广 东 化 工 2018 年 第 12 期

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基于 QBD 的枸橼酸西地那非清洁残留物的分析方法
开发与验证
石诚
(广州白云山医药集团股份有限公司白云山化学制药厂，广东 广州 510515)

[摘 要]目的：对枸橼酸西地那非生产设备清洁残留，采用QBD进行分析方法开发与验证。方法：经过方法设计(第 1 阶段)、方法确认(第 2
阶段)和持续方法确证(第 3 阶段)，色谱柱为C18(3.9 mm×150 mm，5.0 μm)；流动相为 0.05 mol/L三乙胺磷酸盐溶液(取三乙胺 7 mL，加水 1000 mL，
用磷酸调pH至 3.0)-乙腈-甲醇(58∶17∶25)；流速为 1.0 mL/min；检测波长为 290 nm；柱温为 30 ℃；进样量为 20 μL。结果：检测限为 0.028 μg/mL，
相当于下一批 0.02 ppm的限度；在 0.028~28.0 μg/mL(R2=0.9999 ，n=6)范围内与峰面积线性关系良好；方法平均回收率为 99.95 %，
RSD=0.09 %(n=9)；取样平均回收率为 98.63 %，RSD=0.33 %(n=9)。结论：实践证明，基于QBD是一种科学知识与风险评估有机结合的现代分
析方法开发与验证的方法。
[关键词]QBD；ATP； HPLC；清洁验证
[中图分类号]TQ [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2018)12-0086-02

Based On QBD to Develop and Validate the Analysis Method for the Sildenafil
Citrate Cleaning Residue
Shi Cheng
(Guangzhou Baiyunshan Pharmaceutical Holdings Co., Ltd., Baiyunshan Chemical Pharmaceutical Factory, Guangzhou 510515, China)

Abstract: Objective Based on QBD to develop and validate the analytical method for the clean residue of sildenafil citrate during manufacturing. Method
Through method design (phase I), method validation (phase 2) and continuous method validation (phase 3), chromatographic column is C18 column(3.9 mm×150
mm, 5.0 μm); for mobile phase, mix 17 volumes of acetonitrile R, 25 volumes of methanol R and 58 volumes of a 0.7 per cent V/V solution of triethylamine R
previously adjusted to pH 3.0 ± 0.1 with phosphoric acid R. The detection wavelength is 290 nm and the flow rate is 1.0 ML/min. The column temperature is 30 ℃.
The injection volume is 20 μL. Results The LOD is 0.028 μg/mL, 0.02 ppm; The calibration curves is linear in the range of 0.028~28.0 μg/mL(R2=0.9999, n=6). The
average recovery rates are 99.95 %, RSD=0.09 % (n=9) for analytical method and 98.63 %, RSD=0.33 % (n=9) for sampling method. Conclusion Practice has proved
that QBD is a modern method combining scientific knowledge with risk assessment to develop and validate the analytical method.
Keywords: QBD；ATP；HPLC；clean validation

