Chapter III-V PDF

BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan rancangan acak
lengkap untuk mengevaluasi efek diuretik EnHPT, EEAPT dan EEPT pada
penurunan tekanan darah tikus normotensi, penurunan tekanan darah kelompok
tikus hipertensi yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon serta kelompok
yang dinduksi L-Name secara in vivo, peningkatan kontraksi dan denyut jantung
isolat jantung tikus secara in vitro. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium
Farmakologi Fakultas Farmasi USU setelah mendapat persetujuan Komisi Etik
Penelitian Kesehatan yang beralamat di Fakultas MIPA USU.
3.1 Alat dan Bahan
3.1.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah kandang metabolik,
Spektroskopis serapan atom (SSA), oral sonde, lemari pengering, rotary
evaporator, neraca analitis, alat gelas (beaker glass, cawan petri, batang
pengaduk), syringe (Terumo), seperangkat alat pengukur tekanan darah NIBP
(Non invasive blood pressure) (AD Instrument), restainer tikus, lampu
penghangat, microtube, spektofotometer UV-Vis, seperangkat alat Langendorf
(AD Instrumen), seperangkat alat bedah.
3.1.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun puguntano, etanol
(teknis), n-heksan (teknis), etilasetat (teknis), tablet furosemide, saline, aqua
bidestilata, baku natrium, baku kalium, CMC-Na (Merck), gel USG (Ultra
Sonography), tablet metilprednisolon (Dexa Medica), tablet bisoprolol (Dexa
46
Universitas Sumatera Utara

Medica), reagensia kolesterol, reagensia trigliserida, reagensia HDL-Kolesterol,
TCA, asam asetat glasial 15%, asam sulfanilat, N-(1-naftil) etilendiamina
dihidroklorida (NED), NaCl (Merck), KCl (Merck), NaH2PO4(Merck),
NaHCO3(Merck), MgCl2(Merck), CaCl2(Merck), Glukosa (Merck), Digoksin,
Karbogen, Ketamin, DMSO, Heparin.
3.2. Pembuatan Reagensia
3.2.1. Besi (III) Klorida 1%
Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam aquadest sampai 100 ml
(Depkes RI, 1978).
3.2.2 Larutan HCl 2N
Sebanyak 7 ml asam klorida pekat diencerkan dengan aquadest sampai 100 ml
(Depkes RI, 1978).
3.2.3 Timbal (II) asetat 0,4 M
Timbal (II) asetat sebanyak 15,17 g dilarutkan dalam aquadesta bebas CO2
hingga 100 ml (Depkes RI, 1978).
3.2.4 Pereaksi Mayer
Sebanyak 1,4 g raksa (II) klorida, dilarutkan dalam aquadest hingga 60 ml.
Pada wadah lain ditimbang sebanyak 5 g kalium iodide dilarutkan dalam 10 ml
aquadest. Kedua larutan dicampurkan dan ditambahkan aquadest hingga 100 ml
(Depkes RI, 1978).
3.2.5 Pereaksi Molish
Sebanyak 3 g α-naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N secukupnya ,
ditambahkan 2 g iodida dan aquadest hingga 100 ml (Depkes RI, 1978).
47

3.2.6 Pereaksi Dragendorf
Sebanyak 0,8 g bismut nitrat dilarutkan dalam asam nitrat pekat 20 ml
kemudian dicampurkan dengan larutan kalium iodida sebanyak 27,2 g dalam 50
ml aquadest. Campuran didiamkan sampai memisah sempurna. Larutan jernih
diambil dan diencerkan dengan aquadest hingga 100 ml (Depkes RI, 1978).
3.2.7 Larutan Pereaksi Asam Sulfat 2 N
Sebanyak 18 ml asam sulfat pekat diencerkan dengan aquadest hingga 100 ml
(Depkes RI, 1978).
3.2.8 Sudan III
Sebanyak 100 mg sudan III dilarutkan dalam campuran 10 ml etanol (95%)
dan 10 ml gliserol (Depkes RI, 1978).
3.2.9 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida dilarutkan dalam aquadest secukupnya kemudian
ditambahkan 2 g iodida sedikit demi sedikit cukupkan dengan aquadest (Depkes
RI, 1978).
3.2.10 Pembuatan larutan NaCl 2,5% (b/v)
Sebanyak 2,5 gram NaCl dimasukkan ke dalam lumpang, kemudian gerus
homogen. Masukkan sebagian aquadest gerus hingga NaCl larut. Masukkan
larutan ke dalam labu tentukur 100 ml, tambahkan aquadest sampai garis tanda.
3.2.11 Pembuatan suspensi metilprednisolon
Timbang sebanyak 10 mg metilprednisolon yang telah disetarakan dengan
berat tablet. Masukkan ke dalam lumpang kemudian gerus hingga homogen.
Masukkan suspensi ke dalam labu tentukur 10 ml. Tambahkan kembali suspensi
CMC Na sampai garis tanda.
48

3.2.12 Pembuatan suspensi bisoprolol (SB)
Timbang setara 50 mg serbuk bisoprolol. Masukkan serbuk ke dalam
lumpang. Tambahkan perlahan-lahan sebagian suspensi CMC Na 0,5%, gerus
hingga homogen. Masukkan suspensi ke dalam labu tentukur 10 ml. Tambahkan
kembali suspensi CMC Na sampai garis tanda.
3.2.13 Pembuatan Pereaksi TCA 20% b/v
Sebanyak 20 g TCA dicukupkan dengan aquadest hingga 100 ml.
3.2.14 Pembuatan Larutan Asam Asetat 15% v/v
Sebanyak 15 ml asam asetat glasial dicukupkan dengan aquadest hingga 100
ml.
3.2.15 Pembuatan Pereaksi Griess
Pereaksi Griess terdiri dari pereaksi asam sulfanilat 1% dan pereaksi NED
0,1%.
3.2.16 Pembuatan Pereaksi Asam Sulfanilat 1% b/v
Sebanyak 1 g asam sulfanilat dilarutkan ke dalam 100 ml asam asetat 15%.
3.2.17 Pembuatan Pereaksi NED 0,1% b/v
Sebanyak 0,1 g NED dilarutkan ke dalam 100 ml asam asetat glasial 15%v/v.
3.2.1.18 larutan fisiologi krebs-Henseleit
Sebanyak 118 g NaCl; 4.7 g KCl; 1.28 g NaH2PO4; 25.0 g NaHCO3; 1.2 g
MgCl2; 2.52 g CaCl2; 5.55 g glucose dilarutkan dalam 1 L aqua bidestilata hingga
diperoleh larutan dengan pH 7,4 (Gilani, 2006).
3.3 Hewan percobaan
Hewan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Tikus galur Wistar berat
150-200 gram yang diperoleh dari Balitbang Depkes RI. Hewan diaklimatisasi
49

selama seminggu dengan siklus 12 jam gelap/terang pada suhu kamar. Tikus
diberi makanan pellet standar dan air ad libitum.
3.4 Pengumpulan Tumbuhan dan Penyiapan Simplisia Puguntano
Tumbuhan Puguntano diperoleh dari Desa Tiga Binanga, Kabupaten Dairi,
Sumatera Utara. Pengambilan bahan tumbuhan dilakukan dengan teknik sampling
secara random purposif. Identifikasi tumbuhan dilakukan oleh Pusat Penelitian
Biologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Jakarta. Daun Puguntano
dicuci dan dikeringkan hingga menjadi simplisia. Simplisia dihaluskan hingga
menjadi serbuk. Tujuan penyerbukan adalah untuk memudahkan proses
pengekstraksian.
3.5 Pembuatan Fraksi N-Heksan, Etil asetat dan Etanol Puguntano
Pembuatan fraksi puguntano dilakukan dengan cara maserasi bertingkat
(Stepwise maceration) menggunakan pelarut n-heksan, etil asetat dan etanol 96%
(Ditjen POM, 1979). Pengekstrasian dilakukan dengan cara sebagai berikut
sebanyak 800 gram serbuk simplisia direndam dalam pelarut n-heksan selama 5
hari sambil sekali-sekali diaduk, kemudian disaring. Ampasnya dikeringkan
dengan cara mengangin-anginkannya di udara terbuka hingga pelarut n-heksan
menguap, lalu dimaserasi kembali menggunakan pelarut etil asetat. Perlakuan
yang sama dilakukan mengunakan pelarut etanol. Masing-masing maserat
diuapkan pelarutnya dengan evaporator pada suhu ± 40oC, lalu di keringkan
menggunakan freeze dyer sehingga diperoleh ekstrak kental.
3.6 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia dilakukan terhadap simplisia, ekstrak n-heksan, etilasetat
dan etanol daun puguntano. Skrining fitokimia bertujuan untuk mengetahui
50

golongan senyawa kimia yang terkandung dalam simplisia dan ekstrak daun
puguntano. Uji yang dilakukan meliputi skrining terhadap golongan tanin,
glikosida, alkaloid, flavonoid dan saponin (Harborne, 1987; Depkes RI, 1995,
Ghayur, 2007).
3.6.1 Pemeriksaan Alkaloida
Sampel (serbuk simplisia dan ekstrak) ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian
ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml aquadest, dipanaskan di atas
penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh
digunakan untuk uji alkaloida. Caranya: sebanyak 0,5 ml filtrat dimasukan ke
dalam 3 tabung reaksi. Pada masing-masing tabung reaksi ditambahkan 2 tetes
pereaksi Mayer, 2 tetes pereaksi Bouchardat, 2 tetes pereaksi Dragendorff.
Alkaloida dinyatakan positif jika terjadi endapan atau kekeruhkan pada paling
sedikit dua dari tiga percobaan d iatas (Depkes, 1978)
3.6.2 Pemeriksaan Flavonoida
Sebanyak 10 g sampel ditambahkan 10 ml air panas, dididihkan selama 5
menit dan disaring dalam keadaan panas. Ke dalam 5 ml filtrate ditambahkan 0,1
g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alcohol, dikocok
dan dibiarkan memisah. Flavonoida dinyatakan positif jika terjadi warna merah
atau kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol (Fransworth, 1996).
3.6.3 Pemeriksaan Glikosida
Sampel puguntano ditimbang sebanyak 3 g, lalu disari dengan 30 ml
campuran etanol 95% dengan air (7:3) dan 10 ml asam klorida 2 N, direfluks
selama 2 jam, didinginkan dan disaring. Kepada 20 ml filrat ditambahkan 25 ml
aquadest dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan 5 menit lalu
51

disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran isopropanol dan kloroform (2:3).
Pekerjaan ini dilakukan sebanyak 3 kali. Sari air diuapkan pada temperatur tidak
lebih dari 50٥C. Sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sisa digunakan
untuk percobaan berikut: sebanyak 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan kedalam
tabung reaksi dan diuapkan di atas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air
dan 5 tetes pereaksi Molish. Kemudian secara perlahan-lahan ditambahkan 2 ml
asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuknya cicin berwarna ungu pada
batas kedua cairan menunjukkan adanya glikosida (Depkes, 1978).
3.6.4 Pemeriksaan Glikosida Antrakinon
Sampel puguntano ditimbang sebanyak 0,2 g, kemudian ditambahkan 5 ml
asam sulfat 2 N, dipanaskan sebentar, setelah dingin ditambahkan 10 ml benzena,
dikocok dan didiamkan. Lapisan benzena dipisahkan dan disaring, lapisan
benzena dikocok dengan 2 ml NaOH 2 N, lalu didiamkan. Lapisan air berwarna
merah dan lapisan benzena tidak berwarna menunjukan adanya glikosida
antrakinon (Depkes, 1978).
3.6.5 Pemeriksaan Saponin
Sampel puguntano ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukan ke dalam tabung
reaksi, lalu ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan dan kemudian dikocok
kuat-kuat selama 10 detik. Jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak
kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2
N menunjukan adanya senyawa golongan saponin (Uji busa) (Depkes, 1978).
3.6.6 Pemeriksaan tanin
Sampel ditimbang sebanyak 1 g, dididihkan selama 3 menit dalam 100 ml
aquadest lalu didinginkan dan disaring. Kepada filtrat ditambahkan 1- 2 tetes
52

peraksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru kehitam atau hijau kehitaman
menunjukan adanyasenyawa golongan tanin (Depkes, 1978).
3.6.7 Pemeriksaan triterpenoida/steroida
Sampel puguntano ditimbang sebanyak 1 g, dimaserasi dengan 20 ml n-
heksana 2 jam, disaring, filtrat diuapkan dalam cawan penguap, dan pada sisanya
ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard. Apabila terbentuk warna ungu atau
merah yang berubah menjadi biru ungu atau biru hijau menunjukan adanya
senyawa golongan tripenioda/steroida (Harborne, 1987).
3.7 Uji Diuretik Fraksi Daun Puguntano
3.7.1 Uji Peningkatan Volume Urin (Diuresis) Tikus
Uji dilakukan untuk mengetahui efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap
peningkatan volume urin (diuresis) dan kadar eletrolit tikus. Sebanyak 56 ekor
tikus dibagi atas empatbelas kelompok, masing-masing kelompok terdiri dari 4
tikus. Seluruh tikus diberi saline sebanyak 20mL/kg bb sebelum perlakuan
sebagai loading dose. Kelompok pertama diberi Na CMC 0,5% secara oral
(kontrol negatif). Kelompok kedua diberi furosemide 10 mg/kg bb secara oral.
Kelompok 3, 4, 5, 6, 7 dan 8 diberikan secara peroral fraksi n-heksan, etilasetat
dan etanol puguntano dengan dosis bervariasi. Setelah pemberian obat dan
ekstrak, tikus diletakkan dalam kandang metabolik dan urinnya dikumpulkan
dalam vial kemudian diukur voleme urin tersebut selama 6 jam. Total urin yang
diekskresikan dikumpulkan dan dihitung volume total urin. Konsentrasi elektrolit
natrium dan kalium ditentukan menggunakan alat spektroskopis serapan atom
(AAS) (Gilani, 2008). Selanjutnya ditentukan indeks diuretik, Nilai Lipschitz,
indek sailuretik dan rasio Na+/K+ berdasarkan rumus:
53

Indeks Diuretic = (UVt/UVc)
Nilai Lipschitz = (UVt/UVr)
Indeks Saliuretic = (CUEt/CUEc)
Rasio Na+ /K+ = (UNa+ /UK+ )
Keterangan : UVt = rata-rata volume urin kelompok perlakuan, UVc = rata-rata
volume urin kelompok kontrol, UVr = rata-rata volume urin kelompok kontrol
positif, CUEt = Konsentarsi elektrolit urin kelompok perlakuan, CUEc =
konsentrasi elektrolit urin kelompok kontrol, UNa+ = konsentarsi Na+ tiap
kelompok dan UK+ = konsentrasi K+ tiap kelompok (Asi et.al, 2014).
3.7.2 Uji Efek Ekstrak Daun Puguntano Terhadap Elektrolit Urin Tikus
3.7.2.1 Pembuatan Kurva Kalibrasi Kalium
Larutan baku kalium (konsentrasi 1000 µg/ml) dipipet sebanyak 1 ml,
dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml dan dicukupkan hingga garis tanda
dengan akuabides (konsentrasi 10 µg/ml).
Larutan untuk kurva kalibrasi kalium dibuat dengan memipet (2,5; 5; 10; 15;
dan 20) ml dari larutan baku 10 µg/ml, masing-masing dimasukkan ke dalam labu
tentukur 50 ml dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides larutan ini
mengandung (0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0) µg/ml dan diukur absorbansinya pada
panjang gelombang 766,5 nm dengan nyala udara-asetilen.
3.7.2.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Natrium
Larutan baku natrium (konsentrasi 1000 µg/ml) dipipet sebanyak 1 ml,
dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml dan dicukupkan hingga garis tanda
dengan akuabides (konsentrasi 10 µg/ml). Larutan induk baku II dibuat dengan
memipet larutan 10 µg/ml sebanyak 25 ml dimasukkan ke dalam labu tentukur
54

100 ml dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides (konsentrasi 2,5
µg/ml). Larutan untuk kurva kalibrasi natrium dibuat dengan memipet (4,0; 8,0;
12; 16; 20) ml dari larutan baku 2,5 µg/ml (LIB), masing-masing dimasukkan ke
dalam labu tentukur 50 ml dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides
(larutan ini mengandung (0,20; 0,40; 0,60; 0,80; 1,00)) µg/ml dan diukur
absorbansinya pada panjang gelombang 589,0 nm dengan nyala udara asetilen.
3.7.2.3 Penentuan Kadar Natrium dan Kalium dengan Spektrofotometri

Serapan Atom
Sebanyak 1 ml urin dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml kemudian
dicukupkan dengan akuades sampai 50 ml. Isi labu tentukur dipindahkan ke dalam
labu erlemeyer dan ditambahkan 5 ml HNO3 pekat dan beberapa butir batu didih.
Campuran dididihkan secara perlahan-lahan kemudian diuapkan dengan hotplate
hingga volume urin total tinggal 20 ml, saring. Filtrat dimasukkan ke dalam labu
tentukur 100 ml dicukupkan dengan akuades sampai garis tanda. Faktor
pengenceran untuk penentuan kadar natrium pada urin adalah 25 kali, faktor
pengenceran untuk penentuan kadar kalium pada urin adalah 12,5 kali.
Selanjutnya diukur menggunakan alat SSA (SNI, 2004).
3.8 Uji Toksisitas Akut
Uji dilakukan untuk mengetahui tingkat keamanan dari fraksi n-heksan, etil
asetat dan etanol puguntano. Uji toksisitas akut dilakukan menggunakan 35 ekor
mencit jantan. Mencit dibagi atas 7 kelompok perlakuan, tiap kelompok terdiri
dari 5 ekor mencit. Mencit dipuasakan selama 12 jam sebelum perlakuan,
kemudian diberi fraksi puguntano dosis 2000 - 5000 mg/kg bb secara oral.
Parameter yang diamati selama uji toksisitas antara lain jumlah makanan, berat
badan, berat organ, makroskopik dan hitopatologi organ (POM, 2000).
55

3.8.1 Pemeriksaan Histopatologi Organ Mencit
Pemeriksaan histopatologi organ mencit dilakukan berdasarkan pewarnaan
Haematoxyllin-Eosin dengan tahapan sebagai berikut:
a. Penyiapan organ hati untuk dipotong
Jaringan difiksasi dalam larutan Buffer Netral Formalin (BNF) 10% minimal
48 jam hingga mengeras. Sampel ditrimming setebal ± 0,5 cm. Potongan
kemudian dimasukkan dalam tissue cassette untuk dimasukkan dalam
automatic tissue processor.
b. Dehidrasi
Proses dehidrasi dimaksudkan untuk menarik air dari jaringan dan mencegah
terjadinya pengerutan sampel yang akan diuji. Dehidrasi dilakukan dengan
cara merendam sampel dalam larutan alkohol dengan konsentrasi bertingkat
(70%, 80%, 90%, 95%, dan alkohol absolut). Proses perendaman masing-
masing konsentrasi alkohol dilakukan selama 2 jam. Proses dehidrasi
dilakukan dengan menggunakan mesin otomatis.
c. Clearing
Proses clearing atau penjernihan dilakukan dengan 2 tahap dengan
menggunakan xylol I dan xylol II. Penggunaan xylol dimaksudkan untuk
melarutkan alkohol dan parafin.
d. Infiltrasi
Infiltrasi dan impregnasi adalah proses pengisian parafin kedalam pori-pori
jaringan. Pengisian pori-pori ini dimaksudkan untuk mengeraskan jaringan
agar mudah dipotong dengan pisau mikrotom. Parafin yang digunakan adalah
parafin histoplast®.
56

