LAPORAN PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI PANGAN

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

PROGRAM STUDI TEKNOLOGI PANGAN
UNIKA SOEGIJAPRANATA
SEMARANG

ELEKTROFORESIS SDS PAGE DAN

KUANTITATIF PROTEIN
Monica Novelia P. Gianto 16.I1.0010
Kelompok C3

Abstrak

1. TUJUAN PRAKTIKUM AccuRuler RGB prestained protein

Tujuan praktikum kali ini yaitu untuk
mengidentifikasi profil protein sampel
berdasarkan berat molekulnya dengan
alat SDS PAGE, mengukur berat
molekul protein dari hasil SDS PAGE,
dan mengetahui profil protein yang telah
diketahui berat molekulnya.
2. TINJAUAN PUSTAKA
3. MATERI METODE
3.1. Materi
3.1.1. Alat
Alat-alat yang digunakan dalam
praktikum ini adalah eppendorf, mikro
pipet, mikro tip, filter paper, sarung
tangan, gelas beaker, biometra Sodium
Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel
Electrophoresis, fixing box, stain,
penggaris, scanner dan destain box.
3.1.2. Bahan
Bahan yang digunakan dalam praktikum
ini adalah alkohol 75%, alkohol 95%,
ethanol 95%, acrylamide, 1,5M Tris HCl
pH 8,8; 0,5M Tris HCl pH 6,8;
aquabidest (DDH2O), SDS (Sodium
Docecyl Sulfate), APS (Ammonium
Persulfate ((NH4)2S2O8), TEMED,
ladder, SDS PAGE sample buffer, tank
buffer, stain solution (Coomasie Brilliant
Blue R), dan destain solution.
3.2. Metode
3.2.1.Persiapan Gel dan Elektroforesis
Mula-mula glass plate dibersihkan
dengan alkohol 75% pada kedua sisi
hingga tidak meninggalkan kotoran.
Selanjutnya, karet penyangga (silicone
rubber seal) dipasangkan pada kaca yang
direkatkan dengan klip. Setelah
terpasang, dilakukan pemeriksaan pada
pemasangan kaca dengan penuangan
etanol 95% dan didiamkan beberapa
saat. Apabila terjadi kebocoran,
pemasangan karet terhadap kaca diulangi
kembali hingga tidak terjadi kebocoran.
Selama menunggu pengecekan,
dilakukan pembuatan stacking gel dan
running gel. Jika kebocoran glass plate
tidak terjadi, larutan running gel
dimasukkan ke dalam glass plate secara
perlahan hingga batas yang ditentukan
(3/4 bagian). Setelah pengisian, pastikan
tidak ada gelembung udara yang
terbentuk. Jika terbentuk gelembung,
dapat ditambahkan alkohol 95%. Setelah

1
running gel mengeras, stacking gel
ditambahkan diatasnya hingga mencapai
batas permukaan. Setelah itu comb
dipasangkan pada stacking gel dan
ditunggu hingga mengeras. Setelah gel
mengeras, karet penyangga dilepas dan
rangkaian glass plate dipindahkan ke
dalam alat elektroforesis. Setelah
dipasangkan dengan rapat, tank buffer
ditambahkan pada bagian dalam alat
hingga penuh. Semua perangkat
kemudian dipasangkan dan
disambungkan dengan power supply,
mesin dinyalakan, dan dilihat apakah
dapat bekerja dengan baik atau tidak.
Jika dapat bekerja dengan baik, mesin
dimatikan kemudian diatur kondisi arus
pada 400 mA dan tegangan 180 volt
selama 30 menit, atau hingga sampel
mencapai running gel. Sampel yang akan
digunakan untuk elektroforesis
diinkubasi terlebih dahulu didalam
waterbath (air mendidih) selama 5
menit. Sampel yang dimasukkan ke
dalam elektroforesis sebelumnya
dihitung jumlahnya (v) berdasarkan
perbandingan dengan konsentrasi (M)
masing-masing sampel. Kemudian
running dijalankan hingga pewarna
sudah mencapai bagian bawah gel.
Power supply dimatikan, kabel dicabut,
dan penutup dibuka. Kemudian glass
plate dibuka secara perlahan serta gel
dipindahkan kedalam stain solution
kemudian didiamkan pada shaker sekitar
30 menit. Setelah itu, stain solution
dibuang dan diganti dengan destain
solution selama 4 jam – 1 malam.
