Pendahuluan Penggunaan kromatografi gas (GC) sebagai teknik kuantitatif dalam analisis obat

telah menurun pentingnya sejak HPLC dan kecanggihan teknik ini meningkat. Namun, ia masih
memiliki peran dalam jenis analisis kuantitatif tertentu dan memiliki aplikasi luas dalam analisis
kualitatif. Karena HPLC saat ini mendominasi analisis kuantitatif dalam industri farmasi,
kekuatan GC dapat diabaikan. GC kapiler mampu melakukan pemisahan yang jauh lebih efisien
daripada HPLC meskipun dengan batasan bahwa senyawa yang dianalisis mast menjadi mudah
menguap atau harus dibuat mudah menguap oleh pembentukan turunan yang sesuai dan juga
harus stabil secara termal. GC banyak digunakan dalam ilmu lingkungan pembuatan bir, industri
makanan, parfum dan analisis perasa, industri petrokimia, analisis mikrobiologi dan biokimia
klinis Meskipun kolom terkemas GC masih digunakan dalam industri farmasi, bab ini akan
berkonsentrasi untuk sebagian besar pada tubular terbuka. GC kapiler. yang merupakan
manifestasi yang lebih modern dari Instrumentasi GC Gambar I1.1 menunjukkan diagram
skematik dari sistem GC. Prinsip-prinsip sistem adalah bahwa ü) Injeksi sampel dapat dia buat
secara manual atau menggunakan autosampler i (n) Sampel diuapkan di area port injeksi
dipanaskan dan mengembun pada (oi) colutnn mungkin baik dia kapiler atau kolom paickef,
yang akan menjadi tiv) Kolom ini diikutkan dalam oven yang dapat disetel pada suhu apa pun
melalui rubher septum yang dapat ditutup kembali, kolom yang dibahas secara lebih rinci
kemudian. Fase gerak yang digunakan untuk membawa sampel melalui columa adalah gas
nitroigen atau helium antara ambieot dan cir 40o C 1 Detektor onisasi api yang paling sering
digunakan. Jarum Suntik Volume yang disuntikkan dalam GC secara rutin dalam kisaran 0,5-2 l.
Jenis semprit yang paling umum digunakan ditunjukkan pada Gambar 11.2; volume syringe yang
biasa adalah 5 dan 10 l. Teknik yang direkomendasikan untuk injeksi ke dalam GC kapiler
adalah untuk menggerakkan spuit dengan pelarut 0,5l dan menarik pelarut ini ke dalam burrel
sedikit sebelum mengisi dengan sampel. Sampel juga ditarik ke dalam laras untuk meninggalkan
celah udara di bawahnya. Syringe ncedie kemudian dapat dimasukkan ke injektor dan dibiarkan
selama beberapa detik untuk pemanasan sebelum plunger tertekan. Jarum suntik kemudian
ditarik segera dari port injeksi. Sistem injeksi. Suntikan kolom yang dikerjakan. Injeksi pada
umumnya dilakukan melalui resus sajak yang dapat dilepas. The injector port n diadakan di 150-
250 tergantung pada solatilitas sampel dan injeksi langsung o.1 10pl sampel dibuat ke kepala
kolom Jumlah sampel ineetcd ontos kolom psked us t 1 g res komponen Injeksi ke dalam pak

