Produk Cair Dari Ikan Industri Pengalengan Sebagai

Sumber Lanjutan Lipid U3

Abstrak

Industri Pengalengan ikan menghasilkan sejumlah besar limbah cair, yang

dibuang, setelah proses untuk menghilangkan kandungan organik. Namun, proses
pengolahan alternatif dapat dirancang untuk menargetkan pemulihan senyawa yang
berharga; dengan prosedur ini, limbah cair dikonversi menjadi produk cair, menjadi
sumber pendapatan tambahan bagi perusahaan.

Studi ini mengevaluasi metodologi penghijauan dan ekonomi lanjutan untuk

ekstraksi lipid u3 dari produk sampingan cairan pengalengan ikan. Lipid diekstraksi
dengan proses yang menggabungkan parameter fisik dan kimia (proses ekstraksi
konvensional dan bertekanan), serta parameter kimia dan biologis. Selanjutnya, LCA
diterapkan untuk mengevaluasi kinerja lingkungan dan indikator biaya untuk setiap
proses. Hasil menunjukkan bahwa ekstraksi dengan tekanan hidrostatik tinggi
memberikan jumlah tertinggi asam lemak tak jenuh ganda u3 (3331,5 mg L1
effluent), selain dari menyajikan dampak dan biaya lingkungan terendah. Prosedur
yang dipelajari memungkinkan untuk mendapatkan sumber lipid u3 alternatif,
berkelanjutan dan dapat dilacak untuk aplikasi lebih lanjut dalam industri makanan,
farmasi dan kosmetik. Selain itu, pendekatan tersebut berkontribusi terhadap
pengurangan organik dari cairan pengalengan, sehingga mengurangi biaya
pengolahan limbah secara keseluruhan.

1. Pendahuluan
Tumbuhnya kesadaran lingkungan mendorong penggunaan bahan baku
berkelanjutan dan meminimalkan limbah selama produksi barang-barang konsumen.
Meskipun istilah "limbah" mengacu pada zat apa pun yang dibuang oleh pemegang,
istilah ini tidak mengecualikan zat dengan potensi pemanfaatan kembali secara
ekonomi. Oleh karena itu, suatu zat yang dihasilkan dari proses produksi yang tujuan
utamanya bukan produksinya sendiri dapat dianggap sebagai produk sampingan
(bukan limbah), selama sejumlah kondisi diverifikasi (Directive, 2008/98 / EC).

Industri makanan menghasilkan sejumlah besar produk samping pengolahan,

yang telah diidentifikasi sangat menarik untuk digunakan kembali karena volume
tinggi yang dihasilkan dan berbagai senyawa kimia yang menarik disajikan.
Pemanfaatan kembali produk-produk semacam itu menghadirkan keuntungan
tambahan karena dapat dilacak, parameter utama untuk keselamatan konsumen dan
penerimaan produk-produk dari sumber-sumber alternatif.

Di antara industri makanan, pengalengan ikan merupakan sektor ekonomi

penting di Galicia (NW Spanyol) dan Portugal Utara, yang mengolah terutama ikan
berminyak, seperti tuna, sarden, spesies jenis sarden dan makarel (Bugallo et al.,
2013; Ferraro et al., 2013). Salah satu kekhawatiran utama dari industri ini adalah
terkait dengan limbah yang dihasilkan: limbah padat dan cair dapat menciptakan
masalah lingkungan yang serius jika dibuang tanpa penanganan yang tepat, karena
muatan organiknya yang sangat kaya (terutama protein dan lipid). Oleh karena itu,
penghilangan senyawa ini sangat penting, untuk mengurangi bahaya lingkungan. Di
sisi lain, alih-alih hanya dibuang dan dibuang, senyawa nutrisi (dan bioaktif) ini dapat
diperoleh kembali, sehingga menjadi sumber pendapatan yang relevan bagi
perusahaan, mengimbangi biaya (wajib) terkait dengan pengolahan limbah sebelum
dibuang, dan bahkan memungkinkan penciptaan pekerjaan baru (Blanco et al.,
2007).

Meskipun beberapa penelitian telah dilakukan untuk memprediksi aplikasi

baru yang potensial dan lebih menguntungkan untuk pengolahan produk sampingan,
sangat sedikit senyawa bernilai tambah yang dapat mencapai pasar dan dijual dalam
jumlah besar. Bahkan, fraksi padat dari pengalengan ikan biasanya dijual (dengan
harga yang sangat rendah) untuk menghasilkan pakan ternak, tepung ikan atau
tepung (Ferraro et al., 2013; Penven et al., 2013), sedangkan fraksi cair dibuang.
Kemungkinan negara yang melakukan pelepasan bergantung pada perkiraan pasar
yang berlebihan, terlalu sedikit produk samping berkualitas tinggi yang tersedia
secara teratur, dan biaya yang sangat tinggi untuk mengisolasi komponen tertentu
(Olsen et al., 2014). Namun demikian, beberapa dari keterbatasan ini mungkin dapat
diatasi, misalnya dengan berfokus pada pemulihan senyawa bioaktif dengan pasar
yang sudah ada (dan bernilai tinggi), seperti lipid yang kaya akan asam lemak tak
jenuh ganda u3 (PUFA), yang dikenal untuk mencegah kardio. Penyakit autoimun -
vaskular dan inflamasi, serta memiliki peran penting pada otak dan retina (Agh et al.,
2014). Lipid bioaktif ini terutama ditemukan dalam minyak ikan, mencapai ca. 30%
dari total kandungan asam lemak, meskipun nilai ini tergantung pada parameter
lingkungan dan genetik.