Destain solution diganti sebanyak 3-4
kali atau hingga warna biru pada
background gel hilang dan pita protein
dapat terlihat jelas.
2
3.2.2. Kuantitatif Protein
Gel hasil SDS PAGE di scan terlebih
dahulu untuk mendapatkan gambar
digital. Setelah didapatkan gambar gel,
dilakukan pengukuran jarak pita protein
yang terbaca dari marker protein dengan
rumus pencarian Rf. Setelah
mendapatkan nilai Rf, angka tersebut
dimasukkan ke dalam persamaan regresi
linear dengan rumus 𝑦 = 𝑎𝑥 + 𝑏 dengan
y = Log BM; x = Rf; BM = anti log y.
Setelah mendapatkan persamaan regresi
linear, dilakukan pengukuran jarak
protein dari sampel pada gel, dan dicari
nilai Rf-nya. Nilai ini dimasukkan ke
dalam persamaan regresi linear sebagai
x. Berat molekul sampel kemudian
digunakan untuk pencarian profil
protein. Analisis data dilakukan secara
bioinformatika dengan mengakses
Protein Data Bank pada The Universal
Protein Research
(http://www.uniprot.org/). Dalam
website tersebut, dibagian search, ketik
nama organisme yang akan dicari, pada
kloter C adalah cow’s milk, kemudian
klik “search”. Setelah masuk ke hasil
pencarian, pada tabel dapat terlihat ikon
pensil, lalu diklik kemudian di bagian
sequences, pilihan “mass” diberi tanda
centang. Setelah itu klik “save” dibagian
kiri atas atau bagian kanan bawah. Lalu
pada tabel hasil pencarian akan muncul
berat molekulnya (mass). Nama protein
dicari dengan melihat berat molekulnya
(BM pada haspeng satuannya masih kilo
dalton, sedangkan pada uni-prot
satuannya dalton sehingga BM perlu
dikali 1000 agar sama dengan BM pada
tabel). Pencarian diurutkan berdasarkan
BM paling rendah atau besar dengan
mengklik panah atas/bawah. Hasil
pencarian dicari yang paling mendekati
dengan BM hasil pengamatan setelah itu
nama proteinnya (protein names) dicatat.
4. HASIL PENGAMATAN
Tabel 1. Perhitungan Rf protein ladder
gel
Berdasarkan tabel diatas, dapat dilihat
bahwa BM(kDA) yang dihasilkan
secara berurutan yaitu 180;130;100;75;
dan 65. Panjang pita (cm) yang
dihasilkan yaitu 2,5; 2,9; 3,3; 3,7; dan
4,2. Log (BM) yang dihasilkan yaitu
2,2553; 2,1139; 2,000; 1,8571; dan
1,7993. Rf yang diperoleh yaitu 0,6098;
0,7073; 0,8049; 0,9024; dan 1,0244
Tabel 2. Hasil pengukuran berat
molekul dan profil protein
Berdasarkan hasil percobaan, setiap
kelompok mempunyai panjang pita
yang berbeda-beda. Rentang panjang
pita yaitu 2,1 cm – 3 cm. Oleh karena
itu, hasil pada Rf, Y (Log BM), dan BM
(kDa) yang didapatkan berbeda-beda
juga. Ketiga hal diatas juga
menyebabkan hasil profil protein yang
tidak sama antar kelompok.
5. PEMBAHASAN
SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate
Polyacrylamide Gel Electrophoresis)
yaitu metode untuk memisahkan rantai
polipeptida pada protein berdasarkan
kemampuan untuk bergerak dalam arus
listrik dengan menggunakan
polyacrylamide sebagai pemisah. SDS
akan membentuk kompleks bersama
protein dan bermuatan negative. SDS
adalah deterjen anionic yang dapat
melapisi protein , sebagian besar
sebanding dengan BM nya, dan dapat
mendenaturasi protein.
3
Elektroforesis adalah teknik pemisahan
campuran berdasarkan pergerakan
partikel koloid bermuatan dengan
pengaruh medan listrik. Cara tersebut
biasanya digunakan pada analisa virus,
asam nukleat, enzim, dan protein.
