Alejandro Soler.

Cod: 6151487
Giovanny Martín Rodríguez Cod: 6151584
María Alejandra Martínez. Cod: 6152678

Martes 23 de Abril del 2019

Hidrólisis enzimática de proteínas en semillas de Guandú

 Diagrama: En el siguiente diagrama se ilustra el proceso que se raliza en la hidrolisis

enzimatica en semillas de guandu

Revisar el diagrama porque carece de algunas líneas de flujo, por ejemplo la torre de
tamizado qué función cumple? No separa por tamaño de partícula? Cuál es la función del
horno, secar? No remueve agua?

La destilación no separa? Y solo sale una corriente!

En el mezclador después del reactor, qué mezcla? Solo ingresa una corriente. Y en el
depósito de producto se almacena toda la mezcla obtenida del reactor?

Las condiciones técnicas del proceso de hidrólisis enzimática de proteínas se producen en

operaciones por lotes en reactores tipo tanque agitado. Sin embargo este modo de
operación conlleva importantes inconvenientes: utilización por debajo de las
especificaciones de la enzima, coste energético asociado a la desviación térmica de la
enzima, coste de mano de obra, variabilidad lote a lote, entre otros. Para superar estos
inconvenientes se ha empleado reactores con enzimas inmovilizadas y reactores continuos
de membrana. Sin embargo, hasta la fecha su aplicación industrial es muy limitada, debido
a una parte de alto coste asociado a la inmovilización y, por otra, a los fenómenos de
calmatación de las membranas (formación de una capa de torta en la superficie
membranaria, durante la micro filtración tangencial) que limitan su operatividad. Commented [U1]: Quien afirma esto? Citar referencia

El tipo de reactores utilizados en este proceso fueron los siguientes:

 Reactores tipo tanque agitado por lotes: El método de producción de hidrolizados

enzimáticos de proteínas más utilizado es el reactor tipo tanque agitado en
funcionamiento discontinuo (Nilsen y Olsen, 2002). La producción discontinua se
emplea fundamentalmente por su simplicidad de diseño y funcionamiento, así como
por la flexibilidad de operación. Además, no se necesita un sistema de control
complejo y permite trabajar a elevadas concentraciones de sustrato. Sin embargo,
presenta considerables inconvenientes como se mencionó anteriormente: El
elevado coste d enzima. En el reactor discontinuo se debe desactivar la enzima Commented [U2]: Referente?
empleada en cada lote después de alcanzar el grado de hidrólisis deseado, de
manera que la enzima no puede ser reutilizada; Los procesos discontinuos
conllevan un alto coste energético y de mano de obra; Estos procesos son lentos y
presentan bajo rendimiento y productividad, debido a que la hidrólisis enzimática de
proteínas presenta, a menudo. Inhibición por producto.
La hidrólisis enzimática de proteínas en reactores discontinuos ha sido ampliamente
estudiada, el que aplica a la similitud de este tipo de semillas fue Kammoun et al.
(2003) emplearon la enzima comercial Neutrase para la hidrólisis de proteínas de
trigo. El proceso presentó inhibición no competitiva de producto. El grado de
inhibición depende del grado de hidrólisis a grados bajos de este y permaneció
contante a partir de grado de hidrólisis 7,5%. El estudio demostró que existía un alto
grado de correlación entre inhibición y tamaño molecular pequeño de los péptidos,
siendo las fracciones inhibidoras menores de 3 kDa.
.
 Reactores de enzimas inmovilizadas: La inmovilización de enzima sobre soportes
poliméricos ha sido uno de los métodos ensayados para solventar las desventajas
 del reactor discontinuo, ya sea mediante la fijación química o física a una superficie
sólida, o mediante la confinación física de la enzima en un soporte, de manera que
se retienen sus propiedades catalíticas (Cheryan, 1998).
Las principales ventajas que presenta esta técnica son:
- Permiten la operación continua.
- Las enzimas inmovilizadas pueden ser reutilizadas, reduciendo los costes de
producción que conllevan los procesos a gran escala.

Sin embargo, las técnicas de inmovilización también presentan inconvenientes:

- Se han descrito en la literatura pérdidas de actividad entre el 10-90% (dependiendo

del método de inmovilización) debidas a restricciones en la difusión, especialmente
con sustratos coloides y de alto peso molecular.

