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control de crecimiento microbiano

ELIMINACIÓN (Muerte)

INHIBICIÓN (Limitación del crecimiento)

Descontaminación: Tratamiento que hace que un objeto o una superficie inanimada sea manipulable sin riesgo
(disminución de recuentos).

Desinfección: Proceso de eliminación de microorganismos (formas vegetativas) de objetos o superficies inanimadas.


Reduce la carga microbiana, no mata endosporas.

Esterilización: Eliminación o destrucción de todas las formas de vida microbiana

 Control físico de los microorganismos: (desinfecta o esteriliza)

Calor, radiación, filtración.

1. Aplicación de calor, puede ser seco o húmedo.

Es simple, barato y efectivo. El mejor método si el material a tratar no de daña por el mismo. Penetra a través
del objeto y puede matar todos/ la mayoría de los microorganismos presentes en el mismo. Todos los
tratamientos por calor matan por desnaturalizar proteínas.

Cuantificación de la esterilización por calor:

Red. 90% de la población

Tiempo de Reducción Decimal (Dtº ): tiempo requerido para reducir la


población microbiana un 90% o un orden de magnitud. –valor D-
Cuando una población microbiana se expone a un agente letal, la cinética de la
muerte es casi siempre exponencial ya que el número de supervivientes
disminuye de forma geométrica con el tiempo. Si representamos gráficamente
el logaritmo del número de supervivientes frente al tiempo se obtiene una
línea recta cuya pendiente negativa define la tasa de mortalidad. Esta tasa de
mortalidad nos dice solamente que fracción de la población inicial sobrevive a
un determinado período de tratamiento.
El valor D es función de la temperatura de calentamiento (Dtº). es distinto para cada
microorganismo.

Relación entre la temperatura y la


tasa de mortalidad microbiana (D)
Mesófilo típico (a) Termófilo (b)

“Medida de la termoresistencia”

Efecto de la alta o baja carga inicial de microorganismos

Si la tasa de muerte es la misma insume más tiempo eliminar a un número determinado de miembros de una
población pequeña que grande.

 Calor húmedo

Se realiza mediante ebullición o mediante el uso de autoclave.

El calor húmedo es más efectivo que el calor seco ya que, además de utilizarse temperaturas menores, penetra más
rápidamente al material. El calor húmedo desnaturaliza las proteínas porque rompe los enlaces que dan lugar a las
estructuras secundaria, terciaria y cuaternaria de las mismas.
Las formas vegetativas de algunas bacterias termófilas pueden sobrevivir después de sometidas a un prolongado
proceso de ebullición, por esta razón el autoclave es más efectivo que la ebullición para esterilizar, las temperaturas
que maneja este son más altas (121°c)

Relación entre P y T Efecto del tamaño de recipiente sobre los tiempos de esterilización (121 C)

Los medios de cultivo se esterilizan en autoclave a 121ºC durante 15 minutos, al menos que se indique otra cosa.

- Usar preferentemente agua destilada en la carga de la autoclave. - Acomodar la carga de manera que el vapor
pueda circular libremente.

- En el caso de artículos con cierre hermético, autoclavar con las tapas desajustadas. Se debe permitir el intercambio
gaseoso para garantizar una esterilización adecuada.

- Los frascos con líquidos no deben llenarse más de las 2/3 partes de su contenido para evitar que el líquido se
vuelque durante el proceso.
-al cerrar el autoclave, se deben ajustar los pernos. Este proceso se debe realizar de a pares, cada uno con el perno
opuesto (frente a él).

- Una vez transcurrido el tiempo de esterilización no abrir el autoclave hasta que haya bajado la presión totalmente.

Vapor fluyente

Destruye células vegetativas de bacterias patógenas, casi todos los virus y hongos y sus esporas

No algunos virus (hepatitis – 30 min) y endoesporas bacterianas (20 hs)

 Pasteurización

Limita el crecimiento microbiano, pero no es un método de esterilización. Garantiza la muerte de patógenos y


reduce la microflora.

 Clásico 63°C 30 min


 HTST 72°C 15 seg
 UHT 140°C 1 seg (esteriliza)
 Calor seco

Mata principalmente porque aumenta los procesos de oxidación que inactivan las macromoléculas

- Flameado

- Incineración

- Esterilización por aire caliente: estufa.

Se envuelve el material en papel “fiambrero”, (placas, tubos de ensayo, pipetas) en las pipetas y tubos de ensayo se
colocará algodón, aunque no pueden ser esterilizados con este hasta 160°

Una vez preparado el material se esterilizará en estufa a 160ºC durante 3 horas, a 140° 5 hs, o a 170° por 2 hs.

Precauciones:

- Debe dejarse suficiente espacio entre los materiales en el interior de la estufa para una distribución uniforme del
calor.

