PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM SEDIAAN CAIR OBAT

HERBAL TERSTANDAR (OHT) MERK KIRANTI DENGAN METODE

KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS KLT- DENSITOMETRI

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi

Oleh :
Veny Megawati Tambunan
NIM: 078114122

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2011
 PENETAPAN KADAR KURKUMIN DALAM SEDIAAN CAIR OBAT
HERBAL TERSTANDAR (OHT) MERK KIRANTI DENGAN METODE
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS KLT- DENSITOMETRI

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi

Oleh :
Veny Megawati Tambunan
NIM: 078114122

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2011

i
ii
iii
HALAMAN PERSEMBAHAN

Karya ini kupersembahkan bagi

kemuliaan Tuhan Yesus Kristus,

atas penyertaan &

kasih karunia-Nya.

Papa, mama, kakak,& adik-adik ku

yang selalu memberikan semangat

dan menyayangiku, bagi teman-

temanku dan almamaterku

iv
v
vi
 PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah Bapa Yang Maha Kuasa

atas segala limpahan berkat dan kasih-Nya sehingga penelitian dan penyusunan

skripsi yang berjudul, “Penetapan Kadar Kurkumin Dalam Sedian Cair Obat

Herbal Terstandar (OHT) Merk Kiranti Dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis

(KLT)–Densitometri,” dapat diselesaikan dengan baik. Skripsi ini disusun sebagai

salah satu syarat untuk meraih gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) di Fakultas

Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Dalam pelaksanaan penelitian hingga selesainya penyusunan skripsi ini,

penulis mendapat banyak dukungan dan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena

itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada:

1. Orang tua dan seluruh anggota keluarga, atas dukungan doa dan segenap

kasih sayang telah diberikan selama ini.

2. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas

Sanata Dharma Yogyakarta.

3. Christine Patramurti, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing akademik dan

dosen pembimbing yang dengan sabar memberikan pengarahan, masukan,

kritik dan saran baik selama penelitian maupun penyusunan skripsi ini.

4. YohanesDwiatmaka, M.Si., selaku dosen penguji yang telah memberikan

kritik dan saran dalam penyusunan skripsi.

5. Jeffry Julianus, M.Si., selaku dosen penguji yang telah memberikan

masukkan dan saran yang membangun.

vii
viii
 DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL.………..……………………......……….………............. I

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING.……..……………………….. ii

HALAMAN PENGESAHAN.........…………………………………………… iii

HALAMAN PERSEMBAHAN......................................................................... iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA............................................................. v

PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI.............................................. vi

PRAKATA.......………………………………….......…................................... vii

DAFTAR ISI ………………………………………………………………….. ix

DAFTAR TABEL ……………………….…………………………………..... xii

DAFTAR GAMBAR ………………………………………………………..... xiv

DAFTAR LAMPIRAN……..…………………………………………………. xvi

INTISARI……………………………………………………………………… xviii

ABSTRACT ……………………………………………………………………. xix

BAB I. PENGANTAR………...………...………...………...………...………. 1

A. Latar Belakang.……………………………………...…………….......…. 1

1. Permasalahan…………….…….……………………………….…… 3

2. Keaslian Penelitian.……………………...…………...……….....….... 3

3. Manfaat Penelitian..…………………………………………..........… 4

B. Tujuan Penelitian……………………………...………...……………..... 5

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA………...………...………...………...… 6

A. Curcuma longae (kunyit)……..………………………………...... …...... 6

ix
B. Sediaan Cair Oral ………………..……......…...……………………....... 7

C. Obat Herbal Terstandar (OHT)…………....…...……........…….............. 8

D. Kiranti………………………………………….………...……................. 9

E. Standarisasi Ekstrak………...……………………………......................... 14

F. Cara Pembuatan Obat Tradisional yang Baik(CPOTB)………….... …… 16

G. Kurkumin………………………...……...…….………………................ 21

H. Kromatografi lapis tipis………………………..…………………........... 26

I. Analisis statistik………………………...…..……………………............ 38

J. Landasan Teori……....……………………………………………........... 39

K. Hipotesis …………………………………………………………............ 40

BAB III. METODOLOGI PENELITIAN………...………...………...………. 41

A. Jenis Rancang Penelitian ………..…………………………………........ 41

B. Variabel Penelitian ………………………………...………………......... 41

C. Definisi Operasional …………………………………………….…........ 41

D. Bahan-Bahan Penelitian…………………………………………............. 42

E. Alat-Alat Penelitian…...…………………………………………............ 43

F. Tata Cara Penelitian ……………………………………………….......... 43

1. Pemilihan Sampel………………………….....…….......................... 43

2. Pembuatan fase gerak………………………….....………................ 43

3. Pembuatan pelarut (metanol pH4) …………………………........... 44

4. Pembuatan larutan baku kurkumin…………………………........... 44

5. Penetapan λ maksimum………………………….....………............. 44

6. Pembuatan kurva baku kurkumin………………………................. 45

x
 7. Optimasi preparasi sampel………………………….....……............ 45

8. Preparasi sampel.......................................................................... 46

9. Penetapan kadar kurkumin dalam sampel…………………........... 46

G. Analisis hasil………………………….....……………………................. 47

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN…..........................…………….…… 48

A. Pembuatan fase gerak………………………….....…………….............. 49

B. Pembuatan pelarut (metanol pH4) ………………………….....….......... 50

C. Penetapan λ maksimum………………………….....……………............ 51

D. Pembuatan kurva baku kurkumin………………………….....…........... 53

E. Pemilihan sampel………………………….....…………………….......... 55

F. Optimasi preparasi sampel…………………...........………………......... 57

G. Penetapan kadar kurkumin dalam sampel………………………............. 64

BAB V. SIMPULAN DAN SARAN………...………...………...………...….. 74

A. Simpulan …........………………………...………………………...…..... 74

B. Saran ……………………………...…………………………………….. 74

DAFTAR PUSTAKA………………………………..………………………... 75

LAMPIRAN………………………………………………...…………………. 80

BIOGRAFI PENULIS………………………………………………………… 112

xi
 DAFTAR TABEL

Halaman

TabelI. Hubungan antara peak asymetry factor dan tailing factor……........... 36

TabelII. Langkah-langkah untuk menentukan uji hipotesis Independent One Way

Anova.................................................................………….....…........................ 38

TabelIII. Hasil pengukuran panjang gelombang maksimum pada seri larutan

baku……...................................………………………....................... 52

TabelIV. Data replikasi kurva baku kurkumin………........................................ 54

TabelV Hasil pengukuran kadar kurkumin sampel pada variasi waktu

penyarian dengan menggunakan ultrasonikator................................... 61

Tabel VI Replikasi sampel kurkumin dengan waktu penyarian dengan

menggunakan ultrasonikator 15 menit…….......................................... 63

Tabel VII Data pengukuran volume sedian cait OHT .......................................... 65

Tabel VIII Kadar kurkumin pada sampel kurkumin di dalam setiap batch............ 66

Tabel IX Data distribusi normal pada analisis statistic antar kadar kurkumin

pada batch 1 sama dengan kadar kurkumin pada batch 2 dan pada

batch 3.................................................................................................. 70

Tabel X Data test of Homogeneity of Variances pada analisis statistic antar

kadar kurkumin pada batch 1, batch 2 dan batch 3 ............................. 71

Tabel XI Data Test of Variances pada analisis statistic 1/square root ............... 72

xii
Tabel XII Data Analisis Post-Hoc ....................................................................... 73

xiii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Curcuma longae (Kunyit) ...........................….......................... 6

Gambar 2. Logo Obat Herbal Terstandar.................................…............... 9

Gambar 3. Sampel OHT cair merk Kiranti................................................ 10

Gambar 4. Struktursenyawakurkumin.................. ................................... 22

Gambar 5. Struktur molekul kurkuminoid............................................. 23

Gambar 6. Contoh Produk degradasi kurkumin pada pH Alkali...………… 24

Gambar 7. Produk foto degradasi kurkumin…………………………….. 25

Gambar 8. Pengukuran talling peak……………………………………… 35

Gambar 9. Pemisahan dua senyawa……………………………………… 37

Gambar 10. Gugus metilen aktif kurkumin………………………………. 50

Gambar 11. Pola spektra seri larutan baku pada panjang gelombang max

Kromatogram baku……………………………………………. 52

Gambar 12. Kromatogram baku………………………………………….... 53

Gambar 13. Hubungan antara konsentrasi kurkumin dengan AUC/100

(replikasi III)……………………………………………......... 55

Gambar 14 (a) Baku kurkuminkonsentrasi 50 ppm (konsentrasirendah),

(b) kromatogram penyarian kurkumin dari sampel dengan

menggunakan ultrasonikator selama 5 menit, (c) selama 10

menit, (d) selama 15 menit, (e) selama 20 menit, (f) selama 25

menit, (g) selama 30 menit…………………………………… 60

xiv
Gambar 15. Kadar kurkumin pada 5 replikasi, lama penyarian 15 menit

dengan menggunakan ultrasonik…………………………….. 64

xv
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran1. Pernyataan Jaminan Keaslian Bahan Kurkumin Standar Hasil

Sintesis…………………………………………………………............. 81

Lampiran 2. Sistem KLT – Densitometri yang digunakan………………….............. 82

Lampiran 3. Spektra Kurkumin pada Penetapan pH Optimum Kurkumin................... 84

Lampiran 4. Kromatogram baku kurkumin replikasi III………………….................. 87

Lampiran 5. Kromatogram validasi metode…………………………......................... 89

Lampiran 6. Contoh perhitungan kadar kurkumin……………....……….................. 94

Lampiran 7. Persamaan kurva baku dan gambar kurva baru kurkumin .................... 94

Lampiran 8. Kromatogram optimasi penyarian dengan ultrasonikator...................... 95

Lampiran 9 Hubungan lamanya waktu penyarian dengan kadar………….............. 97

Lampiran 10 Nilai AUC dan contoh perhitungan kadar kurkumin…………............. 97

Lampiran 11 Contoh perhitungan resolusi……………………………....................... 98

Lampiran 12 Kromatogram Replikasi sampel yang disari dengan menggunakan

ultrasonikator selama 15 menit………….........................................…… 99

Lampiran 13 Nilai AUC Replikasi sampel yang disari dengan menggunakan

ultrasonikator selama 15 menit……….........................................……… 101

Lampiran 14 Contoh perhitungan kadar sampel……................……………………… 101

Lampiran 15 Perhitungan kadar kurkumin dalam setiap botol OHT merk

Kiranti…………………………………………..............……………… 102

Lampiran 16 Kromatogram penetapan kadar…………...............…………………… 103

Lampiran 17 Perhitungan kadar kurkumin dalam tiap batch

(1000ppm=1mg/ml)………...................…………...……………………
108

xvi
Lampiran 18 Perhitungan kadar rata-rata kurkumin dalam setiap batch ...................... 111

xvii
 INTISARI

Salah satu obat tradisional yang mengandung kurkumin sebagai

komposisi terbesarnya adalah sediaan cair OHT merk Kiranti. Pada label tertera
komposisi dari Curcuma domesticate Rhizoma sebasar 30 gram. Kandungan
kurkumin pada sediaan cair OHT merk Kiranti, belum dapat diketahui secara
pasti. Hal ini disebabkan karena tidak adanya peraturan yang mengatur mengenai
batas minimal maupun maksimal dari kandungan kurkumin di dalam suatu
sediaan. Oleh karena itu dalam rangka melihat kadar kurkumin yang terkandung
di dalam setiap sediaan OHT merk Kiranti perlu dilakukan analisis kuantitatif
berupa penetapan kadar. Analisis penetapan kadar kurkumin dalam OHT merk
Kiranti dilakukan dengan menggunakan tiga nomor batch yang berbeda sehingga
dapat dilihat reprodusibilitasnya dari setiap proses produksi yang berbeda.
Berdasarkan penetapan kadar yang dilakukan dari ketiga nomor batch
yang berbeda diperoleh hasil kadar rata – rata kurkumin pada setiap batch adalah
sebagai berikut pada batch 1 yaitu 0,5893 x 10-1 mg/ml kurkumin; pada batch 2
yaitu 0,4794x10-1 mg/ml kurkumin, dan pada batch 3 yaitu 0,6103 x 10-1 mg/ml,
kadar kurkumin dari ketiga batch tidak masuk ke dalam kadar kurkumin
seharusnya yaitu 3,08 mg/mL sampai 7,7 mg/mL. Nilai CV antar batch lebih dari
2% yaitu 10,65%. Dengan demikian dapat disimpulkan kadar kurkumin pada
setiap batch tidak reprodusibel.

Kata kunci: kurkumin, OHT, KLT-densitometri, penetapan kadar

xviii
 ABSTRACT

Kirantiis one of the traditional medicines that contain curcumin as a

biggest composition in liquid dosage. On the label printed composition of
Rhizoma Curcuma domesticaeis 30 grams. The content of curcuminin Kiranti,
can not be known for certain. This is because no rule regulation the minimum
and maximum limit of the content of curcumin in a preparation. Therefore, in
order to view the content of curcumin that is contained in each dosage Kiranti,
needs to be done in the form of determination of quantitative analysis. Analysis
of determination of curcumin in Kiranti performed using three different batch
numbers so it can be seen the reproducibility of each different production
processes.
Based on the determination that made from third different batch
number the result average of curcumin on every batch is as different: in batch 1,
that is 0,5893 x 10-1 mg / ml curcumin; batch 2 is 0,4794 x10-1 mg / ml
curcumin, and batch 3 is 0,6103 x 10-1 mg / ml, contents of curcumin from the
third batch did not get into the contentss of curcumin which is supposed to be
3,08 mg / ml to 7,7 mg / ml. Inter-batch CV values more than 2% i.e 10,65%.
The concluded isthe contents of curcuminin each batch is not reproducible.

Key words: curcumin, OHT, TLC-densitometry, determination of curcumin

xix
 1

BAB I

PENGANTAR

A. Latar Belakang Masalah

Seiring dengan perkembangan zaman, masyarakat cenderung lebih

memilih untuk menggunakan obat-obat tradisional bila dibandingkan dengan

menggunakan obat sintesis. Hal ini disebabkan karena obat-obat tradisional

memiliki efek samping yang relatif lebih kecil dibandingkan dengan obat sintesis

(Sastrohamijoyo, 1985). Walaupun demikian bukan berarti tanaman obat atau

obat tradisional tidak memiliki efek samping yang merugikan, bila tidak disertai

dengan ketepatan dosis (Katno dan Pramono, 2010).

Untuk meningkatkan penjaminan terhadap keamanan obat herbal, maka

Badan Pengawasan Obat dan Makanan mengeluarkan kebijakan untuk mendorong

perkembangan obat herbal sampai ke tingkat fitofarmaka atau setidaknya obat

herbal terstandar (OHT). Perkembangan ini bertujuan untuk menjamin keamanan

obat herbal sehingga obat herbal dapat dimasukkan dalam pengobatan formal.

OHT merupakan obat tradisional yang menggunakan bahan baku yang

telah terstandar dan khasiatnya telah ditunjang dengan pembuktian ilmiah berupa

penelitian-penelitian pra-klinik (Anonim, 2008a). Standarisasi bahan baku

diperlukan agar dapat diperoleh bahan baku yang seragam yang akhirnya dapat

menjamin efek farmakologi tanaman tersebut (Hanani, 2010). Standarisasi yang

dilakukan meliputi penetapan kadar air, kadar abu larut air, kadar abu larut asam,

1
 2

cemaran mikroba, dan cemaran logam berat (Direktorat Jenderal Pengawas Obat

dan Makanan, 1995).

Salah satu obat tradisional yang mengandung kurkumin sebagai

komposisi terbesarnya adalah sediaan cair OHT merk ”Kiranti”. Pada label tertera

kadar Curcuma domestica Rhizoma sebanyak 30 gram. Produk ini merupakan

sediaan cair yang banyak beredar di tengah masyarakat dan sangat diminati oleh

masyarakat. Sediaan cair OHT merk Kiranti merupakan salah satu produk utama

dari yaitu PT. Prima Abadi, Indonesia yang dibuat dalam skala besar dan sudah

tersebar ke seluruh Indonesia.

Kandungan kurkumin pada sediaan cair OHT merk Kiranti, belum dapat

diketahui secara pasti. Hal ini disebabkan karena tidak adanya peraturan yang

mengatur mengenai batas minimal maupun maksimal dari kandungan kurkumin

didalam suatu sediaan. Oleh karena itu dalam rangka melihat kadar kurkumin

yang terkandung di dalam setiap sediaan OHT merk Kiranti perlu dilakukan

analisis kuantitatif berupa penetapan kadar. Analisis penetapan kadar kurkumin

dalam OHT merk Kiranti merupakan upaya pengawasan terhadap mutu dan

kualitas kadar kurkumin sebagai sediaan cair. Penetapan kadar kurkumin

dilakukan untuk mengetahui kestabilan kurkumin pada sediaan selama proses

penyimpanan sehingga dapat diketahui jumlah zat aktif yang terkandung pada

sediaan yang masih dapat memberikan efek farmakologi.

Sediaan OHT Kiranti banyak terkandung senyawa kimia lain selain

kurkumin. Oleh karena itu digunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT)-

densitometri untuk memisahkan senyawa campuran di dalaam sediaan OHT

 3

menjadi senyawa tunggal dengan teknik pemisahan berdasarkan kepolaran.

Metode ini dapat memisahkan senyawa kurkumin dengan senyawa- senyawa lain

yang berada di dalam sampel (Stahl, 1985). KLT cocok untuk analisis obat di

laboratorium farmasi, karena metodenya sederhana, sensitif, kecepatan

pemisahan tinggi, dan memerlukan jumlah cuplikan yang sangat sedikit (Khopkar,

1990).