kolom menyajikan kurang masalah dari pengenalan sampel ke sinus kapiler semua sampel
dimasukkan ke dalam kolom dikemas (Gambar 11.3). Dengan demikian, meskipun pakod kolom
tidak menghasilkan kromatografi resolusi tinggi, thix adalah kekuatan mereka. Splithplitless
injection. Jenis injektor ini digunakan dalam hubungannya dengan kapiler coluniın GC.
Comnmsonty coli kapiler memiliki diameter internal beteen 0,2 dan 0,5 mm dan panjang betueen
12 dan 50 m. Injeksi terjadi ke dalam gelas yang dipanaskan atau quanz liner daripada langsung
ke kolom th split male, sampel dibagi menjadi dua bagian uncqual yang lebih kecil yang masuk
ke kolom. Pisahkan rentang rasio hetwceen 10.1 dan 100.1, dengan porsi yang lebih besar
dikeluarkan dalam aliran yang lebih tinggi dari split venl. Teknik ini digunakan dengan sampel
terkonsentrasi Dalam mode splitless, semua sampel dimasukkan ke kolom dan katup
pembersihan injektor tetap tertutup selama 0,5-1 menit setelah injeksi. Kesulitan tetap dengan
injeksi spli / eplitdess ke cofumn kapiler adalah dalam memperoleh presisi injeksi posdiperlukan
harus dibayar ke titik-titik tertentu (0 o Karena injeksi adalah laki-laki pada suhu tinggi ke port
injeksi, kurangnya ketepatan yang dihasilkan dari deompuuisi beberapa komponen dalam kabut
sebelum mereka reash kolom harus dipertimbangkan Dengan demikian penting untuk
memastikan bahwa sampel memiliki kontak minimal dengan permukaan logam selama proses
injeksi karena ini dapat menyebabkan dekomposisi (i) Jika injeksi split digunakan, perawatan
harus diambil bahwa tidak ada diskriminasi yang menyebabkan semakin banyak komponen yang
terlarut dalam suatu hal yang salah dari proporsi yang hilang melalui split eet (i) Ini adalah
perpecahan tanpa batas adalah muale, volume harus dijaga di bawah ou 2l memetikan sampel
hackflash melalui Ekspektasi cepat dari pelarut di mana itu adalah dissolvol ini baik pasokan gas
lincs atau garis parge masing-masing I solicet sangat cocok dengan yapourisatin, misalnya saya
thanol c 0,66 ml / lo etil aktate co 0,23 mljd pada tekanan atmosfer ns) Bahkan standar internal
(p 259) digunakan untuk mengkompensasi kerugian, kemungkinannya adalah discriminalel
randumly agaitst baik melalui perbedaan dalam volatilitas atau dekomposisi yang dibandingkan
dengan sampel apakah dia sudah kesal. (v) Dalam mode splitless, sampel harus terperangkap
secara efisien di bagian kepala kolom. Agar hal ini terjadi, harus cukup tidak mudah menguap,
yaitu memiliki titik didih> ca50 C lebih tinggi dari suhu awal kolom. Jika sampel relatif mudah
menguap maka harus diinjeksikan ke dalam GC dalam pelarut volatilitas rendah yang akan
mengembun di bagian kepala kolom, menjebak sampel dalam proses. Transfer sampel mungkin
lambat dan penting untuk mempertimbangkan hal ini ketika mengatur waktu pembersihan katup,
misalnya. untuk aliran ml / min helium yang khas melalui kolom kapiler, sekitar 0,5 menit akan
diperlukan untuk mentransfer volume injeksi etil asetat 2 pl ke kolom (vi) (vii Ketepatan injeksi
sangat ditingkatkan dengan penggunaan autosampler untuk melaksanakan injeksi karena dapat
mencapai presisi yang jauh lebih baik dalam mengukur volume ca ll daripada operator manusia.
Mendinginkan injeksi kolom Injeksi langsung pada kolom ke kolom kapiler dapat dilakukan
dengan cara yang analog dengan injcction ke dalam kolom u packed. teknik membutuhkan jarum
suntik dengan jarum silika leburan garis sangat. Teknik ini memiliki keuntungan: (1) mengurangi
diskriminasi antara komponen dalam campuran; (2) tidak ada degradasi sampel dalam injektor
panas, dan (3) tidak ada backflash, maka sampel kuantitatif Transfer juga memiliki kelemahan
berikut: (1) sampel harus bersih, jika tidak, residu akan disimpan pada kolom: (2) injektor secara
mekanis lebih kompleks dan membutuhkan perawatan lebih dari septu sistem injeksi m: dan (3)
jarum suntik dapat merusak kepala kolom. Oven GC Oven GC menggabungkan kipas yang
memastikan distribusi panas merata di seluruh oven. Mereka dapat diprogram untuk
menghasilkan suhu yang konstan, kondisi isotermal, atau peningkatan bertahap dalam tempe-
rata. Tingkat pemrograman oven dapat berubah dari 1 'C / menit menjadi 40'C / menit. Program
suhu kompleks dapat dihasilkan dengan melibatkan sejumlah jalur suhu yang diselingi dengan
periode kondisi isethermal, misalnya. 60'C (0miny 3 Chnin hingga 100 C (SmiDV1O C / menit
sampai 200 c 5 menit) .Aplikasi dari program suhu adalah bahwa matenals dari volatilitas sangat
berbeda dapat dipisahkan dalam waktu yang wajar dan juga injeksi sampel dapat menjadi carricd
keluar pada suhu rendah di mana ia akan terperangkap di kepala

Jenis kolom Dikemas kolom Kolom biasanya terbuat dari kaca yang dihaluskan untuk
menghilangkan gugus silan silanol Si-Oll dari permukaannya yang dapat berkontribusi pada
puncak tailing dari puncak analit polar. Kolom ini memiliki diameter internal 2-5 mm. Kolom
yang dikemas dengan partikel-partikel pendukung padat yang dilapisi dengan phasa diam cair
Dukungan yang paling sering digunakan adalah tanah diatome (terutama kalsium silikat) .Bahan
ini biasanya asam dicuci untuk menghilangkan kotoran mineral dan kemudian dihaluskan seperti
yang ditunjukkan pada Gambar 11.4. untuk menghilangkan gugus-gugus Si-OH polar pada
permukaan suppon, yang dapat menyebabkan tailing dari puncak analit. The suppon con hen
ochanicaly dilepaskan dengan suatu fase fase stionay Iiqaid Fase maobil yang paling banyak
ditemukan dalam kolom terkompresi GC adalah tingkat nitegen winahow t 20e acked olumn GC
attords esolution derajat yang relatif derek dibandingkan apary Gcavpeally 4-6000 piring untuk 2
o dibandingkan pelat for25 m copillary colomn Tic tinggi soasranue imit paked colorns i 280
beond hs teoipersture liuid Haceary a apos pada tingkat whiuh ceeate besar Sinyal back ground
os banyak otins kualitas oerations sontrsl, mereka cukup adejaste