 Reactores de membrana: Un reactor de membrana consiste en el acoplamiento de

un módulo de separación de membranas a una unidad de reacción.
La membrana es un medio semipermeable, que crea una barrera físico- química
selectiva al paso de determinadas especies. Las especies permeables se separan
selectivamente de la mezcla de reacción debido a la existencia de una fuerza
impulsora (potencial químico, presión o campos eléctricos) que genera el
movimiento de solutos a través de la membrana (por difusión, convección o
migración electroforética, respectivamente). Por otra parte, la membrana rechaza
por completo la enzima, que se recircula recipiente de reacción debido a la
existencia de una fuerza impulsora (potencial químico, presión o campos
 Fase: Se considera que las enzimas que llevan a cabo esta reacción dan a lugar en
el interior de organismos vivos, por lo que la actividad cinética de esta reacción se
desarrolla en las condiciones de un medio de reacción biológico. Es por esto que
esta actividad se caracteriza por tener lugar en condiciones suaves de temperatura
y ph, la velocidad de reacción es muy alta y gran variedad de enzimas llevan a cabo
diferentes reacciones.

 Información cinética: Se refieren modelos cinéticos pseudo-homogéneos de

Michaelis-Menten con inhibición competitiva y no competitiva por producto para
describir la reacción de hidrólisis enzimática de bagazo de caña deslignificado. Se
presenta una metodología para el ajuste parámetros y se comparan las predicciones
de los modelos con resultados experimentales. El modelo con inhibición competitiva
 es el que mejor describe los perfiles de la reacción de hidrólisis enzimática. Un
estudio cinético de la hidrólisis enzimática de proteínas de dicho sustrato, por medio
del análisis de las curvas de hidrólisis bajo diferentes condiciones de trabajo, y se
encontró que es posible ajustar el comportamiento descrito a un modelo matemático
basado en una cinética de reacción de orden cero, desactivación enzimática de
segundo orden e inhibición irreversible inicial de una fracción de la enzima,
pudiéndose determinar de esta forma los parámetros cinéticos del mecanismo de
reacción propuesto. Este estudio permitió obtener información útil para predecir y
manipular el comportamiento de las variables del proceso, lo que podría servir para
dirigir la hidrólisis enzimática hacia la obtención de fracciones peptídicas de interés
biológico. Mediante técnicas de regresión no lineal se ha determinado el valor de los
parametors cinéticos Ka y Kb característicos del modelo propuesto Commented [U3]: Referencia bibliográfica?

 Descripción de los reactivos y productos: Los reactivos usados en el estudio Commented [U4]:
fueron de grado analítico y los métodos empleados fueron estandarizados a priori. Commented [U5R4]: No hace referencia a reactivos de
un estudio específico sino materias primas, insumos y
El plasma fue suministrado por la empresa Yeruvá S. A., en la ciudad de Esperanza, productos de su proceso, del diagrama de este trabajo
provincia de Santa Fe, República Argentina. La presentación del producto fue
líquida, con un contenido proteico de 6,5 %. A este se le realizaron controles
microbiológicos de mohos y levaduras, coliformes totales y mesófilos, en el
momento de la recepción. Para la hidrólisis de proteínas, se utilizó alcalasa 2,4 L
grado alimenticio (actividad específica de 2,45 ± 0,07 AU/g), cuya actividad se
verificó con el método de Takami, Akiba y Horikoshi (1989) modificado; es una
enzima proteolítica producida por fermentación sumergida de una cepa
seleccionada de guandul. El componente principal de la enzima, subtilisina A
(subtilisina Carlsberg), es una endoproteasa. Las condiciones óptimas para alcalasa
2,4 L son temperaturas entre 55 °C y 70 °C, dependiendo del tipo de sustrato, y
valores de pH entre 6,5 y 8,5 Commented [U6]: Transcripción literal de la fuente, no es
lo que se solicita en este item
 Rendimientos:
o En los procesos discontinuos debido a su lenta reacción, genera inhibición
por producto, generado en la hidrolisis enzimática de proteínas, lo que
resulta un bajo rendimiento en este tipo de procesos.
o En general, los rendimientos en la producción de hidrolizados proteicos son
bajos, ya que para la etapa de deshidratación solo se emplea la fracción
soluble, que es la que contiene a los productos de interés de la reacción
 o Mokrane et al (2006) compararon la operación de un reactor de membrana
para la hidrolisis de hemoglobina empleando dos membranas diferentes: una
membrana de micro filtración de 0.14 µm y una membrana de ultrafiltración
de 10kDa. Debido a la adsorción inicial de la proteína nativa y la consiguiente
modificación de la porosidad y las propiedades superficiales de la
membrana, el rendimiento de ambas membranas fue prácticamente idéntico.
o Considerando la naturaleza bioquímica de la reacción, aumentos
importantes se registran en el rendimiento de la misma cuando se suscitan
leves incrementos en la temperatura hasta ciertos niveles indicados, esto
contrasta con las disminuciones observadas en la velocidad de ruptura de
enlaces peptídicos cuando la temperatura supera un valor límite que provee
desnaturalización y perdida de la actividad catalítica de enzimática (Prieto,
2008).

