Polihidroxialcanoatos

RESUMEN.
Los Polihidroxialcanoatos son biopolímeros que los producen las bacterias y microalgas
con finalidad de usarlos como fuente de energía, y almacenamiento de carbono. Su carácter
biodegradable hace posible el poder remplazar a los plásticos derivados de petróleo. Su
estructura bio-poliéster es dada por una cadena de grupo alquilo (R) acompañado de ácidos
grasos hidroxilados, con el grupo hidroxilo del siguiente se forma un enlace éster, por esta
razón se lo conoce como bio poliéster.
Palabras clave: Polihidroxialcanoatos, microalgas, producción, biopoliéster.

ABSTRACT.

Polyhydroxyalkanoates are biopolymers that are produced by bacteria and microalgae with
the purpose of using them as an energy source, and carbon storage. Its biodegradable
nature makes it possible to replace petroleum-based plastics. Its bio-polyester structure is
given by a chain of alkyl (R) group accompanied by hydroxylated fatty acids, with the
hydroxyl group of the following an ester bond is formed, for this reason it is known as bio
polyester.
Keywords: Polyhydroxyalkanoates, microalgae, production, biopolyester.

METODOLOGIA.

Para la redacción de este artículo se comenzó con la búsqueda de literatura en bases de

datos como scopus, sciens direct, y Google académico, en donde se elaboró un recuento
de artículos científicos datados entre el año 2011 y 2019. Se tuvieron en cuenta el uso de
palabras clave como PHAs, polihidroxialcanoatos, microalgas, fermentación y producción.
Al tener la selección de 11 artículos se procedió al uso del software Mendeley, en el cual se
realizó un ordenamiento de las ideas respectivas de cada artículo para proceder a la
elaboración de las fichas RAE, lo que permitió tener una mayor facilidad en el momento de
acceder a la información concreta de la literatura para así dar paso a la construcción de
este artículo de revisión.
INTRODUCCIÓN.

Entre los diversos tipos de polímeros biodegradables, los polihidroxialcanoatos (PHA) son
especialmente atractivos porque tienen propiedades útiles debido a que son
biodegradables, no tóxicos y biocompatibles. Los PHA se almacenan intracelularmente por
muchos microorganismos, bacterias (grampositivas y gramnegativas) como reservas de
carbono y energía. Por primera vez, fueron obtenidos de Bacillus megaterium en 1926 por
el investigador francés Lemoigne. Más tarde, se descubrió que los PHA se acumulan por
microorganismos como materiales de reserva de energía y carbono. Desde entonces,
muchas empresas se han establecido para comercializar polihidroxialcanoatos, los
productores de PHA a gran escala los venden como materias primas en forma de pellets o
polvo, también se comercializan como el producto final con aplicaciones definidas. Se han
desarrollado como aditivos para PVC y PLA, micropolvo para cosméticos, suturas o
películas para aplicaciones médicas. Sin embargo, el mercado global de PHA es aún
pequeño en comparación con la producción de polímeros a base de petróleo. Según los
últimos datos de mercado publicados por European Bioplastics, la producción mundial de
biopolímeros alcanzó los 2,11 millones de toneladas en 2018, incluido el 1,4% de los PHA.
Por lo tanto, la industria como la investigación hacen un gran esfuerzo en la selección de
productores anfitriones utilizados para la producción de PHA fermentativa y para optimizar
el bioprocesamiento hacia la alta productividad de estos biopolímeros.1

Muchos estudios proporcionan datos sobre varios productores de PHA. Se sabe que los
microorganismos capaces de sintetizar PHA se pueden dividir en dos grupos. Las bacterias
que pertenecen al primer grupo son capaces de sintetizar polihidroxialcanoatos con
limitación de nutrientes, como oxígeno, nitrógeno o fósforo, y no acumulan PHA en su fase
de crecimiento. El segundo grupo está presentado por microorganismos que acumulan
biopolímeros durante la fase de crecimiento y no necesitan limitar los nutrientes.1

Los polihidroxialcanoatos son biopolímeros sintetizados por diferentes microorganismos y

poderosos sustitutos para plásticos derivados de petróleo, estos tienen propiedades
mecánicas similares a los polímeros sintéticos, que pueden ser procesados de manera
similar y son completamente biodegradables. El objetivo de la presente revisión
bibliográfica es proporcionar una visión general de las tendencias recientes acerca de las
propiedades de los PHAs como su estructura, el método de detección, los medios de cultivo
y sus diferentes aplicaciones.

