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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE FISIOLOGÍA

PRÁCTICA 4

“POTENCIAL DE DIFUSIÓN Y POTENCIAL DE LESIÓN”

EQUIPO 3.

GRUPO: 4FV1

INTEGRANTES:

Meza Castrejón Gibran de Jesus

Castro Garcia Eduardo

Martínez Guzmán Mariel Izbeth

Buendía Buendía Adriana


INTRODUCCIÓN

La membrana plasmática contiene canales proteicos que permiten a los principales iones
celulares (Na​+​, K​+​, Ca​2+​ y Cl​-​) cruzar la membrana a favor de su gradiente de concentración a
distintas velocidades (Figura 1). Los gradientes de concentración de iones y el movimiento de
estos a través de la membrana crean una diferencia de potencial eléctrico entre el interior y el
exterior de la membrana celular. A esta diferencia de potencial se la denomina ​Potencial de
Membrana.​ En la mayor parte de las células el valor de dicho potencial suele ser de unos -60
o -70 mV (el signo negativo indica que el interior de la célula presenta carga negativa respecto
al exterior) y se debe únicamente a un ligero exceso de cationes, de tan solo ppm, en el
exterior celular​1​.

Fig 1. ​Transportadores de la membrana celular y variación de energía al usarlos.

El potencial de membrana depende de:

► La permeabilidad de la membrana para cada ion.

Donde la permeabilidad es la capacidad que tiene un material de permitirle a un flujo que lo


atraviese sin alterar su estructura interna. Se afirma que un material es permeable si deja
pasar a través de él una cantidad apreciable de fluido en un tiempo dado, e impermeable si la
cantidad de fluido es despreciable. Hemos de recordar que el ión Na​+ tiene una muy baja
permeabilidad, dado que su potencial de equilibrio es de +54 mV, así la permeabilidad
depende del ión a tratar.​2

► Las concentraciones de los respectivos iones en LEC Y LIC.

La concentración intracelular de sodio es alrededor de 5 mM mientras que la extracelular es


mucho mayor (145 mM). Sin embargo, las concentraciones intra y extracelulares de potasio
son 140 mM y 5 mM respectivamente. Esto nos indica que hay un fuerte gradiente
electroquímico que impulsa a las dos sustancias a moverse: el sodio hacia adentro y el potasio
hacia afuera de la célula​3​.

► La bomba sodio potasio.

La bomba sodio-potasio es un transportador ABC que se encuentra en la membrana celular. Es


una ATPasa cuya función es el transporte de sodio y potasio a través de la membrana. La
bomba expulsa tres iones sodio (Na+) hacia la matriz extracelular a la vez que ingresa dos
iones potasio (K+) hacia el citoplasma mediante transporte activo que ocupa como fuente de
energía el ATP. Este bombeo permanente permite mantener el gradiente electroquímico de
solutos con una concentración elevada de potasio dentro de la célula y bajo afuera, mientras
que la concentración de sodio es baja dentro de la célula y elevada afuera​3​.

Potencial de difusión

Se denomina como la diferencia de potencial generada a través de una membrana cuando un


soluto con carga eléctrica se difunde y se opone al paso de nuevos iones hacia el lado de
menor concentración. Sólo puede generarse si la membrana es permeable a ese ion​4​.

Cuando el flujo del ion, dado por la diferencia de concentraciones llega a ser compensado por
el flujo de repulsión, dado por la diferencia de potencial eléctrico, se dice entonces que el ion
está en equilibrio electroquímico a través de la membrana. Este potencial de equilibrio se
calcula con la ​ecuación de Nerst​4​:

Donde
E​(ion)​= potencial de equilibrio (volts)

R= constante de los gases

T= temperatura absoluta

F= constante de Faraday

z= valencia del ion

[ION]i = concentración del ion en el interior de la célula

[ION]o = concentración del ion en el exterior de la célula


La ecuación de Nerst se emplea para predecir la dirección del flujo iónico en los siguientes
casos​5​:

1.- Cuando la diferencia de potencial medida a través de la membrana es igual a la calculada


mediante la ecuación de Nerst determinando, el ion se encuentra en equilibrio electroquímico
y no habrá flujo neto del mismo a través de la membrana.