Kolom kapiler Kolom kapiler terbuat dari leburan silika, biasanya dilapisi di bagian luar dengan
poliamida untuk memberikan fleksibilitas kolom. Pelapisan di bagian luar dengan aluminium
juga telah digunakan untuk pekerjaan suhu tinggi (> 400 C). Diameter internal kolom berkisar
antara 0,15 dan 0,5 mm. Dinding kolom dilapisi dengan fase diam cair, yang mungkin memiliki
ketebalan antara 0. I dan 5 sore. Jenis pelapisan yang paling umum adalah yang didasarkan pada
poliester organo silikon, yang terikat secara kimia dengan kelompok-kelompok silanol pada
dinding kolom dan rantai-rantai polimer yang dilapisi dengan tubular terbuka (WCOT) dan
kolom-kolom tubular terbuka yang mendukung-lapis (SCOT). yang dilaporkan dalam literatur
sebelumnya, untuk sebagian besar aplikasi rutin. Kolom SCOT kadang-kadang ditemukan dalam
pekerjaan suhu yang sangat tinggi. Fase terikat-dinding stabil sampai setidaknya 325 C dan
beberapa jenis lapisan akan tahan suhu 370 ° C. Polimer berbasis non-silikon, misalnya
carbowax, tidak dapat diikat ke dinding kolom dengan cara dan kolom yang sama dengan lapisan
ini kurang stabil suhu. Misalnya, batas suhu untuk kolom kapiler carbowax adalah ca 240 C. Gas
pembawa yang paling sering digunakan dalam GC kapiler adalah helium dan laju aliran yang
digunakan antara 0,5 dan 2 m / menit. Karena laju aliran dari ujung kolom kapiler rendah
dibandingkan dengan ruang internal beberapa detektor, make up 'gas sering harus ditambahkan
ke kolom pos aliran gas untuk menyapu sampel melalui volume internal detektor. pada tingkat
yang masuk akal. Biasanya sekitar 100 ng per komponen dimuat ke kolom kapiler. Selektivitas
fase diam cair Indeks Kovats dan polaritas kolom Kovats indeks l-nilai) didasarkan pada waktu
retensi analit dibandingkan dengan waktu retensi dari scri n-alkana. Untuk fase GC tertentu. -
value sangat direproduksi dari satu kolom atau dari satu GC ke yang lain. Namun, mereka sedikit
terpengaruh oleh kondisi pemrograman GC. Alkana memiliki afinitas paling banyak untuk fase
non-polar dan cenderung berikatan lebih cepat dari fase polar. Sebaliknya, analit polar akan
mengelupas lebih lambat dari fase polar dan dengan demikian relatif terhadap n-alkana, waktu
retensinya dan dengan demikian nilai / nya akan meningkat sebagai polaritas

Fase GC meningkat. Ukuran polaritas fase diam diberikan oleh konstanta nempelnya (Tabel
11.1), yang didasarkan pada waktu retensi dari beazene, n-butanol, pentan-2-one. nitropropanc
dan piridin pada fase tertentu Semakin tinggi konstanta McReynold semakin polar fase. Banyak
fase diam yang dikeringkan oleh nomor AR OV. Semakin tinggi angka setelah OV semakin
polar fase. Tabel 11.1 Konstanta McRpmoe Jenis kimia consuunt McReynold Silikon oV-1
Silikon 5E - 54 silikon OV 17 Metililsilin 94% metil, 5% fenil, 1% viny, 50% methy, 50%
pheny! 337 886 Carton.OV - 225 Polyetetene 2Solyanopropyl. 25% phenyt Carbowarx 201s
2318 I-nilai menyediakan metode yang berguna untuk mengkarakterisasi senyawa dan tabel yang
tidak diketahui dari nilai-I yang telah dikompilasi untuk sejumlah besar senyawa. Di bawah
kondisi pemrograman suhu. dimana suhu GC naik pada tingkat yang seragam. misalnya. 10 C /
menit, sebidang jumlah karbon n-alkana (di mana saya karbon -100) terhadap waktu retensi
mereka adalah garis lurus. Di bawah kondisi isotermal, di mana kolom dipertahankan pada suhu
yang sama di seluruh analisis, sebidang nomor karton terhadap logan dari waktu retensi m-alkana
adalah garis lurus, kurva caltbration seperti itu dapat ia gunakan untuk mengubah waktu retensi
suatu senyawa menjadi 1-nilai Contoh pemisahan campuran dengan GC Analisis minyak
peppermint pada dua fase GC Gambar 11.5 menunjukkan struktur-struktur dari komponen-
komponen utama dalam minyak peppermint. Penggunaan sistem indeks retensi diilustrasikan
pada Gambar 11.6 dan 11,7 untuk minyak peppermint yang berjalan di compartsoa dengan a-
alkane standads pada kolom Ov-Stype polar lemah dan kolom polor carbowax Gambar 11.6
menunjukkan perkiraan / valucs untuk beberapa komponen-komponen dalam peppermint oit
pada kolumin RPXx-S: columin ini bersisik terutama atas dasar berat dan bentuk molekul.
Misalnya B pinene memiliki berat molekul yang sama dengan limonene tetapi memiliki shapc
lebih sompct dan dengan demikian nilai-I lebih rendah. Menthyi acctute memiliki I-valuc yang
lebih tinggi daripada mentol karena tingginya berat molekulnya. Kolom carbowax sangat selektif
untuk kompon kutub. Seperti dapat dilihat pada Gambar 11.7 kelompok senyawa polar hingga
termasuk mentol dan menthone

