MATERIAL 1

1 matraz de digestión Kjeldahl con capacidad de 125 ml.

1 matraz de Erlenmeyer de 10 ml.

1 matraz volumétrico de 100 ml.

1 mechero de Bunsen.

2 pinzas (nueces).

1 soporte universal

1 pipeta de 5 ml.

1 pipeta de 10 ml.

1 frasco gotero de 25 ml.

1 frasco lámbar con capacidad de 1 litro.

1 piseta grande con agua destilada.

1 microbureta.

3 cuerpos de ebullición.

1 par de guantes de asbesto.

1 pinzas largas.

1 embudo de cristal chico o mediano.

EQUIPO1

Aparato digestor Kjeldahl (1 para todo el grupo).

1 aparato destilador micro Kjeldahl (1 por equipo).

REACTIVOS 1

Verde de bromocresol al 0.1% diluido en alcohol al 95%.

Rojo de metilo al 0.1% diluido en alcohol al 95%.

Ácido bórico al 2%.

Ácido clorhídrico 0.01N (solución valorada).

Hidróxido de sodio al 30%.

Ácido sulfúrico concentrado.

Mezcla catalizadora para la digestión: 2.5 g de dióxido de selenio + 100 g de sulfato de potasio +
20 g de sulfato de cobre pentahidratado (proporcionada por la coordinación de laboratorios).

ELABORACION DE REACTIVOS 2

1.- Mezcla Indicadora.- Prepare por separado los indicadores verde de bromocresol al 0.1% y el
rojo de metilo al 0.1% diluidos en alcohol al 95%. Mezcle 10 ml. de verde de bromocresol con 2
ml. de la solución de rojo de metilo en un frasco gotero.

2.- Ácido Bórico al 2%.- Disuelva 10 g de ácido bórico (en cristales) en 500 ml. de agua destilada
hirviendo. Después de que se enfríe transfiera la solución a un frasco tapado. Se conserva
indefinidamente.
3.- Ácido Clorhídrico 0.01N.- Prepare un litro y valórela con una solución de NaOH de la misma
normalidad.

4.- Hidróxido de Sodio al 30%.- Disuelva 150g de perlas de hidróxido de sodio en 350 ml. de
agua destilada. Almacene la solución en un frasco ámbar con tapón de vidrio.

5.- H2SO4 concentrado.

6.- Catalizadores para la Digestión.- Mezcle 2.5g de dióxido de selenio (SeO2), 100g de sulfato
de potasio (K2SO4) y 20 g de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4 . 5H2O).

PROCEDIMIENTO 2

DIGESTIÓN

1.- Pese exactamente 0.15g de harina de trigo en un matraz de micro-Kjeldahl cuidando que la
muestra no se adhiera a las parédes o al cuello del matraz.

2.- Añada 2.5 ml. de H2SO4, dos perlas de ebullición y aproximadamente 1.0 g de mezcla
catalizadora.

3.- Someta a digestión la muestra en el aparato de microKjeldahl bajo una campana de extracción,
con el matraz ligeramente inclinado usando baja temperatura al inicio y aumentando el calor a
medida que procede la digestión, rotando los matraces de vez en cuando para asegurarse de que se
digiera toda la muestra. La digestión terminará cuando el color de la muestra sea azúl-verde claro.
El proceso tomará aproximadamente 90 minutos.
4.- Enfríe el matraz durante unos 4 minutos para que no se endurezca al solidificarse la muestra.

5.- Añada 7 ml. de H2O cuidadosamente, poco a poco, a la muestra digerida. Mezcle y permítale
enfriarse.

DESTILACIÓN

6.- Encienda la unidad destiladora.

7.- Si es posible ajuste la velocidad de destilación a aproximadamente 5 ml. por minuto

8.- Abra la llave del agua para tener H2O circulando por el refrigerante todo el tiempo.

9.- Añada la muestra a la cámara de ebullición por medio de un embudo (para recuperar las perlas
de ebullición) y enjuague el matraz con aproximadamente 5ml. de H2O destilada.

10.- Coloque 1 frasco Erlenmeyer con 10 ml de ácido bórico y 2 gotas de indicador bajo la salida
de destilación.

11.- Añada aproximadamente 10 ml. de la solución de NaOH a la cámara de ebullición lentamente.

La mezcla digerida se tornará oscura (azúl-gris o café oscuro). Si no cambia de color añada más
NaOH.

12.- Deje un poco de NaOH en la copita superior del destilador.

13.- Colecte aproximadamente 20 ml. del destilado (4-5 minutos). El destilado estará listo para
ser titulado cuando se torna verde en el matraz receptor.

14.- Retire el matraz de Erlenmeyer y limpie la unidad destiladora enjuagando la cámara de

ebullición varias veces con agua destilada. Cada vez que se añada agua destilada hasta llenar la
copita superior de la unidad destiladora para el enjuague deje que ésta hierva primero. Luego abra
la llave de la parte que permite salir las muestras hacia fuera de la unidad destiladora. Una vez
vacía la parte en donde se procesa la muestra asegúrese de que esté bien vacía. Si queda todavía
un poco de agua en el fondo permita que hierva para que se vaya toda hacia esa segunda parte de
la unidad destiladora. El matraz estará listo para recibir la segunda cantidad de agua destilada para
lavar la unidad destiladora. Esta operación se repite al menos unas 4 veces.
NOTA: La llavecita de la segunda parte de la unidad destiladora (que conduce la muestra
procesada hacia el vasito permanece cerrada (en posición horizontal) durante el procesamiento de
la muestra. Sólo se abre cuando se enjuaga el destilador.

TITULACIÓN

15.- Titule la muestra con 0.1N de HCl. Un color violeta indica el punto final de la titulación.
Compárese este color con el del blanco. Cada equivalente del HCl usado corresponde a un
equivalente de NH3 o a un equivalente de N en la muestra original. El peso del N en mg está dado
por miliequivalentes del ácido X 14 (el peso equivalente del N).

RESULTADOS Y DISCUSIONES 3

DIGESTIÓN:

En la digestión se produce la descomposición del nitrógeno que contienen las muestras

orgánicas utilizando una solución de ácido concentrado. Esto se obtiene haciendo hervir la
muestra en una concentración de ácido sulfúrico. El resultado es una solución de sulfato de
amonio.

n - C –NH2 + m H2 SO4 catalizadores CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2

Proteína calor

DESTILACIÓN:
En la etapa de destilación se libera amoniaco, el cual es retenido en una solución con una
cantidad conocida de ácido bórico. Inicialmente se realiza una destilación con vapor por el
método de arrastre de vapor de agua, mediante la cual acelera la obtención del destilado.

(NH4)2SO4 + 2 NaOH → 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O

NH3 + H3BO3 (ácido bórico) → NH4 + H2BO3- (ión borato)

VALORACIÓN O TITULACIÓN:

Al final, se utiliza la TITULACIÓN para valorar finalmente la cantidad de amonio presente

en la muestra destilada.

H2BO3- + H+ → H3BO3

Cálculos:

Los cálculos para el % de nitrógeno o de proteína deben tener en cuenta qué tipo de solución
receptora se utilizó y qué factores de dilución se usaron durante el proceso de destilación.
En la fórmula siguiente, “N” representa la normalidad. “ml blanco” se refiere a los
mililitros de álcali consumidos en la valoración por retroceso de un blanco, si la solución
 receptora es ácido clorhídrico o ácido sulfúrico estandarizados, o se refiere a mililitros de
solución valorada de ácido para titular un blanco si la solución receptora es ácido bórico.

Cuando se utiliza ácido bórico como solución receptora, la fórmula es:

(𝑚𝑙. á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒 − 𝑚𝑙. 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜) ∗ 𝑁 𝑑𝑒𝑙 á𝑐𝑖𝑑𝑜 ∗ 1,4007

%𝑁𝑖𝑡𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜 =
𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑒𝑛 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Yanu, P., & Jakmunee, J. (2017). Down scaled Kjeldahl digestion and flow injection
conductometric system for determination of protein content in some traditional northern
Thai foods. Food Chemistry, 230, 572–577.
2. Latham, MC (1997). Nutrición humana en el mundo en desarrollo. Roma: Alimentos y
agriculturas organización de la nación unida, (Capítulo 8)
3. Hall, GN, y schonfeldt, HC (2013). Nitrógeno total vs. perfil de aminoácidos como
indicador de contenido de proteínas de carne de vacuno. Food Chemistry, 140, 608-612.

MÉTODO DE DUMAS

Fundamento
Se caracteriza por pirólisis completa de la muestra y medición del contenido de nitrógeno de los
gases de combustión. El nitrógeno puede ser medido con manómetro después de absorber el
dióxido de carbono en una solución alcalina o por conductividad térmica en métodos
automatizados.

Referencias:

1. Pocklington, W.D. and Diefenbacher, A. 1988. (Pure & Appl. Chem. 60:877-892).