2.- Cuando el potencial eléctrico medido es del mismo signo que el calculado por la ecuación
de Nerst para un ion determinado, pero de mayor valor, la fuerza eléctrica es superior causada
por el gradiente de concentración, por lo que habrá movimiento neto de dicho ion en la
dirección determinada por la fuerza eléctrica.

3.- Cuando la diferencia de potencial eléctrico medida es del mismo signo, pero de menor
cantidad, que la calculada por la ecuación de Nerst , la fuerza debida al gradiente de
concentración es superior a la eléctrica, y el movimiento neto del ion tiende a producirse en la
dirección determinada por la diferencia de concentración.

4.- Cuando la diferencia de potencial eléctrico medida es de signo opuesto al predicho por la
ecuación de Nerst, tanto la fuerza eléctrica como el gradiente de concentración se encuentran
orientados en el mismo sentido y consiguiente el ion no se encuentra en equilibrio, por lo que
tendría a fluir en dirección determinada por ambas fuerzas.

Julius Bernstein mediante análisis químico determinó que el interior es rico en K​+ ​y contiene
poco Na​+ y Cl​-​. Además comprobó que en el interior de la célula hay aniones a los que la
membrana en reposo no es permeable​6​.

Bernstein cortó fibras musculares de un músculo de rana e insertó un electrodo en el área


cortada, haciendo contacto eficaz con el líquido interno de las fibras musculares, pudiendo
además modificar el líquido externo del músculo. Al registro que obtuvo lo llamó potencial de
lesión. Dicho potencial está entre las partes lesionada y no lesionada de un nervio, debido a la
exposición de la superficie interna con carga negativa de la membrana polarizada en el lugar
de la lesión. En los tejidos excitables, la lesión produce despolarización en la zona lesionada
(potencial de lesión), lo que origina un flujo de corriente eléctrica entre ambas zonas
(corriente de lesión). Asimismo, el potencial de lesión se aproxima al potencial
transmembranal debido a que la superficie lesionada está casi en el potencial del interior de la
célula​6​.

La ecuación de ​Goldman-Hodgkin-Katz predice el potencial de membrana para la contribución


de todos los iones que pueden atravesar la membrana: Esta ecuación incluye los valores de
permeabilidad de la membrana porque influye en su contribución al potencial de membrana.
Si la membrana es impermeable a un ion, éste no afectará el potencial de membrana​7​.

La ecuación de Goldman-Hodgkin-Katz:

Donde:

Em=Potencial de membrana en reposo.


R= Constante de los gases
T=Temperatura absoluta
F=Constante de Faraday
P= Permeabilidad relativa de la membrana al ion indicado con el subíndice.
[ion in], [ion out] = Concentraciones del ion dentro y fuera de la célula.

La ecuación de Goldman predice los potenciales de membrana sobre la base de


concentraciones iónicas y permeabilidades de membrana dadas y explica porque la ligera
permeabilidad de la célula al Na​+ hace que el potencial de membrana en reposo sea más
positivo que el E° determinado con la ecuación de Nerst. La ecuación de Goldman también se
puede utilizar para predecir lo que sucede con el potencial de membrana cuando cambian las
concentraciones iónicas o las permeabilidades de las membranas​7​.

OBJETIVOS
- Demostrar que la difusión de un electrolito a través de una membrana artificial con
permeabilidad selectiva genera una diferencia de potencial (Potencial de difusión)
- Determinar el potencial de lesión de un músculo esquelético de rana.
- Establecer si existe una relación entre la diferencia de potencial obtenida con las
diferentes concentraciones de potasio y el predicho por la ecuación de Nernst.
- Aplicar las ecuaciones de Nernst y Goldman para establecer una relación entre la
diferencia de potencial obtenida y la teórica.

FUNDAMENTO
Para obtener el potencial de difusión se utiliza la cáscara de huevo que posee dos membranas:
externa e interna. La membrana interna tiene una composición que es de fibras proteicas más
finas y de superficie homogénea y lisa teniendo cierta permeabilidad.
Se utilizó la membrana testácea interna de huevo ya que esta es altamente permeable al ion
potasio; en esta se llevó a cabo un potencial de difusión generado a través de la membrana
cuando un ion se difunde debido al gradiente de concentración.