- El tiempo mínimo de esterilización es de 2 hs. a 165-170 ºC. Se suele dejar más tiempo considerando no lograr una
distribución uniforme del calor, sobre todo si la estufa está muy cargada.

- Una vez terminado el proceso se debe dejar enfriar antes de abrir las puertas para evitar la ruptura por contracción
del material.
 Aplicación de radiación

Las radiaciones que pueden matar directamente las bacterias son todas de longitud de
onda más corta que la de la luz visible, estas radiaciones son la luz uv (longitud de onda 10
a 400nm) y la radiación ionizante (longitud de onda de 0.001nm).

Las microondas dañan por el efecto de calor que producen, la luz uv daña el ADN, la
radiación ionizante causa muerte celular (expulsa e- de los átomos)

Se emplea para esterilizar (radiación ionizante –gamma, x), o reducir la carga microbiana
(en el caso de radiación UV y microondas)

La dosis de radiación absorbida se mide en rads (100 erg/g) o en grays (1 Gy = 100 rads)

Relación entre fracción de Sensibilidad a la radiación


supervivientes y dosis de
radiación

D10= cantidad de radiación necesaria para reducir la población inicial o la actividad inicial a la décima parte.

 Filtración

Los microorganismos, excepto los virus, pueden ser eliminados de los liquidos mediante filtración. En el laboratorio
de microbiología, la filtración se utiliza para ciertos medios como las soluciones de vitaminas, las de antibióticos y
otras sustancias que son susceptibles de degradación por calor. Bacterias: 10 a 0,3 μm Virus: 0,2 μm

Filtro: dispositivo con poros de diferentes diámetros.

Filtración de profundidad

Lámina compuesta de fibras de papel o vidrio borosilicato dispuestas al azar que se solapan. (Pre – filtros - Filtración
de aire (HEPA) - Filtración de agua) –desinfecta.

Filtración de membrana

Se componen de polímeros de alta resistencia (acetato de celulosa, nitrato de celulosa, polisulfona - policarbonato)
diseñados para presentar numerosos poros o agujeros diminutos (80 a 85% de la superficie).
En el caso del filtro de nucleacion, esteriliza.

 Control quimico antimicrobiano

Agente antimicrobiano:

compuesto químico, natural o sintético, que mata o inhibe el crecimiento de los microorganismos.

-cidas: destruyen (matan) las bacterias.

 Bactericidas
 Fungicidas
 Virusidas

-estáticos: impiden el crecimiento bacteriano

 Bacteriostáticos
 Fungistáticos
 Virustáticos

En general, sino sólo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de microorganismos, hablamos
respectivamente de agentes microbiostáticos y microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia química, la línea
de demarcación entre un efecto microbiostático y otro microbicida depende muchas veces de la concentración de
dicha sustancia y del tiempo durante el que actúa. El único criterio válido para saber que un microorganismo está
muerto es la pérdida irreversible de la capacidad de división celular, es decir, la pérdida de viabilidad, y se suele
comprobar empleando técnicas con placas de Petri (es decir, confirmando que no crecen en medios sólidos
adecuados).

Condiciones ideales para un agente antimicrobiano químico:

 No tóxico para el ser humano, animales ni medio ambiente


 Actividad antimicrobiana
 No debe de reaccionar con la materia orgánica o corroer
 Estable y homogéneo

Agentes antimicrobianos químicos:


a) Fenoles: El primer desinfectante y antiséptico utilizado. Hasta ahora los fenoles y sus derivados (cresol, xilenol) son utilizados
como desinfectantes en laboratorios y hospitales. Elimina micobacterias (bacilos aerobios no esporulados, -tuberculosis, lepra),
eficaz aún en presencia de materia orgánica y permanece activo en la superficie después de mucho tiempo de su aplicación.
Desnaturaliza proteínas y altera la membrana. puede producir irritaciones cutáneas.

b) Alcoholes: No elimina esporas, pero son bactericidas, fungicidas y algunas veces viricidas. Son comúnmente utilizados,
principalmente el etanol y el isopropanol en concentraciones de 70-80%. Tienen el mismo modo de acción de los fenoles.
c)Metales pesados: Tales como mercurio, arsénico, plata, zinc y cobre. Son bacteriostáticos ya que el metal se combina con los
grupos sulfihidrilos de las proteínas inactivándolas o precipitándolas. Son tóxicos. Ejemplos: sulfato de cobre (alguicida) y nitrato
de plata (gonorrea oftálmica en niños)

d) Halógenos:

- Yodo: Antiséptico cutáneo. Oxida componentes celulares y forma complejos con las proteínas. En altas concentraciones puede
destruir algunas esporas. Puede lesionar la piel, dejar manchas y desarrollar alergias.