Proses pengalengan ikan dapat diringkas secara singkat melalui langkah-

langkah berurutan berikut: operasi pendahuluan (penerimaan ikan, pencucian,
penjemuran dan pemotongan), pemrosesan (pemasakan, pengalengan dan
pemangkasan), dan operasi akhir (penyegelan dan sterilisasi). Operasi bantu juga
berlangsung, seperti pengelolaan limbah padat dan proses pengolahan air limbah
(Bugallo et al., 2013). Salah satu faktor dengan dampak lingkungan yang besar
dalam proses ini adalah penggunaan air: sumber daya alam ini digunakan dalam
brining, memasak, dalam langkah-langkah pencucian yang berbeda dan bahkan
dalam kasus-kasus di mana pembuatan uap diperlukan (Tabel 1). Oleh karena itu,
limbah cair sangat bervariasi dalam komposisi kualitatif dan kuantitatif. Studi
mengenai valorisasi limbah cair dari pengolahan ikan sangat langka, dan sangat
terfokus pada pengolahan air limbah (Cristov ~ ao et al., 2015; Rio et al., 2018).
Dalam makalah ini kami mengeksploitasi penggunaan metode fisik-kimia dan
biologis-kimia alternatif untuk ekstraksi lipid yang kaya u3 dari produk sampingan
cair, karena mereka menghubungkan pemanfaatan efisien pelarut organik (food
grade) dengan suhu, tekanan atau suhu. -zymes, dalam solusi yang lebih baik dan
lebih ramah lingkungan. Selanjutnya, alternatif yang diusulkan untuk ekstraksi lipid
dievaluasi melalui Life Cycle Assessment (LCA), untuk menilai dampak lingkungan
dan ekonomi mereka. Prosedur yang dipilih dapat secara bersamaan menyediakan
sumber alternatif bahan fungsional (u3-PUFA) untuk dimasukkan dalam makanan,
produk farmasi dan kosmetik, dan secara substansial mengurangi biaya dalam
pengelolaan aliran limbah cair yang tersisa.
2. Bahan dan metode

2.1. Sampel
Bahan baku yang digunakan dalam penelitian ini adalah limbah cair yang
dihasilkan dari langkah memasak makarel (Scomber japonicus), yang disediakan
oleh perusahaan La Gondola (Matosinhos, Portugal). Langkah pemrosesan tersebut
di atas dilakukan dalam pengering uap, setelah brining dan pengeluaran isi ikan.
Ikan mentah pertama-tama dibuang di nampan logam besar, yang kemudian
ditempatkan di dalam peralatan memasak uap, dioperasikan pada 100 C selama
beberapa menit. Setelah itu, baki dikeluarkan dari pengering uap, ikan yang dimasak
melanjutkan prosesnya di sepanjang rantai proses, dan produk sampingan cair
(kondensat) yang dihasilkan selama pemrosesan uap dikumpulkan dari bagian
bawah baki logam. Kemudian, cairan disaring dengan kain katun tipis (untuk
menghilangkan partikel padat akhirnya dalam suspensi) dan disimpan pada 20 C
sampai digunakan.

2.2. Proses ekstraksi

2.2.1. Metode fisik-kimia

2.2.1.1. Ekstraksi konvensional. Ekstraksi konvensional dengan ini digambarkan
sebagai proses yang menggunakan pelarut dan suhu, dengan agitasi mekanis. Lipid
dari limbah cair diekstraksi sesuai dengan prosedur yang dijelaskan oleh Hara dan
Radin (1978), dengan modifikasi (Alonso et al., 2003), menggunakan campuran
isopropanol dan heksana pada 50 C, 70 C dan 90 C, di bawah pencampuran
berkelanjutan pada 1500 rpm dalam pengaduk magnet pemanas (AREC.X, Velp
Scientifica), selama 30 menit. Pemisahan fasa dicapai dengan sentrifugasi pada
12000 rpm (Heraus Megafuge 16R, Thermo Scientific). Selanjutnya, fase organik
dikumpulkan dan pelarut dievaporasi dengan tekanan rendah (Buchi Rotavapor R-
200, dengan Vacuum Controller V-850), untuk kuantifikasi gravimetrik dari total lipid.
Tes dilakukan dalam rangkap tiga. Karena masalah yang terjadi selama
penyimpanan, tidak mungkin untuk melakukan analisis lebih lanjut dengan ekstrak
ini.

2.2.1.2. Ekstraksi cairan

2.2.1.2.1. Ekstraksi tekanan hidrostatik tinggi (HHPE). Pengujian dilakukan dalam
pers Hidrostatik (FPG7100, Stanstead Fluid Power, Stanstead, Inggris), dilengkapi
dengan bejana tekan dengan diameter dalam 100 mm dan tinggi 250 mm, dan
dikelilingi oleh jaket eksternal untuk mengontrol suhu (dijaga 20 C). Karena pelarut
dan proporsi yang berbeda digunakan, indeks polaritas (PI) digunakan untuk
memungkinkan penyederhanaan data. Nilai PI dihitung sebagai nilai tertimbang PI
individu untuk setiap pelarut dan untuk air (komponen utama dari sampel efluen).
Setiap sampel menerima kode yang terdiri atas huruf diikuti oleh angka. Angka
dikodekan sebagai 1 untuk sampel tanpa pelarut organik (PI ¼ 10.2), 2 untuk
campuran etanol dan produk samping (PI ¼ 7.8) dan 3 untuk campuran produk
samping, isopropanol dan hex-ane (PI ¼ 5.2). Surat menyangkut kondisi
eksperimental yang diteliti: A untuk tekanan 150 MPa, B untuk 300 MPa dan C untuk
450 MPa, semua selama 10 menit; sampel dikodekan sebagai percobaan terkait D
dilakukan pada 300 MPa dan 20 menit (Tabel S1).