Prinsip kerjanya yaitu gaya tarik
elektrostatis, dimana biomolekul
bermuatan diletakkan pada medan
listrik sehingga akan bergerak bebas
menuju elektroda (anoda dan katoda)
yang menjadi lawan muatannya dalam
suatu matrix. Matriks adalah penyangga
berpori pada saat terjadi pemisahan
molekul, sehingga dalam memilih matriks
harus disesuaikan dengan molekul yang
inget dipisahkan. Matriks juga dapat
menahan panas akibat adanya arus listrik
(Dolnik, 1997). Umumnya matriks yang
digunakan adalah gel polyacrylamide.
Polyacrylamide struktur seperti spons yaitu
struktur ikatan silang dan ukuran porinya
seukuran dengan banyak molekul protein.
Dalam mendeteksi molekul yang
terseparasi dalam gel dapat digunakan
autoradiografi atau pewarnaan,
Pada pratikum kali ini digunakan metode
SDS PAGE (Sodium dodecyl sulfate –
Polyacrylamide Gel Electrophoresis).
Tujuan metode ini adalah untuk
memisahkan protein berdasarkan berat
molekulnya serta mengetahui profil
protein tersebut. Metode SDS PAGE adalah
salah satu metode elektroforesis untuk
memisahkan protein dengan menggunakan
matriks penyangga polyacrylamide gel dan
detergen SDS (sodium dodecyl sulfate)
(Davis, 994). Sebelum dilakukan separasi
protein dengan SDS-PAGE, dilakukan
preparasi sampel dari hasil praktikum
isolasi protein sebelumnya. Isolat protein
dimasukkan ke dalam tabung eppendorf
sebanyak 0,1 gram dan ditambahkan
sample buffer (dengan perbandigan sampel
: buffer, 1 : 3). Penambahan sample buffer
berfungsi dalam denaturasi protein pada
isolat, struktur protein yang kompleks
dapat berubah menjadi lebih sederhana,
sehingga pergerakan molekul melalui
matrix gel lebih mudah. Sample buffer
umumnya mengandung 10% glycerol, 1%
SDS, 10 mM Tris-Cl pH 6.8, 1 mM ethylene
diamine tetraacetic acid (EDTA), agen
reduksi dithiothreitol (DTT) atau 2-
mercaptoethanol, serta 0.05 mg/ml
bromophenol blue. Glycerol berperan
dalam memberikan massa jenis agar
sample dapat bergerak menuju stacking
gel yang dikelilingi buffer elektroda. Tris-
HCl berfungsi sebagai buffer untuk
mencegah kerusakan dan aktivasi protein
karena protein sangat sensitif terhadap
perubahan pH yang sempit. Sedangkan
peran dari SDS, DTT, dan pemanasan
adalah untuk mendenaturasi isolat protein.
SDS (anionic detergent) akan memberi
muatan negatif pada protein sehingga
struktur 2 dan 3 dimensi dari protein dapat
terpecah. Oleh karena itu diperlukan
reagen yang lebih kuat untuk
mendenaturasi beberapa struktur tersier
dan kuartener yang memiliki ikatan
disulfida (kovalen), seperti DTT atau 2-
mercaptoethanol untuk memecah ikatan
disulfida (-S-S-) protein. Proses ini harus
dilakukan supaya pada gel, pita protein
dapat terbaca dengan baik. Oleh karena itu
proses ini sangat penting (Garfin, 2003).
Dalam melakukan metode SDS PAGE,
mula-mula glass plate dibersihkan dengan
alkohol 75% pada kedua sisi hingga tidak
meninggalkan kotoran. Selanjutnya, karet
penyangga (silicone rubber seal)
dipasangkan pada kaca yang direkatkan
dengan klip. Setelah terpasang, dilakukan
4
pemeriksaan pada pemasangan kaca
dengan penuangan etanol 95% dan
didiamkan beberapa saat. Apabila terjadi
kebocoran, pemasangan karet terhadap
kaca diulangi kembali hingga tidak terjadi
kebocoran. Kebocoran ini dapat saja terjadi
saat glass plaste rusak (chipped),
pemasangan spacer pada glass plate yang
tidak sejajar, maupun gasket (karet) yang
sudah rusak, kotor, maupun tidak dipasang
secara benar (Bio-rad Laboratories, 2016).
Selama menunggu pengecekan, dilakukan
pembuatan stacking gel dan running gel.