Metode KLT-densitometri dipilih dalam mengukur kadar kurkumin

karena metode ini mempunyai selektifitas tinggi dan dapat memberikan hasil yang

cepat dan akurat. Selain itu metode ini dapat digunakan untuk analisa campuran

senyawa tanpa saling mengganggu (Fried and Sherma, 1994). Metode penetapan

kadar kurkumin dalam sediaan OHT ini menggunakan sistem yang diperoleh dari

hasil optimasi dan validasi yang dilakukan pada rangkaiaan penelitian ini.

1. Perumusan masalah

Beberapa permasalahan yang timbul antara lain:

a. Berapakah kadar kurkumin dalam sediaan cair obat herbal terstandar merk

Kiranti dalam tiga batch produksi?

b. Apakah kadar kurkumin antar batch yang diteliti reprodusibel?

2. Keaslian penelitian

Sejauh yang diketahui penulis dan penelusuran pustaka yang dilakukan

penulis mengenai penelitian tentang penentuan kadar kurkumin di dalam sampel

sediaan cair obat herbar terstandar merk Kiranti secara KLT- densitometri belum

pernah dilakukan oleh peneliti sebelumnya. Penelitian yang pernah dilakukan

sebelumnya yaitu dilakukan pada kurkumin yang tercampur dengan turunan

 4

demetoksinya dalam sampel serbuk kunyit dengan fase diam silika gel GF 254

dan fase gerak kloroform:etanol:air suling (25:0,96:0,04) (Martono, 1996).

Penetapan kadar kurkumin dalam sediaan obat menggunakan kromatografi cair

kinerja tinggi (KCKT) (Musfiroh dkk, 2010), estimasi kandungan kurkumin pada

sediaan herbal komersial secara spektrofotometri derivatif (Batubara dkk, 2005),

penetapan kadar kurkumin dan piperin secara simultan dalam produk pangan

dengan metode kromatografi cair untuk menggunakan diode array detection

(Nagappan dkk, 2009), serta penetapan kadar kurkumin dalam serbuk kunyit

dengan teknik HPTLC (Anonim, 2008b), penetapan kadar kurkuminoid secara

simultan dalam sampel Curcuma menggunakan metode high performance thin

layer chromatography (HPTLC) (Gupta, Gupta, and Kumar, 1999), standarisasi

mutu dengan HPTLC terhadap adanya kurkuminoid dalam Curcuma longa L.

(Paramasivam, Aktar, Poi, Banerjee, and Bandyopahyay, 2008).

3. Manfaat penelitian

a. Manfaat metodologis. Diharapkan dengan dilakukannya penelitian ini

mampu menambah khasanah ilmu pengetahuan dalam dunia kefarmasian

mengenai penetapan kadar kurkumin di dalam sediaan cair obat tradisional.

b. Manfaat praktis. Diharapkan dengan dilakukannya penelitian ini dapat

berguna untuk menganalisis campuran multi komponen kurkuminoid dalam suatu

sediaan cair obat tradisional.

 5

B. Tujuan penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kadar kurkumin di dalam

sediaan cair obat herbal terstandar merk Kiranti dan reprodusibilitas kadar

kurkumin antar batch produksi dengan menggunakan metode KLT- densitometri.

 6

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Curcuma longa (Kunyit)

Gambar 1. Curcuma longa (Kunyit)

Curcuma longa (sinonim: Curcumae domesticae Rhizoma), familia

Zingiberaceae. Bau khas aromatik, rasa agak pahit, agak pedas (Depkes RI, 2000).

Curcuma longa (Kunyit) mengandung beberapa kandungan kimia yang telah

diketahui yaitu minyak atsiri sebanyak 6% yang terdiri dari golongan senyawa

monoterpen dan sesquiterpen (meliputi zingiberen, alfa dan beta-turmerone), zat

warna kuning yang disebut kurkuminoid sebanyak 5% (meliputi kurkumin 70-

80%, monodesmetoksikurkumin dan bidesmetoksikurkumin), protein, fosfor,

kalium, besi dan vitamin C (Saputra & Ninggrum, 2010).

Dari ketiga senyawa kurkuminoid tersebut, kurkumin merupakan

komponen terbesar. Kadar total kurkuminoid dihitung sebagai persen kurkumin,

karena kandungan kurkumin paling besar bila dibanding komponen kurkuminoid

6
 7

lainnya. Karena alasan tersebut beberapa penelitian baik fitokimia maupun

farmakologi lebih ditekankan pada kurkumin (Saputra & Ninggrum, 2010).

Studi keamanan (uji toksisitas) terhadap rimpang kunyit menunjukkan,

ekstrak kunyit aman digunakan dalam dosis terapi. Rimpang kunyit yang

diberikan secara oral tidak memberikan efek teratogenik (dampak pada

embrio/janin) pada tikus. Keamanan ekstrak kunyit selama kehamilan belum

terbukti, penggunaan selama kehamilan harus di bawah pengawasan medis.

Ekskresi ekstrak kunyit melalui ASI dan efeknya pada bayi belum terbukti,

sebaiknya penggunaan selama menyusui di bawah pengawasan medis. Kurkumin

memberikan efek analgesik dengan dosis 1200 mg/hari (Depkes RI, 2000). Dari

uji toksisitas yang telah dilakukan selama 90 hari untuk konsumsi kunyit

diperoleh hasil bahwa efek toksik terjadi pada 50 kali dosis yang biasa digunakan

manusia setiap harinya (Sumiati, 2008).

A. Sediaan Cair Oral

Sediaan cair oral merupakan sediaan cair yang dibuat untuk pemberian

oral, mengandung satu atau lebih zat dengan atau tanpa bahan pengaroma,

pemanis atau pewarna yang larut dalam air atau campuran kosolven-air (Isnaini,

2009). Sediaan cair oral obat dapat berupa larutan, emulsi, atau suspensi. Sediaan

cair oral obat tradisional memiliki beberapa persyaratan yang harus dipenuhi

antara lain: keseragaman volume, angka lempeng total tidak lebih dari 10, angka

kapang khamir tidak lebih dari 10, mikroba patogen negatif, aflatoksin lebih dari
 8

30 bagian per juta (bpj), bahan tambahan, wadah dan penyimpanan, penandaan

(Kementerian Kesehatan RI, 1994).

Keuntungan dari penggunaan sediaan cair adalah:

1. Cocok untuk penderita yang sukar menelan

2. Absorpsi obat lebih cepat dibandingkan dengan sediaan oral lain. Urutan

kecepatan absorpsinya larutan > emulsi > suspensi.

3. Homogenitas lebih terjamin.

4. Dosis/takaran dapat disesuaikan

5. Dosis obat lebih seragam dibandingkan sediaan padat, terutama bentuk larutan.

Untuk suspensi dan emulsi, keseragaman dosis tergantung pada pengocokan

6. Beberapa obat atau senyawa obat dapat mengiritasi mukosa lambung atau

dirusak cairan lambung bila diberikan dalam bentuk sediaan padat. Hal ini

dapat dikurangi dengan memberikan obat dalam bentuk sediaan cair karena

faktor pengenceran (Isnaini, 2009).

B. Obat Herbal Terstandar (OHT)

Merupakan sediaan obat bahan alam yang telah dibuktikan keamanan dan

khasiatnya secara ilmiah dengan uji pra klinik dan bahan bakunya telah

distandarisasi. OHT harus memenuhi kriteria: aman, klaim khasiat dibuktikan

praklinik,dan telah dilakukan standarisasi bahan baku yang digunakan dalam

produk jadi (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2004).
 9

Gambar 2. Logo Obat Herbal Terstandar

Bahan baku yang digunakan dalam produk jadi dapat berupa simplisia.

Simplisia adalah bahan alamiah yang digunakan sebagai obat tradisional dan

belum mengalami pengolahan apapun juga, kecuali dinyatakan lain merupakan

bahan yang dikeringkan (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik

Indonesia, 2005). Standarisasi simplisia meliputi: penetapan kadar minyak atsiri,

penetapan kadar abu, penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam, penetapan

kadar abu yang larut air, penetapan kadar air, penetapan susut pengeringan,

penetapan kadar sari yang larut dalam air, penetapan kadar sari yang larut dalam

etanol, penetapan bahan organik asing, dan penetapan kadar tanin (Direktorat

Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1995).

C. Kiranti

Kiranti Sehat Datang Bulan adalah minuman kesehatan dengan bentuk

praktis ready-to-drink terbuat dari rempah alami dan diproses dengan cara yang

higienis sehingga aman untuk dikonsumsi. Anjuran minum kiranti 1-2 botol

perhari, mulai dari 3 hari sebelum datang bulan sampai 3 hari sesudah datang

bulan. Keunggulan dari Kiranti Sehat Datang Bulan adalah rasa yang enak,

formulasi rasional dan terstandar, bahan alami segar, dan khasiat Kiranti telah

teruji klinis dan aman. Sedangkan manfaat dari Kiranti Sehat Datang Bulan adalah
 10

memperlancar haid, mengatasi keluhan haid, seperti nyeri, letih, lesu, dan

mengatasi bau badan (Anonim, 2009).

Gambar 3. Sampel OHT cair merk Kiranti

Kiranti merupakan sediaan cair yang mengandung berbagai ekstrak yaitu

Curcumae domesticae Rhizoma (30g), Tamarindi Pulpa (6g), Kaempferiae

Rhizoma (3g), Arengae pinnata Fructose (3g), Zingiberis Rhizoma (0,8g), dan

Cinnamomi Cortex (0,1g) (Research and Innovation Center, 2005).

Standarisasi produksi Kiranti sudah dilakukan mulai dari bahan baku

sampai produk akhir dan diformulasikan secara rasional dalam arti bahan-bahan

yang digunakan sudah teruji khasiatnya secara ilmiah, menggunakan bahan-bahan

tumbuhan obat yang sudah diketahui tingkat keamanannya dan tidak

menimbulkan efek samping negatif, hasiat dan keamanannya sudah terbukti

berdasarkan pengalaman nenek moyang. Produk Kiranti juga telah melalui tahap

uji praklinik dan uji klinik yang diikuti oleh 86 orang, 43 orang sebagai kontrol

dan 43 orang diberi perlakuan yaitu mengkonsumsi kiranti selama 3 bulan dan

didapat hasil bahwa Kiranti Sehat Datang Bulan adalah minuman tradisional

dengan ramuan warisan nenek moyang Indonesia yang menggunakan bahan

tumbuhan obat yang benar, sesuai khasiatnya, terstandarisasi, aman untuk

 11

dikonsumsi jangka panjang dan terbukti bermanfaat untuk mengatasi gangguan

nyeri haid dan gangguan keputihan (Research and Innovation Center, 2005).

1. Manfaat Bahan Alam Yang Terkandung Dalam Kiranti Sehat Datang

Bulan

Bahan alam yang terkandung didalam Kiranti Sehat Datang Bulan yang

dipercaya dapat mengatasi nyeri saat haid adalah Curcuma domesticae Rhizoma,

Tamarindi Pulpa, Kaempferia galanga Rhizoma, Zingiberis Rhizoma, Arengae

pinnata Fructose, dan Cinnamomi Cortex

a. Curcuma domesticae Rhizoma. Rimpang kunyit (Curcuma

domesticae Rhizoma) mengandung senyawa kurkumin, pati, tanin, damar, dan

minyak atsiri tidak kurang dari 3% sampai 5% yang memiliki efek estrogenik

yang dalam jumlah kecil dapat mempercepat dimulainya haid apabila diminum

pada fase luteum. Curcumin juga mempunyai efek antioksidan, antikanker,

antijamur, antibakteri, antiinflamasi, menurunkan kadar kolesterol,

hepatoprotektor, imunostimulan. Kunyit juga mengandung arturmerone yang

memiliki aktivitas untuk menghentikan pendarahan dan melancarkan haid,

mengatasi yeri haid, mencegah keputihan dan bau badan, serta dapat

meningkatkan daya tahan tubuh terhadap penyakit (Departemen Kesehatan RI,

1997).

b. Tamarindi Pulpa. Asam jawa (Tamarindi Pulpa) secara turun temurun

digunakan berpasangan dengan kunyit yang disebut jamu kunyit asam. Buah asam

jawa mengandung kimia seperti gula invert, tartaric acid, citric acid, serine, β-

alanin, vitamin B3, geranial, limonene, peptin, prolin, leusin, phenylalanine, dan
 12

pipecolic acid. Asam jawa bersinergi dengan kunyit membantu melancarkan

pencernaan dan memberikan rasa asam yang enak dan menyegarkan sewaktu

diminum (Anonim, 2010).

c. Kaempferia galanga Rhizoma. Rimpang kencur (Kaempferia galanga

Rhizoma) mengandung p-metoksi sinamat; minyak atsiri 2,4% sampai 3,9%;

kaempferol yang bersifat oksitoksik (mempengaruhi siklus haid). Kencur juga

memiliki efek analgesik, antijamur/antibakteri. Dengan demikian kencur dapat

membantu memperlancar haid dan mencegah keputihan serta bau badan

(Departemen Kesehatan RI, 1997).

d. Zingiberis Rhizoma. Rimpang jahe (Zingiberis Rhizoma)

mengandung zingiberen, felandren, kamfen, limonen, boineol, sineol, sitral, dan

zingiberol, minyak damar yang mengandung zingeron, dan minyak atsiri tidak

kurang dari 2% sampai 3% yang bersifat tonikum (memperkuat tubuh), analgesik

(penghilang rasa sakit), antiinflamasi (antiradang). Dengan demikian jahe dapat

mengurangi rasa sakit/nyeri dan menguatkan tubuh, sehingga tubuh tetap bugar

saat haid (Departemen Kesehatan RI, 1978).

e. Arengae pinnata Fructose. Selain memberikan rasa manis dan aroma

yang khas, gula jawa (Arengae pinnata Fructose) merupakan sumber energi

sehingga dapat menjaga stamina. Serat pada warna coklatnya, kalori, kalsium,

protein kasar, mineral, vitamin, senyawa-senyawa yang berfungsi menghambat

penyerapan kolesterol di saluran pencernaan (Anonim, 2008).

 13

f. Cinnamomi Cortex. Kayu manis (Cinnamomi Cortex) mengandung o-

metoksiinamaldehida yang bersifat antimikroba dan mengatasi dismenorrhea.

Kandungan kimia ada terdapat dalam kayu manis adalah minyak atsiri 1% sampai

3%, tanin, damar, dan kalsium oksalat. Sifat kimia dari kayu manis adalah pedas,

sedikit manis, hangat, dan wangi (Departemen Kesehatan RI,1997).

2. Kiranti Sehat Datang Bulan Telah Teruji Klinis

Kiranti Sehat Datang Bulan pada tanggal 22 Mei 2005 mendapat predikat

Obat Herbal Terstandar oleh menteri Kesehatan RI. Kiranti mendapatkan

predikat Obat herbal terstandar karena telah memenuhi kriteria:

a. Aman sesuai dengan persyaratan yang ditetapkan.

Kiranti Sehat Datang Bulan dinyatakan aman untuk dikonsumsi berdasarkan

pengujian toksisitas akut dan sub akut yang dilakukan oleh Fakultas

Kedokteran Universitas Indonesia

b. Klaim khasiat dibuktikan secara ilmiah atau praklinik dan klinik.

Kiranti telah terbukti memiliki efek analgesik. Penelitian dilakukan dengan

bekerjasama dengan Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia untuk uji

praklinik dan dengan Fakultas Kedokteran Universitas Padjadjaran RSU Dr.

Hasan Sadikin, Bandung untuk uji klinik.

c. Memenuhi persyaratan mutu yang berlaku.

Salah satunya adalah dilakukannya standarisasi terhadap bahan baku yang

digunakan dalam produk jadi (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2005
 14

D. Standardisasi Ekstrak

1. Standardisasi

Standardisasi dalam kefarmasian tidak lain adalah serangkaian parameter,

prosedur dan cara pengukuran yang hasilnya merupakan unsur-unsur terkait

paradigma mutu kefarmasian, mutu dalam artian memenuhi syarat standard

(kimia, biologi dan farmasi), termasuk jaminan (batas-batas) stabilitas sebagai

produk kefarmasian umumnya. Persyaratan mutu ekstrak terdiri dari berbagai

parameter standar umum dan parameter standar spesifik. Pengertian standardisasi

juga berarti proses menjamin bahwa produk akhir obat (obat, ekstrak atau produk

ekstrak) mempunyai nilai parameter tertentu yang konstan dan ditetapkan terlebih

dahulu (Anonim, 2000).

Simplisia sebagai produk hasil pertanian atau pengumpulan tumbuhan liar

(wild crop) tentu saja kandungan kimianya tidak dijamin selalu konstan karena

disadari adanya variabel bibit, tempat tumbuh, iklim, kondisi (umur dan cara)

panen, serta proses pasca panen dan preparasi akhir (Sismaini, 2010). Variasi

kandungan senyawa dalam produk hasil panen tumbuhan obat disebabkan oleh

beberapa aspek sebagai berikut:

a. Genetik (bibit)

b. Lingkungan (tempat tumbuh, iklim)

c. Rekayasa agronomi (fertilizer, perlakuan selama masa tumbuh)

d. Panen (waktu dan pasca panen) (Anonim, 2000).

 15

2. Parameter dan Metode Uji Ekstrak

a. parameter susut pengeringan. Pengukuran sisa zat setelah pengeringan

pada temperatur 105oC selama 30 menit atau sampai berat konstan, yang

dinyatakan sebagai nilai persen. Dalam hal khusus (jika bahan tidak mengandung

minyak menguap/atsiri dan sisa pelarut organik menguap) identik dengan kadar

air, yaitu kandungan air karena berada di atmosfer/lingkungan terbuka. Tujuan

susut pengeringan memberikan batasan maksimal (rentang) tentang besarnya

senyawa yang hilang pada proses pengeringan.

b. parameter bobot jenis. Parameter bobot jenis yaitu massa per satuan

volume pada suhu kamar tertentu (25oC) yang ditentukan dengan alat khusus

piknometer atau alat lainnya. Tujuan memberikan batasan tentang besarnya massa

persatuan volume yang merupakan parameter khusus ekstrak cair sampai ekstra

pekat (kental) yang masih dapat dituang. Memberikan gambaran kandungan kimia

tertentu.

c. Kadar air. Pengukuran kandungan air yang berada di dalam bahan,

dilakukan dengan cara yang tepat diantara cara titrasi, destilasi atau gravimetri.

Tujuan memberikan rentang besarnya kandungan air di dalam ekstrak.

d. Kadar abu. Bahan dipanaskan pada temperatur dimana senyawa

organik dan turunannya terdekstruksi dan menguap, sehingga tinggal unsur

mineral dan anorganik. Tujuan memberikan gambaran kandungan mineral internal

dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak.

e. Sisa pelarut. Menentukan kandungan sisa pelarut tertentu (yang

memang ditambahkan) yang secara umum dengan kromatografi gas. Untuk

 16

ekstrak cair berarti kandungan pelarutnya, misalnya kadar alkohol. Tujuan

memberikan jaminan bahwa selama proses tidak meninggalkan sisa pelarut yang

memang seharusnya tidak boleh ada. Sehingga untuk ekstrak cair menunjukkan

jumlah pelarut (alkohol) sesuai dengan yang ditetapkan.

f. Ekstrak dapat mempunyai senyawa identitas, artinya senyawa tertentu

yang menjadi petunjuk spesifik dengan metode tertentu. Tujuan memberikan

identitas obyektif dari nama dan spesifik dari senyawa identitas.

g. Senyawa terlarut dalam pelarut tertentu. melarutkan ekstrak dengan

pelarut (alkohol atau air) untuk ditentukan jumlah solut yang identik dengan

jumlah senyawa kandungan secara gravimetri. Dalam hal tertentu dapat diukur

senyawa terlarut dalam pelarut lain, misalnya heksana, diklorometan, metanol.

Tujuan memberikan gambaran awal jumlah senyawa kandungan.

h. Organoleptik. penggunaan pancaindera mendeskripsikan bentuk,

warna, bau, rasa. Tujuan pengenalan awal yang sederhana seobyektif mungkin

(Sismaini, 2010).

E. Cara Pembuatan Obat Tradisional yang Baik (CPOTB)

Cara Pembuatan Obat Tradisional yang Baik (CPOTB) meliputi seluruh

aspek yang menyangkut pembuatan produk tradisional, yang bertujuan untuk

menjamin agar produk yang dihasilkan senantiasa memenuhi persyaratan mutu

yang telah ditentukan sesuai dengan tujuan penggunaannya. Mutu produk

tergantung dari bahan awal, proses produksi dan pengawasan mutu, bangunan,
 17

peralatan dan personalia yang menangani (Badan Pengawasan Obat dan Makanan

RI, 2005).

CPOTB bertujuan untuk melindungi masyarakat terhadap hal-hal yang

merugikan dari penggunaan produk tradisional yang tidak memenuhi persyaratan

mutu dan meningkatkan nilai tambah dan daya saing dengan menjamin bahwa

produk tradisonal dibuat secara konsisten, memenuhi persyaratan yang ditetapkan

dan sesuai dengan tujuan penggunaanya. Penerapan CPOTB merupakan

persyaratan kelayakan dasar untuk menerapkan sistem jaminan mutu yang diakui

dunia internasional (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2005).

1. Manajemen Mutu

Pelaksanaan sistem mutu meliputi penjaminan terhadap kualitas

simplisia, sediaan galenik, bahan tambahan atau bahan lainnya, baik yang

berkhasiat maupun yang tidak berkhasiat, yang berubah maupun yang tidak

berubah, yang digunakan dalam pengolahan obat tradisional (Anonim, 2006).

Melakukan pegawasan terhadap seluruh rangkaian kegiatan yang meliputi

pengadaan bahan awal termasuk penyiapan bahan baku, pengolahan, pengemasan,

pengawasan mutu sampai diperoleh produk jadi yang siap untuk didistribusikan,

melakukan karantina terhadap suatu bahan atau produk yang dipisahkan baik

secara fisik maupun secara sistem dan melakukan Penarikan kembali (recall)

produk dari semua mata rantai distribusi apabila ditemukan adanya produk yang

tidak memenuhi persyaratan mutu, keamanan dan penandaan atau adanya efek

yang merugikan kesehatan atau bila terdapat keluhan dari pelanggan atau

konsumen mengenai produk (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2005).
 18

2. Produksi

Aspek produksi mencakup perlakuan terhadap bahan awal; validasi

proses; pencegahan pencemaran silang; sistem penomoran batch; penimbangan

dan penyerahan serta pengembalian; pengolahan; kegiatan pengemasan;

pengawasan selama proses; penanganan bahan dan produk yang ditolak,

dipulihkan dan dikembalikan; karantina dan penyerahan produk jadi;

penyimpanan bahan awal, bahan pengemas, produk antara, produk ruahan dan

produk jadi; pengiriman dan pengangkutan (Badan Pengawasan Obat dan

Makanan RI, 2005).

Pengadaan bahan awal hendaknya dari pemasok yang telah disetujui dan

memenuhi spesifikasi. Setiap bahan awal, sebelum dinyatakan lulus untuk

digunakan hendaknya memenuhi spesifikasi bahan awal yang sudah ditetapkan.

Bahan awal yang diterima hendaklah dikarantina sampai disetujui dan diluluskan

untuk pemakaian. Semua kegiatan pengolahan hendaklah dilaksanakan mengikuti

prosedur tertulis. Karantina produk jadi merupakan tahap akhir pengendalian

sebelum penyerahan ke gudang dan siap untuk didistribusikan. Sebelum

diluluskan untuk diserahkan ke gudang, pengawasan yang lebih ketat hendaklah

dilaksanakan untuk memastikan produk dan catatan pengemasan batch memenuhi

semua spesifikasi yang ditentukan (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI,

2005).
 19

3. Pengawasan Mutu

Pengawasan mutu merupakan bagian yang essensial dari cara pembuatan

obat tradisional yang baik. Rasa keterikatan dan tanggung jawab semua unsur

dalam semua rangkaian pembuatan adalah mutlak untuk menghasilkan produk

yang bermutu mulai dari bahan awal sampai pada produk jadi (Anonim, 2006).

Pengawasan mutu hendaklah dilakukan terhadap bahan baku, bahan

pengemas, proses pembuatan, produk antara, produk ruahan dan produk jadi.

Sedangkan untuk pemeriksaan dan pengujian secara berkala hendaklah dilakukan

terhadap bahan baku dalam persediaan, untuk memberikan keyakinan bahwa

penyimpanan, wadah dan bahannya dalam kondisi yang baik. Produk jadi yang

masih berada dalam industri maupun yang ada di peredaran hendaklah dipantau

secara berkala. Khusus untuk bahan baku segar sekurang-kurangnya menyimpan

diskripsi dari bahan yang bersangkutan, mengevaluasi produk jadi yang

dikembalikan dan menetapkan apakah produk tersebut dapat diedarkan kembali

atau diproses ulang atau hendaklah dimusnahkan. Pengawasan mutu merupakan

bagian yang esensial dari CPOTB untuk memberikan kepastian mutu bahwa

produk secara konsisten mempunyai mutu yang sesuai dengan tujuan

pemakaiannya (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2005).

4. Inspeksi Diri dan Audit Mutu

Tujuan inspeksi diri adalah untuk mengevaluasi apakah semua aspek

produksi dan pengawasan mutu industri farmasi memenuhi kriteria CPOTB.

Program inspeksi diri hendaklah dirancang untuk mendeteksi kelemahan dalam

pelaksanaan CPOTB dan untuk menetapkan tindakan perbaikan yang diperlukan.

 20

Tim inspeksi ditunjuk oleh manajemen perusahaan terdiri dari sekurang-

kurangnya 3 orang yang ahli di bidang pekerjaannya dan paham mengenai

CPOTB. Inspeksi diri hendaklah dilakukan secara independen dan rinci oleh

petugas yang kompeten dari perusahaan (Badan Pengawasan Obat dan Makanan

RI, 2005).

Penyelenggaraan audit mutu berguna sebagai pelengkap inspeksi diri.

Audit mutu meliputi pemeriksaan dan penilaian semua atau sebagian dari sistem

manajemen mutu dengan tujuan spesifik untuk meningkatkan mutu. Audit mutu

umumnya dilaksanakan oleh spesialis dari luar atau independen atau tim yang

dibentuk khusus untuk hal ini oleh manajemen perusahaan. Audit mutu juga dapat

diperluas terhadap pemasok dan penerima kontrak (Anonim, 2006).

5. Penanganan Keluhan terhadap Produk, Penarikan Kembali Produk dan

Produk Kembalian

Keluhan terhadap produk mencakup keluhan terhadap mutu, kualitas

menyangkut keadaan fisik, kimia dan biologi dari produk jadi atau kemasannya,

kuantitas, khasiat dan keamanan. Semua keluhan dan laporan keluhan hendaklah

diteliti dan dievaluasi dengan cermat, kemudian diambil tindak lanjut yang sesuai

(diproses kembali atau dimusnahkan) (Anonim, 2006).

Produk kembalian adalah produk jadi yang telah beredar, dikembalikan

dari semua mata rantai distribusi ke pabrik karena keluhan mengenai kerusakan,

daluarsa, atau alasan lain misalnya kondisi wadah atau kemasan yang

menimbulkan keraguan akan identitas, mutu, jumlah dan keamanan produk yang

bersangkutan.
 21

Penarikan kembali produk adalah suatu proses penarikan kembali dari

satu atau beberapa batch atau seluruh batch produk tertentu dari peredaran.

Penarikan kembali produk merupakan suatu kegiatan menarik kembali produk

dari semua mata rantai distribusi apabila ditemukan adanya produk yang tidak

memenuhi persyaratan mutu, keamanan dan penandaan atau adanya efek yang

merugikan kesehatan (Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2005).

F. Kurkumin

Kurkumin ( 1,7-bis(4′ hidroksi-3 metoksifenil )-1,6 heptadien, 3,5-dion

dikenal sebagai bahan alam yang mempunyai aktivitas biologis, diekstraksi dari

rhizome tanaman jenis Curcuma longa Linn. Kurkumin memiliki berat molekul =

368,37 g/mol (C = 68,47 %; H = 5,47 %; O = 26,06 %), berwarna kuning muda,

titik lebur 1830 C dan larut dalam pelarut organik (metanol, etanol atau benzena),

asam asetat glasial serta tidak larut dalam air (Tonnesen, Karlsen, 1985).

Kurkumin tergolong senyawa diarilheptanoid dengan rumus molekul

C21O6H2O (Tonnesen and Karlsen, 1985). Strukturnya yang rigid dan planar

(adanya sistem konjugasi) membuat afinitas kurkumin terhadap lipid bilayer

menjadi besar, dan juga bertanggung jawab terhadap warna kuning yang ada

(Nakayama, 1997). Zat warna kuning dari kurkumin sering digunakan sebagai

bahan tambahan makanan, bumbu, atau obat-obatan (Warsi et al., 2003).

Kurkumin juga mempunyai aroma yang khas dan tidak bersifat toksik bila

dikonsumsi oleh manusia. Jumlah kurkumin yang aman dikonsumsi oleh manusia
 22

adalah 100 mg/hari sedangkan untuk tikus 5 mg/hari (Rosmawani dkk, 2007).

Panjang gelombang 425 nm diketahui sebagai panjang gelombang serapan

maksimum kurkumin dimana menghasilkan sensitivitas pengukuran paling baik

(Paramasivam et al., 2008).

Gambar 4. Struktur senyawa kurkumin

Serbuk kering rhizome (turmerik) mengandung 3-5% kurkumin dan dua

senyawa derivatnya dalam jumlah yang kecil yaitu demetoksikurkumin dan bis-

demetoksikurkumin, yang dikenal dengan kurkuminoid (Tonnesen dan Karlsen,

1985).

O O

HO OH
kurkumin
OCH3 OCH3

O O

HO demetoksikurkumin OH

OCH3
 23

O O

HO Bis-demetoksikurkumin OH

Gambar 5. Struktur molekul kurkuminoid (Aggarwal, Bhatt, Ichikawa, Ahn, Sethi,

Sandur, Natarajan, Seeram, dan Shishodia, 2006)

Stabilitas kurkumin sangat dipengaruhi oleh pH lingkungan. Prinsipnya

kurkumin relatif stabil pada pH asam, tetapi akan terdekomposisi secara cepat

pada pH di atas netral (Tonnesen and Karlsen, 1985). Kurkumin mengalami

perubahan warna akibat perubahan pH lingkungan. Kurkumin berwarna kuning

atau kuning jingga pada suasana asam, sedangkan dalam suasana basa berwarna

merah (Tonnesen and Karlsen, 1985).

Dalam larutan berair dengan pH basa, kurkumin mengalami reaksi

degradasi pada gugus metilen aktif pada senyawa tersebut. Degradasi ini terjadi

bila kurkumin berada dalam lingkungan pH 8,5 – 10,0 dalam waktu yang relatif

lama, walaupun hal ini tidak berarti bahwa dalam waktu yang relatif singkat tidak

terjadi degradasi kurkumin (Tonnesen and Karlsen, 1985). Kurkumin dapat

mengalami degradasi membentuk asam ferulat dan feruloilmetan (gambar 6).

Feruloilmetan secara cepat terbentuk produk kondensasi warna kuning sampai

kuning kecoklatan. Produk degradasi pada pH alkali yang terbentuk adalah asam

ferulat, vanilin dan aseton serta jumlahnya meningkat seiring bertambahnya waktu

(Stankovic, 2004).
 24

Gambar 6. Contoh produk degradasi kurkumin pada pH alkali (Stankovic, 2004)

Selain pH lingkungan, sifat kurkumin yang tidak kalah penting adalah

sensitivitasnya pada cahaya. Bila kurkumin terkena cahaya, akan terjadi

dekomposisi struktur berupa degradasi fotokimia senyawa tersebut. Prinsipnya,

kurkumin tidak stabil terhadap cahaya terutama dalam bentuk larutan (Van

derGoot, H., 2002).

 25

Gambar 7. Produk fotodegradasi kurkumin (Tonnesen and Karlsen, 1985)

Karena sifatnya yang tidak stabil, kurkumin harus segera diukur

menggunakan densitometer (TLC Scanner) sesaat setelah pengembangan selesai.

kemudian diukur absorbansinya pada λmaks 426,5 nm. Analisis penetapan kadar

kurkumin dilakukan pada panjang gelombang maksimum, pengukuran pada

daerah visibel dikarenakan kurkumin memiliki warna (kuning) sehingga panjang

gelombang terletak antara 400-800 nm, memiliki gugus kromofor yang panjang

dan gugus auksokrom serta memiliki bentuk molekul (Zahro dkk, 2009).
 26

G. Kromatografi Lapis Tipis

1. Kromatografi

Kromatografi didefinisikan sebagai prosedur pemisahan zat terlarut oleh

suatu proses migrasi diferensial dinamis oleh sistem yang terdiri dari dua fase atau

lebih, salah satu diantaranya bergerak secara berkesinambungan dalam arah

tertentu dan di dalamnya zat- zat itu menunjukkan perbedaaan mobilitas

disebabkan adanya perbedaan dalam adsorpsi, partisi, kelarutan, tekanan uap,

ukuran molekul, atau kerapan muatan ion. Dengan demikian masing- masing zat

dapat diidentifikasi atau ditetapkan dengan metode analitik.

Teknik kromatogarfi umum membutuhkan zat terlarut terdistribusi ia

antara dua fase, satu diantaranya diam (fase diam), yang lainnya bergerak (fase

gerak). Fase gerak membawa zat terlarut melalui media, hingga terpisah dari zat

terlarut lainnya, yang teraluasi lebih awal atau lebih akhir. Umumnya zat terlarut

dibawa melalui media pemisah oleh aliran suatu pelarut berbentuk cairan atau gas

yang disebut eluen. Fase diam dapat menjadi zat penjerap, seperti halnya penjerap

alumina yang diktifkan, silika gel, dan resin penukar ion, atau dapat bertindak

melarutkan zat terlarut sehingga terjadi pertisi antara afse diam dan fase gerak.

Dalam proses terakhir ini suatu lapisan cairan dalam suatu penyangga yang inert

berfungsi sebagai fase diam. Partisi merupakan mekanisme pemisahan yang

utama dalam kromatografi gas- cair, kromatografi kertas, dan bentuk kromatografi

kolom yang disebut cair- cair. Dalam praktek, sering kali pemisahan disebabkan

oleh suatu kombinasi efek adsorpsi dan partisi (Anonim, 1995).

 27

Kromatogarafi merupakan cara pemisahan yang mendasaran partisi

cuplikan antara fase gerak danfase diam. Fase gerak dapat berupa gas atau cairan

dan fase diam dapat berupa cairan atau padatan. Kromatografi mempunyai

beberapa keuntungan antara lain:

a. Metode pemisahan cepat dan mudah

b. Menggunakan peralatan yang murah dan sederhana

c. Membutuhkan campuran cuplikan yang sedikit

d. Pekerjaan dapat diulang (Hardjono, 1983).

2. Kromatografi lapis tipis

Kromatografi lapis tipis adalah suatu cara pemisahan yang berdasarkan

pada pembagian campuran senyawa dalam dua fase, dimana fase gerak bergerak

terhadap fase diam dan fase diam berupa suatu bidang datar. Kromatografi lapis

tipis dikenal juga dengan kromatografi kolom terbuka, dimana pemisahan dapat

dilakukan berdasarkan atas pembagian penyerapan atau gabungannya tergantung

dari jenis zat pelarut.

