Folic acid grafted and tertiary amino based pH-responsive pentablock

polymeric micelles for targeting anticancer drug delivery

Pendahuluan

Meningkatkan target ke situs tumor dan mengurangi akumulasi di situs jaringan normal dari
obat antikanker penting untuk meningkatkan efisiensi kemoterapi kanker. Telah
dikembangkan pentablock novel poli polimer (etilen glikol) -b- (poli (2- (dietilamino) etil
metakrilat) -b-poli (hidroksietil metakrilat) -g-folic acid) 2 [misel-misel PEG-b-
(PDEAEMA-b-PHEMA-g-FA) 2] sebagai nanocarrier obat antikanker yang dapat
menargetkan sel-sel tumor dengan cepat, dan menuju pH situs tumor untuk mengontrol
pelepasan obat. Digunakan ligan asam folat (FA) mengikat dengan afinitas tinggi terhadap
folat reseptor, yang diekspresikan pada membran apikal permukaan sel epitel untuk
memodifikasi nanopartikel untuk lebih meningkatkan penargetan selektif terhadap sel kanker.
Sehingga penelitian ini dikembangkan, Doxurubicin yang ditransplasikan asam folat dan
pentablock responsif-pH berbasis amino misel polimer untuk menargetkan pemberian obat
antikanker
Metode
Preparasi DOX-loaded misel
Kopolimer PDEAEMA dilarutkan dalam DMSO, HCl dan TEA. Campuran dipindahkan ke
membran dialisis (MWCO: 3500 Da) dan didialisis terhadap deionisasi air untuk memurnikan
misel. Disaring membran mikroporous 0,45 μm untuk menghapus partikel ukuran besar,
larutan dibekukan dan diperoleh liofilisasi misel kering. Bubuk misel disimpan pada suhu
20°C untuk menentukan kandungan muatan obat (LC) dan efisiensi jebakan (EE)
Pelepasan obat secara In vitro
Pengujian dengan larutan buffer pH 5,0 dan pH 7,4 lalu dihitung dengan metode pelepasan
obat kumulatif (%)
Pengujian Sitotoksisitas secara In vitro
Uji MTT standar digunakan untuk mengevaluasi sitotoksisitas misel DOX ke sel HepG2.
Penyerapan Sel secara In Vitro
Dilakukan pengkulturan misel lalu diwarna dengan formaldehid dan dicuci PBS lalu dilihat
pada Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM, Leica, TCS SP8)
Hasil
Analisis misel yang dimuat DOX Misel
Ukuran misel, potensi zeta, kandungan muatan obat (LC) dan efisiensi jebakan obat (EE) dari
misel ditentukan oleh DLS dan Analisis UV-vis. Hasil ukuran partikel blank misel pada 120
nm indeks polidispersitas yang relatif sempit (PDI <0,3). Rantai panjang PDEAEMA
hidrofobik misel menghasilkan volume inti misel dan ukuran misel yang besar. Karena itu,
semakin tinggi proporsi rantai PDEAEMA menyebabkan peningkatan volume inti dan ukuran
misel. Pada Tabel 2, kandungan muatan obat dan efisiensi enkapsulasi Micelle-1-FA adalah
20,11% dan 45,28%, kandungan muatan obat dari Micelle-2-FA dan Micelle-3-FA (20,99%
dan 21,67%) sedikit meningkat karena penambahan rantai panjang hidrofobik.

Morfologi misel berbentuk bola, dan menunjukkan distribusi ukuran misel yang relatif sempit
dikukur dengan TEM. Pada pH 5 ukuran partikel lebih besar yaitu 180-190 dibandingkan
dengan pH 7,4, yaitu 120-150. Ukuran lebih besar maka dapat berefek lebih baik. Pada pH 5
Zeta potensial lebih besar (12-15) dibandingkan dengan pH 7,4 (3-6). Zeta potensial tinggi
tidak akan membentuk flokulasi (pengendapan) diukur dengan DLS
Analisis mekanisme pelepasan obat secara in vitro

