Ultracentrifugación

Fabián Andrés Cruz González

Universidad Nacional de Colombia

Facultad de ciencias
Quı́mica

24 de mayo de 2019

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Ultracentrifuga

La ultracentrı́fuga es una centrifugadora optimizada para girar a

revoluciones muy altas; llegando a alcanzar velocidades de hasta
150000 rmp.

Un equipo que rota a 100000 revoluciones por minuto, genera un

campo centrı́fugo de 802000 x g; por lo que estos equipos siempre
tienen sistemas auxiliares de alto vacı́o y de refrigeración.

Gracias a estos sistemas adicionales, las ultracentrı́fugadoras, traba-

jan en rangos de temperatura que en general van desde los 0 hasta
los 40◦ C .

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Ultracentrifuga

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Ultracentrifugación analı́tica

Figura: Métodos de ultracentrifugación

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Velocidad de sedimentación

Fundamentos
Método hidrodinámico en que se somete una muestra a altos
campos centrı́fugos con fuerza mayor que el campo difusivo.
Esto permite separar macromoléculas en base al coeficiente de
sedimentación.
Aplicaciones
Saber el grado de homogeneidad o heterogeneidad de las espe-
cies macromoleculares que sedimentan.
puede ser muy útil para detectar y cuantificar la estequiometrı́a
y la afinidad de complejos macromoleculares.
De esta información podemos también estimar la forma apro-
ximada de macromoléculas en disolución.

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Equilibrio de sedimentación

Fundamentos
Las muestras se someten a campos centrı́fugos moderados has-
ta que se igualan las fuerzas opuestas de centrifugación y difu-
sión.
En estas condiciones, las especies macromoleculares se distribu-
yen formando un gradiente de concentración que se caracteriza
porque
1 no varı́a con el tiempo.
2 es independiente de las propiedades hidrodinámicas (forma) de
las macromoléculas.
3 depende únicamente de la masa molecular de la especie que
sedimenta.

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Equilibrio de sedimentación

Aplicaciones

Esta técnica permite la determinación de

La masa molecular de las especies macromoleculares que sedi-
mentan.
la detección y el análisis cuantitativo (en términos de estequio-
metrı́a, afinidad y reversibilidad) de las asociaciones que dan
lugar a la formación de complejos macromoleculares en disolu-
ción.

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Caso de estudio: Virus de fiebre amarilla

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Hallazgos

Forma del virus: Esférica.

Diametro: 19 nm
Densidad: 1,15 g /cm3
Espectro de absorción: 320 a 440 nm.

“Se encontró que la concentración de virus en el suero no alterado

era del orden de 0, 00005g /cm3 . 1cm3 de una dilución 10−9 , que,
como se ha demostrado, puede constituir una dosis infectiva mı́nima
para los monos, contendrı́a aproximadamente 10, 000 partı́culas de
virus. Se discute la probabilidad de que la mayorı́a de las partı́culas
de virus estuvieran en forma inactiva”.

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¿Qué sabemos hoy?
Forma del virus: Esférica
Diametro: 40-60 nm

Figura: Micrografı́a del virus de fiebre amarilla

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¿A qué corresponde?

Figura: ¿A qué experimento corresponde?

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Bibliografı́a

Edward G. Pickels, Johannes H. Bauer. Journal of

Experimental Medicine May 1940, 71 (5) 703-717; DOI:
10.1084/jem.71.5.703
Centro de Investigaciones Biológicas. Métodos de
ultracentrifugación analı́tica. Consultado el 15 de Mayo de
2019. En linea: https://www.cib.csic.es/sites/
default/files/inline-files/UCA-CIB.13oct2005.pdf

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