Di barbagai jenis teknik kromatogarfi, kromatografi lapis tipis adalah

yang paling cocok untuk analisis obat di labolatorium farmasi, karena metodenya

sederhana, cepat dalam pemisahan, sensitif, kecepatan pemisahan tinggi dan

mudah untuk memperoleh kembali senyawa- senyawa yang dipisahkan dan

memerlukan jumlah cuplikan yang sangat sedikit (Khopkar, 1990).

Dalam pemisahan suatu senyawa harus dipilih fase diam, fase gerak, dan

cara kerja yang sesuai. Pemisahan yang lebih baik dapat diperoleh dengan

mengadakan perubahan- perubahan pada fase diam, fase gerak, dan cara kerja
 28

yang antara lain meliputi kejenuhan, temperatur dalam bejana kromatografi, cara

pengembangan dan keadaan permukaan.

Identifikasi senyawa- senyawa yang terpisah pada lapisan tipis lebih baik

dikerjakan dengan pereaksi warna, tetapi lazimnya untuk identifikasi

menggunakan harga Rf (Hardjono, 1983). Harga Rf merupakan parameter

karakteristik KLT. Harga Rf didefinisikan sebagai perbandingan antara jarak

senyawa dari titik awal dan jarak tepi muka pelarut dari titik awal (Roth, 1994).

Angka Rf berjangka antara 0,00 sampai 1,00 dan hanya dapat ditentukan dua

desimal (Stahl, 1985).

Harga Rf untuk senyawa murni dapat dibandingkan dengan harga Rf

standar. Pengukuran yang sering dipakai lainnya menggunakan pengertian Rx

atau Rstd yang didefenisikan sebagai perbandingan antara jarak yang digerakkan

oleh senyawa standar yang diketahui. Senyawa standar biasanya memiliki sifat-

sifat kimia yang mirip dengan senyawa yang dipisahkan pada kromatogram

(Hardjono, 1983).

Pada kromatogram KLT dikenal istilah atau pengertian faktor retardasi

(Rf) untuk tiap- tiap noda kromatogram yang didefenisikan sebagai:

Rf = =

HRf = Rf x 100

Sedangkan untuk maksud analisis kualitatif dilakukan dengan cara

membandingkan noda kromatogram sampel dengan noda kromatogram “reference

standar” yang dikenal sebagai faktor retensi relatif (Rx) :

Rx =
 29

Rx =

(Mulja H.M. & Suharman, 1995).

a. Fase diam. Fase diam yang sering digunakan dalam KLT adalah

bahan penyerap (adsorben). Dua sifat penting yang harus diperhatikan untuk KLT

adalah ukuran dan homogenitas dari partikel penyerap. Sebab daya lekat pada

pendukung sangat ditentukan oleh kedua sifat tersebut. Partikel yang kasar tidak

dapat memberikan pemisahan yag baik. Silika gel merupakan penyerap yang

paling banyak digunakan dalam KLT. Pada umumnya ditambah dengan bahan

pengikat untuk memberikan kekuatan perlekatan pada pendukungnya. Bahan

pengikat yang sering digunakan adalah gipsum, dan silika gel yang diberikan

tambahan senyawa, ini dikenal dengan istilah “silika gel G”. Kadang- kadang

untuk mempermudah identifikasi ditambah zat yang berfluorosensi sehingga

dikenal dengan silika gel GF. Bahan penyerap lain yang digunakan ialah alumina,

selulosa, sefadex, poliamida, kieselguhr, dan amilum (Harborne, 1973).

b. Fase gerak. Fase gerak adalah medium angkut yang terdiri atas satu

atau beberapa pelarut. Fase gerak bergerak di dalam fase diam yaitu lapisan

berpori karena ada gaya kapiler. Fase gerak juga mempengaruhi koefisien

pembagian melalui daya larutnya. Disamping kelarutan relatif zat terlarut dalam

fase gerak, perlu dipertimbangkan pula persaingan antara zat terlarut dengan

pelarut terhadap bidang adsorbsi pada permukaan fase diam. Pelarut yang

mengelusi terlalu cepat tidak akan dapat memisah dengan baik, sebaliknya pelarut

yang bergerak terlalu lambat akan memberikan waktu elusi yang terlalu panjang.

Fase gerak yang biasanya dipakai dapat dikelompokkan ke dalam deret eluotopi
 30

berdasarkan efek elusinya. Urutan polaritas dari fase gerak tersebut (dari non

polar ke polar) adalah n – hexane, heptana, siklohexsan, karbontetra klorida,

benzena, kloroform, eter, etil asetat, piridina, aseton, metanol, dan air. Efek

elusinya naik dengan kenaikkan kepolaran pelarut. Laju rambat juga tergantung

pada viskositas pelarut dan juga stok larutan. Terdapat berbagai kemungkinan

untuk deteksi senyawa pada kromatografi lapis tipis (Stahl, 1985).

Kromatogram pada pelat KLT akan tampak setelah visualisasi dengan

cara fisika atau cara kimia. Noda kromatogram tiap- tiap komponen yang terpisah

setelah visualisasi tampak sebagai noda yag bulat apabila terjadi proses pemisahan

dengan baik. Pengekoran noda kromatogram terjadi apabila proses pemisahan

yang terjadi tidak sempurna yang digambarkan dengan noda yang tidak bulat

(berekor). Terlalu tingginya konsentrasi komponen yang ditentukan juga

merupakan salah satu penyebab terjadinya kromatogram yang berekor. Penyebab

pengekoran yang lain adalah ketidakjenuhan tank (chamber) KLT sehingga fase

mobil yang mengelusi pelat KLT segera menguap dalam ruangan tangki KLT.

Ketidaktepatan pemilihan fase mobil terhadap jenis fase mobil dan macam sampel

yang dianalisi juga merupakan penyebab pengekoran kromatogram yang lainnya

(Mulja H.M. & Suharman, 1995).

Oleh karena itu pada pelaksanaannya harap diperhatikan masalah antara

lain: aktivitas fase diam pada pelat, dengan jalan memanaskan pelat KLT dalam

tanur dengan suhu 105 – 110oC selama 60 menit dan pendinginan dalam

eksikator. Penyiapan chamber basah dengan fase mobil. Penotolan larutan sampel
 31

pada KLT dilakukan dengan pipet mikro atau jarum mikro dengan diameter

penotolan diusahakan seminimal mungkin (Mulja H.M. & Suharman, 1995).

3. KLT- Densitometri

KLT- Densitometri merupakan salah satu dari metode analisa kuantitatif

penetapan kadar suatu senyawa dengan metode ini dilakukan dengan mengukur

kerapatan bercak senyawa yang dipisahkan dengan kerapatan bercak senyawa

standar yang dielusi bersama- sama (Hardjono, 1985).

Metode densitometri mempunyai cara kerja yang sederhana dan cepat.

Pada metode densitometri diperlukan absorbens dan fase gerak yang murni. Untuk

memperoleh hasil yang baik lazimnya digunakan absorbens siap pakai yang telah

mengalami pra pencucian (Gritter, 1991).

Alat densitometri memunyai sumber sinar yang bergerak di atas bercak

pemisahan pada lempeng kromatografi yang akan ditetapkan kadar komponennya.

Lazimnya lempeng itu digerakkan menyusuri berkas sinar yang berasal dari

sumber sinar tersebut. Bercak yang kecil dan intensif akan menghasilkan suatu

puncak kurva absorbsi yang sempit dan tajam, sebaliknya bercak yang lebar akan

menghasilkan puncak kurva absorbsi yang melebar dan tumpul (Sudjadi, 1998).

Teknik pengukuran dapat didasarkan atas pengukuran intensitas sinar

yang diserab (absorbansi), intensitas sinar yang dipantulkan (reflaktansi) atau

intensitas sinar yan difluoresensikan (fluoresensi). Teknik pengukuran

berdasarkan refleksi dimana sinar datang sebagian diserap dan sebagian lagi

dipantulkan. Dimana Sifat pemantulan ini akan menjadi sensitif dan selektif bila

sinar yang datang adalah monokromatis. Disini biasanya dipilih sinar pada
 32

panjang gelombang yang diserap atau dipantulkan paling banyak oleh noda yang

diteliti. Banyaknya sinar yang direfleksikan atau ditangkap oleh suatu alat yang

disebut reflection photomultiplier yang akan diteruskan ke pencatat atau rekorder

untuk diubah menjadi suatu puncak atau kromatogram. Luas puncak sesuai

dengan konsentrasi senyawa pada noda yang diukur kerapatannya (Mintarsih,

1990).

Pada beberapa alat TLC scanner sudah dilengkapi alat pemproses data

atau mikro komputer, sehingga integrasi luas puncak atau tinggi puncak tersebut

dapat langsung direkam dan dicatat langsung sebagai kadarnya, melalui teknik

pemograman tertentu. Noda yang terkecil dan intensif akan menghasilkan suatu

puncak yang sempit dan tajam, sebaliknya noda yang lebar dan kurang intensif

akan menghsilkan puncak yang lebar maupun tumpul. Penelusuran bercak dapat

dilakukan secara horizontal maupun vertikal (scanning horizontal atau scanning

vertikal). Penelusuran bercak secara horizontal dapat dilakukan satu persatu, atau

apabila satu plat bercak yang diperoleh segaris semua maka dapat dilakukan

penelusuran untuk semua bercak sekaligus. Sedangkan cara penelusuran vertikal,

hanya dapat di lakukan satu persatu. Pada penelusuran bercak horizontal dengan

penelusuran beberapa bercak sekaligus hanya dapat dilakuakan apabila bercak-

barcak tersebut benar- benar berada dalam satu baris. Cara ini akan mengalami

kesulitan jika bercak yang sangat dekat dengan bercak yang akan ditetapkan,

karena ada kemungkinan bercak yang tidak diiinginkan ikut pula ditetapkan

(Mintarsih, 1990).
 33

Berdasarkan atas jalannya sinar, penelusuran dapat dilakukan dengan dua

cara yaitu penelusuran lurus dan penelusuran zig- zag (naik turun). Pada

penelusuran lurus, sinar yang mengenai bercak berjalan lurus dari kiri ka kanan,

sdangkan pada penelusuran zig- zag, sinar yang mengenai bercak berjalan zig- zag

dari kiri ke kanan. Besarnya jarak, naik turunnya sinar dapat diatur menurut

kebutuhan, yang diperhitungkan dengan besar kecilnya bercak, yang dalam

operasi alat dikenal sebagai lebar penelusuran (scan width) (Mintarsih, 1990).

Penelusuran bercak akan mendapatkan hasil yang baik apabila dilakukan

pada panjang gelombang maksimum, karena perubahan konsentrasi pada bercak

sedikit saja sudah terdeteksi. Pengukuran dilakukan dengan menelusuri bercak

yang akan ditetapkan kadarnya pada kisaran panjang gelombang zat tersebut.

Pelat yang digunakan untuk KLT pada densitometri sebaiknya digunakan

pelat buatan pabrik, karena pada pelat buatan sendiri fase diamnya kurag rata,

sehingga akan mempengaruhi hasil penelusuran dengan densitometri, yaitu berupa

puncak yang lebar dan kasar. Puncak yang lebar disebabkan kurang kompaknya

fase diam, puncak yang kasar disebabkan permukaan pelat yang kurang rata

(Mintarsih, 1990).

Pada umumnya tebal lapisan tipis pada lempeng yang digunakan adalah

0,20 mm – 0,25 mm maksimum 0,33 mm, untuk mengurangi efek hamburan sinar

yang disebabkan oleh fase diam terhadap lineritas hubungan serapan dan

konsentrasi dari senyawa yang diteliti. Hubungan antara serapan terhadap

konsentrasi dilinearkan dengan dasar teori kubelka- Munk, menggunakan kurva

karja linear yag telah diprogramkan oleh suatu mikro komputer. Kurva serapan
 34

konsentrasi tersebut ditentukan olah harga paramater hamburan yang disebabkan

olah fase diam. Harga parameter hamburan tersebut tergantung ukuran dan

distribusi partikel fase diam pada lempeng KLT (Supardjan, 1987).

Ada dua cara penetapan dengan alat densitometer. Pertama, setiap kali

penetapan ditotolkan sediaan baku dari senyawa yang bersangkutan dan dielusi

bersama dalam satu lempeng, kemudian AUC (luas daerah di bawah kurva)

sampel dibandingkan dengan harga AUC zat baku. Yang kedua, dengan membuat

kurva baku hubungan antara jumlah zat baku dengan AUC. Kurva baku diperoleh

dengan membuat totolan zat baku pada pelat KLT dengan bermacam – macam

konsentrasi (minimal tiga konsentrasi). Bercak yang diperoleh dari AUC dengan

alat densitometer. Dari kurva baku diperoleh persamaan : y = bx + a, dimana x

adalah banyaknya zat yang ditotlkan dan y adalah AUC (Supardjan, 1987).

4. Optimasi Metode

Parameter – parameter yang digunakan untuk optimasi metode dalam

KLT-Densitometri adalah :

a. Sensitivitas (sensitivity) adalah kemampuan untuk mendeteksi atau mengukur

analit yang berukuran mikro (kecil).

b. Selektivitas (selectivity) adalah kemampuan sistem kromatografi untuk

memproduksi nilai Rf berbeda untuk tiap senyawa dalam suatu campuran.

c. Efisiensi (efficiency) adalah keruncingan peak dibandingkan panjangnya waktu

dari senyawa kontak dengan fase diam. Analisis KLT-Densitometri mencari

kondisi yang menghasikan puncak simetris karena puncak yang asimetris dapat
 35

menghasilkan perhitungan yang tidak teliti, penurunan derajat resolusi serta

waktu keluarnya peak yang tidak reprodusibel.

Gambar 8. Pengukuran tailing peak (Synder et.al., 1997)

Parameter yang digunakan untuk menilai bentuk peak kromatogram adalah

peak asymmetry factor (As) yang diukur pada 10% tinggi puncak.

Puncak yang simetri memiliki nilai As sama dengan 1, sedangkan puncak

dengan nilai As pada rentang 0,9-1,2 masih dikatakan baik. Parameter lain yang

dapat digunakan yaitu peak tailing factor (Tf) yang diukur pada 5% tinggi

puncak.

Untuk nilai keasimetrisan kurang dari 2, As dan Tf nilainya mirip. Berikut tabel

hubungan antara As dan Tf (Synder et.al., 1997).

 36

Tabel I. Hubungan antara peak asymmetry factor dan tailing factor (Synder, et.al., 1997)

d. Nilai retardasi faktor (Rf) adalah nilai rasio dari jarak migrasi center of a zone

analit dibagi jarak migrasi pelarut, keduanya diukur dari permulaan

perambatan. Rf dapat dihitung dengan persamaan:

Harga Rf yang baik antara 0,2-0,8. Hal ini dikarenakan pada Rf ini didapatkan

resolusi optimum dimana peningkatan resolusi pada KLT dalam

pengembangan satu dimensi untuk meningkatkan selektivitas dengan berbagai

komposisi fase gerak (Sherma, et.al., 2003).

e. Faktor resolusi (Rs) adalah ukuran pemisahan dari dua puncak yang berdekatan

dapat diukur dengan persamaan:

Pemisahan dua senyawa dapat digambarkan sebagai berikut:

 37

Gambar 9. Pemisahan dua senyawa (Johnson dan Stevenson, 1978)

Harga Rs ≥ 1,5 disebut baseline resolution, yaitu pemisahan sempurna dari dua

puncak yang berdekatan. Dalam prakteknya, pemisahan dengan harga Rs = 1,0

(kedua puncak berhimpit lebih kurang 2%) dianggap memadai (Pescok et. al.,

1976). Untuk pemisahan yang baik Rs harus ≥ 1,5 karena berarti pemisahan

kedua senyawa ≥ 99,7% (Sastrohamidjojo, 2002).

f. Coefficient of corelation (CV) adalah nilai absolut dari standar deviasi, nilainya

biasa dalam bentuk persentase. CV ini biasa digunakan dalam kimia analisis

untuk mengekspresikan presisi dan keterulangan dari suatu analisis. Cara

menghitungnya adalah standar deviasi dari seri replikasi analisis sampel dibagi

rata-rata, hasilnya dikali 100. Rumusnya :

CV yang baik bila ≤ 2 (Sherma,et.al., 2003).

 38

H. Analisis satistik

1. Uji parametrik Shapiro – Wilk

Penggunaan statistik parametris, bekerja dengan asumsi bahwa data

setiap variabel penelitian yang akan dianalisis memebentuk distribusi normal.

Untuk itu sebelum peneliti menggunakan teknik statistik parametris sebagai

analisisnya , maka peneliti harus membuktikan terlebih dahulu, apakah data yang

akan dianalisis itu berdistribusi normal atau tidak. (Sugiyono, 2008). Untuk

mengetahui apakah distribusi data mempunyai distribusi normal atau tidak secara

analitis dapat digunakan uji Kolmogorov – Smirnov atau uji Shapiro – Wilk. Uji

parametrik Shapiro – Wilk ini digunakan untuk jumlah sampel yang sedikit

(kurang atau sama dengan dari 50) (Dahlan, 2009).

2. Independent One Way Anova

One Way Anova mengunakan lebih dari dua sampel yang berbeda dan

tidak saling berhubungan (independent). Tujuan dilakukan analisis Anova ini

untuk mengetahui reprodusibilitas antar sampel yang berbeda (Sugiyino, 2008).