Analisis komposisi asam lemak dari minyak tetap dengan GC Sebuah fase sangat polar seperti
carbowax umumnya hanya digunakan untuk sampel yang membutuhkan tingkat tinggi
diskriminasi polar untuk pemisahan atau retensi yang memadai. Contoh dari ini adalah dalam
analisis asam gemuk dengan tingkat ketidakjenuhan differng. Pada kolom non-polar seperti
BPX-5, serangkaian asam C-18 seperti asam stearat, oleat, linoleat dan linolenat, yang masing-
masing mengandung 0,2 dan 3 ikatan ganda, tumpang tindih secara berurutan. Namun, pada
kolom polar seperti carbowax, mereka di eparasi. Monografi BP untuk banyak minyak tetap
mengandung analisis GC untuk mengkonfirmasi kandungan asam lemak yang menyusun
trigliserida (triester asam lemak gliserol) yang ada dalam minyak. Monografi untuk minyak
almond menyatakan komposisi asam lemak yang membentuk tniglyceride harus palmitic icid
(16.0) 40-90% palmitoleic acid (16: 1) <0 6% asam margaric (17.0) 0,24 stearat acid (18: 030) 9-
20% asam oleat (18: 1) 62.0-860% asam linoleat (18: 2070-30.0%) asam linolenat ('83) <0,2%
asam arakid (20: 0) <0. 1% asam behenic (22 : 0) <0,1%.. * * * * Nomor finit dalam kurung,
misalnya 16, mengacu pada jumlah atom karbon dalam asam lemak dan angka kedua.c.g0
mengacu pada jumlah ikatan rangkap dalam asam Persentase komponen cach ditentukan dalam
kaitannya dengan jumlah area puncak kromatografi dari semua komponen yang tercantum di
atas. Untuk menentukan susunan asam lemak dari trigliserida, mereka harus terlebih dahulu
dihidrolisis dan asam lemak yang dibebaskan diubah. ke metil ester mereka, yang memiliki
bentuk puncak chromatografi yang baik yang diimbangi dengan asam bebas, Sebuah metode
yang nyaman untuk mencapai hidrolisis dan metilasi dalam satu langkah ditunjukkan pada
Gambar 11.8 Sebuah jejak GC minyak almond metanol ditunjukkan pada Gambar 11.9. Hal ini
dapat scen thai metil ester stearat, asam Dlcic dan linoleat tidak lengkap diselesaikan pada kolom
BPX-5. Ester dari asam minor G: 20 dan C-22 juga tidak lengkap

dipisahkan. Ketika kolom carbowax digunakan. pemisahan sempurna oleat (18: 1), linoleat (18:
2), asam stearike (180) dan sedikit asam linolenic (183) dalam sampel dicapai Kromatogram
yang diperoleh pada kolom carbowax memberikan persentase area puncak dalam contoh khusus
minyak almond ini sebagai berikut: 160 (70%), 16: 1 (04%), 17: 0 (0,12%), 18: 0 (15%), 18: 1
(628%). IK: 2 (28,4%), 18: 3 (0,16%), 200 (0,09%), 2201009%). Jadi minyak almond berada
dalam spesifikasi BP yang diberikan di atas (Gambar 11.9B). Selektivitas kiral Jenis lanjutan
dari selektivitas kolom adalah diskriminasi kiral. Karena enantiomer memiliki sifat fisik yang
identik mereka tidak dapat dipisahkan pada kolom GC konvensional Namun, jika analit kiral
diperbolehkan untuk berinteraksi dengan lingkungan kiral mereka akan membentuk kompleks
diastereomeric sementara yang mengakibatkan mereka ditahan oleh kolom ke tingkat yang
berbeda. Seiring meningkatnya jumlah obat-obatan murni enantiomer yang disintesis untuk
mengurangi efek samping, pemisahan jenis ini akan menjadi semakin penting. Chirasil Val
adalah salah satu dari phaves CC kiral pertama; ia memiliki satu pusat kiral sebagaimana dapat
dilihat dalam strukturnya seperti yang ditunjukkan pada Gambar 11.10