Ekstraksi dengan air (X1, dengan X mengacu pada huruf AD, menurut Tabel
S1) dan etanol (X2) berasal campuran akhir hanya dengan satu fase, mungkin
karena rendahnya jumlah fraksi lipid, sehingga mencegah pemulihan organik tahap.
Oleh karena itu, perlu untuk menambahkan langkah pemisahan ekstra, di mana
sampel yang sebelumnya diperlakukan dicampur dengan heksana, ditempatkan 1
menit di pusaran dan dipisahkan oleh sentrifugasi (Adam et al., 2012). Setelah
sentrifugasi, lapisan organik atas diambil, dikeringkan dan ditimbang (untuk
penentuan lipid). Untuk ekstrak dengan isopropanol dan heksana (X3), lipid
dipulihkan dengan fase pemisahan dan sentrifugasi, seperti yang dijelaskan untuk
ekstraksi konvensional. Semua uji eksperimental dilakukan dalam tripli-cate, dan
semua fraksi lipid kemudian dianalisis dalam hal profil asam lemak, sedangkan fase
berair dianalisis untuk kadar protein.

2.2.1.2.2. Ekstraksi air subkritis (SWE). Ekstraksi subkritis dilakukan dalam reaktor /
reaktor subkritis buatan rumah (Gbr. S1). Total kapasitas bejana stainless steel
bertekanan tinggi adalah 1,7L dan tekanan bejana dilakukan dengan nitrogen
99,999% (Messer, Jerman) melalui katup. Nitrogen digunakan untuk mencegah
oksidasi pada suhu tinggi. Tekanan operasi di kapal dipantau oleh manometer built-
in (Inol, Slovenija, model IM 811A12). Temperatur proses diukur dengan termokopel
Pt100 dan diatur oleh pengontrol suhu (Nigos, Serbia, model 1011P). Platform
bergetar digunakan untuk meningkatkan perpindahan massa dan mencegah
pemanasan berlebih lokal jika bersentuhan dengan pemanas.

Ekstraksi dilakukan dengan sampel efluen dalam kondisi suhu yang berbeda
(90, 130 dan 190 C), waktu (1 atau 2,5 jam) dan pelarut (air murni, air dengan
natrium dodecyl sulfate 0,5% atau air dengan butanol (1: 1) ) (Tabel S2); tekanan 5
MPa dan laju pengadukan 3 Hz dijaga konstan untuk semua pengujian. Setelah
langkah subkritis, bejana proses segera didinginkan dalam penangas air flow-
through pada 20 ± 2 C, dan depressurisasi dicapai dengan membuka katup dan
membersihkan nitrogen melalui katup. Sekali lagi, tes eksperimental dilakukan dalam
rangkap tiga. Jumlah lipid diukur secara gravimetri dan dianalisis dalam hal profil
asam lemak.

2.2.2. Metode biologi-kimia

Hidrolisis enzimatik dilakukan sebagai langkah pra-ekstraksi, dalam kondisi
yang terkendali (pH 8 dan 50 C) dan jumlah Alcalase® 2.4L (Sigma-Aldrich) yang
berbeda: 0,1%, 0,6%, dan 1,1% (v / v) dalam 20 mL efluen. Setelah 3 jam hidrolisis,
enzim tidak aktif dengan pemanasan pada 95 C selama 15 menit. Larutan berair
(rangkap tiga) yang dihasilkan kemudian diserahkan ke langkah ekstraksi dengan
isopropanol dan heksana pada 1500 rpm selama 30 menit, untuk memungkinkan
lipid bermigrasi dan dikumpulkan dalam fase organik. Akhirnya, penentuan total lipid
dan profil asam lemak terjadi dalam fase organik, sementara fase air juga
dikumpulkan untuk kuantifikasi protein. Tingkat hidrolisis dihitung sesuai dengan
metode pH-stat (Dumay et al., 2009).

2.3. Pengujian analitis

2.3.1. Komposisi biokimia
Total lipid ditentukan secara gravimetri dengan metode Hara dan Radin
(1978) dengan modifikasi (Alonso et al., 2003), sebagaimana dirinci dalam subbab
sebelumnya. Total protein diuji dengan metode Lowry (Lowry et al., 1951).

2.3.2. Profil asam

Lemak Ester metil asam lemak diperoleh dengan transesterifikasi sampel
rangkap tiga, sesuai dengan metode asam yang dijelaskan oleh Lepage dan Roy
(1984), dengan modifikasi (Cohen et al., 1988), menggunakan asam heptadekanoat
sebagai standar internal dan asetil klorida sebagai katalis. Analisis ester-ester
tersebut dilakukan dengan kromatografi gas Shimadzu GC-2010 dengan AOC-20i
Auto Injector, dilengkapi dengan FID dan sebuah kolom kapiler sekering silika berfusi
panjang 60 m (CP-Sil 88, Agillent). Suhu injektor dan detektor masing-masing adalah
250 dan 270 C, dan suhu kolom ditempatkan pada 100 C selama 5 menit dan
kemudian meningkat hingga 215 C pada laju 1 C min 1. Standar murni (Sigma)
digunakan untuk identifikasi asam lemak, yang didasarkan pada perbandingan waktu
retensi puncak sampel dan standar. Area puncak dikuantifikasi dan perhitungan
dilakukan sesuai dengan Metode Resmi AOCS Ce 1b-89 (Firestone, 1994).

2.4. Analisis statistik

Analisis varian dan Tukey (HSD) atau tes post hoc Games-Howell digunakan
untuk menganalisis hasil secara statistik, menggunakan perangkat lunak IBM®
SPSS® 22 Statistics untuk Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Perbedaan
dianggap signifikan ketika p <0,05.