Uji one way ANOVA (uji parametrik) digunakan jika memenuhi syarat sebagai

berikut

Tabel II. langkah-langkah untuk menentukan uji hipotesis Independent One Way
Anova
Langkah Jawaban
Menentukan variabel yang Variabel yang dihubungkan adalah
dihubungkan numerik dan katagorik
Menentukan jenis hipotesis Komparatif
Menentukan masalah skala variabel Numerik
Menentukan berpasangan atau tidak Tidak berpasangan
berpasangan
Menentukan jumlah kelompok Tiga kelompok
(Dahlan, 2009).
 39

I. Landasan Teori

OHT adalah obat tradisional yang disajikan dari ekstrak atau penyarian

bahan alam dan telah ditunjang dengan pembuktian ilmiah berupa penelitian-

penelitian pra-klinik. Pembuatan OHT berdasarkan pada Cara Pembuatan Obat

Tradisional yang Baik (CPOTB) yaitu telah dilakukan standarisasi terhadap bahan

baku yang digunakan dalam produk jadi dan memenuhi persyaratan mutu yang

berlaku. Standarisasi bahan baku diperlukan agar dapat diperoleh bahan baku

yang seragam yang akhirnya dapat menjamin efek farmakologi tanaman tersebut.

Kiranti merupakan salah satu produk OHT yang mengandung banyak

senyawa kimia berkhasiat salah satunya adalah kurkumin. Kandungan kurkumin

pada sediaan cair OHT merk Kiranti, belum dapat diketahui secara pasti. Hal ini

disebabkan karena tidak adanya peraturan yang mengatur mengenai batas minimal

maupun maksimal dari kandungan kurkumin didalam suatu sediaan. Oleh karena

itu dalam rangka melihat kadar kurkumin yang terkandung di dalam setiap

sediaan OHT merk Kiranti perlu dilakukan analisis kuantitatif berupa penetapan

kadar. Analisis penetapan kadar kurkumin dalam OHT merk Kiranti dilakukan

dengan menggunakan tiga nomor batch yang berbeda sehingga dapat dilihat

reprodusibilitasnya dari setiap proses produksi yang berbeda.

KLT- Densitometri merupakan salah satu dari metode analisa kuantitatif.

Penetapan kadar suatu senyawa dengan metode ini dilakukan dengan mengukur

kerapatan bercak senyawa yang dipisahkan dengan kerapatan bercak senyawa

standar yang dielusi bersama-sama.

 40

J. Hipotesis

Kadar kurkumin dalam sediaan cair obat herbal terstandar merk Kiranti

dapat ditentukan dengan menggunakan metode KLT – densitometri dan kadar

kurkumin antar batch dalam proses produksi reprodusibel.

 41

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan jenis penelitian non eksperimental deskriptif

karena tidak ada intervensi atau perlakuan terhadap subjek yang diamati.

B. Variabel

1. Variabel bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah nomor batch dalam sampel.

2. Varibel tergantung

Variabel tergantung pada penelitian ini yaitu Rf, resolusi, AUC, dan

reprodusibilitas kadar kurkuminoid dalam sampel

3. Variabel pengacau terkendali

a. Pelarut. Untuk mengatasinya, digunakan pelarut pro analisis yang

memiliki kemurnian tinggi.

b. pH larutan. Untuk mengatasinya dilakukan pengaturan pH larutan

baku kurkumin, yaitu pada pH 4.

c. Tempat pengambilan sampel. Untuk mengatasinya, pengambilan

sampel dilakukan hanya pada satu tempat saja. Jadi sampel yang diteliti memiliki

persamaan kondisi penyimpanan.

d. Cahaya. Untuk mengatasinya, pengerjaan dilakukan diruangan

dengan intensitas cahaya yang terbatas serta dengan penggunaan alumunium foil.

41
 42

C. Defenisi Operasional

1. OHT

Merupakan obat tradisional yang disajikan dari ekstrak atau penyarian

bahan alam yang telah ditunjang dengan pembuktian ilmiah berupa penelitian-

penelitian pra-klinik, pada penelitian sampel yang digunakan berupa sediaan cair

Obat Herbal Terstandar Merk Kiranti.

2. Kromatografi Lapis Tipis

Sistem KLT yang digunakan dalam penelitian adalah fase diam berupa

silika gel G 60 dan fase gerak berupa campuran kloroform p.a : asam asetat glasial

p.a (9,5 : 0,5). Sistem kromatografi pada penelitian ini merupakan kromatografi

fase normal.

3. KLT- Densitometri

KLT- Densitometri merupakan salah satu dari metode analisa kuantitatif

penetapan kadar suatu senyawa dengan metode ini dilakukan dengan mengukur

kerapatan bercak senyawa yang dipisahkan dengan kerapatan bercak senyawa

standar yang dielusi bersama- sama

4. Kadar kurkumin

Kadar kurkumin pada penelitian ini dinyatakan dalam satuan mg/mL.

 43

D. Bahan-bahan Penelitian

Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah baku kurkumin (hasil

sintesis Prof. Dr. SudibyoMartono, M.S., Apt., yang telah dikonfirmasikan

strukturnya dengan metode spektroskopi H-NMR dan Mass spectra, serta

memiliki titik lebur 181,2 – 182,40C), metanol p.a (E. Merck), asam asetat glasial

p.a (E. Merck), kloroform p.a (E. Merck), lempeng KLT silikagel 60 G (E.

Merck), aquadest dan sediaan cair obat herbal terstandar (OHT) merk Kiranti yang

mengandung kurkuminoid.

E. Alat-alat Penelitian

Alat yang digunakan adalah alat yang digunakan dalam penelitian ini

meliputi neraca analitik (OHAUS Carat Series PAJ 1003) dengan spesifikasi

Scaltec SBC 22 maksimum 60/210 g; min 0,001 g; d=0,01/0,1 mg, e=1 mg,

indikator pH, mikropipet (Socorex,), ultrasonikator (Retsch tipe T460 no

V935922013 Ey), Densitometer (CAMAC TLC Scanner 3 CAT. No. 027.6485

SER. No.160602), labu ukur 5 mL dan 10 mL, cawan arloji, corong, flakon, pipet

tetes, bekker glass, sendok, pengaduk, stirer, sentrifugasi, bejana kromatografi.

F. Tata Cara Penelitian

1. Pemilihan sampel

Sampel dipilih dari suatu Apotek yang berada daerah Yogyakarta.

Sampel yang digunakan adalah sediaan cair obat herbal terstandar merk Kiranti.
 44

Dalam penilitian ini digunakan sampel dari 3 nomor batch produksi yang berbeda

dan dari setiap batch diambil sampel sebanyak 10.

2. Pembuatan fase gerak

Campuran fase gerak yang digunakan dalam penelitian ini dibuat dalam

perbandingan yaitu campuran kloroform p.a : asam asetat glasial p.a (9,5 : 0,5).

3. Pembuatan pelarut (metanol pH 4)

Metanol p.a. ditambah dengan asam asetat glasial p.a. dengan

perbandingan yaitu campuran metanol p.a: asam asetat glasial p.a (9,0 : 1,0). pH 4

dapat diukur dengan indikator kertas pH.

4. Pembuatan larutan baku kurkumin

a. Pembuatan larutan stok. Menimbang seksama lebih kurang 10,0 mg

serbuk baku kurkumin kemudian dilarutkan dengan metanol pH 4 dalam labu

takar 10,0 ml hingga tanda.

b. Pembuatan seri larutan baku. Membuat seri larutan baku kurkumin

0,50, 0,75, 1,00, 1,25, 1,50 dan 1,75 mg/ml dengan cara mengambil sebanyak

0,250 ml; 0,375 ml; 0,500 ml; 0,625 ml; 0,750 ml dan 0,875 ml larutan baku

kurkumin 1000 ppm, kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 5 ml lalu

diencerkan dengan methanol pH 4 hingga tanda.

5. Penetapan λ maksimum

Seri larutan baku kurkumin 0,50; 1,00; dan 1,75 mg/ml ditotolkan dengan

volume penotolan 3 µl pada plat KLT dengan fase diam silika gel G 60 dan

setelah kering dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhi

dengan fase gerak yang telah dibuat pada point 1. Setelah mencapai jarak rambat
 45

10 cm, plat dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan. Plat hasil pengembangan

kemudian secepatnya diukur panjang gelombangnya dengan densitometer.

Panjang gelombang maksimum ditentukan berdasarkan serapan maksimum yang

dihasilkan oleh ketiga seri larutan baku.

6. Pembuatan kurva baku kurkumin

Masing-masing seri larutan baku kurkumin 0,50; 0,75; 1,00; 1,25,; 1,50;

dan 1,75 mg/ml ditotolkan dengan volume penotolan 3 µl pada plat KLT dengan

fase diam silika gel G 60 dan setelah kering dikembangkan dalam bejana

kromatografi yang telah dijenuhi dengan campuran fase gerak yang telah dibuat

pada point 1. Setelah mencapai jarak rambat 10 cm, plat dikeluarkan dari bejana

dan dikeringkan. Plat hasil pengembangan kemudian secepatnya diukur AUC dan

tinggi peaknya dengan densitometer. Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali dan

pilih persamaan kurva baku yang paling baik.

7. Optimasi preparasi sampel

Sebanyak 6,0 ml sampel sediaan cair dimasukkan ke dalam setiap labu

takar 10,0 ml kemudian diencerkan dengan metanol pH 4 hingga tanda. Kemudian

setiap larutan sampel disari menggunakan ultrasonikator selama 5, 10, 15, 20, 25,

dan 30 menit. Masing-masing larutan kemudian dimasukkan ke dalam tabung

sentrifugasi lalu disentrifuse selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Setiap

hasil preparasi sampel ditotolkan 2 kali setiap perlakuan yang sama dengan

volume penotolan 3,0 µl pada plat KLT dengan fase diam silika gel G 60 dan

setelah kering dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhi

dengan fase gerak yang telah dibuat pada point 1. Setelah mencapai jarak rambat
 46

10 cm, plat dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan. Plat hasil pengembangan

kemudian diukur AUC dengan densitometer pada panjang gelombang serapan

maksimum sehingga di dapatkan data berupa AUC sampel. Setiap sampel diamati

kadarnya sehingga didapat waktu optimal yang diperlukan untuk mengisolasi

kurkumin dari sampel.

8. Preparasi sampel

Sepuluh botol sampel dengan nomor batch yang sama dicampur dalam

satu wadah. Sebanyak 6,0 ml sampel sediaan cair dimasukkan ke dalam labu takar

10,0 ml lalu diencerkan dengan metanol pH 4 hingga tanda. Larutan hasil

replikasi sampel kemudian disari menggunakan ultrasonikator sesuai dengan

waktu hasil optimasi preparasi sampel lalu disentrifugasi selama 15 menit dengan

kecepatan 3000 rpm. Preparasi sampel ini dilakukan pada tiap batch sampel dan

setiap batch dilakukan replikasi sebanyak 5 kali.

9. Penetapan kadar kurkumin dalam sampel

Masing-masing larutan sampel hasil preparasi sampel ditotolkan dengan

volume penotolan 3,0 µl pada plat KLT dengan fase diam silika gel G 60 dan

setelah kering dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhi

dengan campuran fase gerak hasil optimasi. Setelah mencapai jarak rambat 10 cm,

plat dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan. Plat hasil pengembangan kemudian

discanning dengan densitometer pada panjang gelombang serapan maksimum

sehingga di dapatkan data luas area dari bercak yang digambarkan dengan satu

puncak sekaligus dengan luas puncaknya yang dikenal dengan area di bawah

kurva (AUC). Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali.

 47

G. Analisis hasil

Analisis yang dilakukan dalam penelitian ini merupakan Analisis

Kuantitatif. Analisis kuantitatif yang dilakukan berdasarkan pada analisis AUC

dari setiap sampel terhadap kurva baku kurkumin yang telah diperoleh dari tahap

validasi. Data AUC kurkumin yang didapat dari masing – masing batch

dimasukkan ke dalam persamaan kurva baku dan ditentukan kadar kurkumin yang

terkandung pada setiap batch. Analisis yang dilakukan meliputi:

1. Uji parametrik Shapiro – Wilk

Untuk menguji apakah distribusi data normal atau tidak

2. Independent sample One Way Anova dengan taraf kepercayaan 95%

Analisis statistik Independent sample One Way Anova dengan taraf

kepercayaan 95% digunakan untuk menguji apakah ada perbedaan yang bermakna

antar kadar kurumin dalam ketiga nomor batch yang berbeda. Pada penelitian ini

rumusan hipotesis sementara yang digunakan adalah tidak terdapat perbedaan

kadar kurkumin antara batch 1, batch 2, dan batch 3.

 48

BAB IV

PEMBAHASAN

Metode penetapan kadar kurkumin dalam sediaan cair OHT merk Kiranti

dapat digunakan dalam analisis kadar kurkimin dalam sampel dengan baik karena

telah dilakukan optimasi dan validasi metode pada awal penelitian.

Pada tahap optimasi telah diperoleh komposisi fase gerak yang baik

untuk pemisahan kurkumin yaitu klorofom p.a. : asam asetat glasial p.a. (95:5)

dan kondisi kurkumin yang paling stabil yaitu pada pH 4. Selain itu telah

dilakukan validasi metode analisis, validasi metode analisis dilakukan untuk

membuktikan bahwa metode analisis yang digunakan memenuhi persyaratan

validitas sehingga memberikan hasil analisis yang dapat dipercaya. Berdasarkan

tahap validasi yang telah dilakukan pada awal penelitian disimpulkan bahwa

Metode KLT-densitometri dengan fase diam silika gel G 60 dan fase gerak

kloroform p.a. :asam asetat glasial p.a. (9,5:0,5), memiliki akurasi yang baik pada

konsentrasi 50-100 ppm, presisi yang baik pada konsentrasi 50-175 ppm,

linearitas dan spesifisitas yang baik, serta range antara 50-100 ppm. Berdasarkan

hasil tersebut, maka metode KLT-densitometri ini memiliki validitas yang baik

untuk menetapkan kadar kurkumin dalam sampel.

48
 49

A. Pembuatan fase gerak

Fase gerak yang digunakan dalam penelitian ini dibuat berdasarkan hasil

optimasi, yaitu dengan perbandingan kloroform p.a : asam asetat glasial p.a (9,5 :

0,5). Pembuatan fase gerak dengan jenis dan komposisi tersebut bertujuan agar

didapatkan polaritas fase gerak yang sesuai sehingga dapat memisahkan kurkumin

dengan senyawa lain dalam sampel secara optimal. Penggunaan asam asetat

glasial, sebagai salah satu komposisi fase gerak, bertujuan untuk memberikan

suasana asam agar kestabilan kurkumin terjaga. Sedangkan Pembuatan fase gerak

dengan menggunakan bahan-bahan pro analisis (p.a) bertujuan agar diperoleh

fase gerak yang dapat berinteraksi secara baik dengan senyawa atau analit di

dalam sampel, dengan tingkat kemurnian yang tinggi maka fase gerak dapat

berinteraksi sempurna dengan analit sehinnga diperoleh puncak yang maksimal

pada kromatogram. Kurkumin memiliki kestabilan pada pH asam, oleh karena itu

dengan penambahan asam asetat glasial pada fase gerak dapat memberikan

suasana asam yang bertujuan untuk menjaga kurkumin agar tidak mudah

mengalami degradasi. Sistem kromatografi pada penelitian ini merupakan

kromatografi fase normal, karena fase gerak pada penelitian ini bersifat non polar,

sedangkan fase geraknya, yaitu silika gel bersifat polar.

 50

B. Pembuatan pelarut (metanol pH 4)

Metanol p.a. ditambah dengan asam asetat glasial p.a. dengan perbandingan yaitu

metanol p.a: asam asetat glasial p.a (9,0 : 1,0). Metanol sendiri memiliki pH 5,

sehingga untuk menurunkan pHnya hingga 4, dilakukan penambahan asam asetat

glasial sebanyak 1 bagian pada setiap 9 bagian metanol. pH 4 dapat diukur dengan

indikator kertas pH. Pelarut dibuat dalam pH 4 (asam) karena kurkumin

merupakan senyawa yang tidak stabil dalam pH basa, dapat terdegradasi pada

gugus metilen aktifnya, gugus metilen pada kurkumin ini aktif karena memiliki H

alfa yang sangat mudah lepas sehingga memiliki sifat cenderung asam, H alfa ini

bersifat asam karena diapit oleh dua gugus karbonil yang memiliki sifat sebagai

gugus penarik elektron. Ketika ada basa maka gugus metilen aktif terputus

sehingga kurkumin terdegradasi.

Gambar 10. Gugus metilen aktif kurkumin

= gugus metilen aktif

Apabila kurkumin terdegradasi, maka kadar yang diperoleh akan

berkurang sehingga tidak dapat merepresentasikan kadar yang sebenarnya. Oleh

karena itu dilakukan penetapan pH optimum kurkumin, agar diketahui pH larutan

yang paling dapat menjaga stabilitas kurkumin, sehingga tidak terdegradasi

selama pengerjaan.
 51

Penggunaan metanol p.a. sebagai pelarut karena dapat melarutkan

dengan baik kurkumin dan berbagai senyawanya dalam OHT cair merk Kiranti.

Selain itu, metanol p.a. akan menguap setelah penotolan serta memiliki panjang

gelombang 205 nm yang berbeda dengan panjang gelombang kurkumin 425 nm

sehingga tidak ikut terdeteksi pada alat densitometer.

C. Penetapan λ maksimum

Panjang gelombang maksimum adalah panjang gelombang dimana suatu

larutan mempunyai serapan maksimum. Dalam penelitian ini, panjang gelombang

yang diperoleh dari tahap optimasi serapan maksimum larutan baku kurkumin 425

nm. Untuk menentukan panjang gelombang maksimum digunakan tiga

konsentrasi baku yaitu, 0,25mg/ml; 1,00 mg/ml; dan 1,75 mg/ml yang bertujuan

untuk memastikan bahwa panjang gelombang yang diperoleh adalah senyawa

kurkumin dibuktikan dengan panjang gelombang yang diperoleh pada ketiga

konsentrasi reprodusibel. Penentuan panjang gelombang maksimum dengan cara

mengukur pada daerah panjang gelombang 400-500 nm dengan detektor sinar

visibel. Hasil pengukuran dibandingkan dengan panjang gelombang maksimum

literatur yaitu 425 nm (Mohammad, dkk., 2007). Berikut ini adalah pola spektra

seri larutan baku pada pengukuran panjang gelombang maksimum (425 nm).
 52

Gambar 11. Pola spektra seri larutan baku pada pengukuran panjang gelombang
maksimum

Tabel III. Hasil pengukuran panjang gelombang maksimum pada seri larutan baku

Dari tabel III dapat disimpulkan serapan maksimum larutan baku

kurkumin pada ketiga konsentrasi adalah 425 nm. Pengukuran panjang gelombang

maksimum dalam Farmakope Indonesia edisi IV (1995) dimaknai memenuhi

syarat jika tepat atau dalam batas 2 nm dari panjang gelombang yang ditentukan.