质量源于设计(QBD)是一种基于科学和质量风险管理的系统 的可接受范围内，以防止出现能够对下一次生产产品的安全性和
化开发方法，旨在预先确定目标，并强调对产品和过程的认识及 质量带来不利影响的污染[3-5]。
过程控制 [1]。按照方法生命周期管理，采用QBD进行分析方法的 在这种情况下，ATP 是在过程中的某个取样点测定清洁残留
开发与验证，是在从方法设计阶段开始的整个方法生命周期内， 物的浓度，关键性能特性要求保证足够的灵敏度和精确度，能确
对数据和知识进行采集并评价，建立科学依据，表明该方法可持 保该取样点的检测结果符合要求。
续提高质量分析数据。该途径可以分为 3 个阶段：方法设计(第 1 定义了 ATP 和方法关键性能特性后，就可进行方法开发和理
阶段)、方法确认(第 2 阶段)和持续方法确证(第 3 阶段)[2]。 解方面的活动。首先，选择能满足 ATP 要求的分析技术和方法条
件进行方法开发，一般包括分析方法原理，仪器及其参数，试剂
1 方法设计(第 1 阶段) 和供试品溶液、对照品溶液等的制备，测量过程，计算公式及范
ICHQ8 并没有明确提到分析方法的开发。但我们可以根据相 围限度要求等。然后，基于先前的知识和风险评估，进行合适的
应定义，寻求严谨的结构化方法来开发分析方法。 实验研究，以理解需控制的样品属性和方法参数及其与方法性能
分析方法开发的目标是开发、验证并实施一种方法，该方法 特性之间的关系，确保该方法的耐用性和稳健性。最后，开发和
能为所需信息提供准确和必要的分析，并且在任何情况下，都可 定义一系列预期能满足 ATP 的方法条件和控制措施，以建立方法
以实现上述目标。首先，我们确定分析方法性能，包括关键质量 控制策略。
参数(CQAs)、关键工艺参数(CPPs)和关键材料特性(CMAs)。其次， 测量清洁残留物有许多技术可用，但对于枸橼酸西地那非的
我们定义设计空间。设计空间是过程的作业范围，它包含了确切 清洁残留物检测，从检测的灵敏度、准确度、检测方法的重复性
的 CPP 和 CMAs 范围，以确保 CQA 能够稳定实现。最后，确定 和便捷性等方面考虑，HPLC 方法是首选。
所需控制策略，将作业限定在指定的设计空间内，同时该控制策 在计算残留检测目标的残留限度时，使用最低日治疗剂量千
略贯穿于整个产品生命周期不断完善的过程中。 分之一标准和10ppm标准计算活性成分的残留限度。比较两者的
1.1 确定分析目标概况(ATP)和方法关键性能特性 大小，选较小的值作为控制限度。[6]
方法设计阶段，首先在理解 QTPP 和产品 CQA 以及过程控制 1.2 检测方法
要求的基础上，确定分析目标概况(ATP)和方法关键性能特性(ATP 仪器。安捷伦1260液相色谱仪(配有紫外检测器)，梅特勒托
是方法生命周期所有阶段的焦点)。确定需要某种分析信息的原 利多XS105电子天平，超声仪。
因、用途以及使用时间，可以帮助制定 ATP。QBD 依据识别和处 试剂。枸橼酸西地那非，批号4230706；三乙胺，优级纯，含
理变量的原则工作，以了解其潜在影响。通过识别、分析设计空 量99.9 %；乙腈，色谱纯；甲醇，色谱纯；磷酸，分析纯；双氧
间，而不是应用一组固定的测量条件，QBD 可在产品的整个生命 水，分析纯；甲酸，分析纯。除另有规定外，试剂均为分析纯，
周期中，为应对日常分析中遇到的固有变化提供一种解决方法。 水为去离子水。
枸橼酸西地那非作为药品，应用于患有男性勃起功能障碍的 色谱条件和系统适用性实验：柱子：C18(3.9 mm×150 mm，
患者，常见的副作用有头痛、潮红、消化不良、鼻塞及视觉异常 5.0 μm)；流动相：0.05 mol/L 三乙胺磷酸盐溶液(取三乙胺 7 mL，
等。 加水 1000 mL，用磷酸调 pH 至 3.0)-乙腈-甲醇(58∶17∶25)；流
清洁残留物的分析方法开发和验证的目的是为了确认和记录 速：1.0 mL/min；检测波长：290 nm；柱温为 30 ℃；进样量：20
与枸橼酸西地那非产品直接接触的设备、系统或设施的标准清洁 μL。称取枸橼酸西地那非对照品约 70 mg，置 250 mL 量瓶中，加
程序能够保证活性成分和上一批产品可能的残留物在预先所定义 30 %双氧水-甲酸(2∶1)混合液 1 mL，静置 30 分钟，用流动相稀
[收稿日期] 2018-04-24
[作者简介] 石诚(1979-)，男，安徽人，硕士，制药工程师，从事药物生产研发、质量研究工作。

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释至刻度，摇匀，滤过，取 20 µL 注入液相色谱仪，记录色谱图， 对照品溶液：精密量取 1 mL 对照品储备液，到 100 mL 量瓶