ESTRUCTURA Y CLASIFICACIÓN

Los polihidroxialcanoatos tienen un origen natural bio-poliéster que están presentes en

células procariotas como principal fuente de energía. Sus componentes básicos son dados
por una cadena de grupo alquilo (R) acompañado de ácidos grasos hidroxilados. (Figura
1) y se clasifican en tres grupos de acuerdo con el número de unidades, ya sea, de cadena
corta (SCL), longitud de cadena media (MCL) y la longitud de cadena larga (LCS). 2 Estos
presentan propiedades físicas similares a plásticos derivados del petróleo y que son
producidos a partir de fuentes de carbono renovables 2.

Los PHA son polímeros de ácidos hidroxialcanoatos que algunas bacterias, (arqueas y
microalgas) acumulan intracelularmente como material de reserva para usarlos
posteriormente como fuente de carbono y energía. La polimerización de los ácidos
hidroxialcanoicos está dada por acción de enzimas intracelulares en donde se tiene lugar a
la condensación del grupo carboxilo de un monómero, con el grupo hidroxilo del siguiente
se forma un enlace éster, por esta razón se lo conoce como bio poliéster 2.  Respecto a su
estructura monomerica, los PHAs se pueden clasificar en varios tipos dependiendo de la
variabilidad sobre la longitud de la cadena en los ácidos hidroxialcanoicos constituidos,
siendo así que una cadena constituida de 3 a 5 átomos de carbonos se considera PHA de
cadena corta (PHA-scl), otros compuestos de 6 a 14 átomos de carbono son PHA de
cadena media (PHA-mcl) y se denomina PHAs mixtos, aquellos que están formados por
monómeros de cadena media y cadena corta. 3
Los PHA de cadena corta, por lo general son polímeros termoplásticos y pueden ser
modificables por encima de sus puntos de fusión, la cual es relativamente alta
estableciéndose aproximadamente a los 180 oC y su temperatura de transición entre -5oC
y 20oC. En cambio, los PHAs de cadena media son altamente amorfos con una temperatura
de transición que oscila entre -62 y -26 oC, y una temperatura de degradación entre los 42
a 58oC, debido a esto se les llama elastómeros.3
 8
figura 1: estructura molecular general de PHA

ESTRATEGIAS DE FERMENTACIÓN

La productividad de los polihidroxialcanoatos por bacterias depende de muchos factores,

entre ellos la proporción de fuente de carbono a fuente de nitrógeno. El período de cultivo,
la temperatura, el pH y la presencia de macro y microelementos. Sin embargo, el factor más
importante es una especie de bacteria que tiene la capacidad de acumular biopolímeros.
Se han estudiado muchos microorganismos para la síntesis de PHAs, pero la mayoría de
ellos no tienen una capacidad prometedora para sintetizar y acumular estos biopoliésteres.
El productor industrial de PHA debe cumplir con varios criterios, como la capacidad de
metabolizar las fuentes de carbono en bruto, para lograr una buena tasa de crecimiento y
un alto contenido de biopolímero en las células bacterianas.4
Para optimizar el rendimiento de PHAs, se han utilizado varios tipos de estrategias de
fermentación, que incluyen procesos discontinuos y continuos. Para mejorar la
productividad del polímero por parte de las bacterias en poco tiempo, los cultivos pueden
llevarse a cabo en condiciones variadas.4
Cultivos en Lote. Debido a los costos generales de producción razonables, la fermentación
en lotes es ampliamente utilizada en procesos de fermentación industrial. Es una estrategia
de cultivo cerrado basada en la suplementación del medio de cultivo con una fuente de
carbono al comienzo del proceso y la eliminación del biopolímero en su extremo. Todo
el proceso se mantiene en una condición constante y sin interrupciones. En la fermentación
discontinua, se pueden realizar dos enfoques: cultivo en una etapa y en dos etapas. En el
proceso de una etapa, el crecimiento celular, la síntesis y la acumulación del biopolímero
tienen lugar simultáneamente. El proceso de dos etapas involucra dos fases: crecimiento
microbiano y acumulación de biopolímeros. En la primera etapa, el cultivo se lleva a cabo
para asegurar una concentración celular bacteriana suficiente, mientras que en la segunda
etapa (etapa de limitación de nutrientes) la tasa de crecimiento bacteriano permanece
constante, pero las células comienzan a almacenar intracelularmente los PHAs. El proceso
de fermentación en lotes también podría asociarse con un bajo rendimiento de
polihidroxialcanoatos debido a la degradación de los PHAs acumulados como carbono y
materiales energéticos después del uso completo del sustrato, dando como resultado una
cantidad reducida del producto final.4
Cultivo de lotes. Un cultivo alimentado de lotes es un proceso más eficiente
que los cultivos en lotes, ya que alcanza una alta densidad de células bacterianas y la
mayor concentración posible de bioproductos. Durante la fermentación discontinua, el
medio de crecimiento se complementa con una porción adicional de un sustrato. Esta
estrategia de bioprocesos garantiza una regulación constante de los nutrientes, evita las
limitaciones de carbono y permite el crecimiento efectivo de microorganismos y la
acumulación de bioproductos. Este tipo de cultivo es el mejor método para la producción
industrial de PHAs. Se ha demostrado que la alimentación conjunta en cultivos alimentados
por lotes podría mejorar la producción de PHAs.5
Cultivos continuos. El cultivo continuo se reconoce como un proceso que mejora la
productividad y ofrece una alta consistencia y uniformidad en la calidad del producto,
proporcionando estabilidad genética a largo plazo del organismo. La concentración de
biomasa activa, el contenido de PHAs y los sustratos, se mantienen constantes tan pronto
como se alcancen las condiciones de estabilidad. La recolección de células también ocurre
continuamente bajo estas condiciones, sin embargo, una desventaja importante de esta
técnica parece ser el riesgo de contaminación microbiana que puede poner en peligro lotes
de fermentación completos, y, en consecuencia, causar una gran pérdida económica.6
MODO DE ACCION