- Cloro: Oxida componentes celulares, requiere un tiempo de exposición de unos 30 minutos. El producto clorado más utilizado
en desinfección es el hipoclorito de sodio, que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y además es efectivo en
un amplio rango de temperaturas. La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al ácido hipocloroso (HClO) y al Cl2
que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua. La actividad germicida del ion hipocloroso es muy reducida debido a que
por su carga no puede penetrar fácilmente en la célula a través de la membrana citoplasmática. En cambio, el ácido hipocloroso
es neutro y penetra fácilmente en la célula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.

Su actividad está influida por la presencia de materia orgánica, pues puede haber en el medio sustancias capaces de reaccionar
con los compuestos clorados que disminuyan la concentración efectiva de éstos.

e) Compuestos cuaternarios de amonio (detergentes):

Moléculas orgánicas emulsificantes porque contienen extremos polares y no polares, solubilizan residuos insolubles y son
agentes limpiadores eficaces. Solo los catiónicos son desinfectantes, alteran membrana y pueden desnaturalizar proteínas. No
destruyen micobacterias ni esporas. Se inactivan con el agua dura y el jabón.

f) Aldehídos: Formaldehído y glutaraldehído. Se combinan con las proteínas y las inactivan. Eliminan esporas (tras 12 horas de
exposición) y pueden usarse como agentes esterilizantes.

g) Gases esterilizantes: Esterilización de objetos termosensibles.

- Óxido de etileno: Microbicida y esporicida, se combina con las proteínas celulares. Alto poder penetrante. En concentraciones
de 10-20% mezclado con CO2 o diclorodifluorometano. Se debe de airear ampliamente los materiales esterilizados para eliminar
el gas residual porque es muy tóxico.
Tratamientos para el control de microorganismos
Tratamiento efecto Modo de accion aplicaciones
METODOS FISICOS
calor
Calor seco esterilzia Desnaturaliza proteinas Material que resista temp
elevada. Material que
resulta dañado por la
humedad.
Calor humedo esteriliza Desnaturaliza proteinas Esteriliza liquidos, material
que se dañaria por la
esterilzacion en seco.

Pasteurizacion Mata ciertos organismos Desnaturaliza proteinas Eimina patogenos y


disminuye la
contaminacion de
alimentos (leche,vino)
radiaciones
Luz UV esteriliza Daña el ADN En lab se usa para
esterilizar superficies
Rayos x, gamma –rad esteriliza Expulsa electrones de los Se utiliza para esterilizar
ionizante- atomos mat de plastico, y la sup de
frutas y verduras.
filtracion
De profundidad Desinfecta Elimina fisicamente la Se utiliza para tratar
celula medios de cultivo,
antibioticos, y sustancias
sensibles al calor.
De membrana esteriliza Elimina fisicamente la Se utiliza para tratar
celula medios de cultivo,
antibioticos, y sustancias
sensibles al calor.
METODOS QUIMICOS
fenoles Matan a la mayoria de Desnaturalizan proteinas germicidas
microorganismos
Compuestos fenolicos Matan a la mayoria de Desnaturalizan proteinas y Desinfectans, antisepticos.
microorganismos alteran la membrana
plasmatica
alcoholes Matan a la mayoria de Desnaturalizan proteinas y Desinfectan superficies,
microorganismos alteran la membrana actuan sobre la piel,
plasmatica limpian termometros
halogenos Matan microorganismos Oxidan compuestos Desinfectan superficies,
bioquimicos escenciales actuan sobre la piel,
limpian termometros
Peroxido de hidrogeno Matan muchos Oxidan compuestos Antiseptico de piel
microorganismos bioquimicos escenciales
Metales pesados Matan muchos Reaccionan con grupos Antisepticos de pel
microorganismos sulfhidrilo de las proteinas
Detergentes Eliminan microorganismos Eliminan fisicamene Desinfectan superficies.
microorganismos Anticepticos de piel
Agentes quimioterápicos: La medicina moderna depende de los agentes quimioterapéuticos para el tratamiento de
enfermedades. Los quimioterápicos son sustancias con actividad antimicrobiana (microbicida o microbiostática), de
origen natural o sintético, con toxicidad suficientemente baja como para poder ser administrados a un organismo
por la vía adecuada, hasta alcanzar y mantener concentraciones eficaces en los tejidos.

Estos agentes destruyen a los Microbiología General microorganismos patógenos o inhiben su crecimiento para
evitar un daño significativo al hospedador.

El término antibiótico se refiere a una sustancia química producida por un microorganismo que inhibe el desarrollo
de otros microorganismos. Los antibióticos modificados por manipulaciones químicas también se llaman
antibióticos.

Las características de los agentes quimioterapéuticos son:

- Toxicidad selectiva: debe de eliminar o inhibir exclusivamente el microorganismo patógeno que está dañando al
hospedador.

- No causar efectos adversos: No deben de causar efectos indeseables para el hospedador (respuestas alérgicas,
daño renal, daño gastrointestinal, náuseas, depleción de la médula ósea)

- Espectro de acción: Algunos agentes tienen un espectro de acción estrecho por lo que su efecto es contra una
limitada variedad de microorganismos. Otros tienen un espectro de acción amplio, y pueden atacar diferentes clases
de patógenos.

Mecanismos de acción:

Las drogas antimicrobianas pueden causar un daño al organismo patógeno de varias maneras:

- Los antibióticos más selectivos son aquellos que interfieren con la síntesis de la pared bacteriana (penicilinas,
vancomicina, bacitracina, cefalosporinas).

- Pueden inhibir la síntesis proteica al unirse al ribosoma procariótico (estreptomicina, gentamicina, cloranfenicol,
eritromicina).

- Inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos, inhibiendo el ADN girasa, interfiriendo con la replicación, transcripción
o traducción, bloqueando la síntesis de ARN, etc. (ciprofloxacina, quinolonas, rifampicina).

- Daño en la membrana plasmática uniéndose a ella para dañar su estructura y alterar su permeabilidad (polimixina
B).

- Algunas drogas antimicrobianas pueden actuar como antimetabolitos: bloquean las vías metabólicas por
competición inhibitoria. Compiten por los metabolitos

Determinación del nivel de actividad antimicrobiana: Para tener una idea de la efectividad de un agente
antimicrobiano puede obtenerse:

- Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), que es la mínima concentración del agente antimicrobiano que puede
inhibir el crecimiento de un patógeno en particular.

- Concentración Letal Mínima (CLM), es la mínima concentración de un agente antimicrobiano que mata a un
patógeno.

Existen diversos métodos para determinar la actividad de los agentes antimicrobianos, entre ellos tenemos:
- Test de susceptibilidad por dilución:

Se utiliza para determinar la CMI y la CMB. Es un método de dilución en caldo, en donde se colocan concentraciones
decrecientes del agente antimicrobiano en tubos con un caldo de cultivo que sostendrá el desarrollo del
microorganismo. El caldo más comúnmente usado para estas pruebas es el de Mueller-Hinton. Un tubo de caldo se
mantiene sin inocular como control negativo de crecimiento. Luego de la incubación adecuada (usualmente de un
día para el otro) se observa la turbidez de los tubos que indicará desarrollo bacteriano. El microorganismo crecerá en
el tubo control y en todos los otros que no contengan suficiente agente antimicrobiano como para inhibir su
desarrollo. La concentración de antibiótico que presente ausencia de crecimiento, detectada por falta de turbidez
(igualando al control negativo), se designa como la CMI. Una vez determinada la CMI, se siembra una cantidad
conocida de inóculo de cada uno de los tubos de caldo que no presentaban turbidez en placas de agar (la pequeña
cantidad del agente antimicrobiano que es llevada junto con el inóculo se elimina por dilución en el agar), y el
número de colonias que crece en estos subcultivos, después de incubar durante la noche, se compara con el número
de UFC/ml del cultivo original. Dado que incluso las drogas bactericidas no siempre esterilizan totalmente una
población bacteriana, la mínima concentración del agente antibacteriano que permite sobrevivir a menos de 0,1 %
del inóculo original se denomina CMB.

 Caldo Mueller-Hinton, no selectivo, promueve el desarrollo


microbiano.

- Prueba de Difusión en agar: El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas


de agar Müller-Hinton y sobre su superficie se disponen los discos correspondientes a varios
antibióticos. Luego de incubar las placas durante 18-24 horas a 35-37ºC se estudia el
crecimiento en ellas. Se valora el diámetro de la zona de inhibición que se forma alrededor de
cada disco. Se puede informar si el microorganismo es Sensible, Intermedio o Resistente (S, I,
R) a cada uno de los antibióticos ensayados en las placas.

- Agentes esterilizantes (esporicidas)

Se utilizan cuando, por sensibilidad de los materiales, no se puede utilizar calor o radiación
(óxido de etileno, ácido peracético, peróxido de hidrógeno). ejemplos de uso: jeringas, curitas,
etc.
 Antimicrobianos naturales, antibióticos.

Agentes antimicrobianos producidos por microorganismos (bacterias y hongos) y su función consiste en inhibir o
matar a otros microorganismos.

Los antibióticos y la toxicidad selectiva

La sensibilidad de los microorganismos a los agentes antimicrobianos varía significativamente

tetraciclinas
acutan contra gram (+)
y (-), aerobios,
amplio espectro
anaerobios,
espiroquetas
cloranfenicol

clasificacion de los por su espectro


antibioticos antibacteriano actuan sobre un grupo penicilina, cocos, gram
espectro reducido
reducido de germenes (+)

actuan contra gram (+)


mediano espectro y contra un grupo ampicilina
reducido de gram (-)

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