西地那非峰与相邻杂质峰的分离度应大于 2.5。理论板数按西地那 中，流动相稀释至刻度，精密量取 5 mL 到 50 mL 量瓶中，流动
非峰计算不低于 4000。 相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
预试验溶液及测试：取枸橼酸西地那非对照品约 70 mg，置 预试验溶液及测试。取枸橼酸西地那非对照品约70 mg，置于
于 250 mL 量瓶中，加 30 %双氧水-甲酸(2∶1)混合液 1 mL，震荡 250 mL量瓶中，加30 %双氧水-甲酸(2∶1)混合液1 mL，震荡使溶
使溶解，放置 30 min，加流动相稀释至刻度，作为预试验溶液。 解，放置30 min，加流动相稀释至刻度，作为预试验溶液。取20 μL
取 20 μL 进样，西地那非峰与相邻杂质峰的分离度应大于 2.5。 进样，西地那非峰与相邻杂质峰的分离度应大于2.5。
样品溶液：取清洁后取样的样品，溶解于 10 mL 量瓶中，流 2.2 测定限度
动相稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。 当信噪比(S/N)为3∶1时，枸橼酸西地那非的浓度为0.028
该分析方法不仅要求在日常使用中有效，而且当该方法从研 μg/mL，相当于下一批0.02 ppm的限度。
究实验室走向实际质量控制应用时，都能极大地降低潜在的失败 2.3 线性关系
风险。 精密量取贮备液0.01 mL到100 mL、1 mL到100 mL、1 mL到
2 方法确认(第 2 阶段) 50 mL、1 mL到25 mL、1 mL到20 mL、1 mL到10 mL容量瓶中，
用流动相稀释至刻度，得枸橼酸西地那非浓度为0.028 μg/mL、2.8
方法确认需符合 ATP 定义的特定预期用途。该确认活动要求 μg/mL、5.6 μg/mL、11.2 μg/mL、14.0 μg/mL、28.0 μg/mL溶液，
证明该方法在其使用的预期分析物浓度范围内具有足够的准确度 依次进样20 μL，按照上述色谱条件测定。以枸橼酸西地那非浓度
和精密度。满足用于测定残留或污染物的分析方法的特性和敏感 为横坐标，响应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为
性。如果测不到污染物或残留物，并不意味着清洁后没有残留的 y=3.158x+0.12，R2=0.9999。线性关系良好。
污染物。这只是表示在样品中不存在大于分析方法的灵敏度或检 2.4 中间精密度
测极限等级的污染物。挑战分析方法，并结合所采用的取样方法， 按照色谱条件，采用不同的人在不同的时间进行溶液中枸橼
用于显示污染物可以从设备表面回收，及回收的水平。 酸西地那非测定，测得枸橼酸西地那非检测结果分别为5.61
考虑不同人员操作的差异性，取样操作应由经过严格培训并 μg/mL，5.61 μg/mL，5.58 μg/mL，5.65 μg/mL，5.60 μg/mL，5.65
能严格遵守规程的人员进行，同时为保证样品应具有较好的重现 μg/mL，RSD为0.50 %。
性，取样操作应由完成回收率实验的人进行操作。棉签使用前用 2.5 回收率实验
取样溶剂(水)预先清洗，以防止纤维残留在取样表面。回收率实 精密量取贮备液1 mL到25 mL、1 mL到20 mL、1 mL到10 mL
验应由同一个人至少进行 3 次操作，应大于或等于 50 %。 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，得枸橼酸西地那非加入浓度为
2.1 溶液配制 11.2 μg/mL、14.0 μg/mL、28.0 μg/mL溶液，依次进样20 μL，按照
对照品储备液：取枸橼酸西地那非对照品约 28 mg，精密称 上述色谱条件测定。按照上述色谱条件进行检测的分析方法回收
定，置 100 mL 量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品 率结果见表1。
储备液。
表1 分析方法回收率结果
Tab.1 Results of recovery for analytical method
序号 加标量/(μg/mL) 检测值/(μg/mL) 回收率/% 平均回收率/% RSD%
1 11.2 11.18 99.82
2 11.2 11.20 100.00
3 11.2 11.19 99.91
4 14.0 14.01 100.07
5 14.0 14.00 100.00 99.95 0.09
6 14.0 14.01 100.07
7 28.0 27.96 99.86
8 28.0 27.98 99.93
9 28.0 27.98 99.93