Dengan demikian panjang gelombang maksimum kurkumin sesuai dengan

panjang gelombang teoritis. Sehingga dapat dipastikan senyawa tersebut adalah

 53

kurkumin. Jadi pengukuran kadar kurkumin selanjutnya akan dilakukan pada

panjang gelombang 425 nm.

Pengukuran kadar kurkumin dengan metode KLT-Densitometri

dilakukan pada panjang gelombang maksimum karena pada panjang gelombang

maksimum, perubahan absorbansi untuk setiap satuan konsentrasi adalah paling

besar, sehingga kepekaan analisis adalah maksimal.

D. Pembuatan kurva baku kurkumin

Pembuatan kurva baku ditujukan untuk melihat korelasi antar seri kadar

larutan baku dengan absorbansi yang dihasilkan sehingga didapatkan persamaan

kurva baku. Persamaan kurva baku yang didapat selanjutnya akan digunakan

untuk menetapkan kadar kurkumin yang terdapat dalam sampel. Seri larutan baku

kurkumin yang digunakan adalah 0,50; 0,75; 1,00; 1,25; 1,50; dan 1,75 mg/ml.

Berikut ini adalah kromatogram salah satu seri larutan baku yang diukur

pada panjang gelombang 425nm.

Gambar 12. Kromatogram baku

Gambar kromatogram baku (gambar 12) menunjukkan 1 peak tunggal

yang runcing. Pada kromatogram tidak terdapat peak lain dengan demikian dapat
 54

disimpulkan bahwa peak yang dihasilkan berupa peak dari kurkumin yang

memiliki nilai Rf 0,55.

Tabel IV. Data replikasi kurva baku kurkumin

Baku kurkumin
Replikasi I Replikasi II Replikasi III
Seri baku Seri baku Seri baku
AUC/100 AUC/100 AUC/100
(ppm) (ppm) (ppm)
51,5 70,099 49,5 65,286 50 66
77,25 94,033 74,25 87,858 75 88,641
103 111,592 99 111,082 100 112,986
128,75 135,354 123,75 135,778 125 134,555
154,5 154,615 148,5 156,98 150 157,746
180,25 184,44 173,25 178,188 175 182,011

A 25,0948 A 20,1123 A 19,6500

B 0,8624 B 0,9196 B 0,9245
r 0,9976 r 0,9997 r 0,9999

Kurva baku yang digunakan dalam penelitian ini adalah kurva baku yang

memiliki linearitas yang baik. Linearitas menyatakan adanya hubungan respon

pengukuran yang secara langsung proporsional terhadap konsentrasi (jumlah)

analit. Suatu kurva baku memiliki linearitas yang baik apabila memiliki nilai r >

0,999. Dari tabel IV dapat dilihat bahwa ketiga replikasi kurva baku telah

memenuhi persyaratan linearitas yang baik, namun yang dipilih untuk digunakan

pada perhitungan kadar selanjutnya adalah kurva baku replikasi III, karena

memiliki nilai r yang lebih besar bila dibandingkan nilai r dari replikasi I dan II .

Kurva hubungan konsentrasi kurkumin dengan AUC dapat dilihat pada gambar

11. Dengan demikian persamaan kurva baku yang digunakan adalah

y=0,9245x+19,6500, dengan r = 0,9999.

 55

Gambar 13. Hubungan antara konsentrasi kurkumin dengan AUC/100 (replikasi

III)

Korelasi yang baik antara konsentrasi dengan absorbansi dapat dilihat

dari kurva tersebut dimana dengan bertambahnya konsentrasi absorbansinya juga

meningkat dan membentuk garis yang linier sehingga persamaan garis yang

diperoleh dapat digunakan untuk menghitung kadar kurkumin.

E. Pemilihan sampel

Pada penelitian ini sampel diambil dari suatu Apotek yang berada di

daerah Yogyakarta. Sampel yang digunakan adalah sediaan cair Obat Herbal

Terstandar (OHT) merk Kiranti dengan 3 nomor batch produksi yang berbeda dan

dari setiap batch digunakan sebanyak 10 sampel dengan Expired date pada batch

1 September 20011, batch 2 Agustus 2011, batch 3 September 2011. Salah satu

senyawa komposisi dari pada sediaan kiranti tersebut adalah Curcumae

domesticae Rhizoma yang mengandung kurkumin yang memiliki fungsi

farmakologis sebagai analgesik.

 56

Pengambilan sampel ini dikontrol dengan cara pengambilan sampel

hanya dilakukan pada satu apotek saja, karena penelitian bertujuan untuk

membandingan kadar kurkumin pada setiap batch yang berbeda, maka diharapkan

dengan pengambilan sampel pada satu apotek akan meminimalkan bias yang

terjadi terhadap kadar kurkumin dalam sampel, dimana senyawa kurkumin

merupakan senyawa yang sensitif yaitu peka terhadap perubahan kondisi

lingkungan karena pengaruh suhu lingkungan dan terhadap cahaya, terutama bila

di dalam bentuk larutan (Tonnesen dan Karsen, 1985). Senyawa kurkumin

merupakan senyawa yang sensitif dalam bentuk larutan karena interaksi antar

molekul di dalam larutan lebih lemah bila dibandingkan dengan interaksi molekul

di dalam padatan sehingga bila terjadi perubahan baik karena suhu lingkungan

ataupun cahaya, kestabilan kurkumin di dalam larutan akan sangat mudah

terganggu. Dengan adanya kontrol terhadap tempat pengambilan sampel maka

diharapkan sampel yang diteliti mengalami kondisi dan perlakuan yang sama,

meliputi proses pembutan sediaan, proses pendistribusian maupun penyimpanan.

Agar hasil analisis yang diperoleh mewakili populasi sampel maka

teknik pengambilan sampel yang digunakan adalah probability sampel khususnya

simple random sampling. Simple random sampling merupakan teknik

pengambilan anggota sampel dari populasi yang dilakukan secara acak tanpa

memperhatikan strata yang ada di dalam populasi tersebut, sehingga setiap

anggota populasi mempunyai peluang yang sama untuk dipilih menjadi anggota

sampel (Sugiyono, 2008). Dalam penilitian ini digunakan sampel dari 3 batch

yang berbeda dan dari setiap batch diambil sampel sebanyak 10 botol sampel
 57

secara acak sehingga total sampel yang digunakan sebanyak 30 botol sampel.

Banyaknya sampel yang digunakan sudah memenuhi syarat statistika, menurut

Sugiono (2008) ukuran sampel yang layak untuk penelitian adalah antara 30

sampai dengan 500. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa sampel yang

digunakan di dalam penelitian ini sudah memenuhi parameter penelitian

representatif sehingga hasil yang diperoleh mewakili populasi.

F. Optimasi preparasi sampel

Pada tahap optimasi preparasi sampel, larutan sampel disari dengan

menggunakan ultrasonikator selama 5, 10, 15, 20, 25, dan 30 menit. Proses

penyarian dengan menggunakan ultrasonikator pada tahap preparasi sampel

sangat penting, karena sampel yang digunakan pada penelitian ini merupakan

sediaan cair OHT merk Kiranti yang mengandung banyak senyawa campuran

selain kurkumin. Kiranti mengandung berbagai senyawanya kimia lain, oleh

karena itu untuk memisahkan senyawa kurkumin dari senyawa kimia lainnya

perlu dilakukan penarikan atau penyarian senyawa kurkumin pada sampel OHT

merk Kiranti. Optimasi preparasi sampel ini dilakukan dengan cara mengoptimasi

pada lamanya proses penyarian dengan tujuan agar kurkumin yang larut di dalam

metanol pH 4 akan terpisah dari senyawa kimia lain yang tidak dapat larut dalam

metanol pH 4 secara sempurna. Variasi waktu penyarian ini dibuat dengan range

waktu 5 – 30 menit, dengan tujuan dalam range waktu 5 – 30 menit kurkumin

yang terkandung dalam larutan sampel sudah tersari secara sempurna dalam

pelarut yaitu metanol pH 4.

 58

Setiap sampel yang sudah melalui tahap penyarian dengan menggunakan

ulterasonikator dimasukkan ke dalam tabung sentrifuse lalu disentrifugasi selama

15 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Tahap sentrifugasi ini berfungsi untuk

memisahkan antara kurkumin yang larut dalam metanol pH 4 dengan senyawa

kimia lain yang tidak dapat larut dalam metanol pH 4 sehingga pada saat larutan

sampel disentrifugasi, kurkumin akan masuk ke bagian supernatan sedangkan

senyawa kimia lainnya akan mengendap. Hasil preparasi sampel ditotolkan dan

dikembangkan dalam bejana yang telah dijenuhkan terlebih dahulu. Plat hasil

pengembangan kemudian discan pada panjang gelombang serapan maksimum.

Berikut adalah hasil kromatogram dari modifikasi lamanya penyarian dengan

menggunakan ultrasonikator.

(a)
0

(b)

(c)
59

(d)

(e)
 60

(f)

(g)

Gambar 14. (a) Baku kurkumin konsentrasi 50 ppm (konsentrasi rendah), (b)
kromatogram penyarian kurkumin dari sampel dengan menggunakan
ultrasonikator selama 5 menit, (c) selama 10 menit, (d) selama 15 menit, (e) selama
20 menit, (f) selama 25 menit, (g) selama 30 menit

Kurkumin diisolasi dari berbagai senyawanya dalam sampel

menggunakan ultrasonikator dengan waktu penyarian selama 5, 10, 15, 20, 25,

dan 30 menit. Bila dilakukan perbandingan antara kromatogram sampel dengan

kromatogram baku, dapat dilihat bahwa sampel dari keenam variasi waktu

mengandung kurkumin hal ini dapat diketahui dengan cara membandingkan

antara Rf dari baku kurkumin dengan Rf peak dari sampel. Peak yang dihasilkan

baku memiliki nilai Rf 0,55 sedangkan nilai Rf peak (ke-3) yang dihasilkan dari

setiap sampel memiliki nilai Rf yang bervariasi yaitu 0,51-0,53. Setiap sampel

memiliki nilai Rf yang mendekati nilai Rf dari baku kurkumin, maka dapat
 61

disimpulkan bahwa setiap sampel dengan waktu penyarain yang bervariasi

mengandung kurkumin. Dari kromatogram yang diperoleh dapat dilihat bahwa

semua sampel yang mengalami variasi waktu penyarian dengan menggunakan

ultrasonikator terdapat 3 peak dimana nilai resolusi antara peak kurkumin dengan

peak ke dua baik yaitu lebih dari 1,5. Harga resolusi yang diperoleh yaitu 1,60

dengan penyarian selama 5 menit; 1,79 dengan penyarian selama 10 menit; 2,47

dengan penyarian selama 15 menit; 2,63 dengan penyarian selama 20 menit; 2,43

penyarian selama 25 menit, 2,43 penyarian selama 30 menit. Dengan demikian

dapat diketahui pemisahan dari dua puncak yang berdekatan sudah sempurna.

Maka dapat disimpulkan bahwa pemisahan kurkumin dari senyawa lain dengan

proses penyarian selama 5, 10, 15, 20, 25, dan 30 menit sudah sempurna.

Untuk melihat nilai kuantitatif peak dalam sampel dengan variasai waktu

penyarian menggunakan ultrasonikator maka dilakukan perhitungan kadar

kurkumin dengan menggunakan nilai AUC. Maka diperoleh data yang

ditunjukkan pada tabel V.

Tabel V. Hasil pengukuran kadar kurkumin sampel pada variasai waktu penyarian
dengan menggunakan ultrasonikator
Waktu penyarian AUC Kadar (ppm) Rf Rs
dengan ultrasonikator
(menit)
5 6073,1 44,44 0,51 1,60
10 6720,9 49,94 0,53 1,79
15 7223,9 56,88 0,53 2,47
20 7162,1 56,22 0,53 2,63
25 6565,7 49,76 0,53 2,43
30 5738,4 40,82 0,53 2,43

Dari tabel V dapat dilihat bahwa kelima sampel memberikan profil

kromatogram yang baik. Nilai resolusi yang dihasilkan dari setiap sampel baik
 62

yaitu ˃ 1,5 dan Rf kurkumin dari kelima sampel mendekati Rf baku kurkumin.

Namun demikian dari kelima sampel yang diukur tidak semua sampel memiliki

kadar yang masuk ke dalam rentang kadar baku kurkumin 50-100 ppm (level

rendah). Dari tabel data hasil optimasi waktu penyarian dapat dilihat bahwa waktu

penyarian dengan menggunakan ultrasonikator selama 15 dan 20 menit

memberikan nilai kadar kurkumin yang masuk kedalam rentang kadar baku

kurkumin yaitu 56,88 dan 56,22 ppm. Oleh karena itu dapat disimpulkan waktu

penyarian yang baik yaitu selama 15 – 20 menit karena dalam rentang waktu 15 –

20 menit kurkumin dapat diisolasi dari sampel secara maksimal hal ini dapat

dilihat dari kadar kurkumin yang diperoleh tinggi. Tahap selanjutnya digunakan

waktu penyarian selama 15 menit. Waktu penyarian dengan menggunakan

ultrasonikator dipilih 15 menit karena kadar kurkumin yang dihasilkan dari

penyarian dengan menggunakan ultrasonikator selama 15 menit paling tinggi bila

dibandingkan dengan kadar kurkumin yang diperoleh dari variasi waktu penyarian

yang lain. Maka dapat disimpulkan dengan dilakukan variasi waktu penyarian

menggunakan ultrasonikator diperoleh waktu optimal penyarian kurkumin yaitu

selama 15 menit.

Pada waktu yang optimal ini dilakukan replikasi sebanyak 5 replikasi

untuk membuktikan apakah kadar yang diperoleh mempunyai keterulangan yang

baik atau tidak. kemudian dilakukan pengukuran AUC pada 5 replikasi sampel

kurkumin. Nilai AUC yang diperoleh kemudian dimasukkan ke dalam persamaan

baku kurkumin sehingga didapatkan kadar kurkumin pada setiap replikasi,

pengukuran pada replikasi sampel ini bertujuan untuk melihat apakah nilai kadar
 63

kurkumin yang dihasilkan antar setiap replikasi memiliki keterulangan yang baik

atau tidak dengan cara mengitung nilai CV.

Tabel VI. Replikasi sampel kurkumin dengan waktu penyarian dengan

menggunakan ultrasonikator 15 menit
Replikasi ke AUC Kadar (ppm)
1 7153,4 56,12
2 7181,5 56,43
3 7160,3 56,20
4 7158,3 56,17
5 7159,7 56,19

Kadar kurkumin yang diperoleh dengan waktu penyarian selama 15

menit dengan menggunakan ultrasonikastor pada setiap replikasi kurkumin (tabel

VI) masuk kedalam range kadar rendah baku kurkumin yaitu 50-100 ppm dan

memberikan nilai CV yang baik. Nilai CV yang didapatkan pada replikasi sampel

kurkumin dengan waktu penyarian selama 15 menit sebesar 0,15% (kurang dari

2%) sehingga dapat disimpulkan bahwa waktu penyarian selama 15 menit dapat

digunakan dalam tahap penetapan kadar selanjutnya karena memiliki keterulangan

yang baik.
 64

Gambar 15. Kadar kurkumin pada 5 replikasi, lama penyarian 15 menit

dengan menggunakan ultrasonikator
Kadar kurkumin pada lima replikasi dengan lama penyarian 15 menit

memberikan grafik yang hampir membentuk garis lurus dapat dilihat pada gambar

16. Maka dapat disimpulkan bahwa pada setiap replikasi dengan lama penyarian

15 menit memberikan kadar kurkumin yang hampir sama (reprodusibel), dengan

demikian cara pengambilan sampel dan cara penghomogenan sampel dapat

digunakan dalam preparasi sampel selanjutnya.

G. Penetapan kadar kurkumin dalam sampel

Penetapan kadar kurkumin dengan menggunakan sampel sediaan cair

OHT merk Kiranti dilakukan dalam kondisi yang sama seperti pada validasi

metode penetapan kadar kurkumin dalam sediaan cair OHT merk Kiranti dengan

menggunakan metode KLT-Densitometri. Penetapan kadar dilakukan terhadap

OHT merk Kiranti dari 3 batch yang berbeda, dilakukan replikasi sebanyak 5 kali

untuk setiap batch. Berikut adalah hasil pengukuran volume sediaan cair OHT

merk Kiranti dalam 30 botol sampel yang dianalisis.

 65

Tabel VII. Data pengukuran volume sediaan cair OHT merk Kiranti

Batch Banyak sampel (botol) Volume rata-rata (mL)

1 10 145,65
2 10 145,67
3 10 145,66

Tabel VII menunjukkan data pengukuran volume sediaan cair OHT

merk Kiranti pada ketiga batch, diperoleh CV sebesar 0,0069%. Nilai CV yang

diperoleh < 2% maka dapat disimpulkan bahwa keseragaman volume antar batch

baik.

