Transcrição do DNA

Mestrando: Ighor Teixeira

Orientador: Régis correa
 O controle genético sobre o
metabolismo
• Os organismos dependem das reações químicas
para crescer e se reproduzir.
• Conjunto de reações químicas do organismo e
denominado metabolismo.
• As reações químicas do nosso corpo são
catalisadas por enzimas, que são proteínas.
• Além disso a “construção” de um organismo
depende das proteínas.
• As proteínas são produzidas a partir de
informação contida no código genético.
 Transcrição
• Realizada por um complexo enzimático cuja enzima chave é a
RNA polimerase.
• A síntese de RNA ocorre no sentido 5’=>3’.
• O RNA sintetizado será complementar à fita de DNA molde.
 Diferenças entre eucariontes e
procariontes
• A transcrição em eucariontes é bem mais
complexa que em procariontes.
• Nos eucariontes a transcrição ocorre no
núcleo, enquanto a tradução ocorre no
citoplasma.
• Nos procariontes tal separação celular não
existe, sendo os dois processos muito bem
acoplados no espaço.
Diferenças entre DNA E RNA
Os diferentes tipos de moléculas
de RNA
 Expressão gênica
• O fenótipo de um organismo é uma
combinação dos efeitos de todos os seus
genes.
• Os genes são regiões do DNA que contém
informação para produzir as proteinas.
• A informação do DNA não é passada
diretamente para proteinas.
• RNA intermediário (mRNA).
 Descoberta do mRNA
• Experimento de Spiegelman
• Experimento de pulso-caça (Elliot Volkin e
Lawrence Astrachan)
 Transcrição em procariontes
• RNA polimerase de
procariotos é uma
holoenzima, ou seja,
uma enzima
composta por várias
subunidades
proteicas.
• Cerne tetramérico
(α2ββ’)
• Subunidade σ
 Estrutura geral de um gene

• Promotor: seqüências específicas do DNA reconhecidas pela

RNA polimerase com o sítio de início da transcrição.
Direcionam a transcrição de segmentos adjacentes do DNA
(gene)
• Região Transcrita da fita molde da qual mRNA é sintetizada
• Finalizador: seqüências que sinalizam o produto da RNA
polimerase a partir do gene.
 Promotor
• Sítio onde a RNA polimerase se liga e inicia a transcrição.
• Genes são regulados similarmente contendo seqüências comuns de DNA
(seqüência de consenso) dentro de seus promotores.
Iniciação transcricional
Bolha de transcrição
• RNA polimerase se liga ao
promotor.
• RNA polimerase separa as fitas
de DNA formando a bolha de
transcrição.
• O RNA começa a ser
sintetizado a partir da fita
molde de DNA.
• Conforme a RNA polimerase
anda e transcreve o DNA ela
fecha as fitas atrás (5’P)e abre
as fitas à frente (3’OH).
Alongamento
 Término de transcrição

• Processo pelo qual o complexo RNA polimerase se

disassocia da extremidade 3’ do gene.

• Seqüências específicas sinalizam a terminação da

síntese de RNA.

• E. coli - duas classes de sinais de terminação:

dependente de ρ (rho) e outro é independente de ρ.
 Independente de Rho
• duas características distintas: região cujo transcrito de RNA
possui seqüências autocomplementares, permitindo
formação de estruturas grampos.
• Outra seria um colar curto de adenilato na fita molde, que é
transcrito em uridilatos na extremidade 3´ do RNA.
 Pausa e disassociação
• O grampo possui a função de travar o andamento da
transcrição.
• 3’ terminal tende a ser rica em AU p/ romper facilmente
durante a pausa. Leva a disassociação do complexo RNA
polimerase.
 Dependente de Rho
• Rho é uma helicase dependente de ATP.
• Se move ao longo do RNA transcrito.
• Quando a RNA Polimerase diminui ou pára na
sequencia de terminação (grampo), Rho se une a
RNA Pol e separa o RNA nascente da bolha de
transcrição.
 Transcrição em eucariotos
• Diferente de procariotos
que possuem apenas uma
RNA polimerase, eucariotos
possuem 3 RNA
polimerases.
• Cada RNA polimerase é
responsável por transcrever
um determinado grupo de
genes.
• As RNA polimerases de
eucariotos são bem mais
complexas que de
procariotos.
RNA Polimerases eucarióticas
 Promotor
• O promotor de eucariotos contém uma região consenso
chamada de TATA Box (TATAAAA).
• As RNA polimerases eucarióticas se ligam a esta região do
promotor para iniciar a transcrição.
• O TATA Box está situado a -30 do gene.
Fatores de transcrição
• Polimerase I, II, e III não
se ligam
especificamente aos
promotores.
• Eles podem interagir
com seus promotores
via fatores de
transcrição .
• Fatores de Transcrição
reconhecem e iniciam
transcrição em
seqüências de
promotores específicas.
 Alongamento e término
• O alongamento da cadeia de RNA ocorre em
um processo similar a procariotos.
• O término de transcrição ainda não está bem
definido, mas há participação de uma
endonuclease.
• O RNA é clivado, mas a transcrição continua
mesmo depois da clivagem do RNA por mais
1000 a 2000 nucleotídeos até que a síntese
pára em uma seqüência de término.
 Processamento do RNA
• Em eucariotos a transcrição e tradução ocorre
em compartimentos separados.
• Isso permite que o RNA possa ser “maturado”
antes que seja traduzido.
• O RNA sofre 3 tipos de modificações no
núcleo antes de ser endereçado para o
citoplasma onde será traduzido.
• O RNA antes de ser modificado é chamado de
“transcrito primário” ou “hnRNA”.
 Capeamento do RNA mensageiro
• A primeira modificação que ocorre no hnRNA
é a adição de um CAP na porção 5’P do RNA
mensageiro.
• O CAP é um 7-metilguanosina, que é unida ao
resíduo terminal 5´do RNA por meio de uma
ligação 5´,5´-trifosfato.
• A função do CAP é proteger o RNA de
degradação por exonucleases, aumentando o
tempo de vida do RNA.
 Poliadenilação
• A segunda modificação é a adição de uma
cauda Poli(A) na extremidade 3’ do hnRNA.
• A cauda Poli(A) é a adição de cerca de 200
nucleotídeos de adenina no final do RNA
mensageiro (extremidade 3’).
• A função da cauda Poli(A) também é
aumentar o tempo de vida do mRNA, porque
as exonucleases terão que degradar 200
nucleotídeos antes de começar a degradar o
mRNA.
 éxons e Íntrons
• Os genes de eucariotos possuem regiões
codificantes e não codificantes.
• Essas regiões não codificantes estarão
contidas no RNA quando ele for transcrito e
precisam ser removidas.
• As regiões codificantes do RNA mensageiro
são chamadas de éxons, as não codificantes
são chamadas de íntrons.
 Recomposição do RNA (Splicing)

• Mecanismo pelo qual os introns são retirados

do RNA mensageiro.

• São 3 diferentes mecanismos: Recomposição

do precursor de tRNA, recomposição
autocatalítica e recomposição do Pre-mRNA.
 Mecanismos de remoção de íntrons
• Recomposição do precursor de tRNA: os introns dos
precursores de tRNA são removidos precisamente
por uma endonuclease que cliva os introns, uma
ligase depois religa os éxons de tRNA.
• recomposição autocatalítica: Em alguns rRNA os
introns se autoremovem, sem a ação catalítica de
nenhuma enzima.
• recomposição do Pre-mRNA: Os introns do hnRNA
são removidos por particulas complexas envolvendo
proteinas e snRNA que são chamadas de
spliceossomos.
• O processamento de RNA aumenta
consideravelmente o tempo de vida do mRNA
(10 horas em células de mamíferos e 2-5
minutos em procariotos).

• mRNA está pronto para sair do núcleo e ser

traduzido no citoplasma.