同时考虑到清洁验证中取样操作的要求，对三个不同的取样人员进行了取样的回收率验证，结果见表 2。
表2 取样回收率结果
Tab.2 Results of recovery for Sampling
序号 取样人员编号 加标量/(μg /mL) 检测值/(μg/mL) 回收率/% 平均回收率/% RSD%
1 A 14.0 13.85 98.93
2 A 14.0 13.81 98.64
3 A 14.0 13.91 99.36
4 B 14.0 13.79 98.50
5 B 14.0 13.77 98.36 98.63 0.33
6 B 14.0 13.79 98.50
7 C 14.0 13.81 98.64
8 C 14.0 13.76 98.29
9 C 14.0 13.79 98.50

性和完整性，根据风险评估结果，需按照 QBD 要求进行合适的

3 持续方法确证(第 3 阶段) 方法安装和方法性能确证。
持续方法确证的主要目的是持续确保建立的分析方法在日常
使用中能保持在受控状态，包括在方法常规应用中的持续方法性 4 讨论
能和相关变更后的方法性能确证。 传统的分析方法开发与验证，常被认为是一次性事件，基于
持续方法确证性能监测指的是，对枸橼酸西地那非生产中， 一般的方法特性和标准，以检查框的方式，而不是以其目的来进
日常设备清洁后的残留物进行取样分析，以及对样品日常检测数 行验证，验证过程更侧重于产生法规可接受的验证文件，而不能
据的趋势分析等。日常分析操作中，密切关注任何由该方法产生
的超标(OOS)或超趋势(OOT)结果。 (下转第 2 页)
方法确认后，可能会在新场所操作或被转移到另一个实验室。
为保证接受方可准确可靠地应用该方法，并确保分析结果的连续

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系统产生的沼气经脱水脱硫后，可以发电供给中温厌氧系统
的搅拌、加热、好氧池风机系统及各级提升泵和污泥脱水机，实
4 结论
现了废物的资源化利用，降低了处理成本。生化系统出水水质达 与传统处理技术比较，本技术体现出以下优势：
到农田灌溉标准，可用于农田灌溉或者消毒后用于冲猪舍、鸡舍 (1)处理效果远优于其它处理技术工艺，出水完全达到国家规
等。 定排放标准。传统处理技术理论上可达到养殖行业排放标准，但
在实际运行中不稳定，有技术风险；本组合技术不仅可稳定达到
3 项目运行效果 养殖行业排放标准，而且 COD、BOD、SS 等核心指标还可达到
3.1 项目出水效果 农田灌溉标准及猪舍清粪用水标准，可用于农田灌溉，养殖企业
系统经过 3 个月的调试，中温厌氧池、常温厌氧池、多级生 完全没有超标风险。
化池出水均稳定后，整个工程投入正常运行。个工艺段进出水质 (2)从污染物治理的传统思路到污染物资源化利用的创新，污
指标监测结果如表 2 所示。 废浓度越高反而越有利
传统处理技术通过生化氧化将污染物变成CO 2 ，故鼓风机能
表 2 各工艺段监测结果及处理效果 耗非常大，且存在能源浪费；本组合技术采用高效厌氧产沼将污
Tab.2 Monitoring results and treatment effect 染物转变成沼气能源，不仅能耗低，且污染物转化成能源，提供
给养殖企业使用。
(3)传统处理技术运行复杂昂贵、无资源回收，本组合技术运
行简单便宜，可实现资源回收，且资源收益可使业主在短期内回
收全部投资成本。
(4)传统处理技术排水水质不稳定，本组合技术出水水质好，
可回用于猪舍、鸡舍清粪，实现废水零排放，节省业主用水成本，
树立良好的企业形象，具有良好的经济效益和社会效益。
(5)可完成污染物的废水、固废、废气的综合处理，无需污水、
固废各上处理系统，在同一系统中即可完成处理，且无新的污染
产生。
5 展望
与传统技术相比，中恒温厌氧-多级生化氧化组合技术既能降
低运行成本又能达标排放，遵循减量、无害化、资源化原则，实
现了经济效益、社会效益和环境效益的统一，在畜禽养殖业高速
发展的过程中必将发挥重要的作用。