El proceso de formación de los gránulos de polihidroxialcanoato se muestra en

la Figura 2. Estas superficies de biopoliéster están cubiertas por numerosos fosfolípidos y
proteínas que desempeñan un papel importante en la degradación y regulación de su
proceso de síntesis. Las fasinas son las proteínas más numerosas que recubren la
superficie de los gránulos, y se ha demostrado que los niveles de cobertura varían entre el
27 al 54%. Los gránulos citoplásmicos se pueden visualizar por microscopía de contraste
de fase, debido a su alta reflectividad o por medio de tintes como el rojo de Nilo y el negro
de Sudán. Se ha informado que, bajo las condiciones correspondientes a la biosíntesis del
biopolímero, algunas bacterias pueden producir hasta un 90% (p/p) de PHA en peso de
células secas. Recientemente, se ha demostrado que los cultivos bacterianos alargan las
células para controlar la porción de volumen de PHAs para que no exceda
aproximadamente el 40% del volumen celular.7

7
Figura 2: Proceso de formación de gránulos

PRODUCCIÓN.

Los PHA se sintetizan por numerosos microorganismos como energía y material de

almacenamiento redox, por lo general bajo condiciones de nutrientes limitados, con
presencia de exceso en fuentes de carbono. 8
Entre los diversos microorganismos productores de PHA, se conocen como Cupriavidus
necator (también conocido como Ralstonia eutropha), Bacillus sp. Y Pseudomonas sp. A lo
largo de los años, se ha encontrado que un número cada vez mayor de microorganismos
producen PHA, y más recientemente, nuevas cepas, incluida Massilia sp.8
Las vías biosintéticas de PHA se asocian directa o indirectamente con muchas vías
metabólicas centrales, incluidas las vías glucolítica y fosfato de pentosa, el ciclo de Krebs
y las vías para la biosíntesis y degradación de aminoácidos y ácidos grasos. La primera vía
biosintética de PHA caracterizada es la de la síntesis de poli (3-hidroxibutirato) (PHB)
que comprende tres etapas de reacción catalizadas por acetil-CoA acetiltransferasa (b-
cetotiolasa; PhaA), acetoacetil-Co reductasa (PhaB ), y PHA sintasa (PhaC) .PhaA cataliza
la condensación de dos moléculas de acetil-CoA en acetoacetil-CoA que, a su vez, se
convierte en (R) -3-hidroxibutiril-CoA [(R) -3-HB-CoA] por PhaB. Finalmente, PhaC
polimeriza (R) -3-HB-CoA en la cadena de crecimiento de PHB. (figura 3)8