Jika kebocoran glass plate tidak terjadi,
larutan running gel dimasukkan ke dalam
glass plate secara perlahan hingga batas
yang ditentukan (3/4 bagian). Running gel
adalah sebagai gel pemisah, yang berfungsi
untuk memisahkan protein berdasarkan
berat molekulnya.
Pratikum ini menggunakan sistem
kontinus, yaitu menggunakan 2 gel
terpisah, stacking gel di bagian atas dan
running gel dibawahnya dengan gel buffer
dan tank buffer yang berbeda. Stacking gel
adalah gel yang memiliki pori besar, sedikit
kandungan akrilamid, dan ber-pH 6,8,
berfungsi untuk mensejajarkan protein
dengan berat molekul berbeda pada suatu
pita tipis sebelum masuk ke separating gel.
Sehingga berat molekul besar tidak dapat
merusak (clog) pori pada bagian atas
running gel sebelum protein dengan berat
molekul kecil masuk. Saat elektroforesis
terjadi protein akan begerak diantara
leading ion dan terminating ion hingga
mencapai running gel. Running gel adalah
gel yang memiliki pori lebih kecil, tinggi
kandungan akrilamid, dan ber-pH 8,8.
Maka akan terjadi perubahan pH dari pH
6,8 menjadi pH 8,8. Hal ini menyebabkan
protein menjadi terminating ion dan
terbebas. Setelah itu maka molekul protein
dapat bergerak pada separating gel
dengan kecepatan berbeda (molekul kecil
bergerak lebih cepat) dan terpisah
Setelah pengisian, pastikan tidak ada
berdasarkan berat molekulnya (Garfin,
gelembung udara yang terbentuk, karena
2003).
menurut Magdeldin (2012) polimerisasi
acrylamide yang baik dilakukan pada
kondisi tanpa udara (O2), karena
Running gel terdiri dari Acrylamide, tris HCl
gelembung-gelembung tersebut dapat
pH 8,8, ddH2O, SDS (Sodium Dodecyl
membuat terjadinya pembelokan arah pita
Sulfate), APS (Amonium Persulfat), dan
protein yang terbentuk, menyebabkan
TEMED. Gel poliakrilamid terdiri dari
gangguan aliran listrik saat proses
akrilamid dan bis-akrilamid yang berfungsi
elektroforesis, serta mengganggu proses
untuk memisahkan sampel protein,
staining setelah elektroforesis. Hal ini
sehingga dapat menyaring molekul dan
dapat dihindari dengan menuangkan gel
meningkatkan pemisahan (Stryer, 2000).
dari sisi luar sandwich gel atau pada salah
Lehninger (1982) menambahkan gel juga
satu sisi spacer glass plate dengan
menjaga molekul yang telah terpisah
perlahan untuk mencegah gel
supaya tidak berdifusi terlalu cepat ke
memerangkap udara (Bio-Rad
dalam fase cair. Tris-HCl berfungsi sebagai
Laboratories, 2016). Jika terbentuk
buffer untuk mencegah kerusakan dan
gelembung, dapat ditambahkan alkohol
aktivasi protein karena protein sangat
95%.
sensitif terhadap perubahan pH yang
sempit. Lalu, ddH2O adalah air distilasi yang
berfungsi sebagai pelarut (Garfin, 2003).
Setelah running gel mengeras, stacking gel
SDS (anionic detergent) akan memberi
ditambahkan diatasnya hingga mencapai
muatan negatif pada protein sehingga
batas permukaan. Setelah itu comb
struktur 2 dan 3 dimensi dari protein dapat
dipasangkan pada stacking gel dan
terpecah. Sehingga protein yang
ditunggu hingga mengeras. Comb atau sisir
bermuatan positif akan tertarik
adalah alat yang berfungsi untuk
menyebabkan protein bergerak menuju
membentuk sumur pada gel sebelum
elektroda positif (Edy Susanto, 2010).