Se ha usado el músculo de rana debido a que se hacen estudios en células musculares o


nerviosas, y estas células muestran una notable especialización para este tipo de actividades.
También, la rana suele utilizarse por la facilidad de disponer de estos animales, así como por
presentar muchos aspectos de su anatomía interna claramente visibles.

Se utilizo KCl y K₂SO₄ ya que tanto el ion Cl​- como el SO₂​-2 son impermeables a las membranas
del huevo y del músculo gastrocnemio respectivamente.

METODOLOGÍA

POTENCIAL DE DIFUSIÓN USANDO LA MEMBRANA TESTÁCEA INTERNA DE HUEVO

POTENCIAL DE LESIÓN (MÚSCULO GASTROCNEMIO DE RANA)


RESULTADOS

Concentració Concentraci Potencial Potencial Relación Log de C


n de K+ ón de K+ del ion K+ del ion K+ C ext/C int ext/C int
intracelular extracelular teórico experiment
(mM) (mM) (mV) al (mV)

400 1 -153.41 -112.1 2.5x10​-3 -2.6021

400 2.5 -129.95 -101.8 6.25x10​-3 -2.2041

400 5 -111.22 -86.7 0.0125 -1.9031

400 10 -94.45 -84.5 0.025 -1.6021

400 20 -76.70 -74.3 0.05 -1.30102

400 50 -53.24 -60 0.125 -0.9031

400 100 -35.49 -39.8 0.25 -0.60206

400 400 0 -14.7 1 0

Tabla 1. Efecto de las concentraciones mM de KCl sobre la diferencia de potencial generada


(difusión) en un la membrana testácea del huevo de gallina, se observan valores teóricos y
experimentales de la diferencia de potencial (E°) en mV.
Figura 1. Efecto de las concentraciones milimolares (mM) del cloruro de potasio (KCl) sobre la
diferencia de potencial generada (potencial de difusión) en una membrana testácea de huevo
de gallina. La recta de color negro color son negro datos teóricos de Vm obtenidos con la
ecuación de nernst, y en color rojo datos experimentales.

Concentraci Concentraci logCe/Ci E° E° teórico E°


ón de K+ ón de K+ teórico (Nernst) experimental
intracelular extracelular (Goldma mV (mV)
(mM) (mM) n) mV

67.3959 Ringer -1.8173 -73.92 -73.4100 -72.8


(1.0262) 0

67.3959 5 -1.1746 -56.00 -54.0000 -60.3


0
67.3959 10 -0.8700 -41.00 -39.8000 -45.8
0
67.3959 25 -0.4700 -23.00 -20.8000 -35.7
0
67.3959 50 -0.1700 -8.00 -6.1800 -18.0
0
67.3959 100 0.12600 6.00 8.1700 8.0

Tabla 2. - Efecto de las concentraciones milimolares (mM) de sulfato de potasio (K₂SO₄) sobre
la diferencia de potencial generada (potencial de lesión) en musculo gastrocnemio de rana.

Figura 2. Efecto de las concentraciones milimolares (mM) del sulfato de potasio (K​2​SO​4​) sobre
la diferencia de potencial generada (potencial de lesión) en musculo gastrocnemio de rana.
(E°) representa la diferencia de potencial de membrana en milivolts.

DISCUSIÓN
El potencial de difusión, debido a la composición de la membrana del huevo, -la cual es
sumamente permeable al ion K​+​-, genera una difusión a favor de su gradiente de
concentración, y tiende a difundirse al exterior generando un equilibrio químico. esto se puede
observar teórico y experimentalmente ya que la concentración extracelular se vuelve más
positiva por el ligero exceso de K+ y la intracelular se vuelve más negativa por la ligera
deficiencia de K+.