2.5. LCA
Studi LCA didasarkan pada data primer yang diberikan oleh tes yang
dilakukan dan data sekunder yang diberikan oleh set data LCI yang tepat, tersedia di
Ecoinvent. Metodologi penilaian dampak yang digunakan adalah IMPACT 2002þ.
Proses yang diteliti terdiri dari: proses 1 (ekstraksi lipid konvensional dengan suhu
dan pelarut e 2.2.1.1.), Proses 2 (ekstraksi lipid dengan HHP dan pelarut - 2.2.1.2.1),
dan proses 3 (ekstraksi lipid dengan biologi-kimia metode e 2.2.2.). Dalam setiap
proses, kondisi eksperimental yang digunakan dalam perhitungan LCA adalah
kondisi yang memberikan jumlah lipid tertinggi. Analisis sensitivitas juga dilakukan
untuk setiap proses, dengan mempertimbangkan rentang yang ditentukan oleh satu
standar deviasi di atas rata-rata dan satu standar deviasi di bawahnya untuk setiap
proses. Proses ekstraksi subkritis tidak dipelajari karena nilai pemulihan yang rendah
diperoleh.

3. Hasil dan Pembahasan

Pengolahan pengalengan ikan menghasilkan sejumlah besar cairan ef-cair,
yang timbul dari berbagai langkah proses yang menggunakan air, baik dalam bentuk
cair atau uap. Karena limbah tersebut memiliki dampak pencemaran yang potensial
terhadap lingkungan, mereka harus mematuhi Nilai Batas Emisi sebelum dapat
dibuang, baik ke pengumpul kota atau langsung ke lingkungan. Oleh karena itu,
mereka perlu diserahkan ke proses pengobatan untuk mengurangi kadar polutan,
yaitu dari sumber organik, seperti protein dan lipid. Pemulihan berkelanjutan
senyawa bernilai ekonomis dari limbah ini dapat memberikan cara untuk secara
bersamaan mengurangi dampak pencemarannya dan secara ekonomis
mengkompensasi biaya perawatan yang terlibat.

Sejauh pengetahuan kami, penelitian sebelumnya tentang ekstraksi lipid u3

dari limbah cair dari pengolahan ikan sangat langka. Beberapa dari beberapa studi
terkait sebagian ditemukan adalah karakterisasi air rekat dari produk sampingan
pengolahan ikan (menghasilkan fase cair setelah penghapusan minyak), yang
melaporkan kembali 2e18% lipid setelah pengeringan beku (Bechtel, 2005), dan
penggunaan air limbah pengalengan tuna untuk menghasilkan mikrokapsul yang
kaya akan u3 (Suriani dan Taulu, 2015).

Penelitian ini memilih hanya produk sampingan cair dari proses memasak
dengan uap (terkaya dalam senyawa organik berharga), daripada campuran dengan
seluruh limbah yang dihasilkan (dari sumber yang berbeda), karena menurut Antelo
et al. (2015), valorisasi bagian-bagian tertentu, daripada penggunaan jumlah
keseluruhan, lebih optimal.

3.1. Pengaruh suhu dan pelarut (ekstraksi konvensional)

Di antara efek yang mempengaruhi proses ekstraksi, suhu adalah salah satu
yang paling dijelaskan, karena pengaruh yang diakui pada hasil ekstraksi akhir.
Selain itu, pelarut organik digambarkan mampu menghancurkan dinding sel atau
mengganggu kekuatan interaksi antara lipid dan matriks jaringan, sehingga
meningkatkan ekstraksi lipid (Adeoti dan Hawboldt, 2014). Untuk menghindari
penggunaan pelarut yang berbahaya bagi lingkungan, metode alternatif
menggunakan isopropanol dan heksana (Hara dan Radin, 1978) telah dipilih.
Meskipun pelarut ini kurang efektif daripada kloroform dan metanol untuk ekstraksi
lipid, mereka diklasifikasikan sebagai food grade, dan ini dianggap sebagai masalah
kritis sehingga proses ekstraksi dengan ini dipelajari dapat ditingkatkan untuk industri
makanan.

Jumlah pemulihan lipid dari sampel sampingan makarel pada 50, 70 dan 90
C adalah efluen masing-masing 3,2, 3,6 dan 2,4 g L 1. Studi lain dari Garcia-Sanda
et al. (2003) tentang pemulihan lipid dalam limbah memasak tuna pada suhu 70 C,
melaporkan jumlah 2 g L 1 dalam total lipid. Dari analisis komparatif lipid dan suhu,
dapat diamati bahwa ada peningkatan total lipid yang diekstraksi ketika suhu
bergeser dari 50 ke 70 C, tetapi kecenderungan tersebut menghilang ketika suhu
semakin meningkat menjadi 90 C. Hasil ini menunjukkan bahwa suhu lebih tinggi
dari 70 C selama proses ekstraksi dapat mengurangi ekstraksi lipid. Bahkan, sebuah
studi oleh Civit et al. (1982) mengenai pengaruh pH dan suhu pada pemulihan
protein dan minyak dari limbah air darah perikanan, juga merujuk bahwa suhu di atas
75-80 C tidak meningkatkan pemulihan.

3.2. Ekstraksi cairan bertekanan

3.2.1. Ekstraksi tekanan hidrostatik tinggi (HHPE)
HHP, digunakan secara konvensional untuk proses pasteurisasi, juga dapat
digunakan untuk ekstraksi senyawa bioaktif. Di bawah HHP, tekanan diferensial
antara bagian dalam dan luar membran sel sangat besar. Hal ini menyebabkan
permeasi yang cepat karena deformasi sel dan kerusakan dinding, dan konsentrasi
keseimbangan yang lebih cepat antara kedua sisi membran, sementara peningkatan
kelarutan juga dapat terjadi untuk beberapa senyawa. Selanjutnya, penerapan
tekanan tinggi mempertahankan pelarut di bawah titik didihnya, sehingga
memungkinkan penetrasi tinggi ke dalam sampel. Kondisi ini mengurangi volume
pelarut yang dibutuhkan dan mempersingkat waktu ekstraksi. Prosedur ini dapat
dilakukan dengan suhu rendah, memungkinkan penggunaannya dalam senyawa
termo-sensitif seperti asam lemak (Santos et al., 2013).
Gambar. 1. Jumlah lipid, protein dan u3 dalam limbah memasak makarel diekstraksi
dengan tekanan hidrostatik tinggi (HHP): percobaan dilakukan selama 10
menit di bawah tekanan yang berbeda (A), dan selama waktu yang berbeda
pada 300 MPa (B).

