MATERIALES Y SUSTANCIAS:

 Peptona de carne.
 Cloruro de Sodio (NaCl).
 Jabón.
 Franela.
 Bensal.
 Algodón
 Torundas para el matraz y los tubos.
 Autoclave.
 6 Pipetas.
 Propipeta.
 6 Tubos de ensayo.
 Gradilla para tubos de ensayo.
 Matraz Erlenmeyer.
 12 Cajas petri.
 Lámpara de alcohol.
 Parrilla.
 Agua destilada.
 Espátula.
 Papel craft.
 Agua residual.
 Probeta de 200ml.
 Báscula.
 Plumón.

PROCEDIMIENTO:

 Para preparar el agar para métodos estándar:

1. Se pesaron 7.05g de agar.
2. Se vació en el matraz Erlenmeyer.
3. Colocamos 300 ml de agua destilada previamente medidos en la probeta.
4. Revolvimos la solución preparada hasta que esta se hiciera homogénea.
5. Colocamos el matraz en la parrilla moviéndolo constantemente hasta que llego
a su punto de ebullición y retiramos del calor.
6. Dejamos enfriar un poco el contenido y colocamos una torunda en la boca del
matraz.
7. Con papel craft hicimos unos “gorritos” que colocamos en la boca del matraz
encima de la torunda.

 Para esterilizar las pipetas:

1. Primero se envolvieron todos las pipetas con el papel craft cómo nos indicó la
profesora.
2. Se preparó la autoclave, primero fue lavada y llenada con agua destilada.
3. Se colocaron las pipetas y los matraces dentro de la autoclave.
4. Dejamos los materiales a una temperatura de 120°C +/- 1°C a una presión de
1.5 a 2 kg/cm2 por un tiempo de 15 min.

 Para la solución isotónica:

1. Se preparó la solución de 8.5g de NaCl y 1g de peptona de carne en un litro de
agua destilada.
2. Agregamos 9ml de la solución en los tubos de ensayo.
 3. Procedimos a tapar los tubos con torundas.

 Para la dilución sucesiva:

1. Tallamos la mesa en que trabajamos con un poco de jabón líquido.
2. Retiramos el exceso de jabón con la franela.
3. Con algodón y un poco de bensal limpiamos la mesa en dirección contraria al
lugar en que trabajamos.
4. Con un plumón etiquetamos los tubos de ensayo(10 -1,10-2,10-3,…) y las cajas
petri ( del 1 al 6 dos veces).
5. Colocamos el agar a baño María para que mantuviera su temperatura.
6. Prendimos la lámpara de alcohol y la colocamos cerca del lugar donde
trabajamos, ya que con ella flameamos la boca de cada tubo que fue utilizado
(antes y después de colocar la solución correspondiente), y cerca de ella se
trabajo con las cajas petri.
7. Con ayuda de una pipeta colocamos 1ml de agua residual en el primer tubo de
ensayo lo movimos para que se integrara bien con la solución isotónica.
8. Con la misma pipeta tomamos 1ml del primer tubo de ensayo y lo colocamos
en el segundo (10-2), lo mezclamos para que fuera una solución homogénea.
9. Proseguimos a tomar 1ml del primer tubo y lo vaciamos a una caja petri(la
etiquetada con el número 1).
10. Volvimos a tomar 1ml del primer tubo y vaciamos a la siguiente caja petri (la
otra etiquetada con el número uno).
11. Cambiamos de pipeta y tomamos 1ml del segundo tubo y lo colocamos en el
tercero (10-3) , mezclamos para formar una solución homogénea.
12. Tomamos 1ml del segundo tubo y lo vaciamos a una caja petri ( la número 2)
13. Volvimos a tomar 1ml del segundo tubo y lo vaciamos a la siguiente caja (la
duplicada del número 2).
14. Repetimos el procedimiento hasta terminar con los tubos de ensayo y las cajas
petri.
15. Tomamos el agar y colocamos de 15 a 20 ml en cada caja petri.
16. Colocamos las cajas en la incubadora.
17. Lavamos los materiales utilizados.

 Para el conteo de colonias: