Vigilancia de Laboratorio de

Coqueluche

T.M. Roberto Flores R.

Laboratorio de Agentes Emergentes y
Zoonóticos
Sección Bacteriología
Vigilancia: Circular B51 n°27

Objetivos
Evaluar el impacto de la
vacunación en términos de
la reducción de casos
graves y complicaciones
(hospitalizaciones), muertes
causadas por coqueluche y
proporcionar conocimientos
sobre el comportamiento de
la enfermedad, con el
propósito de adecuar los
mecanismos de
intervención.
Vigilancia

• Caso sospechoso
Persona que presenta tos de al menos dos semanas, con uno de
los siguientes síntomas: paroxismos de tos, estridor inspiratorio,
vómito post tusivo sin otra causa aparente.
En neonatos y lactantes menores de 6 meses, infección
respiratoria que cursa con apneas.
• Caso confirmado
Caso sospechoso que es confirmado por laboratorio o vinculado
epidemiológicamente a un caso confirmado por el laboratorio.
• Caso compatible o clínico
Caso sospechoso al cual no se pudo demostrar la asociación
epidemiológica o confirmación por laboratorio.
• Contacto
Persona con contacto prolongado y estrecho con un caso
sintomático (personas que duermen bajo el mismo techo) hasta
21 días del inicio de la enfermedad.
Diagnostico de Laboratorio

• Paciente que cumple con la definición de

caso sospechoso, se deberá tomar una
muestra de aspirado nasofaríngeo. La cual
debe ser trasladada al laboratorio local,
debidamente identificada para efectuar la
técnica de inmunofluorescencia Directa
Muestras
Hay dos tipos de muestras:

aspirados nasofaríngeos (ANF)

hisopados nasofaríngeos (HNF)

Dracon o rayón

punta de algodón o hisopos Inhibe

de alginato de calcio PCR
Muestras
1. Muestra
Debe ser Aspirado Nasofaringeo (ANF).
La recolección de la muestra debe ser realizada con precaución, no se debe
utilizar material de vidrio.
La manipulación de la muestra debe ser mínima y debe realizarse en
condiciones de bioseguridad

2. Transporte
Bordetella pertussis es una bacteria muy lábil, por lo tanto la muestra una
vez recolectada debe ser transportada inmediatamente al laboratorio para
la siembra.
La muestra debe ser enviada al laboratorio a temperatura ambiente antes de
las 4 horas o a 4º C si es dentro de 48 a 72 horas.
Cada muestra debe ir plenamente identificada con los datos completos del
paciente.
El recipiente o tubo debe mantenerse cerrado durante todo el trayecto.

3. Envío de los cultivos o cepas sospechosas

El envío debe ser en un contenedor a temperatura ambiente. Cada placa
debe ser sellada con parafilm para evitar derrames o contaminación.
Las placas deben estar rotuladas con los datos de la muestra acompañado
del formulario de envío de muestras de la sección bacteriología del Instituto
de Salud Pública.
Enviar un formulario por muestra
Diagnostico de Laboratorio

• Las técnicas actualmente en uso e

implementadas por el Laboratorio Nacional de
Referencia del Instituto de Salud Pública de Chile

– Cultivo bacteriano en agar Regan-Lowe

– Inmunofluorescencia Directa (IFD)
– Reacción de polimerasa en cadena (PCR)
Inmunofluorescencia directa (I.F.D)
• Preparación de frotis de aspirado nasofaríngeo
• Fijación del frotis
• Procedimiento de tinción
• Reactivos IFD: Anticuerpo policlonal o
Anticuerpo monoclonal
• Lavado
• Lectura de laminas
Inmunofluorescencia directa