Hasil mengenai pengaruh tekanan pada waktu konstan (A) dan efek waktu
pada tekanan konstan (B) pada jumlah lipid, protein dan u3 yang diekstraksi dengan
berbagai campuran pelarut yang diuji disajikan pada Gambar. 1. Analisis hasil
mengenai konten lipid memungkinkan kita untuk menyimpulkan bahwa: (i) untuk
waktu ekstraksi konstan 10 menit, peningkatan tekanan dari 150 hingga 300 MPa
mempromosikan peningkatan hasil yang signifikan secara statistik untuk ekstrak
isopropanol / heksana (PI ¼ 5.2), sedangkan peningkatan dalam tekanan dari 300
hingga 450 MPa hanya signifikan untuk ekstrak etanol (PI ¼ 7.8); (ii) untuk tekanan
konstan 300 MPa, jumlah lipid yang diekstraksi meningkat dengan waktu ekstraksi
dan berkurang dengan PI; (iii) hasil lipid yang lebih tinggi (limbah cair L1 19,84 g)
diperoleh untuk ekstraksi pada 300 MPa selama 20 menit dan PI yang lebih rendah
(yaitu, dengan iso-propanol dan heksana). Oleh karena itu, diharapkan untuk
mendapatkan hasil yang lebih tinggi ketika menggunakan periode ekstraksi yang
meningkat. Hubungan langsung antara hasil lipid dan PI pelarut tidak terduga,
karena lipid adalah senyawa dengan polaritas rendah dan, dengan demikian, mudah
larut dalam pelarut polaritas rendah. Bahkan, polaritas yang cocok dari senyawa
yang ditargetkan meningkatkan kekuatan relatif interaksi antara molekul pelarut dan
lipid, sehingga meningkatkan proses ekstraksi (Adeoti dan Hawboldt, 2014).

Jumlah protein dalam produk sampingan ikan adalah maksimal (17,6 g L1

efluen) untuk ekstrak PI yang lebih rendah diperoleh pada tekanan yang lebih tinggi
(450 MPa) dan 10 menit, meskipun nilai tersebut secara statistik setara dengan yang
diperoleh selama ekstraksi dengan PI pelarut campuran yang sama pada 300 MPa
selama 20 menit. Bahkan, mirip dengan jumlah lipid yang diekstraksi, juga jumlah
protein yang bertambah dengan penurunan PI. Hasil ini dapat dijelaskan secara
tentatif karena interaksi yang kuat antara pelarut ekstraksi dan lipid, yang dapat
melemahkan ikatan antara molekul lipid dan protein, sehingga memungkinkan hasil
ekstraksi lipid yang meningkat dalam fase organik, dan meningkatkan kandungan
protein terikat bebas dalam fase berair. Berkenaan dengan pengaruh tekanan dan
waktu pada ekstraksi protein, jumlah protein berkurang dengan meningkatnya waktu
dan tekanan dalam kasus PI 10.2 dan 7.8, sedangkan variasi tersebut tidak linier
dalam kasus PI 5.2. Jumlah protein yang diekstraksi dari produk samping makarel
dilaporkan 184 g kg 1 oleh García-Moreno et al. (2013), tetapi matriks padat selalu
lebih terkonsentrasi pada protein dan lipid daripada produk sampingan cair.

Jumlah tertinggi total PU3 u3 (3331,5 mg L1 limbah) diperoleh untuk

pengujian dengan PI terendah (5,2), di bawah 300 MPa dan 20 menit.

Tabel 2 menyajikan profil asam lemak untuk kondisi eksperimental HHPE

yang diuji. Dari analisis tabel ini, dapat diamati bahwa asam lemak utama yang
diidentifikasi adalah asam palmitat (C16: 0), oleat (C18: 1 u9), eicosapentaenoic
(C20: 5 u3) dan docosahexae-noic (C22: 6 u3) . Hasil ini sejalan dengan penelitian
sebelumnya tentang profil asam lemak dari lipid yang diekstraksi dari mackerel
(García-Moreno et al., 2013). Kondisi eksperimental A3 (campuran iso-propanol dan
heksana dengan PI 5,2, diekstraksi pada 150 MPa selama 10 menit) memberikan
jumlah eikosapentaenoat (99,8 g kg 1 lipid) tertinggi dan asam docosahexaenoic
(192,8 g kg 1 lipid), u3-PUFA paling relevan dari sudut pandang gizi dan fungsional.

3.2.2. Ekstraksi air subkritis (SWE)

Air adalah pelarut paling hijau yang dapat digunakan dalam proses ekstraksi
dan, meskipun senyawa hidrofobik seperti lipid tidak larut di dalamnya, penggunaan
pelarut bersama secara substansial dapat meningkatkan hasil ekstraksi (Herrero et
al., 2013).
Gambar. 2. Jumlah lipid dalam limbah makarel diekstraksi dalam kondisi subkritis;
hasilnya digambarkan dalam mode komparatif, di mana parameter
eksperimental identik ditunjukkan di bagian atas setiap grafik, dan
parameter yang diteliti dijelaskan dalam sumbu X (kode uji juga ditunjukkan
dalam sumbu X, di bawah kurung).

