Pruebas bioquímicas

Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias
de objeto de identificación. Algunas son rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima
preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas
requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a
48 horas.
PRUEBAS CON LECTURA INMEDIATA
· Catalasa
La catalasa es una enzima presente en la mayoría de los microorganismos que poseen
citocromos. Las bacterias que sintetizan la catalasa hidrolizan el Hidrogeno en agua y el
oxígeno gaseoso que se libera produce burbujas.
· Oxidasa
Sirve para determinar la presencia se enzimas oxidantes. La reacción de la oxidasa se debe a
la presencia de un sistema citromooxidasa que activa la oxidación del citocromo el cual es
reducido por el oxígeno molecular produciendo agua o peróxido de hidrogeno según la especie
Moraxella Helicobacter y Brucella.
· Indol
Mediante esta prueba se detecta la liberación de Indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberación
se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante la enzima triptófanosa.
PRUEBAS LENTAS CON LECTURA DE 18 A 48 HRS
· Óxido-fermentación
Mediante esta prueba se va a determinar si la utilización de los hidratos de Carbono pro parte
de un microorganismo se realiza vía oxidativa o por vía fermentativa.
· Reducción de nitratos
Sirve para determinar la capacidad de un organismo de reducir nitratos en nitritos. Se utiliza
para asignar bacterias a la familia Enterobacteriaceae.
· Rojo de metilo
Es un indicador de pH. Actúa entre un pH 4,2 y 6,3 variando desde rojo hasta amarillo
respectivamente. Mediante esta prueba se comprueba la capacidad de un microorganismo de
producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación ácido-mixta.
Se utiliza como parte de la identificación a nivel especie de los bacilos entéricos Gram
negativos.
· Voges-Proskauer
Permite observar si el microorganismo fermenta la glucosa por la vía butanodiólica. Se usa en
la identificación de bacilos entéricos Gram negativos.
· Agar de Hierro Kligler
Mediante esta prueba se puede determinar la capacidad de un microorganismo de metabolizar
un hidrato de carbono específico incorporado en un medio de crecimiento básico; la
producción o no de gases CO2 e H2 como productos finales del metabolismo de los hidratos de
carbono. Y la producción de ácido sulfhídrico.

Por Ramírez Hernández Jessica

Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a la Medicina como
apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias.
Las principales pruebas son:
IMVIC
El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato. Su
finalidad es identificar un organismo del grupo de los coliformes. La presencia de estos indica
contaminacion fecal.
Indol
La prueba del indol estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y
metabolitos indólicos.
Rojo de Metilo
Estudia la fermentación ácido mixta con producción de ácidos estables en el tiempo.
Voges Proskauer
Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario neutro.
Técnica: Sembrar la muestra en el medio e incubar de 24 a 48h a 37 °C. Según el volumen del
medio añadir a partes iguales el volumen de los reactivos, agitar para exponer el medio al O2.
VP POSITIVO: Color rojo-rojizo en menos de 1h. VP NEGATIVO: Amarillo en superficie.
Citrato
Estudia la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono.
Oxidasa
La oxidasa estudia la presencia del enzima citocromo c oxidasa que actúa en la cadena
respiratoria del organismo.
Catalasa
Estudia si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo el peróxido
de hidrógeno.
Coagulasa
Coágulos formados por la reacción de la coagulasa en un tubo de ensayo.
Estudia la producción del enzima coagulasa, capaz de coagular el plasma. Diferencia
Staphylococcus aureus de otras especies.
Ureasa
Estudia si el microorganismo posee el enzima ureasa que cataliza la hidrólisis de la urea.
Reducción Nitratos
Estudia la capacidad de los microorganismos para reducir los nitratos por la presencia de un
conjunto de enzima denominado nitrato reductasa
β - D - Galactosidasa
Estudia la capacidad de producir β - D - galactosidasa, enzima necesario para metabolizar la
lactosa.
Descarboxilasas
Estudia si el microorganismo produce los enzimas que descarboxilan los aminoácidos
presentes en el medio.
Hidrolisis Gelatina
Estudia la capacidad proteolítica (la capacidad de egradación de proteínas) del microorganismo
por degradación de la gelatina.
Óxido - Fermentativa o de Hugh-Leifson
Estudia si el microorganismo es capaz de metabolizar un hidrato de carbono por via oxidativa o
por via fermentativa.
Ácidos y gases
Estudia la capacidad de utilizar un hidrato de carbono con la producción de ácidos y la
formación de gas.
Agar TSI
El agar TSI estudia la utilización de la glucosa y lactosa, la producción de gas y ácido
sulfhidrico (como producto metabolico final de los aminoacidos azufrados).
Índice Analítico de Perfil
API 20NE Sistema de detección a las 24 horas de incubación.
El Índice Analítico de Perfil (Analytical Profile Index o API) son un conjunto de pruebas
bioquímicas que se concentran en muy poco espacio mediante el uso de pocillos con el
reactivo correspondiente ya preparado para ser usado.
Se llenan los pocillos siguiendo las instrucciones del fabricante con la muestra problema. Se
sellan los pocillos que sean obligatorios. Se incuba la estufa a unos 37 °C normalmente.
Posteriormente se comprueba los resultados pasado el tiempo indicado en la tira.
Los resultados se apuntan por cada prueba bioquímica en el casillero correspondiente, de
manera que al final dará un número de varias cifras. Con este número se puede buscar en el
libro de referencia de las tiras API, el tipo de bacteria que se tiene en la muestra.
Son muy útiles, capaces de identificar en poco tiempo la bacteria problema (actualmente unas
600 especies). Hay varios modelos dependiendo del uso. Por ejemplo, si la muestra es un
coprocultivo se debería usar una tira de enterobacterias.

Valor D

Una medida de la resistencia al calor de un microorganismo que resulta útil para calcular la
letalidad del tratamiento térmico es el valor D ó Tiempo de Reducción Decimal, el cual se define
como el tiempo necesario a una temperatura dada para reducir en un ciclo logaritmico una
población bacteriana, esto es el 90%. La temperatura a la cual se aplica un valor D se indica
por medio de un subíndice, por ejemplo D65.

El valor D se puede obtener por medio de una gráfica en la que se representa el log 10 del
número de supervivientes en función del tiempo, en la que este valor es el inverso de la
pendiente.

El valor D es la medida de la resistencia bacteriana al calor, así un valor de D120= 4 significa la

reducción decimal al cabo de 4 minutos de aplicar 120ºC como temperatura constante. En la
tabla 3 se observan algunos valores D según el tipo de alimento.