Baru-baru ini siklodekstrin alkilasi telah dikembangkan sebagai fase kiral. Fase-fase ini
didasarkan pada siklodekstrin, yang merupakan struktur cyelie yang terbentuk dari 7 atau 8 unit
glukosa. Alkilasi gugus hidroksil dalam struktur siklodekstrin menurunkan titik lelehnya dan
membuatnya cocok sebagai fasa GC. Siklodekstrin mengandung banyak pusat kiral dan
enantiomer obat yang terpisah sesuai dengan seberapa baik mereka masuk ke rongga kiral unit
siklodekstrin (lihat Bab 12 hal. 273). Sebuah alternatif untuk membeli kolom kiral mahal untuk
memisahkan enantiomer adalah dengan menggunakan agen derivatifasi kiral. Reagen ini dapat
didasarkan pada produk alami yang biasanya terjadi dalam bentuk murni enantiomer. Agen
derivatisasi kiral sering dapat menghasilkan pemisahan yang lebih baik daripada kolom kiral,
tetapi jika kondisi reaksi terlalu kuat, ada risiko sejumlah kecil rasemis terjadi dalam analit, yaitu
konversi kimia dari enansiomer menjadi kebalikannya. Reaksi campuran enansiomerik dengan
agen turunan kiral menghasilkan sepasang diastereoisomer yang dapat dipisahkan oleh GC pada
kolom non-kiral, misalnya ester mentol dengan (+) asam krisan. dilihat pada Gambar 11.13
bahwa, meskipun bagian mentol dari ester adalah bayangan cermin, penambahan pereaksi asil
kiral menghasilkan ester yang bukan merupakan bayangan cermin tetapi merupakan
diastereoisomer dan dengan demikian memiliki sifat fisik yang berbeda. Penggunaan derivatisasi
dalam Derivatisasi GC telah disebutkan di atas. tanpa sepenuhnya menunjukkan mengapa perlu
untuk melakukan analisis GC. Derivatisasi umumnya diperlukan sebelum GC jika suatu senyawa
sangat polar sehingga bentuk puncak kromatografi yang baik dapat dicapai Sejumlah besar
strategi derivatisasi tersedia. Dalam istilah berikut ini, derivatisasi digunakan bentuk puncak
pseudocphedrine (Gambar 11.14),

Suatu sirup dekongestan dibasakan dengan ammonis dan dikeluarkan ke dalam etil asetat,
sehingga memastikan bahwa komponen yang diekstraksi berada dalam bentuk basa bebas
mereka daripada garam-garamnya, yang penting untuk memperoleh bentuk puncak kromatografi
yang baik. Garam basa secara termal akan terdisosiasi dalam OC suntox pont tetapi proses ini
dapat mengurangi hilangnya bentuk puncak dan dekomposisi. Jika ekstrak dijalankan secara
langsung, jejak dasi yang ditunjukkan pada Gambar I1.15A diperoleh. Basis gratis triprotidine
dan dekstrometorfan memberikan bentuk puncak yang baik tetapi pseudoefedrin yang
merupakan basa kuat dan yang memiliki tambahan gugus hidroksil dalam strukturnya
memberikan bentuk puncak yang buruk. Ini dapat diperbaiki dengan menyamarkan kelompok
alkohol polar dan amina pseudoefedrin melalui reaksi dengan TFA anhidrida tuifluoroasetat.
Perawatan dengan TFA tidak menghasilkan turunan dari basa tentatif dalam ekstrak. Reagen ini
sangat berguna karena sangat reaktif dan mendidih pada 40 C sehingga pereaksi berlebih dapat
dievaporasi sangat mudah sebelum analisis GC dan dengan demikian tidak seperti banyak
reagen, tidak meninggalkan residu. Pereaksi Silylating adalah kelas populer reagen
derivatisation. Reagen baru memperkenalkan residu ke dalam sampel, meskipun ini bukan
masalah besar jika analit relatif tidak mudah menguap. Contoh reaksi sililasi ditunjukkan pada
halaman 226 Ringkasan parameter yang mengatur kinerja GC kapiler Tipe / aliran gas pembawa
Menurut Van Deemter, persamaan hidrogen dan helium memberikan efisiensi yang lebih tinggi
pada laju alir tinggi dibandingkan dengan nitrogen. Untuk analisis praktis, kali hidrogen atau
helium digunakan dalam GC kapiler dan laju fnow khusus untuk hidrogen dan helium berada di
kisaran 30-50 cm / s; nitrogen memiliki laju alir optimum pada 10-20 cm / s. Tabel 11.2
menunjukkan pengaturan tekanan khas untuk mencapai tingkat rendah optimal untuk tiga kolom.
Laju aliran gas menurun dengan meningkatnya suhu dan ini mungkin memiliki pengaruh pada
efisiensi columa. Instrumen modern memiliki aliran pemrograman sehingga aliran dapat diatur
agar tetap konstan ketika suhu meninggi.