e. Embedding dan Blocking
Embedding atau blocking adalah proses penanaman jaringan dalam blok
parafin. Parafin yang digunakan parafin histoplast. Proses embedding
dilakukan dengan menggunakan alat tissue embedding console .
f. Sectioning
Sectioning adalah proses pemotongan jaringan dengan menggunakan
mikrotom dengan ketebalan 2-3 µm di dalam waterbath, agar parafin mencair
dari dalam organ yang telah dipotong, kemudian organ diambil menggunakan
object glass dan disimpan dalam inkubator dengan suhu 37oC selama 24 jam.
g. Pewarnaan Haematoxyllin-Eosin
Sebelum melakukan pewarnaan, preparat histopatologi dideparafinisasi
dengan larutan xylol (I dan II) selama 2 menit. Kemudian dilakukan proses
rehidrasi dengan cara mencelupkan sediaan ke dalam alkohol bertingkat
(alkohol absolut, alkohol 95%, alkohol 90%, alkohol 80%). Perendaman
dalam alkohol 95% dan 80% dilakukan selama 1 menit. Kemudian sediaan
dicuci dengan air yang mengalir (air kran) selama 1 menit. Sediaan diwarnai
dengan pewarna Mayer’s Haematoxyllin dengan tahapan sebagai berikut :
i. preparat direndam dalam larutan Mayer’s Haematoxyllin selama 8 menit
ii. dicuci dengan air mengalir (air kran) selama 30 detik
iii. dicelupkan ke dalam larutan Lithium Carbonat selama 15-30 detik
iv. dicuci dengan air mengalir (air kran) selama 2 menit
v. direndam dalam larutan Eosin selama 2-3 menit
vi. dicuci dengan air mengalir (air kran) selama 30-60 detik
vii. preparat dicelupkan ke dalam larutan alkohol 95% dan alkohol absolut
57

viii. sebanyak 10 kali celupan, absolut I selama 2 menit, xylol I selama 1 menit
dan xylol II selama 2 menit
ix. Setelah pewarnaan, sediaan ditetesi perekat Canada balsem (Entellan®)
dan ditutup dengan cover glass.
x. Diamati dengan menggunakan mikroskop cahaya.
3.9 Pengukuran TD Tikus Wistar dengan Alat NIBP
Program Labchart dibuka pada komputer yang telah terhubung dengan alat
NIBP, atur parameter yang akan diukur dengan cara klik channel settings lalu
sesuaikan dengan jumlah parameter yang ingin diukur. Channel 1 menyatakan
pulse yaitu denyut listrik TD tikus, channel 2 menyatakan pressure yaitu pump
controller alat NIBP dan channel 3 menyatakan denyut jantung tikus. Kalibrasi
alat NIBP dengan cara menekan tombol start pada ujung taskbar lalu tekan
tombol pump controller pada alat. Tekanan akan mulai meningkat sampai 300
mmHg pada spighnomanometer. Tekan stop pada ujung taskbar jika tekanan
sudah turun sampai 100 mmHg. Tikus yang akan diukur dimasukkan ke dalam
restrainer, dioleskan gel USG pada ekor tikus. Lalu letakkan sensor NIBP dan
pump detektor pada ekor tikus. Tunggu pulse tikus stabil lalu tekan kembali pump
controller. TDS dan TDD dapat dilihat pada channel 1 dan DJ pada channel 3
Perangkat alat NIBP yang digunakan dalam penelitian ini dapat dilihat pada
Lampiran 20.
3.9.1 Pengujian efek penurunan TD tikus normotensi
Sebanyak 28 ekor tikus Wistar jantan dibagi menjadi 7 kelompok dosis.. Tiap
kelompok terdiri dari 4 ekor tikus jantan. Hewan dikelompokkan sebagai berikut:
Kelompok I, diberi sediaan suspensi CMC Na 0,5% (b/v)
58

Kelompok II, diberi sediaan suspensi EnHPT 400 mg/kg BB
Kelompok III, diberi sediaan suspensi EnHPT 800 mg/kg BB
Kelompok IV , diberi sediaan suspensi EEAPT 400 mg/kg BB
Kelompok V : diberi sediaan suspensi EEAPT 800 mg/kg BB
Kelompok VI : diberi sediaan suspensi EEPT 400 mg/kg BB
Kelompok VII : diberi sediaan suspensi EEPT 800 mg/kg BB
Sebelum diberi perlakuan, TD awal tiap kelompok terlebih dahulu diukur
menggunakan NIBP melalui vena ekor. Tiap kelompok diberi perlakuan secara
oral selama 14 hari. TD diukur kembali pada hari ke 7 dan 14. Dari hasil
perlakuan akan diperoleh data TDS, TDD, DJ, dan TAR. TDS, TDD, dan DJ
dapat langsung diperoleh dari hasil pengukuran alat sedangkan nilai TAR dihitung
dengan menggunakan rumus (Shapiro, 2010)
2TDD + TDS
TAR =
3
Setelah diperoleh TDS, TDD, DJ, dan TAR kemudian dihitung persentase
penurunan TD tikus normotensi menggunakan rumus (Siska, et al., 2012)
% penurunan TD hari X=
3.9.2 Pengujian efek penurunan TD tikus hipertensi yang diinduksi NaCl

2,5% dan metilprednisolon
Sebanyak 36 ekor tikus jantan Wistar diukur TD awalnya dengan alat NIBP
melalui vena ekor, kemudian diinduksi dengan larutan NaCl 2,5% dan suspensi
metilprednisolon 1,5 mg/kg BB setiap hari selama 14 hari . Lalu diukur kembali
TDnya pada hari ke-14. Dihitung persentase kenaikan TD dengan menggunakan
rumus (Vogel, 2008; Siska, et al., 2011)
59

% kenaikan TD hari X =
Tikus jantan Wistar hipertensi yang telah diinduksi selama 14 hari dibagi menjadi
9 kelompok dosis. Tiap kelompok terdiri dari 4 ekor tikus jantan. Hewan
dikelompokkan sebagai berikut:
Kelompok I, tidak diberikan apapun tetapi diinduksi
Kelompok II, diberi sediaan suspensi CMC Na 0,5% (b/v)
Kelompok III , diberi sediaan suspensi bisoprolol 0,0714 mg/kg BB
Kelompok IV, diberi sediaan suspensi EnHPT 400 mg/kg BB
Kelompok V, diberi sediaan suspensi EnHPT 800 mg/kg BB
Kelompok VI , diberi sediaan suspensi EEAPT 400 mg/kg BB
Kelompok VII , diberi sediaan suspensi EEAPT 800 mg/kg BB
Kelompok VIII, diberi sediaan suspensi EEPT 400 mg/kg BB
Kelompok IX , diberi sediaan suspensi EEPT 800 mg/kg BB
Ekstrak diberikan secara oral setiap hari mulai hari ke 15 sampai hari ke-21. TD
diukur kembali pada hari ke-17, 19 dan ke-21. Parameter yang diukur meliputi
TDS, TDD, DJ, dan TAR. Lalu dihitung persentase penurunan TD
3.9.3 Pengujian efek penurunan TD tikus hipertensi yang diinduksi L-Name
Sebanyak 20 ekor tikus jantan Wistar diukur TD awalnya dengan alat NIBP
melalui vena ekor, kemudian diinduksi dengan L-Name 75 mg/kg BB. TD diukur
kembali pada hari ke-14. Dihitung persentase kenaikan TD dengan menggunakan
rumus (Vogel, 2008; Siska, et al., 2011)
% kenaikan TD hari X =
60

Tikus jantan Wistar hipertensi yang telah diinduksi selama 14 hari dibagi menjadi
5 kelompok. Tiap kelompok terdiri dari 4 ekor tikus jantan. Hewan
dikelompokkan sebagai berikut:
Kelompok I, diberi sediaan suspensi CMC Na 0,5% (b/v)
Kelompok II, diberi sediaan suspensi EnHPT 400 mg/kg BB
Kelompok III , diberi sediaan suspensi EnHPT 800 mg/kg BB
Kelompok IV , diberi sediaan suspensi EEAPT 400 mg/kg BB
Kelompok V, diberi sediaan suspensi EEAPT 800 mg/kg BB
Ekstrak diberikan secara oral mulai heri ke 15 sampai hari ke-21. TD diukur
kembali pada hari ke-17, 19 dan ke-21. Parameter yang diukur meliputi TDS,
TDD, DJ, dan TAR. Lalu dihitung persentase penurunan TD
3.10 Pengukuran Parameter Biokimia Darah
Pengukur parameter biokimia darah bertujuan untuk mengetahui efek fraksi
aktif terhadap kadar kolesterol total, trigliserida, HDL, LDL, ALT, AST, Ureum
dan kreatinin tikus hipertensi yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon
serta yang diinduksi L-Name setelah 7 hari pemberian fraksi.
3.10.1 Pengukuran Kadar Kolesterol Total
Kadar kolesterol ditetapkan dengan metode kolorimetri enzimatik (metode
CHOD-PAP) dengan kolesterol esterase, kolesterol oksidase, dan peroksidase
sebagai katalis indikator reaksi (Tabel 3.1).
Prinsip:
Kolesterol ester + H2O kolesterol esterase kolesterol + asam lemak
Kolesterol + O2 kolesterol oksidase kolesten- 3- on + H2O2
2 H2O2 + 4- aminoantipirin + fenol peroksidase kuinonimin + 4H2O
61

Tabel 3.1 Jumlah sampel, standar, dan reagensia kolesterol yang dibutuhkan
dalam pengukuran kadar kolesterol total
Blanko (µl) Standar (µl) Sampel (µl)

Aquabidest 10 - -
Standar - 10 -
Sampel - - 10
Reagensia kolesterol 1000 1000 1000
Serum darah dipipet dengan pipet mikro sebanyak 10 µl, dimasukkan ke
dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan larutan reagensia kolesterol
sebanyak 1000 µl, lalu dihomogenkan menggunakan vortex, dan diinkubasi pada
suhu 37ºC selama 10 menit. Diukur serapan pada panjang gelombang 546 nm
selama 60 menit. Sebagai blanko digunakan larutan reagensia kolesterol 1000 µl
dan aquabidest 10 µl. Pengukuran serapan standar sama dengan pengukuran
serapan kolesterol total, tetapi serum darah diganti dengan standar kolesterol.
Kadar kolesterol total diperoleh dengan menggunakan rumus:
C kolesterol total = x C st
Dimana: C= Kadar Kolesterol total (mg/dl),
A = Serapan,
Cst = Kadar kolesterol standar (200 mg/dl)
3.10.2 Pengukuran Kadar Trigliserida
Kadar trigliserida ditetapkan dengan metode kolorimetri enzimatik (metode
GPO-PAP) menggunakan gliserol-3-fosfat oksidase (GPO) (Tabel 3.2).
Prinsip:
Trigliserida lipase gliserol + asam lemak
62

Gliserol + ATP gliserol kinase gliserol -3- fosfat + ADP
Gliserol -3- fosfat + O2 GPO dihidroksiaseton + fosfat + H2O2
2 H2O2 + 4- aminoantipirin + 4- klorofenol peroksidase kuinonimin + HCl + 4
H2 O
Tabel 3.2 Jumlah sampel, standar dan reagensia trigliserida yang dibutuhkan
dalam pengukuran kadar trigliserida

Standar - 10 -
Sampel - - 10
Reagensia trigliserida 1000 1000 1000
Serum darah dipipet dengan pipet mikro sebanyak 10 µl, dimasukkan ke
dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan larutan reagensia trigliserida
sebanyak 1000 µl. Larutan dihomogenkan menggunakan vortex, dan diinkubasi
pada suhu 37ºC selama 10 menit. Diukur serapan pada panjang gelombang 546
nm selama 60 menit. Pengukuran serapan standar dilakukan dengan cara yang
sama dengan pengukuran serapan sampel. Kadar trigliserida diperoleh dengan
menggunakan rumus:
C trigliserida = x C st
Dimana: C = Kadar trigliserida (mg/dl)
A = Serapan
Cst = Kadar trigliserida standar (200 mg/dl)
3.10.3 Pengukuran Kadar Kolesterol HDL (High Density Lipoprotein)
Kadar kolesterol HDL diukur setelah HDL diendapkan menggunakan reagen
pengendapan kolesterol HDL (Tabel 3.3).
63