• La I.F.D para la realidad nacional, continúa

siendo la herramienta diagnóstica disponible
• Su sensibilidad es variable, alrededor de 29-71%
• Su especificidad puede ser alta pero es operador
dependiente.
• Falsos positivos H. influenzae no capsulados,
difteroides, B. bronchiseptica
• I.F.D negativa en un paciente con cuadro clínico
y epidemiológico compatible, no descarta el
diagnóstico de coqueluche
• Colonización transitoria, sin enfermedad en curso
Cultivo: Toma de muestra, transporte
y siembra
• A partir de una muestra de aspirado
nasofaríngeo o tórula nasofaríngea
• Aspirado traqueal en pacientes intubados o
sometido a lavado brocoalveolar.
• No se recomienda el uso de torulas de algodón
• Transporte inmediato o en medios Amies
charcoal o Regan-Lowe
• Regan-Lowe: Charcoal suplementado con sangre
se caballo y cephalexina
• Incubación: 7 a 10 días en atmósfera aerobia y
en humedad
• Identificación mediante IFD de colonias
sospechosas y PCR
Cultivo

• Su rendimiento es máximo en el periodo catarral

durante el cual normalmente no se plantea el
diagnóstico y durante la primera semana del
periodo paroxístico.
• Después de 4 días de emplear macrólidos puede
detectarse B. pertussis aún en 56% de los
pacientes y a los 7 días el cultivo se negativiza
completamente
• En adultos el cultivo es infrecuentemente
positivo, puede ser de un 10 hasta un 30%
Métodos Moleculares

• Detección del ADN de B. pertussis

• Altamente sensible y especifica
• Indicado en pacientes sintomáticos
• Disponible PCR convencional y tiempo real
• Muestra: Aspirado nasofaringeo
• Para estudio de brote pueden ser utilizados según
requerimiento del Ministerio de Salud.
Estudio de Brotes

• Frente a brotes de coqueluche, éstos deberán ser

notificados a la SEREMI de Salud correspondiente
para iniciar la investigación.

• Se deberá tomar un máximo de cinco muestras,

para el diagnóstico y confirmación del brote, a
través de las técnicas disponibles en el Instituto
de Salud Pública.
Laboratorio de referencia

• Transferencia tecnológica y capacitaciones a

profesionales desde 1995 a la fecha.
• Envío de laminas IFD positivas desde laboratorio
de local para evaluar concordancia con
laboratorio de referencia.
• Cultivo
• Estudios moleculares: PCR y PFGE
Capacitaciones y Evaluación

• Curso “Diagnostico de
laboratorio de Bordetella
pertussis”
• Evaluación de laboratorios
mediante nuevo programa de
evaluación externa de la
calidad
• PEEC IFD Bordetella pertussis
Capacitaciones

• Laboratorio de Agentes emergentes y zoonóticos

y Microbiología Molecular de la Sección
Bacteriología ha realizado durante el segundo
semestre del presente año 3 jornadas de
capacitaciones en Diagnostico de laboratorio de
coqueluche, específicamente en
Inmunofluorescencia de Bordetella pertussis.
• Laboratorios capacitados 2011
– Hospital Guillermo Grant Benavente de Concepción
– Hospital Base de Valdivia
– Hospital Víctor Ríos Ruiz de Los Ángeles
– Hospital Regional de Rancagua
– Hospital Regional de Talca
– Hospital Gustavo Fricke de Viña de Mar
– Hospital Dr. Ernesto Torres Galdames de Iquique
– Laboratorio Vida Integra de Santiago
PEEC: Inmunofluorescencia Directa
IFD B. pertussis
• Para el 2012 los laboratorios que cuenten con la
técnica implementada y que se encuentren
adscritos podrán participar en el nuevo
programa.
• Envío de láminas de pacientes por parte del
laboratorio participante evaluando la
concordancia con el Laboratorio de Referencia
PEEC: Inmunofluorescencia Directa
IFD B. pertussis
• El procedimiento de evaluación técnica es
indirecto
• Envío de láminas de pacientes en duplicado por
parte del laboratorio participante al Laboratorio
de Referencia
• Se realizará la tinción y lectura de las láminas
enviadas, Evaluando la concordancia con el
laboratorio de referencia
• Evalúa la técnica de I.F.D por lo que los
laboratorios participantes deben disponer de un
microscopio de fluorescencia con filtro para
fluoresceína.
• 1 evaluación anual
• Casos por evaluación: 10