Suhu kolom Karena suhu kolom meningkatkan tingkat resolusi antara dua komponen menurun
karena tingkat interaksi dengan fase diam berkurang ketika tekanan uap analit meningkat.
Temperatur yang lebih rendah menghasilkan resolusi yang lebih baik. Panjang kolom Daya
pemisah kolom bervariasi sebagai akar kuadrat dari panjangnya. Jadi, jika peningkatan dua kali
lipat dalam resolusi diperlukan dan peningkatan empat kali lipat dalam panjang kolom akan
diperlukan. ini akan menghasilkan peningkatan empat kali lipat dalam waktu analisis.
Peningkatan resolusi yang diberikan oleh panjang sering dapat diganti dengan penurunan suhu
memastikan bahwa lebih banyak interaksi dengan fase stasioner terjadi, terutama jika fase
stasioner memiliki karakteristik yang memungkinkan untuk memilih satu analit lebih dari yang
lain Ketebalan lapisan film loading Semakin besar volume fase stasioner semakin banyak zat
terlarut akan partisi ke dalamnya. Jika ketebalan film atau pemuatan fase ganda stasioner maka
secara teori retensi analit harus berlipat ganda. Film yang lebih tebal digunakan untuk bahan
yang sangat mudah menguap untuk meningkatkan waktu rctention mereka dan untuk
meningkatkan resolusi antara analit tanpa menambah panjang kolom. Diameter internal Semakin
kecil diameter internal dari suatu koluma kapiler lebih efisien pada kolom adalah untuk suatu
fase diam fase diam pada dinding kapiler. Hal ini karena karakteristik perpindahan massa kolom
ditingkatkan dengan analit yang mampu berdifusi dan aut dari fase mobite lebih sering karena
lebih pendek untuk transvenc diffsin 10p 201

Detektor GC Ada banyak detektor GC yang tersedia meskipun detektor ionisasi nyala tetap yang
paling banyak digunakan dan moxt secara luas berlaku untuk kontrol kualitas produk farmasi.
Namun, detektor baru seperti detektor emisi plasma untuk analisis jejak kotoran atau delusi GC-
FTIR untuk karakterisasi struktur komponen dalam kabut menjadi semakin penting. Kelenturan
dalam detektor paling sering diperlukan untuk methoxds bioanalitik sensitif dengan jumlah jejak
senyawa yang sedang dianalisis dengan adanya interferant yang juga terdapat dalam sumple
matrik. Propenties dari beberapa detektor umumnya dijumlahkan. Tabel 13 Tabel 11.3
Commonty ined GC Aplikasi Oetector deteton dan ini merupakan peningkatan arus antara rt dan
kolektor Mendeteksi senyawa yang bersentuhan dengan mobil Atom karbon inenutrdligo yang
diserap ke oksida nitrogen atau klorin dalam kombinasi dengan GC tapilaris itu mendeteksi Hws
100 pa t0rg berbagai macam inea cnea . Senyawa dengan afinitas tinggi untuk elektron
memasuki detektor dan menangkap elektron yang dihasilkan oleh sumber radioaktif sehingga
mengurangi arus ke kolektor. Senyawa yang sangat terhalogenasi dapat dideteksi pada tingkat s0
fg-1 pg, Memiliki volume internal yang besar sehingga beberapa resolusi kromatografi dapat
hilang. Linearitas respons tidak sehebat FID, e.9. 10, Terutama digunakan untuk menganalisis
obat dalam cairan tubuh. Memiliki aplikasi luas dalam pemantauan lingkungan, misalnya
chiorofluorocarbons di atmosfer Nitrogen dan senyawa yang mengandung fosfor bereaksi
dengan garam logam alkali dalam detektor untuk menghasilkan spesies seperti CN berbagai
anion fosfor atau elektron yang semuanya menghasilkan peningkatan arus yang menghasilkan
sinyal, Mendeteksi senyawa fosfor pada tingkat po, senyawa nitrogen tikus tingkat rg rendah,
Sangat selektif untuk senyawa yang mengandung nitrogen dan fosfor. Digunakan terutama dalam
analysh obat-obatan dan metabolitnya dalam jaringan dan cairan tubuh. Menanggapi efek rooling
dari analit terhadap bulu. Relatif imensitif terhadap kompon organik dalam perbandingan dengan
iD. Ini adalah detektor utopia yang dapat digunakan untuk menentukan air vapout itu aso non
estncUve sehingga analit dapat dikumpulkan deteksi atter jika diperlukan, untuk menentukan air
di beberapa BP asays misalnya dalam peptida ataunotrophin, gonadorcllsand salcatonin
Aplikasi C dan 'H yang ada dalam molekul masing-masing berkorelasi dengan CO, dan'
sensitivitas Peka tergantung pada tingkat radioaktivitas analit. Berguna untuk penelitian
pelabelan metabolik, membuat metabolit obat mudah dideteksi. Detektor cenderung bekerja lebih
baik dengan kolom dikemas karena memiliki ruang internal yang besar Sebuah plasma panas
argon diproduksi dengan pemanasan sampai> 6000 C yang menyebabkan semua elemen dalam
senyawa menghasilkan spektrum emisi. Kisi difraksi dan dideteksi oleh garis emisi individu
dioda dilewatkan melalui Mcrosavearray Mendeteksi unsur-unsur individu, 9 klorin dalam
pestisida dan logam organoklorin di organologam Sensitif terhadap tingkat pg untuk beberapa
elemen. Paling banyak digunakan dalam pemantauan Pasmaenvironmental tetapi juga memiliki
potensi yang berguna untuk pengotoran proflling obat-obatan dan studi metabolam Pada
dasarnya hanya sebuah instrumen FT-IR digabungkan ke GC sehingga memungkinkan spektrum
IR compouns eluting dari kolom GC yang akan diperoleh ul untuk elusidasi struktur daripada
studi kuantitatif Detektor sensitif terhadap tingkat 10 ng. Digunakan sebagai alat untuk
identifikasi kualitatif Ada beberapa contoh aplikasi kuantitatif e.9 penentuan propandiol ins
acyctovit krim