Tabel 3.3 Prosedur presipitasi HDL
Prosedur Presipitasi
Sampel/ standar 200 µl
Reagensia pengendapan 500 µl
Serum darah dipipet dengan pipet mikro sebanyak 200 µl lalu ditambahkan
500 µl larutan reagensia pengendap kolesterol-HDL, dikocok, dan dibiarkan
selama 10 menit pada suhu 25ºC. Kemudian disentrifuge selama 20 menit dengan
kecepatan 4000 rpm. Kadar kolesterol HDL ditetapkan dengan metode
kolorimetri enzimatik dengan menggunakan reagensia kolesterol (Tabel 3.4).
Tabel 3.4 Jumlah sampel, standar, dan reagensia kolesterol yang dibutuhkan
dalam pengukuran kadar HDL

Aquabidest 100 - -
Standar - 100
Sampel - 100 -
Reagensia kolesterol 1000 1000 1000
Diambil 10 µl supernatan, dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian
ditambahkan larutan reagensia kolesterol sebanyak 1000 µl, dan dihomogenkan
menggunakan vortex. Setelah itu diinkubasi pada suhu 37ºC selama 10 menit.
Serapan diukur pada panjang gelombang 546 nm selama 60 menit.
Kadar kolesterol-HDL diperoleh dengan menggunakan rumus:
C kolesterol-HDL = x C st
Dimana: C = Kadar Kolesterol-HDL (mg/dl)
A = Serapan
Cst = Kadar kolesterol standar (200 mg/dl)
3..10.4 Pengukuran Kadar Kolesterol LDL (Low Density Lipoprotein)
Kadar LDL dapat ditetapkan secara tidak langsung dengan menggunakan
rumus Friedewald:
64

LDL (mg/dl) = kolesterol total – trigliserida – kolesterol HDL
3.11 Pengukuran Kadar Nitrit dan Nitrat Pada Plasma
Penyiapan plasma darah tikus dilakukan untuk mengukur kadar nitrit dan nitrat
tikus hipertensi yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon serta diberi
fraksi n-heksan dan tikus hipertensi yang diinduksi L-Name serta diberi fraksi etil
asetat. Diambil 1,5 ml cuplikan darah dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge.
Ditambahkan 1,5 ml TCA 20% kemudian divortex dan disentrifugasi dengan
kecepatan 4000 rpm selama 10 menit. Diambil supernatan, dimasukkan ke dalam
vial, dan disimpan dalam lemari pembeku.
3.11.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Nitrit
Serbuk natrium nitrit dikeringkan pada suhu 110°C selama satu jam,
kemudian didinginkan dalam desikator. Ditimbang 100 mg natrium nitrit yang
telah dikeringkan dan didinginkan, kemudian dipindahkan dalam labu tentukur
100 ml secara kuantitatif dan dilarutkan dengan aquadest, lalu dicukupkan
volumenya sampai garis tanda (C = 1000,0 µg/ml) (larutan induk baku I = LIB
I). Dipipet 1 ml LIB I di atas dan dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml lalu
diencerkan dengan aquadest sampai garis tanda (C = 10,0 µg/ml) (LIB II).
3.11.2 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Nitrit Baku
Dipipet 4 ml LIB II dan dimasukkan dalam labu tentukur 50 ml, ditambahkan
2,5 ml pereaksi asam sulfanilat 1% b/v dan dikocok. Setelah 5 menit,
ditambahkan 2,5 ml pereaksi NED 0,1% b/v dan dicukupkan dengan aquadest
sampai garis tanda kemudian dihomogenkan. Diukur serapan pada panjang
gelombang 400-800 nm dengan blanko aquadest (C = 0,8 µg/ml).
65

3.11.3 Penentuan Waktu Kerja Nitrit Baku
Dipipet 4 ml LIB II dan dimasukkan dalam labu tentukur 50 ml, ditambahkan
2,5 ml pereaksi asam sulfanilat 1% b/v dan dikocok. Setelah 5 menit,
ditambahkan 2,5 ml pereaksi NED 0,1% b/v dan dicukupkan denganaquadest
sampai garis tanda kemudian dihomogenkan. Diukur serapan pada panjang
gelombang maksimum 540 nm dalam selang waktu 1 menit selama 60 menit.
3.11.4 Penentuan Kurva Kalibrasi Nitrit Baku
LIB II (C = 10,0 µg/ml), dipipet masing-masing sebanyak 0,25; 0,5; 0,75; 1;
2; 3; 4; 5 dan 6 ml (0,05 µg/ml; 0,1 µg/ml; 0,15 µg/ml; 0,2 µg/ml; 0,4 µg/ml; 0,6
µg/ml; 0,8 µg/ml; 1,0 µg/ml; 1,2 µg/ml). Masing-masing larutan dimasukkan ke
dalam labu tentukur 50 ml. Ditambahkan 2,5 ml pereaksi asam sulfanilat 1% b/v
pada setiap labu tentukur kemudian dikocok. Setelah 5 menit, ditambahkan 2,5 ml
pereaksi NED 0,1% b/v, dikocok dan diencerkan sampai garis tanda dengan
aquadest dan dihomogenkan. Diukur serapan setelah menit ke-12 pada panjang
gelombang maksimum 540 nm.
3.11.5 Pengukuran Kadar Nitrit dalam Plasma
Sebanyak 1 ml plasma dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml.
Ditambahkan 2,5 ml pereaksi asam sulfanilat 1% b/v. Setelah 5 menit,
ditambahkan 2,5 ml pereaksi NED 0,1% b/v, dikocok dan diencerkan sampai garis
tanda dengan aquadest dan dihomogenkan. Diukur serapan setelah menit ke-12
pada panjang gelombang maksimum 540 nm.
3.11.6 Pengukuran Kadar Nitrat dalam Plasma
Sebanyak 1 ml plasma dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml.
Ditambahkan 10 mg serbuk Zn. Setelah 10 menit, ditambahkan 2,5 ml pereaksi
66