Jumlah lipid yang diperoleh setelah ekstraksi dalam kondisi subkritis (suhu
90, 130 atau 190 C, tekanan 5 MPa, dan air, baik itu sendiri atau dikombinasikan
dengan natrium dodesil sulfat e SDS atau butanol sebagai pelarut bersama)
digambarkan pada Gambar. 2. Hasil digabungkan dalam empat grafik yang berbeda,
masing-masing menyajikan dua pengujian dengan hanya satu variabel
eksperimental di antara mereka. Seperti yang dapat diamati, hanya pengujian
dengan air dan butanol (pada 90 C, selama 1 jam) menunjukkan perbedaan yang
signifikan secara statistik antara satu sama lain. Selain itu, pengujian dengan butanol
adalah yang memberikan jumlah tertinggi lipid yang diekstraksi (13,9 mg L1 efluen),
jauh di atas nilai rata-rata yang diperoleh dengan tes subkritis yang tersisa (3,6e4,7
mg L1). Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa, di bawah kisaran kondisi
eksperimental yang diuji dan untuk jenis sampel khusus ini, penggunaan air murni
atau air dengan 0,5% SDS (Gbr. 2 - B), peningkatan waktu dari 1 menjadi 2,5. h
(Gbr. 2 - C) atau suhu dari 130 hingga 190 C (Gbr. 2 - D) tidak secara signifikan
mengganggu lipid yang diekstraksi. Kesimpulan tersebut diperkuat oleh profil asam
lemak yang diperoleh untuk pengujian yang dilakukan di bawah berbagai kondisi
eksperimental (Tabel S3), di mana dapat dilihat bahwa u3-PUFA hanya dikuantifikasi
untuk pengujian yang menggunakan air dan butanol. Penjelasan yang mungkin
untuk hasil yang diperoleh mungkin bergantung pada terjadinya koagulasi protein,
karena suhu tinggi yang digunakan, menyebabkan jebakan senyawa lipid dan
karenanya mengurangi hasil ekstraksi mereka, seperti yang disarankan oleh Dong et
al. (2016).

3.3. Proses biologi-kimia Proses

Biologi banyak digunakan dalam konsentrasi protein, juga menyediakan
jumlah minyak yang tinggi karena meningkatnya pelepasan lipid. Proses-proses ini
pada dasarnya ditandai oleh penggunaan aktivitas enzimatik atau bakteri (Adeoti dan
Hawboldt, 2014). Untuk ekstraksi lipid, penggunaan enzim dapat membantu
melepaskan lipid terikat, sehingga meningkatkan hasil ekstraksi; Namun, langkah
tambahan dengan ekstraksi pelarut organik adalah wajib untuk memulihkan fraksi
lipid; oleh karena itu, langkah enzimatik dianggap sebagai langkah pra-ekstraksi.
Gambar 3. Jumlah lipid, protein dan u3 dalam sampel limbah yang diekstraksi
setelah hidrolisis biologis.

Tingkat hidrolisis yang dicapai selama inkubasi dengan Alcalase berkisar

antara 77,8 dan 79,6%, dan tidak ada perbedaan yang signifikan antara jumlah
enzim yang digunakan berbeda. Jumlah lipid tertinggi dicapai dengan 0,1% enzim,
dan angka-angka ini berkurang dengan meningkatnya konsentrasi enzim (Gbr. 3-A).
Penurunan kadar lipid total seperti itu dengan peningkatan jumlah enzim dapat
dijelaskan secara tentatif oleh oksidasi lipid yang terjadi selama hidrolisis, karena
reaksi ini dilakukan pada 50 C selama 3 jam. Jumlah protein setara untuk semua
konsentrasi enzim yang diuji (kuantifikasi protein untuk 0,1% enzim tidak dilakukan)
(Gbr. 3-B). Hasil ini tidak mengherankan, karena jumlah protein dalam sampel efluen
tidak terlalu tinggi (sekitar 18e24 g L 1) dan dengan demikian, jumlah terendah dari
enzim yang diuji cukup untuk mempromosikan hidrolisis protein yang hampir lengkap
dan pelepasan bersamaan dari protein. lipid terikat (Dumay et al., 2009). Mengenai
kandungan u3, hasil tertinggi (170 mg g 1 lipid, sesuai dengan efluen 500 mg L 1)
diperoleh untuk hidrolisis yang dilakukan dengan jumlah enzim terendah (Gbr. 3-C,
D). Profil asam lemak (Tabel S4) dari ekstrak dari tiga kondisi percobaan yang
berbeda menyajikan jumlah yang sama dari berbagai asam lemak untuk ekstrak
yang diperoleh dengan 0,6 dan 1,1% enzim, yang secara statistik berbeda dari yang
diperoleh dalam ekstrak dengan 0,1% dari enzim. Ekstrak kemudian adalah yang
dengan jumlah tertinggi dari berbagai asam lemak di bawah pengawasan, mungkin
karena alasan yang sama yang disajikan sebelumnya, mengenai jumlah total lipid.