Pelepasan obat In vitro pada pH 5,0 dibandingkan dengan pH 7,4. Dalam lingkungan
fisiologis normal (pH 7,4), struktur misel relatif kompak, dan DOX enkapsulasi rilis 10%
selama 10 jam dan rilis <25% dalam 96 jam. DOX misel terlindung dengan baik pada pH
fisiologis. Ini berpotensi meminimalkan efek samping dari DOX ke jaringan normal. Di
lingkungan sel kanker yang lebih asam (pH 5.0), pelepasan DOX cepat secara signifikan.
Gugus amino tersier Blok PDEAEMA benar-benar terprotonasi pada pH 5.0. Rantai
PDEAEMA dalam misel berfungsi sebagai switch on dan off yang peka terhadap pH untuk
mengontrol pelepasan DOX-loaded. Pelepasan kumulatif DOX dalam 10 jam adalah 41%,
46% dan 48% untuk Micelle-1-FA, Micelle-2-FA dan Micelle-3-FA. Dalam 96 jam mencapai
Micelle-2-FA 91% dan Micelle-3-FA96%, dan Micelle-1-FA 82%. Dalam kondisi asam,
DOX pelepasan kumulatif dari Micelle-3-FA adalah yang tertinggi di antara semua misel,
karena punya PDEAEMA terpanjang dalam struktur misel. Protonasi DOX dalam kondisi
asam meningkatkan kelarutan air, yang mempercepat pelepasan DOX. Oleh karena itu, misel
pentablock copolymer FA-grafted dengan penggabungan PDEAEMA sebagai inti misel
memiliki muatan obat yang responsif-pH.
Pengujian Sitotoksisitas In vitro dan Serapan Misel dalam Sel
Pengujian Sitotoksisitas in vitro dari misel kosong, misel tanpa doxorubicin (DOX) dan misel
yang bermuatan doxorubicin (DOX) yang dilakukan pada sel HepG2 menggunakan uji
sitotoksisitas MTT. Misel kosong (0–400 mg/L) digunakan sebagai kontrol negatif dan DOX
(0-20 mg / L) digunakan sebagai kontrol positif. Sel-sel HepG2 yang telah diinkubasi selama
48 jam pada berbagai konsentrasi menunjukkan hasil, sebagai berikut :

Gbr. 10 (A). Viabilitas sel HepG2 masih dipertahankan lebih dari 85% setelah diinkubasi 48
jam pada konsentrasi yang relatif tinggi (400 mg / L). biokompatibilitas misel kosong sangat
baik dan memiliki toksisitas yang rendah jika digunakan sebagai pembawa obat.
Gambar. 10 (B). Viabilitas sel HepG2 setelah diinkubasi 48 jam dengan misel bermuatan
DOX dan misel tanpa DOX. sitotoksisitas misel tanpa DOX sedikit lebih tinggi dari misel
yang bermuatan DOX.
Misel polimer menunjukkan sitotoksisitas yang minimal, tetapi misel yang bermuatan
DOX lebih efektif untuk menghambat proliferasi sel tumor. misel yang bersifat
biokompatibel efektif sebagai pembawa untuk mengendalikan sistem pelepasan obat. Misel
tanpa DOX merupakan molekul kecil yang dapat memasuki sel dan mencapai situs aktif
melalui difusi pasif. Sementara misel yang bermuatan DOX dapat memasuki sel melalui
endositosis dibutuhkan waktu yang lebih lama untuk mencapai inti sel.
Mikroskopi pemindaian laser confocal digunakan untuk mempelajari penyerapan
seluler DOX. media kultur diganti dengan media DMEM yang mengandung 50 mg / L DOX
atau misel tanpa DOX. Sel-sel HepG2 diinkubasi pada suhu 37° C selama 0,5 jam, 1 jam, 2
jam, dan 4 jam.
Setelah menginkubasi sel HepG2 dengan micel bermuatan DOX selama 0,5 jam fluoresensi
merah dari DOX didistribusikan di daerah sitoplasma. waktu inkubasi diperpanjang hingga 1
jam, fluoresensi DOX diamati pada nukleus sel dan sitoplasma. Fluoresensi DOX pada inti
sel secara bertahap meningkat dengan memperpanjang waktu inkubasi menjadi 2 jam. jumlah
DOX yang ditingkatkan terlokalisasi dalam inti sel hal ini menunjukkan bahwa misel dengan
cepat melepaskan obat-obatan di daerah mikro tumor internal setelah memasuki sel. ketika
waktu inkubasi diperpanjang menjadi 4 jam, fluoresensi merah sangat kuat hampir
sepenuhnya menutupi fluoresensi biru, menunjukkan bahwa sejumlah besar obat telah
terakumulasi dalam sel. Pelepasan DOX secara bertahap dalam nukleus secara efektif dapat
menghambat proliferasi sel kanker. misel DOX sangat berpotensi jika digunakan untuk
menargetkan pemberian obat antikanker.

dapus
Chen, Q., J. Zheng, X. Yuan, J. Wang, dan L. Zhang. 2018. Materials science & engineering
c folic acid grafted and tertiary amino based ph-responsive pentablock polymeric
micelles for targeting anticancer drug delivery. Materials Science & Engineering C.
82(May 2017):1–9.