Aplikasi analisis kuantitatif HPLC memiliki lebih atau kurang menggantikan GC sebagai metode
untuk mengukur obat dalam sediaan farmasi. Banyak referensi literatur untuk tes GO kuantitatif
yang begitu lama dan ketepatan yang dilaporkan dalam popers ini sulit untuk dievaluasi
berdasarkan pengukuran ketinggian puncak atau integrasi manual. Lebih sulit untuk mencapai
presisi yang baik dalam analisis GC daripada dalam analisis HPL.C dan sumber utama
ketidaktepatan adalah cara pengenalan sampel, yang paling baik dikendalikan oleh autosampler,
dan volume kecil sampel yang disuntikkan. Namun, dimungkinkan untuk mencapai tingkat
presisi yang serupa dengan yang dicapai dengan menggunakan metode HPLC. deteksi dalam
metode HPLC yang umum digunakan, GC kuantitatif mungkin menjadi metode pilihan, untuk
analisis banyak scida amino. asam lemak, dan gula. Ada sejumlah senyawa tertentu yang tidak
memiliki chromophores, yang diperlukan untuk kromatografi gas dari tes di BP US
Pharmacopoeia dan European Phamacopoeia yang mengandung GC, tetapi sclestioe coorounds
yang dianalisis dengan cara ini tampaknya agak acak dan banyak dari ihe tes desrihed juga dapat
dilakukan oleh HPLC Format BP untuk uji assayst HPL.C dan GC), paling sering dilakukan,
untuk menjalankan tiga sampel. Ini adalah: u salibratio standar murni dan standaud internal
Solusi a sainpke yang tidak mengandung standar internal untuk memeriksa anterferencc dari
matriks formulasi estandard yang mengandung lebih banyak atau kurang eqoot hasil dari Solusi
2 dan perkiraan sampel yang contringing jumlah yang sama dari standar intenal 259

Analisis methyltestosterone dalam tablet Sebuah larutan kalibrasi yang mengandung ca 0,04% b
/ v metiltestosteron dan ca 0,04% b / v testosteron dalam etanol disiapkan (Solusi 1). Berat bubuk
tablet yang mengandung ca 20 mg methyltestosterone diekstraksi dengan 50 ml etanol untuk
menyiapkan Solusi 2. Larutan 3 disiapkan dengan melarutkan bubuk tablet yang mengandung ca
20 mg methyltestosterone dalam tepat 50 ml etanol yang mengandung eractly konsentrasi
testosteron yang sama. sebagai Solusi I. Dalam contoh ini 0,5 ul jumlah larutan disuntikkan ke
GC dalam mode splitless. Solusi I memberikan faktor respon untuk solusi kalibrasi sebagai
berikut: rea puncak methyltestosterone di daerah solusi kalibrasi puncak testosteron dalam
larutan kalibrasi Solusi 3 memberikan faktor respon untuk sampel sebagai berikut: area reagen
metak ltestosterone di area larutan sampel testosteron puncak dalam sumple solution Jumlah
methyltestosterone dalam bubuk tablet dapat dihitung sebagai berikut: jumlah faktor mcthy
ltestoxtcronctesponse untuk sampel methyliestosterone dalam larutan kalibrasi X faktor respon
untuk larutan kalibrasi vol. larutan sampel T00 Data dari analisis tablet methyltestosterone Berat
5 Lablets 0.7496 p. kuret yang diserap dari methylensteine per tablet 25 mg