Proses preparasi sampel dilakukan dengan menghomogenkan larutan 10

botol Kiranti sampel dari nomor batch yang sama terlebih dahulu melaui

pengadukan menggunakan stirer selama 15 menit. Setiap sampel disari

menggunakan ultrasonikator, lamanya proses penyarian ini disesuai dengan waktu

hasil optimasi preparasi sampel. Replikasi sampel diukur absorbansinya pada

panjang gelombang 425 nm kemudian ditentukan kadar kurkumin dalam setiap

replikasi dengan menggunakan persamaan kurva baku dan didapatkan jumlah

kurkumin dalam lima replikasi dengan tiga nomor batch seperti pada tabel VIII.
 66

Tabel VIII. Kadar kurkumin pada sampel kurkumin di dalam setiap batch

Batch Replikasi Area Kadar kurkumin Keterangan

ke (mg/mL)
1 1 7377,3 0,05854 X rata- rata =
2 7352,9 0,05828 0,0589
3 7487,1 0,05973 Sd= 6,48x10-4
4 7466,2 0,05951 CV= 1, 0987 %
5 7379,4 0,05857
2 1 6390,1 0,04787 X rata – rata =
2 6388,5 0,04785 0,0479
3 6436,8 0,04837 Sd = 2,97x10-4
4 6408,7 0,04807 CV = 0, 6203%
5 6362,6 0,04757
3 1 7669,3 0,06170 X rata – rata =
2 7565,1 0,06057 0,0610
3 7577,3 0,06071 Sd = 6,31 x10-4
4 7671,4 0,06172 CV = 1,0333%
5 7552,9 0,06044

Pada tabel VIII didapat nilai CV dari setiap nomor batch < 2 % dengan

demikian dapat disimpulkan bahwa preparasi sampel yang dilakukan memiliki

presisi yang baik yaitu keterulangan pengambilan sampel dari setiap batch baik

sehingga memberikan kedekatan hasil pengukuran dan dapat dikatakan sampel

sudah tercampur homogen pada saat dilakukan preparasi. Dengan demikian kadar

kurkumin yang diperoleh dari setiap batch dapat mewakili kadar kurkumin pada

batch tersebut. Berdasarkan nilai AUC yang diperoleh dari setiap batch maka

dapat dihitung kadar pada setiap replikasi dan kadar rata- rata dari setiap batch,

maka didapatkan kadar rata – rata kurkumin pada setiap batch adalah sebagai

berikut pada batch 1 dengan 5 replikasi yaitu 0,5893x10-1 mg/ml kurkumin; pada

batch 2 dengan 5 replikasi 0,4794x10-1 mg/ml kurkumin, dan pada batch 3

dengan 5 replikasi yaitu 0,6103x10-1 mg/ml kurkumin.

 67

Menurut Tonessen dan Karlsen (1995) Serbuk kering rhizome (turmerik)

mengandung 3-5% kurkuminoid dan 77% dari kurkuminoid terdiri dari kurkumin.

Berdasarkan jumlah Curcuma domesticae Rhizoma yang tertera pada label

kemasan Kiranti maka diperoleh perhitungan kandungan kurkumin pada setiap

sampel yaitu pada batch 1 kandungan kurkumin sebesar 2,9248 mg/ml sampai

7,9299 mg/ml; batch 2 kandungan kurkumin sebesar 2,9244 mg/ml sampai 7,9289

mg/ml; batch 3 kandungan kurkumin sebesar 2,9246 mg/ml sampai 7,9294 mg/ml

(perhitungan dapat dilihat pada lampiran). Dari hasil perhitungan kadar rata-rata

kurkumin pada setiap batch, menunjukkan bahwa kadar kurkumin di dalam

sampel Kiranti tidak berada dalam range kadar kurkumin dalam sampel Kiranti

secara teoritis. Kadar kurkumin di dalam sampel lebih kecil dengan kadar

kurkumin seharusnya.

Tujuan dilakukan analisis mengenai penetapan kadar di dalam sediaan

yaitu untuk penjaminan mutu dari sediaan tersebut. Pada penelitian ini dilakukan

analisis berupa penetapan kadar kurkumin antar setiap batch dan dilakukan

perbandingan kadar kurkumin dari setiap batch. Perbandingan kadar kurkumin

dari setiap batch bertujuan untuk melihat apakah kadar kurkumin yang terdapat

pada setiap batch reprodusibel atau tidak. Nilai reprodusibilitas dapat diperoleh

melalui perhitungan nilai CV antar batch dan didapatkan nilai CV antar batch

lebih dari 2% yaitu 10,65% dengan demikian dapat disimpulkan bahwa kadar

kurkumin dalam setiap batch tidak reprodusibel. Untuk mendukung analisis

reprodusibilitas antar batch maka digunakan metode analisis statistik. Metode

analisis statistik ini digunakan karena sampel yang kami gunakan berasal dari
 68

pasaran oleh karena itu untuk mendapatkan data atau hasil yang mewakili

populasi dalam pasar kami menggunakan teknik pengambilan sampel secara acak

atau random. Dimana pada saat pengambilan sampel nomor batch yang dipilih

ditentukan secara acak tidak berdasarkan perhitungan ataupun interval tertentu.

Selain itu juga digunakan analisis statistik karena statistik merupakan salah satu

alat quality kontrol dimana dengan menggunakan analisis statistik dalam suatu

penelitian dapat sebagai alat bantu sekaligus sebagai alat pengawas standarisasi

kualitas dari sampel yang akan diteliti (Hasan, 2004).

Metode pengujian hipotesis yang digunakan dalam penelitian ini adalah

pengujian hipotesis komparatif, karena hipotesis komparatif merupakan

pernyataan yang menunjukkan dugaan nilai dalam satu variabel atau lebih (pada

penelitian ini yaitu kadar kurkumin) pada sampel yang berbeda. Pengujian

hipotesis komparatif yang digunakan merupakan komparasi antara lebih dari dua

sampel sering disebut komparasi k sampel. Untuk menganalisis reprodusibilitas

dari 3 batch sekaligus yaitu antara batch 1, batch 2 dan dengan batch 3 digunakan

model komparasi k sampel yaitu dengan menggunakan Independent One Way

Anova dengan taraf kepercayaan 95%. Tingkat kepercayaan yang digunakan

digunakan pada kedua model analisis ini yaitu 95% karena jumlah sampel yang

digunakan dalam penelitian ini sedikit yaitu kurang dari 50 sampel selain itu juga

di dalam penelitian ini banyak faktor lain yang tidak bisa dikontrol yang dapat

mempengaruhi perubahan kadar di dalam sampel salah satunya adalah proses

distribusi.
 69

Sebelum dilakukan uij tersebut, masing-masing data diuji dengan

menggunakan uji Shapiro- Wilk untuk melihat normalitas data. Hal ini disebabkan

karena uji ANOVA merupakan uji parametrik yang mensyaratkan distribusi data

normal. Uji Shapiro- Wilk ini digunakan karena jumlah sampel yang digunakan

dalam penelitian ini sedikit yaitu kurang dari 50 sampel.

Penentuan kesimpulan untuk uji ANOVA dilakukan berdasarkan nilai

probabilitas atau signifikasi, karena lebih mudah dilakukan, lebih praktis, dan

memberikan hasil yang sama jika dibandingkan pengambilan keputusan

berdasarkan t tabel. Penarikan kesimpulan berdasarkan nilai probabilitas ini

dilakukan dengan melihat tingkat signifikasi, dimana jika signifikasi yang

dihasilkan lebih besar dari 0,05 maka data rata-rata antar batch tersebut adalah

tidak berbeda bermakna dan jika signifikasinya lebih kecil dari 0,05 maka data

rata-rata antar batch adalah berbeda bermakna.

Independent One Way Anova dengan taraf kepercayaan 95% untuk

mengetahui apakah terdapat perbedaan yang bermakna antar kadar kurkumin yang

di hasilkan dari ketiga nomor batch produksi yang dianalisis. Uji ANOVA ini

mengunakan lebih dari dua sampel yaitu 3 batch produksi yang berbeda dan tidak

saling berhubungan (independent).

Analisis ANOVA digunakan karena setiap populasi (batch) yang akan

dilakukan penetapan kadar kurkumin memiliki distribusi yang normal,

pengambilan sampel dilakukan secara acak dan setiap sampel tidak terikat sampel

yang lain (independent), maksudnya setiap sampel tidak saling mempengaruhi.

 70

Selain itu setiap populasi (batch) memiliki nilai varians populasi yang sama yaitu

10 botol.

Adapun hasil analisis statistik kadar kurkumin pada batch 1, batch 2, dan

batch 3 menunjukkan bahwa data terdistribusi normal. Hasil ujinya adalah sebagai

berikut.

Tabel IX. Data distribusi normal pada analisis statistik antar kadar kurkumin
pada batch 1, batch 2, dan pada batch 3
Tests of Normality
a
Batch Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk

Statistic Df Sig. Statistic Df Sig.

Kadar batch 1 ,310 5 ,130 ,854 5 ,208

*
batch 2 ,248 5 ,200 ,952 5 ,749

batch 3 ,296 5 ,175 ,794 5 ,073

Dari uji normalitas data (tabel IX), diperoleh nilai signifikasi untuk batch

1 sebesar 0,208; batch 2 sebesar 0,749 dan batch 3 sebesar 0,073. Ketiga batch

mempunyai nilai signifikasi ˃ 0,05 maka dapat disimpulkan bahwa distribusi

normal.

Distribusi kadar kurkumin pada ketiga batch menunjukkan distribusi

normal sehingga analisis statistik dapat dilanjutkan dengan menggunakan uji

ANOVA. Analisis data kadar kurkumin dengan uji Independent one way ANOVA

antar batch 1, dengan batch2, dan dengan batch 3 dapat dilihat pada tabel X.
 71

Tabel X. Data Test of Homogeneity of Variances pada analisis statistik antar

kadar kurkumin pada batch 1, batch 2, dan pada batch 3
Test of Homogeneity of Variances
Kadar

Levene Statistic df1 df2 Sig.

7,382 2 12 ,008
ANOVA
Kadar

Sum of Squares Df Mean Square F Sig.

Between Groups 509,986 2 254,993 857,778 ,000

Within Groups 3,567 12 ,297
Total 513,554 14

Dari tabel X dapat dilihat Signifikasi dari tes homogeneity of variance

menunjukkan anggka 0,008. Karena nilai signifikasi <0,05, maka dapat ditarik

kesimpulan bahwa paling tidak terdapat dua kelompok yang mempunyai varians

data yang berbeda secara bermakna. Karena varians data tidak sama, maka hasil

uji ANOVA pada tabel berikutnya tidak valid. Maka dilakukan transformasi data

agar varians data sama.

Untuk mentransformasi data agar memiliki varians yang sama dapat

dilakukan beberapa kali percobaan transformasi data dengan memperhatikan nilai

slope dan power. Berdasarkan analisis yang dilakukan dan dengan memperhatikan

nilai slope dan power maka didapat bentuk transformasi yang terbaik adalah

1/square root. Hasil yang diperoleh dapat dilihat pada tabel XI.
 72

Tabel XI. Data Test of Homogeneity of Variances pada analisis statistik

1/square root
Test of Homogeneity of Variances
trn_kadar

Levene Statistic df1 df2 Sig.

3,267 2 12 ,074
ANOVA
trn_kadar

Sum of Squares Df Mean Square F Sig.

Between Groups ,001 2 ,000 1103,669 ,000

Within Groups ,000 12 ,000
Total ,001 14

Dari tabel XI diketahui bahwa harga signifikasi 0,074. Terlihat bahwa

tingkat signifikasi 0,074 ˃ 0,05 maka dapat diambil kesimpulan bahwa tidak ada

perbedaan varians antara kelompok data yang dibandingkan dengan kata lain

varians data adalah sama. Karena varians sama, maka uji ANOVA pada tabel

berikutnya adalah valid. Pada uji ANOVA, diperoleh nilai signifikasi sebesar

0,000 yang artinya terdapat perbedaan kadar kurkumin yang bermakna pada kedua

kelompok. Untuk mengetahui pada kelompok mana terdapat perbedaan bermakna

maka dilakukan analisis Post-Hoc (tabel XII).

 73

Tabel XII. Data analisis Post-Hoc

Multiple Comparisons
trn_kadar
LSD

(I) batch (J) batch 95% Confidence Interval

Mean Difference (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound
*
batch 1 batch 2 -,01445 ,00039 ,000 -,0153 -,0136
*
batch 3 ,00227 ,00039 ,000 ,0014 ,0031
dimension3

dimension2
*
batch 2 batch 1 ,01445 ,00039 ,000 ,0136 ,0153
dimension3

*
batch 3 ,01672 ,00039 ,000 ,0159 ,0176
*
batch 3 batch 1 -,00227 ,00039 ,000 -,0031 -,0014
dimension3

*
batch 2 -,01672 ,00039 ,000 -,0176 -,0159

Dengan melihat hasil dari analisis Post-Hoc, diperoleh hasil antar batch 2

dengan batch 3, didapat nilai signifikasi sebesar 0,000; batch 1 dengan batch 3,

didapat nilai signifikasi sebesar 0,000; dan antara batch 1 dengan batch 2, didapat

nilai signifikasi sebesar 0,000. Kadar kurkumin pada setiap nomor batch produksi

dapat disimpulkan berbeda secara bermakna (tidak reprodusibel), hal ini dapat

dilihat dari nilai signifikasi yang diperoleh pada setiap perbandingan antar batch

yaitu < 0,05.

 74

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

Berdasarkan penetapan kadar yang dilakukan diperoleh hasil:

1. Kadar rata – rata kurkumin pada setiap batch adalah sebagai berikut pada

batch 1 yaitu 0,5893 x 10-1 mg/ml kurkumin; pada batch 2 yaitu 0,4794x10-1

mg/ml kurkumin, dan pada batch 3 yaitu 0,6103 x 10-1 mg/ml kurkumin.

2. Kadar kurkumin pada setiap batch tidak reprodusibel.

B. Saran

1. Perlu dilakukan penetapan kadar kurkumin di dalam bentuk sediaan Obat

Herebal Terstandar yang lain.

2. Perlu dilakukan uji kestabilan kurkumin tarhadap panas dalam sediaan cair

Obat Herbal Terstandar merk Kiranti.

74
 75

DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 2000, standarisasi ekstrak, Universitas Muhammadiyah Surakarta,

Surakarta

Anonim, 2005, Kiranti Sehat Datang Bulan Teruji Aman Atasi Nyeri Haid Dan
Keputihan, Research dan Inovation Center, Surabaya

Anonim, 2006, Pemanfaatan Obat Tradisional dengan Pertimbangan Manfaat

dan Kemanannya,
http://jurnal.farmasi.ui.ac.id/pdf/2006/v03n01/lusia0301.pdf, diakses
tanggal 20 Februari 2010

Anonim, 2008a, Obat Tradisional dan Tanaman Obat di Indonesia,

http://www.tanaman-obat.com/tanamanobat, diakses tanggal 25 September
2010

Anonim, 2008b, Penetapan Kadar Kurkuminoid Dalam Serbuk Kunyit Dengan

Teknik HPTLC, Current Science, 95 (11), 1529-1531

Anonim, 2009, Gula Jawa Memiliki Manfaat Kesehatan Diandingkan Gula Tebu,
http://healindonesia.wordpress.com, diakses tanggal 25 September 2010

Anonim, 2010, Asam Jawa (Tamarindus indica),

http://clearinghouse.bplhdjabar.go.id/index.php?option=com_content&vie
w=article&id=196%3Aasam-jawa-tamarindus-indica-
l&catid=59%3Asman10-bdg&Itemid=183&lang=id , diakses tanggal 27
September 2010

Batubara, I., Rafi, M., Darusman, L.K., 2005, Estimasi Kandungan Kurkumin
pada Sediaan Herbal Komersial secara Spektrofotometri Derivatif, Jurnal
Sains Kimia, 9 (1), 28-34

Bermawie, N., Rahardjo, M., Wahyuno, D., Ma’mun, 2005, Status Teknologi Dan
Panen Tanaman Kunyit Dan Temulawak Sebagai Penghasil Kurkumin, 85,
96, Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik, Bogor

Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2004, Keputusan

Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia No. HK
00.05.4.2411 tentang Ketentuan Pokok Pengelompokkan dan Penandaan
Obat Bahan Alam indonesia, Badan Pengawas Obat dan Makanan
Republik Indonesia, Jakarta
 76

Badan Pengawas Obat Dan Makanan RI, 2005, Lampiran Peraturan Kepala
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor HK
00.05.4.1380 tentang Pedoman Cara Pembuatan Obat Tradisional Yang
Baik, Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta

Dahlan, 2009, Statistik Untuk Kedokteran dan Kesehatan, 60-84, Salemba

Medika, Jakarta

Departemen Kesehatan RI, 1977, Materia Medika Indonesia, edisi I , Jakarta, pp.
40-52, 55-57

Departemen Kesehatan RI, 1978, Materia Medika Indonesia, edisi II , Jakarta, pp.
118-121

Departemen Kesehatan RI, 2000, Acuan Sediaan Herbal, Introduction to Alkaloid

a Biogenetic Aproach , Jakarta, pp. 19-65

Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope

Indonesia, edisi IV, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, pp.735-737

Fried dan Sherma, J., 1994, Thin Layer Chromatography Techniques And
Application, Third Edition, Revised And Expended, New York

Gritter, R. J., Bobbit J. M., Schwarting, A. E., 1991, Pengantar Kromatografi,

diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, terbitan ke-2, 107-155, ITB,
Bandung

Hardjono, S., 1985, Kromatografi, 32-34, Laboratorium Analisa Kimia Fisika

Pusat, UGM, Yogyakarta

Harborne, J. B., 1987, Metode Fitokimia Penuntun Cara Menganalisis

Tumbuhan, Terbitan Kedua, 222, ITB, Bandung

Hanani, E., 2010, Standarisasi Simplisia dan Ekstrak Daun Handeuleum

(Graptophyllum Pictum), Laporan Penelitian, Universitas Indonesia,
Jakarta

Hasan, I., 2004, Analisa Data Penelitian dengan Statistik, 116-129, 146-1147,
Bumi Aksara, Jakarta