terjadi polimerisasi (pengerasan) gel,
Ammonium persulfate (APS) berperan
sehingga memudahkan dalam
dalam inisiator pengaktifan poliakrilamida,
memasukkan sampel. Semakin banyak dan
sehingga akan bereaksi dengan molekul
tebal gerigi sisir makan semakin banyak
poliakrilamida lainnya membentuk rantai
pula sampel yang dapat dimasukkan
polimer yang panjang. Kemudian TEMED
(Hames, 1998). Setelah gel mengeras, karet
berfungsi sebagai katalisator reaksi
penyangga dilepas dan rangkaian glass
polimerisasi akrilamid menjadi gel
plate dipindahkan ke dalam alat
poliakrilamid sehingga dapat digunakan
elektroforesis. Setelah dipasangkan dengan
dalam pemisahan protein. Penambahan
rapat, tank buffer ditambahkan pada
SDS, APS, dan TEMED harus dilakukan
bagian dalam alat hingga penuh. Tank
secara berurutan agar dapat terjadi
Buffer bersama dengan buffer tris-HCl akan
polimerisasi secara sempurna (Yepyhardi,
bekerja sama pada gel untuk
2009). Sedangkan stacking gel mempunyai
menggerakkan protein pada stacking gel
komposisi yang sama seperti running gel
(Magdeldin, 2012). Semua perangkat
hanya saja tris HCl yang digunakan
kemudian dipasangkan dan disambungkan
merupakan tris HCl pH 6,8.

5
dengan power supply, mesin dinyalakan,
dan dilihat apakah dapat bekerja dengan
Sampel yang dimasukkan ke dalam
baik atau tidak. Jika dapat bekerja dengan
elektroforesis sebelumnya dihitung
baik, mesin dimatikan kemudian diatur
jumlahnya (v) berdasarkan perbandingan
kondisi arus pada 10 mA dan tegangan 50
dengan konsentrasi (M) masing-masing
volt selama 30 menit, atau hingga sampel
sampel. Pada bagian sumur paling kiri diisi
mencapai running gel. Kemudian, arus
dengan marker (protein standard). Marker
diganti menjadi 15 mA dan tegangan 100
adalah campuran protein dengan berat
volt selama 90 menit atau hingga sampel
molekul tertentu yang telah diketahui
mencapai dasar gel. Tegangan dan arus
karakteristiknya dan memiliki ikatan
listrik pada proses elektroforesis berperan
kovalen dengan pewarna (Bio-Rad
sebagai tenaga penggerak molekul
Laboratories, 2016). Kemudian, sampel
bermuatan melalui pori matrix. Semakin
yang berada di tabung eppendorf diambil
tinggi tegangan dan arus yang diberikan,
dengan mikropipet dan dimasukkan ke
maka semakin cepat perpindahan molekul
dalam sumur secara perlahan supaya
kearah elektroda yang belainan dengan
sampel tidak menyebar ke dalam gel.
muatannya (ke arah elektroda positif).
Kemudian running dijalankan hingga
Tegangan harus diatur agar tidak sampai
pewarna sudah mencapai bagian bawah
ketinggian untuk menghindari
gel. Power supply dimatikan, kabel dicabut,
meningkatnya suhu pada buffer yang
dan penutup dibuka. Dalam proses
digunakan. Peningkatan suhu dapat
running, terjadi pergerakan sampel dari
menyebabkan matrix gel yang digunakan
stacking gel hingga mencapai separating
meleleh dan merusak struktur sampel.
gel pada kecepatan yang sama. Proses ini
Maka dari itu untuk gel berukuran normal
dibantu dengan buffer pada stacking gel
tegangan listrik yang digunakan kurang dari
berupa tris-HCl pH 6,8 dan juga tank buffer,
8 Volt/cm (jarak antar elektroda) dan arus
sehingga mereka akan bekerja sama
listrik kurang dari 75 mA. Namun,
seperti yang telah dijelaskan sebelumnya.
