa en el medio
y, quién mejor que la lactosa misma para cumplir con esta función. Es así como la
Lactosa induce su propia degradación.
Operón Triptofano:
A diferencia del Operón Lac, el Operón Triptofano regula la transcripción de las
enzimas que intervienen en una vía anabólica. Las cinco enzimas que regulan este
Operón pertenecen a la vía anabólica del aminoácido Triptofano.
Cuando la concentración de Triptofano es la adecuada el represor inactivo, codificado
por el gen regulador, se une a otra molécula que le confiere la capacidad para
acoplarse al operador. Al estar el operador ocupado, la ARN polimerasa no podrá
formar el Complejo Promotor Abierto, por lo tanto, la síntesis de las enzimas
intervinientes en la vía anabólica del Triptofano no son producidas. El co-represor,
molécula que confiere la activación del represor, es nada más ni nada menos que el
Triptofano. Es sumamente lógico que lo sea, ya que cuando hay una alta
concentración de Triptofano, no es necesario gastar energía en sintetizarlo. Si la
concentración de mencionado aminoácido es baja, el represor no podrá unirse al co-
represor, por tal motivo el represor no adquirirá la capacidad de unirse al operador. Al
encontrarse el operador libre, la ARN polimerasa podrá iniciar la transcripción de los
genes estructurales, obteniéndose las enzimas necesarias para poder sintetizar este
aminoácido esencial.

Diferencias entre el Operón Lac y el Operón Try:

 El Operón Lac interviene en la regulación de la transcripción de enzimas
pertenecientes a la vía catabólica de la Lactosa, mientras que el Operón Try
interviene en la regulación de la transcripción de enzimas pertenecientes a la
vía anabólica del Triptofano.
 La Lactosa actúa induciendo la transcripción de los genes estructurales,
mientras que el Triptofano actúa como Co- represor, inhibiendo la transcripción
de los genes estructurales.
 Cuando hay alta concentración de Lactosa, los genes estructurales se
transcriben, en el caso de la alta concentración del Triptofano, los genes
estructurales No se transcriben.