8
figura3: rutas metabólicas y enzimas clave para la producción de PHAs

Esta vía biosintética ha sido ampliamente examinada en diversos microorganismos. Sin

embargo, los mecanismos moleculares detallados de la biosíntesis de PHA no han sido
claros debido a la falta de información estructural sobre las enzimas biosintéticas de
PHA. Últimamente se habla sobre la determinación de las estructuras cristalinas de las tres
enzimas clave, PhaA, PhaB y PhaC. Estos estudios recientes que presentan características
estructurales y bioquímicas de las enzimas clave son fundamentales para comprender los
mecanismos moleculares de la biosíntesis de PHA. Además, el conocimiento proporciona
un marco para la ingeniería racional de las enzimas involucradas en la biosíntesis de PHA
hacia una producción más eficiente de bioplásticos a partir de recursos renovables y la
producción de polímeros compuestos de monómeros deseados. Las proteínas también
están asociadas con el metabolismo de la PHA, estas produciendo PHA que contengan
monómeros de carbono más largos que el ácido 3-hidroxibutírico, el ácido 3-hidroxivalérico
y el ácido 3-hidroxihexanoico.8

Microalgas para la producción de PHAs. La extracción de PHA de la célula microbiana es

un paso fundamental para obtener biopolímeros, ya que puede influir en sus características
y, en consecuencia, en su aplicación industrial. Como producto acumulado
intracelularmente en el citoplasma de las células de los microorganismos, los PHA deben
extraerse de las células después de la etapa de cultivo. De esta manera, el tratamiento de
la biomasa, después del cultivo para la extracción de PHA acumulada, es un paso muy
importante, ya que puede conducir a cambios en las propiedades del producto final. Varios
estudios sugieren que las microalgas son un tipo de microorganismos que se puede utilizar
para obtener los PHAs a un menor costo porque tienen nutrientes de mínimos requisitos
para el crecimiento, estas utilizan la luz y CO2 como sus principales fuentes de energía.9

En general, el proceso de extracción de PHA implica los pasos del tratamiento de la

estabilización o interrupción celular, la recuperación y la purificación de biopolímeros. En
estos pasos, se pueden aplicar métodos químicos, físicos y biológicos, o incluso una
combinación de estos métodos, para garantizar un producto de alta pureza y con
características físicas y térmicas preservadas. El proceso de extracción de PHA comienza
con la etapa de separar el material sólido, compuesto de células con biopolímero
intracelular, del caldo de cultivo, esto generalmente se realiza mediante centrifugación. La
pared celular microbiana debe romperse, esto se realiza por métodos químicos, físicos o
biológicos. Luego de la desestabilización de la pared celular, una suspensión que consiste
en biopolímero, células con biopolímero (células que desestabilizan, pero no rompen las
paredes celulares) y desechos celulares (mezcla de proteínas, ácidos nucleicos, lípidos y
fragmentos de la pared celular). El siguiente paso es recuperar el biopolímero, que también
puede llevarse a cabo utilizando métodos químicos, biológicos y físicos, o mediante el uso
de métodos combinados tales como físicos y químicos, biológicos y químicos, entre otros.
El proceso finaliza después de la recuperación del biopolímero por sedimentación
(centrifugación) o por precipitación.9
 8
FIGURA 4: ciclo de producción y degradación de las PHA en microalgas.

METODOS DE EXTRACCION.

Los métodos químicos empleados para extraer los PHA de las células de los
microorganismos implican el uso de disolventes aislados o combinados. Los disolventes
más utilizados son cloroformo, acetona, metil isobutil cetona, cloruro de metileno, carbonato
de propileno, acetato de etilo y alcohol isoamílico. Para determinar la eficiencia del proceso
de extracción y la calidad del producto, es necesario evaluar el tiempo de contacto y la
temperatura de calentamiento del polímero con el solvente. Los métodos físicos más
comunes aplicados en la extracción de PHA son aquellos que usan molinos
homogeneizadores y ultrasonidos. Normalmente, estos métodos se aplican al comienzo del
proceso de extracción, con el objetivo de desestabilizar y romper la membrana celular de
los microorganismos. Los métodos de extracción mecánica, en comparación con los
químicos, proporcionan mejores propiedades térmicas al polímero, además de ser más
económicos y menos tóxicos. La aplicación del método mecánico para la extracción de
biopolímeros aumentará su potencial de recuperación si está asociado a un método químico
adecuado, que permita una alta recuperación de PHA en el proceso de extracción sin
promover cambios significativos en sus características. El método biológico de extracción
de PHA microbianos es un proceso complejo que se basa en la aplicación de enzimas,
como lisozimas, nucleasas y proteasas, para la recuperación del biopolímero. Las enzimas
se agregan al caldo de cultivo para hidrolizar PHA que contienen células. 9

DEGRADACION.

Los PHAs se biodegradan bajo condiciones aeróbicas y anaeróbicas por microorganismos

degradadores de PHA presentes en la mayoría de los entornos naturales, incluyendo el
medio marino. En condiciones aeróbicas los productos resultantes deben ser en último
término biomasa, CO2 y agua, mientras que en condiciones anaerobias los productos
resultantes debe ser biomasa, CO2, metano y agua.7
La comprensión de la vida útil de los polímeros biodegradables comienza con la
comprensión de los mecanismos a través de los cuales se puede producir la biodegradación
lo cual es el desglose completo de los materiales por medio de la actividad biológica, por la
acción de microorganismos como bacterias, arqueas, hongos y algas. Los PHA se
biodegradan tanto en condiciones aeróbicas como anaeróbicas por los degradadores de
PHA presentes en la mayoría de los entornos naturales, incluido el ambiente marino. En
condiciones aeróbicas, los productos resultantes deberían ser en última
instancia de biomasa, CO2 y agua, mientras que en condiciones anaeróbicas los productos
resultantes deberían ser biomasa, CO2, metano y agua. La biodegradación de PHA ocurre
principalmente a través de erosión de la superficie mediante hidrólisis catalizada por
enzimas, lo que significa que cuando se considera en términos simples, la tasa de pérdida
de masa de un objeto de PHA se relaciona con el área de superficie accesible al ataque
enzimático, e incluso mientras ocurre la pérdida de masa, las propiedades del material a
granel se conservan normalmente. A medida que avanza la biodegradación, la superficie
del polímero cambia, los poros pueden formarse y puede producirse un cambio del
mecanismo hacia la degradación en masa y la hidrólisis auto catalítica en lugar de la
degradación de la superficie. Todos estos factores actúan en sinergia, lo que lleva a una
interacción compleja que influye en la velocidad de biodegradación. Para la
conceptualización, un proceso de biodegradación simplificado con tres pasos clave y una
tasa definida para cada uno.10
Uno de los tres pasos que se han definido es la formación de biopelículas, cuya velocidad
se ha designado RB. El biofilm es una asociación única y compleja de microbios formados
a partir de células microbianas asociadas a la superficie que están incrustadas en una
matriz de sustancia polimérica extracelular (EPS) autoproducida que consiste en
polisacáridos, proteínas y partículas orgánicas e inorgánicas atrapadas. Otro paso que se
ha definido es la despolimerización hidrolítica catalizada por enzimas, cuya velocidad ha
sido designada RD. Esto es, cuando las despolimerasas extracelulares catalizan la escisión
del enlace hidrolítico del polímero, lo que finalmente conduce a la formación de
oligómeros, dímeros y monómeros. Finalmente, la captación de pequeñas moléculas por
parte de la célula durante la bioasimilación para el crecimiento y la reproducción o la
mineralización se ha combinado en un solo parámetro. Los productos resultantes de este
proceso son una mayor biomasa celular y productos finales simples como el CO2 en
ambientes aeróbicos y el metano en ambientes anaeróbicos. La tasa de bioasimilación y
mineralización ha sido designada RM. RB y RD, se consideran limitantes de la velocidad,
lo que significa que los efectos de cualquier factor en la RM pueden considerarse menos
significativos.10
Figura 5: tasa de biodegradación de PHA. En donde t0 = punto de tiempo inicial. tL = tiempo de retardo. tn = punto de

tiempo final. A = área de superficie. m = masa. En la presente gráfica los pasos de la biodegradación se muestran de forma
secuencial para los medios de comunicación, sin embargo, todos los procesos se llevan a cabo al mismo tiempo, un
10
proceso no ocurre en su totalidad antes de que comience el próximo.

APLICACIONES.

Los PHA se puede utilizar como plástico ecológico para fines de embalaje. Y su
biodegradabilidad y biocompatibilidad les permite ser utilizados como
materiales bioimplantes para aplicaciones médicas y terapéuticas. Las aplicaciones
terapéuticas potenciales de PHA incluyen implantes médicos tales como ingeniería de
tejidos de válvulas cardíacas, ingeniería de tejidos vasculares, ingeniería de tejidos óseos,
ingeniería de tejidos de cartílago, ingeniería en tejido de conductos nerviosos, así como la
matriz portadora de administración de fármacos.11

CONCLUSIONES.

Los polihidroxialcanoatos como fuentes de plástico biodegradable son el mecanismo

alternativo para el futuro del planeta reparando el daño ambiental. Siendo como fuente
principal microalgas y bacterias que se obtiene por fermentación hacen que el costo de
producción sea un poco elevado a comparación a los productos derivados del petróleo, por
esta razón se espera que a futuro con la biotecnología su precio de cultivo sea menor para
poder producir PHAs con facilidad.

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