Hardjono, 1983, Kromatografi, Laboratorium Analisa Kimia Fisika Pusat, UGM,

Yogyakarta, pp.32-34

Khopkar, 1990, Concepts of Analytical Chemistry, diterjemahkan oleh Sapto

Raharjo, Universitas Indonesia Press, Jakarta
 77

Kementerian Kesehatan RI, 1994, Keputusan Menteri Kesehatan RI

Nomor:661/MENKES/VII/1994, Departemen Kesehatan RI, Jakarta

Kementerian Kesehatan RI, 1994, Keputusan Menteri Kesehatan RI

Nomor:661/MENKES/VII/1994, Departemen Kesehatan RI, Jakarta

Martono, 1996, Penentuan Kadar Kurkumin Secara Kromatografi Lapis Tipis-

Densitometri, 11-21, Buletin ISFI Yogyakarta, Vol. 2, No. 4, April 1996

Mintarsih, E.R.R., 1990, Penetapan Kadar Alkaloid Kinina dalam Akar, Batang,
dan Daun Chinchona Succirubra Pavon et Klotzch dari Daerah Kaliurang
secara Spektrodensitometri (TLC-Scanner), Skripsi, Fakultas Farmasi,
UGM, Yogyakarta

Mulja, H. M & Suharman, 1995, Analisis Instrumental, 60, Airlangga University

Press, Surabaya

Musfiroh, I., Indriyati, W., Susilawati, Y., and Percekawati, A., 2010, Curcumin
Quantification in Dossage Forms Using High Performance Liquid
Chromatography, Laporan Penelitian, Fakultas Farmasi, Universitas
Padjajaran, Bandung

Mintarsih, 1990, Penetapan Kadar Alkaloid Kininda dalam Akar, Batang, dan
Daun Chinchona Succirubra Pavon et Klotzsch dari Daerah Kaliurang
Secara Spektrodensitometri (TLC-Scanner),Skripsi, Universitas Gadjah
Mada, Yogyakarta

Nakayama, T., 1997, Affinities of Dietary Phenolic Antioxidants for Lipid

Bilayers, in Shahidi, F., Ho, Chi-Tang. (Eds.), Phytochemicals and
Phytopharmaceutical, 355-356, AOCS Press, USA

Nagappan, K.V., Meyyanathan, Raja, R.B., and Kannan, E., 2009, A Liquid
Chromatography Method for the Simultaneous Detemination of Curcumin
and Piperine in Food Products Using Diode Array Detection, Asian J. V.
Research Chem, 2(2), 115-118

Nugraha, Y., 2009, Kromatografi Kolom dan Kromatografi Lapis Tipis Isolasi
Kurkumin dari Kunyit (Curcuma Longa L.), ITB, Bandung

Paramasivam, M., Aktar, W., Poi, R., Banerjee, H., Bandyopahyay, A., 2008,
Occurrence of curcuminoids in Curcuma longa: A quality standardization
by HPTLC,
http://www.banglajol.info/index.php/BJP/article/viewFile/833/913, diakses
tanggal 15 Februari 2010
 78

Research And Innovation Center, 2005, Uji Klinik KIRANTI Sehat Datang Bulan,
Teruji Aman Atasi Nyeri Haid Dan Keputihan, Orang Tua, Surabaya

Roth, 1994, Pharmaceutical Analysis, diterjemahkan oleh Sarjono Kisman, Slamet

Ibrahim, cetakan 2, Gajah Mada university Press, Yogyakarta

Saputra & Ningrum, 2010, Pengeringan Kunyit Menggunakan Microwave Dan

Oven, Universitas Dipenogoro, Semarang

Sastrohamijoyo, H., 1985, Kromatografi, Ed I, 26-30, Liberty, Yogyakarta

Sismaini, 2010, Standardisasi Ekstrak Metanol Kulit Kayu Kluwih (Artocarpus

Communis J.R. & G.), Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah
Surakarta, Surakarta

Stankovic, 2004, Curcumin : Chemical and Technical Assessment (CTA), JECFA

61st edition, FAO,
ftp://ftp.fao.org/es/esn/jecfa/cta/CTA_61_Curcumin.pdf, diakses tanggal 1
Desember 2010

Stahl, E., 1985, Drug Analysis by Chromatography and Microscopy,3-7,

diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, Institut Teknologi Bandung,
Bandung

Sugiyono, 2008, Statistika Untuk Penelitian, cetakan ketigabelas, 117-190,

Alfabeta, Bandung

Sumiati, T., 2008, Keunggulan dan Manfaat Kunyit, http://id.shvoong.com/lifestyl

e/2005091-keunggulan-dan-manfaat-kunyit/, diakses tanggal 30 Oktober
2010

Supardjan, A.M., 1987, Laporan Penelitian : Pemisahan Tetrasiklin dan Hasil

Uraiannya dalam Sediaan Tetrasiklin Secara KLT-Densitometri, Lembaga
Penelitian, UGM, Yogyakarta

Sudjadi, 1988, Metode Pemisahan, cetakan pertama, Penerbit Kanisius,

Yogyakarta, pp.167-175

Tonnesen, H.H., and Karlsen, 1985, Studies On Curcumin and Curcuminoids

Alkaline Degradation of Curcuming Z.Lebens, Unters, Forsch, 180 : 132-
134

Tonnesen, H. H., 1989, Studies On Curcumin And Curcuminoids, Catalytic Effect

Of Demethoxy And BisdemethoxyCurcumin On The Peroxydation Of
Linoleic Acid By 15- Lipoxygenase, Internal Journal Pharmacy, Vol. XV,
51, 179-181
 79

Tonnesen, H. H., and Karlsen, 1983, Curcuminoid and It’s Compounds, Journal
Chromatography, Vol. 4, 259 -376

Van derGoot, H., 2002, The Chemistry and Qualitative Structure – Activity
Relationships Of Curcumin In Recent Development In
CurcuminPharmacochemistry, Procedings of The International Symposium
on CurcuminPharmacochemistry, 1995, Edited By SuwijyoPramono,
Aditya Media, Yogyakarta

Warsi et al., 2003, Penetapan Kadar Kurkuminoid Total dalam Berapa Jamu
Instant Temulawak, 192-198, FF Universitas Airlangga, Surabaya

Zahro Dkk, 2009, Jurnal Sains & Matematika Volume, Profil Tampilan Fisik Dan
Kandungan Kurkuminoid Dari Simplisia Temulawak (Curcuma
Xanthorrhiza Roxb) Pada Beberapa Metode Pengeringan, Fakultas
Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Diponegoro,
Semarang
 80

LAMPIRAN

80
 81

Lampiran 1. Pernyataan Jaminan Keaslian Bahan Kurkumin Standar Hasil

Sintesis
 82

Lampiran 2. Sistem KLT – Densitometri yang digunakan

83
 84

Lampiran 3. Spektra Kurkumin pada Penetapan pH Optimum Kurkumin

1. pH larutan 3
 konsentrasi 0,4 ppm

 konsentrasi 1 ppm

 konsentrasi 1,6 ppm

 85

2. pH larutan 4
 konsentrasi 0,4 ppm

 konsentrasi 1 ppm

 konsentrasi 1,6 ppm

 86

3. pH larutan 5
 konsentrasi 0,4 ppm

 konsentrasi 1 ppm

 konsentrasi 1,6 ppm

 87

Lampiran 4. Kromatogram baku kurkumin replikasi III

1. Seri 1 (50 ppm)

2. Seri 2 (75 ppm)

3. Seri 3 (100 ppm)

 88

4. Seri 4 (125 ppm)

5. Seri 5 (150 ppm)

6. Seri 6 (175 ppm)

 89

Lampiran 5. Kromatogram validasi metode

1. Konsentrasi rendah (50 ppm)

 Replikasi I

 Replikasi II

 Replikasi III
 90

 Replikasi IV

 Replikasi V

2. Konsentrasi sedang (100 ppm)

 Replikasi I
 91

 Replikasi II

 Replikasi III

 Replikasi IV
 92

 Replikasi V

3. Konsentrasi tinggi (175 ppm)

 Replikasi I

 Replikasi II
 93

 Replikasi III

 Replikasi IV

 Replikasi V
 94

Lampiran 6. Contoh perhitungan kadar kurkumin

Baku kurkumin

Replikasi I Replikasi II Replikasi III

Seri baku Seri baku Seri baku

AUC/100 AUC/100 AUC/100
(ppm) (ppm) (ppm)

51,5 70,099 49,5 65,286 50 66

77,25 94,033 74,25 87,858 75 88,641

103 111,592 99 111,082 100 112,986

128,75 135,354 123,75 135,778 125 134,555

154,5 154,615 148,5 156,98 150 157,746

180,25 184,44 173,25 178,188 175 182,011

A 25,0948 A 20,1123 A 19,6500

B 0,8624 B 0,9196 B 0,9245

r 0,9976 r 0,9997 r 0,9999

Lampiran 7. Persamaan kurva baku dan gambar kurva baku kurkumin

1. Persamaan kurva baku yang digunakan adalah replikasi 3, yaitu :
y=0,9245x+19,6500

2. Gambar kurva baku kurkumin

 95

Lampiran 8. Kromatogram optimasi penyarian dengan ultrasonikator

3. Penyarian dengan ultrasonikator selama 5 menit

4. Penyarian dengan ultrasonikator selama 10 menit

5. Penyarian dengan ultrasonikator selama 15 menit

 96

6. Penyarian dengan ultrasonikator selama 20 menit

7. Penyarian dengan ultrasonikator selama 25 menit

8. Penyarian dengan ultrasonikator selama 30 menit

 97

Lampiran 9. Hubungan Antara Lamanya Waktu Penyarian Menggunakan

Ultrasonikator dengan Kadar Kurkumin yang Diperoleh

Lampiran 10. Nilai AUC dan contoh perhitungan kadar kurkumin

1. AUC kurkumin

Waktu penyarian dengan menggunkan AUC/ 100

ultrasonikator (menit)
5 60,731
10 67,209
15 72,239
20 71,621
25 65,657
30 57,384

2. Contoh perhitungan kadar kurkumin

 y = 0,925x + 19,6500
60,731 = 0,925x + 19,6500
x = 44,44
 y = 0,925x + 19,6500
67,209 = 0,925x + 19,6500

x = 49,94
 y = 0,925x + 19,6500
72,239 = 0,925x + 19,6500
x = 56,88
 y = 0,925x + 19,6500
71,621 = 0,925x + 19,6500
x = 56,22
 98

 y = 0,925x + 19,6500
65,657 = 0,925x + 19,6500
x = 49,76
 y = 0,925x + 19,6500
57,384 = 0,925x + 19,6500
x = 40,82

Waktu penyarian dengan AUC/ 100 Kadar (ppm)

ultrasonikator (menit)
5 60,731 44,44
10 67,209 49,94
15 72,239 56,88
20 71,621 56,22
25 65,657 49,76
30 57,384 40,82

Lampiran 11. Contoh perhitungan resolusi

1. gambar kromatogram penyarian selama 5 menit

Diketahui: Rf kurkumin = 0,51

Rf peak sebelah = 0,35
Perhitungan: Resolusi (Rs)

=
= 1,6 (penyarian dengan ultrasonikator selama 5
menit)
Penyarian dengan ultrasonikator selama 10 menit → 1,79
Penyarian dengan ultrasonikator selama 15 menit → 2,47
Penyarian dengan ultrasonikator selama 20 menit → 2,63
Penyarian dengan ultrasonikator selama 25 menit → 2,63
Penyarian dengan ultrasonikator selama 30 menit → 2,63
 99

Waktu penyarian AUC/ 100 Kadar (ppm) Rf Rs

dengan
ultrasonikator
(menit)
5 60,731 44,44 0,51 1,60
10 67,209 49,94 0,53 1,79
15 72,239 56,88 0,53 2,47
20 71,621 56,22 0,53 2,63
25 65,657 49,76 0,53 2,43
30 57,384 40,82 0,53 2,43

Lampiran 12. Kromatogram Replikasi sampel yang disari dengan

menggunakan ultrasonikator selama 15 menit
Replikasi 1

Replikasi 2
 100

Replikasi 3

Replikasi 4

Replikasi 5
 101

Lampiran 13. Nilai AUC Replikasi sampel yang disari dengan menggunakan
ultrasonikator selama 15 menit

Replikasi ke AUC/100 Kadar (ppm)

1 71,534 56,12
2 71,815 56,43
3 71,603 56,20
4 71,583 56,17
5 71,597 56,19

Lampiran 14. Contoh perhitungan kadar sampel

Replikasi I
y = 0,9245x + 19,65
71,534= 0,9245x +19,65
x = 56,12ppm

Replikasi II
y = 0,9245x + 19,65
71,815 = 0,9245x +19,65
x = 56,43ppm

Replikasi III
y = 0,9245x + 19,65
71,603= 0,9245x +19,65
x = 56,20ppm

Replikasi IV
y = 0,9245x + 19,65
71,583= 0,9245x +19,65
x = 56,17ppm

Replikasi V
y = 0,9245x + 19,65
71,597= 0,9245x +19,65
x = 56,19ppm
 102

Lampiran 15. Perhitungan kadar kurkumin dalam setiap botol OHT merk
Kiranti

Kurkuminoid dalam serbuk kunyit (2-5%)

 Kadar rendah
x 30 g = = 0,6 g
 Kadar tinggi
x 30 g = = 1,5 g

Kurkumin 77% dari kurkuminoid

 Kadar rendah
x 0,6 = 0,462 g

 Kadar tinggi
x 1,5 = 1,15 g

Kandungan kurkumin pada setiap kemasan 150 ml (1 botol kiranti)

a. Batch 1  volume rata-rata = 145,65 ml

 Kadar rendah
= 2,9248 x 10-3 g/ml = 2,9248 mg/ml

 Kadar tinggi
= 7,9299 x 10-3 g/ml = 7,9299 mg/ml

b. Batch 2  volume rata-rata = 145,67 ml

 Kadar rendah
= 2,9244 x 10-3 g/ml = 2,9244 mg/ml

 Kadar tinggi
= 7,9289 x 10-3 g/ml = 7,9289 mg/ml

c. Batch 3  volume rata-rata = 145,66 ml

 Kadar rendah
= 2,9246 x 10-3 g/ml = 2,9246 mg/ml

 Kadar tinggi
= 7,9294 x 10-3 g/ml = 7,9294 mg/ml
 103

Lampiran 16. Kromatogram penetapan kadar

1. Batch 1
 Replikasi I

 Replikasi II

 Replikasi III
 104

 Replikasi IV

 Replikasi V

2. Batch 2
 Replikasi I
 105

 Replikasi II

 Replikasi III

 Replikasi IV
 106

 Replikasi V

3. Batch 3
 Replikasi I

 Replikasi II
 107

 Replikasi III

 Replikasi IV

 Replikasi V
 108

Lampiran 17. Perhitungan kadar kurkumin dalam tiap batch

(1000ppm=1mg/ml)

Batch 1

 Replikasi 1
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 58,5430 ppm 0,05854 mg/ml

 Replikasi 2
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 58,2791 ppm 0,05828 mg/ml

 Replikasi 3
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 59,7303 ppm 0,05973 mg/ml

 Replikasi 4
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 59,5046 ppm 0,05951 mg/ml

 Replikasi 5
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 58,5657 ppm 0,05857 mg/ml

 109

Batch 2

 Replikasi 1
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 47,8648 ppm 0,0479 mg/ml

 Replikasi 2
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 47,8475 ppm 0,04785 mg/ml

 Replikasi 3
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 48,3699 ppm 0,04837 mg/ml

 Replikasi 4
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 48,0660 ppm 0,04807 mg/ml

 Replikasi 5
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 47,5673 ppm 0,047 mg/ml

 110

Batch 3

 Replikasi 1
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 61,7015 ppm 0,06170 mg/ml

 Replikasi 2
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 60,5744 ppm 0,06057 mg/ml

 Replikasi 3
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 60,7063 ppm 0,06071mg/ml

 Replikasi 4
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 61,7242 ppm 0,06172 mg/ml

 Replikasi 5
y= 0,925x + 19,6500

= 0,925x + 19,6500

x = 60,4424 ppm 0,06044 mg/ml

 111

Lampiran 19. Perhitungan kadar rata-rata kurkumin dalam tiap batch

1000 ppm = 1 mg/ml

 Batch 1
X rata-rata =

= 58, 9246 ppm = 0,0589 mg/ml

 Batch 2
X rata-rata =

= 47,9431 ppm = 0,0479 mg/ml

 Batch 3
X rata-rata =

= 61, 0304 ppm = 0,0610 mg/ml

 112

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi yang berjudul “Penetapan Kadar

Kurkumin di dalam sediaan Cair Obat Herbal Terstandar

(OHT) dengan menggunakan metode KLT-Densitometri,

memiliki nama lengkap Veny Megawati Tambunan.

Penulis lahir di Kupang, Nusa Tenggara Timur pada

tanggal 16 Januari 1990 dari pasangan Bapak Obor H.

Tambunan dan Ibu Roma Gultom. Pendidikan formal

yang ditempuh oleh penulis meliputi: SD Katolik Santa Theresia pada tahun

1995-2001, SLTP Santa Theresia pada tahun 2001-2004, SMA Stella Duce pada

tahun 2004-2007 dan melanjutkan kuliah di Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma Yogyakarta pada tahun 2007 hingga tahun 2011. Selama kuliah, penulis

aktif dalam berbagai macam kegiatan, antara lain anggota Divisi Pengabdian

Masyarakat pada Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas Farmasi (BEMF) (2007-

2008), sekertaris Ikatan Senat Mahasiswa Farmasi (ISMAFARSI) (2007-2008),

anggota UKM Kerohanian Apostolos (2007-2009), Anggota Jaringan Mahasiswa

Kesehatan Indonesia (2007-2009).

112