asam sulfanilat 1% b/v kemudian dikocok. Setelah 5 menit, ditambahkan 2,5 ml
pereaksi NED 0,1% b/v, dikocok dan diencerkan sampai garis tanda dengan
aquadest. Diukur serapan setelah menit ke-12 pada panjang gelombang
maksimum 540 nm.
3.12 Uji Efek Fraksi Puguntano Terhadap Kontraktilitas dan Denyut Isolat
JantungTikus
Uji ini dilakukan untuk mengetahui efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap
kontraksi dan denyut isolat otot jantung tikus. Tikus dianestesi terlebih dahulu
dengan ketamin dosis 10 mg/Kg bb dan heparin dosis 5000 UI/ kg bbsecara
intraperitoneal. Tikus dibedah dan dengan cepat dada dibuka untuk melepaskan
jantung dari aorta. Jantung tikus yang telah diisolasi dan diletakkan dalam
petridish yang berisi larutan fisiologi krebs-Henseleit dingin (NaCl, 118; KCl, 4.7;
NaH2PO4, 1.28; NaHCO3, 25.0; MgCl2, 1.2; CaCl2, 2.52; glucose, 5.55; pH 7,4)
dan dialiri carbogen (campuran 95% O2 + 5% CO2). Jantung dibersihkan dari
bagian lemak dan perikardium. Setelah bersih, jantung diletakan dalam alat
Langendorff yang berisi larutan Krebs-Henseleit dan tetap dialiri dengan
carbogen. Bagian ventrikel jantung disambungkan dengan transduser yang akan
merekam pergerakan dari otot jantung. Setelah dicapai kondisi stabil (15 menit),
isolat jantung diberikan fraksi n-heksan, etil asetat dan etanol daun Puguntanoh
dan dilihat efek kontraksi dan denyut yang terjadi pada jantung melalui rekaman
yang disampaikan oleh transduser (Kamadyapa, 2009; Niazmand and Saberi,
2010). Perlakuan diulang sebanyak 3 (tiga kali). Perubahan kontraktilitas jantung
ditentukan menggunakan rumus = (B-A) dimana A merupakan kontraktilitas otot
jantung sebelum diberi ekstrak sedangkan B merupakan kontraktilitas otot jantung
setelah diberi ekstrak (Janardan, et.al. 2011).
67

3. 13 Analisis Statistik
Data hasil penelitian dianalisis menggunakan program SPSS 17. Data TD
sebelum dan sesudah perlakuan dianalisis menggunakan paired t-test sedangkan
data perbedaan rerata antar kelompok dianalisis menggunakan uji ANAVA Jika
terdapat perbedaan, dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tuckey dengan tingkat
kepercayaan 95%.
68

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Tumbuhan yang telah diidentifikasi di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia
(Indonesian Institute of Science) Pusat Penelitian Biologi (Research Center for
Biology), Bogor adalah Picria felterrae. Lour, famili Scrophulariaceae
(Lampiran 1).
4.2 Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak
Karakterisasi simplisia daun dan fraksi merupakan bagian dari standarisasi
mutu simplisia dan fraksi terhadap persyaratan sebagai bahan obat dan menjadi
penetapan nilai untuk berbagai parameter mutu produk. Parameter standarisasi
meliputi uji makroskopik, mikroskopik, kadar air, kadar sari larut dalam air, kadar
sari larut dalam etanol, kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam (Ditjen
POM, 2000).
Pemeriksaan makroskopik bertujuan untuk mengetahui ciri-ciri fisik simplisia
suatu tumbuhan seperti bentuk, ukuran, bau dan rasa yang berguna untuk
pemastian kebenaran suatu simplisia. Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia
daun puguntano diperoleh daun berwarna hijau muda sampai hijau tua, berbentuk
bulat telur, tepi daun beringgit, ukuran daun ±2x4 cm, dengan tekstur permukaan
daun yang kasar, berkerut-kerut dan berbulu halus (Lampiran 2).
Pemeriksaan mikroskopik bertujuan untuk mengetahui struktur anatomi suatu
simplisia tumbuhan. Hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia secara
mikroskopik terlihat adanya fragmen pengenal berupa trichoma, berkas pembuluh,
kristal kalsium oksalat dan stomata tipe diasitik dan anomositik (Lampiran 3).
69

Hasil pemeriksaan kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol, kadar
abu total dan kadar abu yang tidak larut asam pada serbuk simplisia dan ekstrak
n-heksan (EnHPT), etil asetat (EEAPT) dan etanol daun puguntano (EEPT)
terlihat pada Tabel 4.1 dan Lampiran 4
Tabel 4.1 Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia dan fraksi daun puguntano
(Picria felterrae. Lour.)
Uraian Simplisia Fraksi (%)

No
(%) n-Heksan Etil asetat Etanol
Kadar air 5,99 4,77 4,92 7,89
1
Kadar sari yang larut 26,36 0,68 13,94 65,05
2 air
Kadar sari yang larut 16,19 2,58 60,59 83,41

3 etanol
Kadar abu total 4,49 0,53 0,57 1,85

4
Kadar abu yang tidak 0,55 0,09 0,12 0,30
5
larut asam
Pembuatan simplisia dilakukan dengan proses pengeringan untuk
mendapatkan simplisia yang tidak mudah rusak sehingga dapat disimpan dalam
jangka waktu yang lama. Penurunan mutu atau kerusakan simplisia dapat dicegah
dengan mengurangi kadar air untuk menghentikan reaksi enzimatik. Reaksi
enzimatik tidak berlangsung lagi jika kadar air dalam simplisia kurang dari 10%.
Selain itu, penetapan kadar air dilakukan untuk memberikan batasan maksimal
kandungan air yang masih dapat ditolerir di dalam simplisia dan ekstrak. Hal ini
bertujuan untuk standardisasi (pengawasan mutu) dan berkaitan dengan penentuan
dosis pemakaian. Hasil penetapan kadar air simplisia, EnHPT, EEAPT dan EEPT
berturut-turut adalah 5,99%; 4,77%; 4,92 dan 7,89%. Berdasarkan ketentuan
standarisasi kadar air simplisia dan ekstrak kental secara umum memenuhi
persyaratan yaitu tidak melebihi 10% untuk simplisia dan kurang dari 30% untuk
70