Mientras más K+ se difunda a favor de su gradiente de concentración mayor será la diferencia


de potencial, a concentraciones milimolares pequeñas de KCl extracelular se genera mayor
diferencia de potencial ya que se alcanzará más rápido el equilibrio disminuyendo la diferencia
de potencial, que es -75 mV.
En la figura 1 se observa el efecto de las concentraciones extracelular e intracelular sobre la
diferencia de potencial, al comparar los resultados teóricos con los prácticos se observa que
difieren muy poco, dado que la ordenada al origen se observa poca diferencia. Los factores
que pueden influir en ésta son que el huevo quedan proteínas cargadas en la membrana, estas
cargas afectan directamente la diferencia de potencial.

En el potencial de lesión al músculo gastrocnemio de rana, contiene iones K+, Na+ y Cl- en su
interior por la solución de LIC, que contribuirán al potencial de membrana, pero en cuanto
mayor es la concentración de una clase de ion en particular y mayor la permeabilidad de la
membrana a este ion, mayor es su importancia en la determinación del potencial en este caso
es al ion K+, dado que la ecuación de Goldman aplica mayoritariamente a dicho ion, como
observado en la tabla 2.

Utilizamos soluciones extracelulares de K​2​SO​4 y el ion SO​4​2- es un anión prácticamente


impermeable, solo se considera la concentración del K​+ extracelular, sin embargo, al utilizar la
solución de Ringer extracelular la cual contiene iones K​+​, Na​+ y Cl​- ​el potencial no puede
considerarse sólo al ion K+ y esto se obtiene por la ecuación de Goldman.

En la figura 2 podemos observar que los valores experimentales y los valores teóricos difieren
poco. Si al manipular el músculo lo rompemos puede quedar expuesto el LIC y el LEC,
combinando ambos y ello afecta directamente el potencial de lesión y con esto la ordenada y
pendiente de la gráfica.

Conclusiones

● El efecto del cambio de gradiente de concentración del ion [K+] sobre el potencial de
difusión y de lesión es que vuelve el valor de E° más positivo.
● La membrana testácea es selectivamente permeable al ion [K+], entre mayor sea la
concentración extracelular del ion [K+], la diferencia de potencial de membrana se hará
menos negativa hasta que llegue al equilibrio.
● La diferencia de potencial de la membrana interna y externa del músculo gastrocnemio
por su potencial de lesión predice el potencial de membrana para múltiples iones que
atraviesan la membrana.
● Las membranas biológicas son barreras que regulan la entrada y salida de las células.
● La diferencia de potencial en la membrana cambia de manera proporcional al cambio
del gradiente de concentración (Si aumenta (Ce)/(Ci), aumenta Vm).
● El gradiente químico como el eléctrico son responsables del equilibrio de los iones a
través de la membrana (Equilibrio de Donnan).
● La ecuación de Goldman es más adecuada que la de Nernst, ya que toma en cuenta la
permeabilidad y concentración de cada ion que produce un Vm.

Bibliografía

1. Bio​logía Celular y Molecular​. (5º Ed.). H. Lodish, A. Berk, P. Matsudaira, C.A., Kaiser, M.
Krieger, M.P. Scott, S.L. Zipursky, J. Darnell. Arhen. Editorial Médica Panamericana.
Buenos Aires. (2004)
2. Bioquímica. (4º Ed.). L. Stryer. Editorial Reverté S. A., Barcelona. (2010).
3. Pivovarov, Arkady S.; Calahorro, Fernando; Walker, Robert J. (noviembre de 2018).
«Na+/K+-pump and neurotransmitter membrane receptors» [La bomba sodio-potasio y
los receptores de membrana de neurotransmisores]
4. Vázquez, M. 2015. Potencial de membrana. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.
Universidad de Antioquia. Url:
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/ocw/mod/page/view.php?id=278
5. Bioquímica. (3º Ed.). C.K. Mathews, K.E. van Holde, K.G. Arhen. Prentice Hall, Pearson
Educacion, Madrid. (2002)
6. Malizos, KN. 2005. The healing potential of the periosteum molecular aspects. Url:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16188544
7. Curso de Fisiología. EQUILIBRIO IONICO Y POTENCIAL DE MEMBRANA. Url:
http://www.iqb.es/cbasicas/fisio/cap02/cap2_01.htm