Analisis atropin dalam tetes mata Kelompok lain yang digunakan untuk menyamarkan kelompok
polar dalam molekul untuk meningkatkan bentuk puncak GC adalah kelompok trimetililil.
Atropin Eye Drops BP digunakan untuk melebarkan pupil sebelum operasi katarak. Metode BP
1993 untuk analisis Atropinc Eye Drops BP menggunakan derivatisasi dengan kelompok
trimethylsilyl untuk menutupi kelompok alchohol seperti yang ditunjukkan pada Gambar 11.17
Kuantifikasi etanol dalam formulasi Gas kromatografi memberikan metode yang berguna untuk
mengukur bahan volati yang sangat. Dalam hal ini columas ditangkapi, yang sangat mengandung
senyawa volatil. Etanol digunakan dalam sediaan atau tincture dan dalam elusi desinfektan.
Biasanya etanol dapat menjadi guantitik terhadap alcobol terkait. Pada tahun 1993 BPassay
larutan chloroxylenol cthanol dikuantisasi terhadap standar inlernal propan-1-ol. Coluimn yang
digunakan dikemas dengan Q. Porapak adalah cxample dari fase diam nolik berpori yang
mempertahankan molekul molelar rendah senyawa kuat Jenis-jenis ini juga. efektif dalam gas-
gas pengekangan chas CO, ammonia dan asetilsk Sebagai sebuah semburan untuk Pocapak
columis, sebuah film tebal (misalnya 5pm film) CC colum kapiler mungkin digunakan untuk
jenis analisis ini.

Penentuan residu manufaktur dan degradasi oleh GC Penentuan asam pivalat dalam tetes mata
dipipfrin GC menyediakan teknik yang berguna untuk memperkirakan produk degradasi yang
mudah menguap. Untuk cxample pelepasan asam pivalie dari hidrolisis dipivefrin dalam sediaan
sitedrop (Gambar 11.19) yang digunakan untuk mengobati glaukoma dapat diperkirakan oleh GC
tsovaleric acid, yang merupakan isomer asam pivalie, memberikan standar internal yang sesuai.
Kerusakan produk ester lebih mungkin terjadi dalam formulasi berair seperti tetes mata atau
suntikan Dimethylaniline dalam injeksi bupivacaine 11,20 Dimrithy laniline adalah pengotor
pabrikasi dalam bupivacainc dan karena itu foumulasi dalam njsctions prsluct peredupan yang
mudah rusak meskipun hidrols amida jauh lebih baik. hy rolysis dari ester. BPuses metode
spectropfotometnic untuk pengujian untuk pengotor ini tetapi GC menyediakan metode yang
lebih sensitif dan spesifik untuk penentuan ini. Analisis perangkap pembersihan Bentuk lain dari
snalisis ruang kepala menggunakan perangkat pembersihan trappiag untuk menangkap impuria
yang mudah menguap. Dalam teknologi ini gas, misalnya helium, digelembungkan melalui
sampel yang dilarutkan dalam pelarut yang sesuai (biasanya air) dan pengotor volatil dengan
demikian dilucuti 'dari larutan dan dilewatkan dalam aliran gas melalui adsorben polimerik di
mana mereka menjadi terperangkap. dan terkonsentrasi. Aliran gas adalah ayam yang dipindah
sehingga mengalir dalam revene dircction melalui perangkap polimerik, yang dipanaskan untuk
menguraikan volatil yang terperangkap dan aliran gas kemudian dialihkan ke GC. Jenis prosedur
ini digunakan dalam analisis lingkungan untuk mengkonsentrasikan volatil dalam air yang ada
pada tingkat rendah. Tes sendiri 11,5

Aplikasi GC dalam bioanalisis Dalam rangka menentukan regimen dosis optimal untuk obat dan
untuk menentukan mode metabolisme, metode untuk analisis obat dan metabolitnya dalam
darah. urin dan jaringan harus dikembangkan. Analisis obat-obatan dalam cairan dan jaringan
biologis oleh GC cukup umum meskipun GC-MS (lihat Bab 9) telah menggantikan banyak
metode GC yang bergantung pada jenis detektor yang kurang efektif. Sebuah aplikasi khas GC
untuk penentuan obat dalam plasma. adalah dalam penentuan obat anti-epileptie asam valproik
'setelah ekstraksi fase padat (lihat Bab 15) oleh GC dengan deteksi ionisasi nyala. Dalam
prosedur ini, asam kaprilat yang isomer dengan asam valproik, digunakan sebagai standar
intenal. Batas detcction untuk obat adalah 1 p / ml plasma. Jejak yang ditunjukkan pada Gambar
11.23 menunjukkan interferensi yang lebih luas dari puncak backgrcund yang diekstrak dari
matriks biologis yang terjadi dalam bioanalisis dibandingkan dengan kontrol kualitas bahan
curah Contoh penggunaan GC dengan deteksi selektif nitrogen dalam kuantifikasi bupivacaine
dalam plasmaBupivacaine mengandung dua atom nitrogen dalam strukturnya yang membuatnya
menjadi kandidat yang baik untuk jenis analisis ini. Batas-batas deteksi yang dapat dicapai
dengan detektor selektif nitrogen untuk senyawa ini jauh lebih baik daripada metode yang
terdapat pada deteksi ionisasi flamc, yang jauh kurang selektif.