penggunaan arus yang terlalu kecil pun
tidak baik karena mengakibatkan
pelebaran (broadening) pita protein,
sehingga hasil pita akan terdispersi dan Protein yang terseparasi belum dapat
sulit dianalisa (Magdeldin, 2012). Sampel ditentukan jumlah dan titiknya sehingga
yang akan digunakan untuk elektroforesis harus dilakukan pengikatan cat (dye
diinkubasi terlebih dahulu didalam binding). Metode ini menggunakan suatu
waterbath (air mendidih) selama 5 menit. pewarna yang dapat berikatan dengan
Pemanasan bersama SDS dan agen protein sehingga protein menjadi bewarna
pereduksi berperan dalam denaturasi dan dapat terlihat. Pewarna yang
protein dengan struktur kompleks menjadi digunakan dalam praktikum ini adalah
lebih sederhana seperti yang telah Coomasie Brilliant Blue R250. Meskipun
dikatakan sebelumnya (Garfin, 2003). pewarna ini tidak sesensitiv silver stain
Kemudian sampel yang telah terdenaturasi tetapi pewarna ini mampu berikatan
divortex supaya protein yang mengendap dengan semua protein tanpa spesifitas
pada dasar tabung dapat terhomogenkan. tertentu dan proses pewarnaannya lebih
Selanjutnya sampel tersebut dimasukkan cepat (3 jam) daripada silver stain (6 jam)
(loading) ke dalam elektroforesis. (Neuhoff, 1988). Setelah pewarnaan maka
dapat diketahui bahwa semakin tinggi

6
konsentrasi protein yang dielektroforesis,
maka akan semakin jelas dan tebal pita
yang dihasilkan. Namun, apabila
konsentrasi protein yang dielektroforesis
rendah, pita yang dihasilkan akan tipis
Wibowo et al., (2012). Kemudian glass
plate dibuka secara perlahan serta gel
dipindahkan kedalam stain solution
kemudian didiamkan pada shaker sekitar
30 menit. Shaker berfungsi untuk
menggoyangkan gel dan pewarna supaya
pewarna tetap merata pada seluruh
permukaan gel (Bio-Rad Laboratories,
2016). Setelah itu, stain solution dibuang
dan diganti dengan destain solution selama
4 jam – 1 malam. Destain solution diganti
sebanyak 3-4 kali atau hingga warna biru
pada background gel hilang dan pita
protein dapat terlihat jelas. Perendaman
dengan larutan destaining berfungsi untuk
menghilangkan CBB yang tersisa dan yang
tidak berada pada band protein, serta
memperjelas band protein yang terbentuk
(Anam, 2009).
Setelah semua proses SDS-PAGE selesai,
kemudian dilakukan dokumentasi gel.
Walaupun gel mudah untuk disimpan,
tetapi dokumentasi secara digital lebih baik
digunakan karena lebih mudah dan
sederhana. Untuk proses dokumentasi
secara digital, gel yang dihasilkan akan di-
scan dengan scanner. Setelah didapatkan
gambar gel, dilakukan pengukuran jarak
pita protein yang terbaca dari marker
protein dengan rumus pencarian Rf (jarak
perpindahan relatif antara pita dengan
pewarna). Setelah didapatkan nilai Rf,
angka tersebut dimasukkan kedalam
persamaan regresi linier y = a + bx. Lalu
setelah didapatkan persamaan regresi
linear, dilakukan pengukuran jarak protein
sampel pada gel, dan dicari nilai Rf nya.
Nilai yang didapat dimasukkan kedalam
persamaan regresi linear sebagai x. Lalu
hasil dari perhitungan diantilog untuk
didapatkan hasil berat molekul dari protein
sampel. Berat molekul sampel kemudian
digunakan untuk pencarian profil protein.
Pencarian profil protein dilakukan melalui
website Universal Protein Resource
(www.uniprot.org), dimana UniProt adalah
gabungan dari European Bioinformatics
Institute (EMBL-EBI), SIB Swiss Institute of
Bioinformatics, dan Protein Information
Resource (PIR). UniProt menyimpan data-
data mengenai protein termasuk
organisme sumbernya, berat molekul,
sekuens, panjang, fungsi, dan masih
banyak informasi lain yang disusun oleh
ilmuan di seluruh dunia (UniProt, 2017).
Retension faktor (Rf) adalah faktor
penghambat untuk memisahkan protein-
protein pada gel dengan cara menghambat
laju migrasi protein sehingga terjadi
pemisahan yang membentuk pita-pita
pada jarak migrasi yang saling berbeda
karena perbedaan berat molekul. Jarak-
jarak migrasi itulah yang merupakan nilai
Rf nya. Sehingga, dengan mencari nilai Rf
dapat kita ketahui berat molekul dari
masing-masing protein. Hubungan antara
nilai Rf dan berat molekul dapat dilihat
pada gambar 1.
6. KESIMPULAN
7. DAFTAR PUSTAKA
8. KESIMPULAN
8.1. Hasil Pengamatan
8.2. Laporan Sementara
8.3. Plagscan