 Limitaciones:
o Los hidrolizados de proteínas se emplean a escala comercial en productos
hipo alérgicos y en nutrición clínica debido a la reducción de antigenicidad
de las proteínas conseguida mediante la hidrolisis enzimática. Actualmente,
los hidrolizados enzimáticos de proteínas se producen en operaciones por
lotes en reactores tipo tanque agitado. Sim embargo, este modo de
operación conlleva importantes incovenientes: infrautilización de enzima,
coste de mano de obra, variabilidad lote a lote, etc. Para superar estos
incovenientes se han empleado reactores con enzimas inmovilizadas y
reactores continuos de membrana. Sin embargo, hasta la fecha su aplicación
industrial es muy limitada, debido por una parte al alto coste asociado a la
inmovilización y, por otra, a los fenómenos de colmatación de las
membranas que limitan su operatividad.
o Tuncturk y Zorba (2006) comprobaron que las hidrolisis limitada de caseína
con Neutrase mejora la capacidad emulsificante, la estabilidad de la
emulsión formada y la densidad de la emulsión frente a la proteína nativa.
Por al contrario, un mayor grado de hidrolisis conlleva un empeoramiento de
las propiedades anteriores.
o En cuanto a la influencia de la concentración de enzima en la reacción de
hidrolisis, si se comparan las curvas correspondientes a una misma
 temperatura y diferentes concentraciones de enzima se puede observar que
la velocidad de reacción es proporcional a la cantidad de enzima añadida.
De hecho, se aprecia una relación lineal entre la velocidad inicial de reacción
y la concentración inicial de enzima para iguales concentraciones de
sustrato. No obstante la cantidad de enzima empleada está limitada por
factores como el coste de enzima o la autolisis, como en el caso de la
tripsina. Normalmente, el fenómeno de la autolisis de enzima no se produce,
ya que la concentración de sustrato es mucho mayor que la de enzima.
 Discusión: El análisis proximal de las semillas de Guandul, cultivadas mostró un
importante contenido en proteína, lo que corrobora el alto valor nutritivo que
presenta esta semilla. Commented [U7]: En este aparte no era lo que otros
discuten, sino ustedes que analizan del procesamiento del
Las mejores condiciones para el proceso de hidrólisis de proteínas presentes en guandul, de la información que se reporta, por ejemplo sino
semillas de Guandul, se obtuvieron por el método de superficie de respuesta, los hay datos de las constantes cinéticas, cómo las podrán
generar o no sería posible, por qué?
valores óptimos encontrados son: pH: 7,2, relación enzima/sustrato: 1,5,
temperatura: 53°C y tiempo de 136, 8 min, los cuales fueron evaluados sobre el
grado de hidrólisis, obteniendo un GH de 10% aproximadamente, con lo que se
pretende generar nuevos procesos que fomente el uso de semillas de Guandul, en
diferentes campos.
Bajo las condiciones del presente estudio se puede afirmar que la reacción de
hidrólisis de proteínas sigue un mecanismo de reacción que representa una cinética
de orden cero con respecto al sustrato, simultánea con una desactivación
enzimática de segundo orden e inhibición por efectos del sustrato de hidrólisis. El
comportamiento de la reacción puede describirse bien empleando métodos
determinísticos como la MSR o métodos probabilísticos como los AG. Ambos
métodos de modelamiento predicen valores similares de los factores que maximizan Commented [U8]:
el GH de la reacción de hidrólisis de proteínas. Commented [U9R8]: Fuente, porque esta información no
fue generada por ustedes.
Y la bibliografía???

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