参考文献
[1]CHEN Q，WANG Y L，ZHAO L，et al.Synchronous start-up of anaerobic
由上表可知，项目出水指标优于《广东省畜禽养殖业污染物 baffled reactor-membrane biofilm bioreactor(ABR-MABR) coupling process
排放标准》要求，COD、BOD 5 、SS等核心指标达到《国家农田 treating synthetic livestock and poultry wastewater[J] . Research of
灌溉水质标准》，且工艺运行稳定可靠，管理方便，效果好。 Environmental Scieces，2017(2)：298-305.
3.2 项目经济效益 [2]JIA H，WU R J，HUANG J，et al.Review and forecast on biology treatment
采用中恒温厌氧-多级生化氧化组合处理工艺协同处置养殖 teconology of intensive livestockwastewater[J] . Technology of Water
污废，使废水、粪便中的有机污染物变废为宝，实现了资源化利 Treatment，2008，34(7)：7-11.
用。 [3]Sanchez E，Borija R，TraviesoL，et al.Effect of influent substrate
(1)污废自身潜在的能源含量 concentration and hydraulic retention time on the performance of down-flow
在厌氧条件下，每消化 1 kg有机质(COD)可产生 0.35 m3沼气， anaerobic fixed bed reactors treating piggery wastewater in a tropical climate
养殖污废中含有大量的有机物，经过充分的厌氧发酵转化为沼气。 [J].Process Biochemistry，2005，40(2)：817-829.
(2)温室气体的减排效益分析 [4]王亮，陈重军，陈英旭，等.规模化猪场养殖废水 UASB-SFSBR-MAP
沼气的主要成分甲烷，其吸热率是二氧化碳的 20 多倍，采用 处理工艺中试研究[J].环境科学，2013，34(3)：979-985.
资源化处理，杜绝了沼气的逸出，可大幅度减少温室气体的排放。 [5]陈蕊，高晓丽，傅学起，等.好氧颗粒污泥膜生物反应器处理畜禽废水
(3)沼渣处理-制成土壤改良剂 [J].中山大学学报(自然科学版)，2007，46(增刊)：185-187.
经过配方加工后，沼渣可制成土壤改良剂，大大减少固废的 [6]王欢，裴伟征，李旭东，等.低碳氮比猪场废水短程硝化反硝化-厌氧
产生，并形成资源化利用。 氨氧化脱氮[J].环境科学，2009，30(3)：815-821.
(4)节省的固废处理费用
正常情况下，养殖固废的处理成本在 400~800 元/吨，本技术 (本文文献格式：蒋铭明，谢红艳.中恒温厌氧-多级生化氧化工
实现养殖固废减量 80 %以上，大大降低了粪便、剩余污泥等固废 艺协同处置养殖污废的研究[J].广东化工，2018，45(12)：1-2)
的处置费用。

(上接第 87 页)
侧重于确保方法在日常使用中能得到较好执行。 November，2004.
基于为预期方法用途而定义的特定 ATP，方法开发与验证的 [2]Sharmista Chatterjee.QBD Considerations for Analytical Methods-FDA
QBD 途径可更灵活地进行所有活动。因为 QBD 途径能被分析方 Perspective.Presentation by Sharmista Chatterjee at IFPAC Annual Meeting，
法的所有用户所采纳，所以，该途径也能提供行业术语标准化的 2013.
可能性，并创建一种相互协调的方法开发与验证途径。 [3]国家食品药品监督管理局(CFDA).中国：药品生产质量管理规范(2010
采用 QBD 进行分析方法开发与验证的设计、确认和持续确 年修订).2011.
证是药品安全、有效和质量可控的充分保证。使用基于科学知识 [4]U.S.Food and Drug Administration，USA，Current Good Manufacturing
与风险评估的 QBD 理念，进行分析方法的设计和确认，可保证 Practice，December，2003.
分析方法的科学性、准确性和可行性，进而通过分析方法的持续 [5]ISPE Baseline Guide.Volume 5-Commissioning and Qualification.First
确证，始终如一地提供高质量的分析数据，可有效控制药品的内 Edition，2001.
在质量，降低药品安全风险。 [6]GB/T 36030-2018，制药机械(设备)在位清洗、灭菌通用技术要求.
QBD 方法用于分析方法开发与验证方面，需经历生命周期管
理“三阶段”的设计、确认和持续确证。实践证明，它是一种科学 (本文文献格式：石诚.基于 QBD 的枸橼酸西地那非清洁残留物的
知识与风险评估有机结合的现代方法。 分析方法开发与验证[J].广东化工，2018，45(12)：86-87)

参考文献
[1]ICH Steering Committee.Pharmaceutical Development.ICH Q8，18

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