3.4. LCA dan analisis sensitivitas

LCA mengevaluasi dampak lingkungan yang disebabkan oleh produk atau
layanan di sepanjang siklus hidupnya, dilakukan dalam empat fase: (i) tujuan dan
ruang lingkup, (ii) inventaris, (iii) penilaian dampak dan (iv) interpretasi. Dengan
demikian, tujuan dari studi LCA ini adalah untuk mengevaluasi pengaruh kinerja
lingkungan dari metode ekstraksi yang menargetkan pemulihan lipid kaya u3. Pada
fase inventaris, data mengenai input dan output dikumpulkan. Penelitian ini
didasarkan pada data primer yang diberikan oleh tes dieksekusi atau tersedia di
bibliog-raphy, dan data sekunder yang diberikan oleh set data LCI yang tepat, yang
ada di Ecoinvent. Pemulihan 95% heksana yang digunakan diasumsikan
dimungkinkan. Selain itu, jumlah enzim yang digunakan dalam metode biologi-kimia
tidak dipertimbangkan, karena massanya sangat rendah (<1%). Dalam fase
penilaian dampak, potensi dampak lingkungan yang terkait dengan penggunaan
bahan baku, energi, emisi dan limbah dievaluasi. Pada fase terakhir LCA
(interpretasi), kesimpulan diambil mempertimbangkan tujuan yang ditetapkan.
Metodologi penilaian dampak yang digunakan adalah "IMPACT 2002þ", yang
mengusulkan implementasi titik tengah yang layak dalam pendekatan gabungan
untuk kerusakan. Empat kategori kerusakan utama yang dikumpulkan
dipertimbangkan: perubahan iklim, kualitas ekosistem, kesehatan manusia dan
sumber daya. Dalam metode ini, hasilnya dinyatakan dalam poin, karena normalisasi
pada kerusakan, yang memfasilitasi perhitungan. Untuk menghitung indikator global,
bobot standar 1 dipertimbangkan, artinya semua kategori memiliki bobot yang sama.
Studi LCA dilakukan dengan pendekatan "cradle to gate": dengan demikian, batas
sistem berakhir pada proses pemulihan, sebagaimana dirinci pada Gambar. S2.
Gambar 4. Dampak lingkungan global untuk pemulihan lipid kaya u3 dengan tiga
metode ekstraksi yang berbeda, dan dampak persentase dari langkah-
langkah pemrosesan yang berbeda di antara setiap metode: Proses 1
(ekstraksi lipid konvensional dengan suhu dan pelarut) - ekstraksi termasuk
listrik, isopropanol dan heksana; Proses 2 (ekstraksi lipid dengan HHP dan
pelarut) - ekstraksi meliputi listrik, isopropanol, dan heksana; Proses 3
(ekstraksi lipid dengan metode biologi-kimia) e hidrolisis meliputi
penggunaan enzim, natrium hidroksida dan listrik, sedangkan ekstraksi
mencakup penggunaan isopropanol dan heksana.

Gambar. 4 menyajikan dampak lingkungan, dinyatakan dalam persentase,

dihasilkan dari tiga metode ekstraksi yang dipelajari: Proses 1 e ekstraksi
konvensional di bawah pengaruh suhu dan pelarut e 2.2.1.1; Proses 2 e ekstraksi di
bawah pengaruh tekanan hidrostatik tinggi dan pelarut - 2.2.1.2.1; Proses 3 e
ekstraksi di bawah pengaruh enzim dan pelarut e 2.2.2. Seperti yang diamati, proses
yang menyajikan dampak terendah adalah Proses 2. Mengenai kontribusi
persentase dari setiap item dalam dampak lingkungan global, penggunaan
isopropanol dan konsumsi listrik adalah kontributor utama, dengan isopropanol
sebagai yang paling penting. Dampak persentual pada setiap kategori kerusakan
(kesehatan manusia, kualitas ekosistem, perubahan iklim dan sumber daya) untuk
setiap proses sangat mirip (Gbr. S3), dengan sumber daya sebagai kontributor
utama, diikuti oleh perubahan iklim dan kesehatan manusia, dalam proporsi yang
setara. Juga dimungkinkan untuk menyimpulkan bahwa proses yang menyajikan
dampak terendah per kg lipid yang diperoleh (44,3 mP kg 1) adalah proses yang
menggunakan proses tekanan hidrostatik tinggi (Proses 2). Sebaliknya, proses
biologis-kimia (Proses 3) menghadirkan dampak tertinggi per kg lipid (277 mP kg 1).
Nilai dampak untuk Proses 1 (mengenai pengaruh suhu dan pelarut) mirip dengan
yang diperoleh untuk proses biologis-kimia (219 mP kg 1). Analisis sensitivitas LCA
juga dilakukan dengan mempertimbangkan rentang yang ditentukan oleh satu
standar deviasi di atas nilai rata-rata lipid yang diperoleh, dan satu standar deviasi di
bawahnya, untuk setiap proses. Menganalisis hasil yang diperoleh adalah mungkin
untuk menyimpulkan bahwa proses 1, 2 dan 3 menyajikan nilai dampak lingkungan
masing-masing berkisar antara 207 dan 231, 43,9 - 44,7 dan 246 - 318 (Tabel S5).
Penting untuk disebutkan bahwa tidak ada tumpang tindih dalam nilai-nilai dampak
lingkungan untuk proses yang berbeda ketika rentang ini dipertimbangkan. Mengenai
hasil untuk analisis ekonomi, mereka mirip dengan yang dari evaluasi lingkungan:
proses dengan biaya lebih rendah per kg lipid diekstraksi adalah Proses 2 (0,091 V g
1), sedangkan proses biologis menyajikan biaya tertinggi (1,255 V g 1), dan Proses 1
nilai biaya antara (0,465 V g 1).

Dalam hal pendekatan industri, UKM akan menghasilkan ca. 220 m3 air
limbah memasak per bulan; Oleh karena itu, penerapan Proses 2 (pemrosesan
HHP) untuk pemulihan dan ekstraksi lipid akan memberikan pemulihan bulanan
4364,8 kg ekstrak lipid yang kaya u3-PUFA.

4. Kesimpulan
Limbah cair dari industri pengalengan ikan dianggap sebagai limbah dan
karenanya dibuang, setelah perawatan yang tepat (dan mahal). Dalam rangka
memberikan hasil kepada industri, pemulihan senyawa-senyawa spesifik dan bernilai
tinggi (U3 PUFA) dari limbah-limbah tersebut diteliti. Hasil percobaan dari prosedur
ekstraksi divalidasi melalui LCA dalam hal dampak lingkungan dan analisis ekonomi.

Dari berbagai penelitian prosedur ekstraksi, disimpulkan bahwa HHPE adalah

yang memberikan hasil PUFA u3 tertinggi. LCA memvalidasi proses ini sebagai yang
paling memadai karena dampak lingkungannya yang kecil dan biaya produksi
terendah.

Daftar Pustaka

Adam, F., Abert-Vian, M., Peltier, G., Chemat, F., 2012. “Solvent-free” ultrasound
assisted extraction of lipids from fresh microalgae cells: a green, clean and
scalable process. Bioresour. Technol. 114, 457-465.

Adeoti, I.A., Hawboldt, K., 2014. A review of lipid extraction from fish processing by
product for use as a biofuel. Biomass Bioenergy 63, 330-340.

Agh, N., Jasour, M.S., Noori, F., 2014. Potential development of value-added fishery
products in underutilized and commercial fish species: comparative study of
lipid quality indicators. J. AOCS 91, 1171-1177.

Alonso, L., Cuesta, E.P., Gilliland, S.E., 2003. Production of free conjugated linoleic
acid by Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus casei of human intestinal
origin. J. Dairy Sci. 86, 1941-1946.

Antelo, L.T., De Hijas-Liste, G.M., Franco-Uría, A., Alonso, A.A., Perez-Martín, R.I.,
2015. Optimisation of processing routes for a marine biorefinery. J. Clean.
Prod. 104, 489-501.

Bechtel, P.J., 2005. Properties of stickwater from fish processing by products.J.

Aquat. Food Prod. Technol. 14, 25-38.
Blanco, M., Sotelo, C.G., Chapela, M.J., Perez-Martín, R.I., 2007. Towards
sustainable and efficient use of fishery resources: present and future trends.
Trends Food Sci. Technol. 18, 29-36.

Bugallo, P.M.B., Cristobal Andrade, L., Magan Iglesias, A., Torres Lopez, R., 2013.
Integrated environmental permit through Best Available Techniques:
evaluation of the fish and seafood canning industry. J. Clean. Prod. 47, 253-
264.

Civit, E.M., Parin, M.A., Lupin, H.M., 1982. Recovery of protein and oil from fishery
bloodwater waste. Effect of pH and temperature. Water Res. 16, 809-814.

Cohen, Z., Vonshak, A., Richmond, A., 1988. Effect of environmental conditions on
fatty acid composition of the red alga Porphyridium cruentum: correlation to
growth rate. J. Phycol. 24, 328-332.

Cristovao,~ R.O., Botelho, C.M., Martins, R.J.E., Loureiro, J.M., Boaventura, R.A.R.,
2015. Fish canning industry wastewater treatment for water reuse e a case
study. J. Clean. Prod. 87, 603-612.

DIRECTIVE 2008/98/EC OF THE EUROPEAN PARLIAMENT AND OF THE

COUNCIL of 19 November 2008 on waste and repealing certain Directives
(accessed at Official Journal of the European Union).

Dong, T., Knoshaug, E.P., Pienkos, P.T., Laurens, L.M.L., 2016. Lipid recovery from
wet oleaginous microbial biomass for biofuel production: a critical review.
Appl. Energy 177, 879-895.

Dumay, J., Allery, M., Donnay-Moreno, C., Barnathan, G., Jaouen,Carbonneau,

M.E., Berge, J.P., 2009. Optimization of hydrolysis of sardine (Sardina
pilchardus) heads with Protamex: enhancement of lipid and phospholipid
extraction. J. Sci. Food Agric. 89, 1599-1606.

Ferraro, V., Carvalho, A.P., Piccirillo, C., Santos, M.M., Castro, P.M., Pintado, M.E.,
2013. Extraction of high added value biological compounds from sardine,
sardine-type fish and mackerel canning residues - a review. Mater. Sci. Eng.
C 33, 3111-3120.

Firestone, D., 1994. Method Ce 1b-89. In: The Official Methods and Recommended
Practices of the American Oil Chemists' Society. AOCS, Champaign,
IL.García-Moreno, P.J., Perez-Galvez, R., Espejo-Carpio, F.J., Munío,~ M.M.,
Guadix, A.,Guadix, E.M., 2013. Lipid characterization and properties of
protein hydrolysates obtained from discarded Mediterranean fish species. J.
Sci. Food Agric. 93, 3777-3784.

Garcia-Sanda, E., Omil, F., Lema, J.M., 2003. Clean production in fish canning
industries: recovery and reuse of selected wastes. Clean. Technol. Environ.
Policy 5, 289-294.

Hara, A., Radin, N.S., 1978. Lipid extraction of tissues with a low toxicity solvent.
Anal. Biochem. 90, 420-426
Herrero, M., Castro-Puyana, M., Mendiola, J.A., Elena Ibanez,~ E., 2013.
Compressed fluids for the extraction of bioactive compounds. Trends Anal.
Chem. 43, 67e83.

Lepage, G., Roy, C.C., 1984. Improved recovery of fatty acid through direct trans-
esterification without prior extraction or purification. J. Lipid Res. 25,
1391e1396.

Lowry, O., Rosebrough, N.J., Farr, A.L., Randall, R.J., 1951. Protein measurement
with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 193, 265e275.

Olsen, R.L., Toppe, J., Karunasagar, I., 2014. Challenges and realistic opportunities
in the use of by-products from processing of fish and shellfish. Trends Food
Sci.Technol. 36, 144e151.

Penven, A., Perez-Galvez, R., Berge, J.P., 2013. By-products from fish
processing:focus on French industry. In: Perez-Galvez, R., Berge, J.P. (Eds.),
Utilization of Fish Waste. CRC Press, pp. 1e25.

Rio,A.V.,Pichel,A.,Fernandez-Gonzalez,,N., Pedrouso, A., Fravazquez,Morales, N.,

Mendez, R., Campos, J.L., Mosquera-Corral, A., 2018. Performance and
microbial features of the partial nitritation-anammox process treating fish
canning wastewater with variable salt concentrations. J. Environ. Manag. 208,
112e121.

Santos, M.C., Salvador, A.C., Domingues, F.M., Cruz, J.M., Saraiva, J.A., 2013. Use
of high hydrostatic pressure to increase the content of xanthohumol in beer
wort. Food Bioprocess Technol. 6, 2478e2485.

Suriani, N.W., Taulu, M.L.S., 2015. The characteristics of omega-3 fatty acids
concentrated microcapsule from wastewater byproduct of tuna canning
(Thunnus sp.). Int. J. ChemTech Res. 8, 235e243.