ekstrak (Voigt, 1994). Kadar air yang tinggi pada simplisia dan ekstrak
menyebabkan ketidakstabilan sediaan obat karena air merupakan media
pertumbuhan bagi bakteri, jamur dan serangga. Hal ini mengakibatkan bahan aktif
yang terkandung didalamnya dapat terurai (Trease dan Evans, 1983; WHO, 1992).
Penetapan kadar sari dilakukan menggunakan dua pelarut, yaitu air dan etanol.
Penetapan kadar sari larut air adalah untuk mengetahui kadar senyawa kimia
bersifat polar yang terkandung di dalam simplisia, sedangkan kadar sari larut
dalam etanol dilakukan untuk mengetahui kadar senyawa larut dalam etanol, baik
senyawa polar maupun non polar. Kadar sari larut air diperoleh sebesar 26,36%;
0,68%; 13,94%; 65,05% dan senyawa larut etanol sebesar 16,19%; 2,58%;
60,59%; 83,41% (Tabel 4.1).
Penetapan kadar abu dimaksudkan untuk mengetahui kandungan mineral
internal (abu fisiologis) yang berasal dari jaringan tanaman itu sendiri, dan
eksternal (abu non-fisiologis) yang merupakan residu dari luar seperti pasir dan
tanah yang terdapat di dalam sampel (Ditjen POM 2000; WHO, 1992). Kadar abu
tidak larut asam untuk menunjukkan jumlah silikat, khususnya pasir yang ada
pada simplisia dengan cara melarutkan abu total dalam asam klorida (WHO,
1992). Hasil penetapan kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam dari serbuk
simplisia, EnHPT, EEAPT dan EEPT berturut-turut adalah 4,49%; 0,53%; 0,57%;
1,85% dan 0,55%; 0,09%; 0,12%; 0,30%. Kadar logam berat yang tinggi dapat
membahayakan kesehatan, oleh sebab itu perlu dilakukan penetapan kadar abu
total dan kadar abu tidak larut asam untuk memberikan jaminan bahwa ekstrak
tidak mengandung logam berat tertentu melebihi nilai yang ditetapkan karena
berbahaya (toksik) bagi kesehatan.
71

4.3 Hasil Skrining Fitokimia Simplisia dan Fraksi
Skrining fitokimia terhadap serbuk simplisia, EnHPT, EEAPT dan EEPT
dilakukan untuk mendapatkan informasi golongan senyawa metabolit sekunder
yang terdapat di dalamnya. Pemeriksaan dilakukan terhadap simplisia, EnHPT,
EEAPT dan EEPT adalah pemeriksaan golongan senyawa alkaloid, flavonoid,
steroid/triterpenoid, tanin, saponin, dan glikosida.
Hasil skrining menunjukan bahwa serbuk simplisia daun puguntano
mengandung senyawa golongan flavonoid, glikosida, saponin, tanin, dan
steroid/triterpenoid. EnHPT mengandung senyawa golongan steroid/triterpenoid.
EEAPT mengandung senyawa golongan flavonoid, glikosida, saponin dan tanin,
sedangkan EEPT mengandung senyawa golongan glikosida dan saponin (Tabel
4.2).
Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia, EnHPT, EEAPT dan EEPT
Simplisia Fraksi
No Skrining
n-heksan Etil asetat Etanol
1 Alkaloid - - - -
2 Flavonoid + - + -
3 Glikosida + - + +
4 Saponin + - + +
5 Antrakuinon - - - -
glikosida
6 Tanin + - + -
7 Triterpenoid/Steroid + + - -
Keterangan : (+) = mengandung golongan senyawa,

(-) = tidak mengandung golongan senyawa
4.4 Efek Diuretik Fraksi n-Heksan, Etilasetat, dan Etanol Daun Puguntano
Pengujian efek diuretik EnHPT, EEAPT dan EEPT dilakukan terhadap
parameter volume urin, kadar natrium, kadar kalium dalam urin, rasio Na+/K+ dan
72

aktivitas diuretika berdasarkan indeks diuretik serta nilai Lipschtiz ketiga fraksi
menggunakan hewan coba yaitu tikus jantan dan pembanding furosemid.
Pengukuran volume urin bertujuan untuk mengetahui adanya gangguan faal
ginjal dan kelainan dalam keseimbangan cairan tubuh. Volume urin berkaitan erat
dengan penggunaan diuretika karena dapat menyebabkan terjadinya diuresis.
Diuretika adalah senyawa atau obat yang dapat meningkatkan volume urin.
Diuresis mempunyai dua pengertian, pertama menunjukkan adanya penambahan
volume urin yang diproduksi dan yang kedua menunjukkan pengeluaran zat-zat
terlarut dalam urin (Junior, 2012). Hasil pengukuran volume urin tikus setelah
pemberian EnHPT dosis 100, 200, 400 dan 800 mg/kg bb/hari menunjukkan
peningkatan. Efek diuretik EnHPT meningkat dengan adanya peningkatan dosis
(dose dependent). Hal ini menunjukkan bahwa EnHPT memiliki efek diuretik
jika dibandingkan furosemid (Gambar 4.1).
Gambar 4.1 Efek EnHPT terhadap volume urin setiap jam selama 6 jam
EnHPT dosis 800 mg/kg bb paling baik dalam pengeluaran urin. Hal tersebut
disebabkan EnHPT dosis 800 mg/kg bb mempunyai aktivitas diuretika hampir
sama dengan furosemid 10 mg/kg bb (P > 0,05). Furosemid merupakan diuretik
kuat golongan loop henle, memiliki waktu paruh yang singkat (15 menit) dengan
73

onset 1 - 2 jam setelah pemberian per oral serta durasi 2 - 6 jam (Khan, 2009).
EnHPT dosis 100, 200 dan 400 mg/kg bb menunjukan efek diuretika yang lebih
rendah dibanding furosemid tetapi tidak berbeda dengan kontrol.
Pengukuran volume urin pada jam ke-6 dinyatakan sebagai urin total. Rerata
volume urin total kelompok kontrol negatif adalah 2,13 ± 0,49 ml, furosemid 7,23
± 2,08, EnHPT 100 mg/kg bb 1,60 ± 1,53, EnHPT 200 mg/kg bb 1,88 ± 1,53,
EnHPT 400 mg/kg bb 2,55 ± 2,14 , EnHPT 800 mg/kg bb 6,75 ± 4,14.
Berdasarkan hasil yang diperoleh, EnHPT dosis 100 , 200, 400 dan 800 mg/kg bb
menunjukkan efek diuretika terhadap volume urin. Dari keempat dosis, EnHPT
800 mg/kg bb mempunyai efek diuretika yang sama dengan furosemid (p > 0,05).
Efek diuretik EnHPT dosis 100 mg/kg bb lebih kecil bila dibandingkan dengan
dosis 200 mg/kg bb dan dosis 400 mg/kg bb namun volume urin total ketiga
kelompok tidak berbeda secara signifikan (p > 0,05) (Gambar 4.2). Hal ini
menunjukkan bahwa peningkatan dosis pemberian EnHPT dapat meningkatkan
pengeluaran volume urin total tikus putih jantan.
Gambar 4.2 Efek EnHPT terhadap volume total urin pada tikus putih jantan
Peningkatan volume urin yang terjadi sesuai dengan prinsip diuretika yaitu
obat yang dapat meningkatkan kecepatan pembentukan urin. Diuretika bermanfaat

74

dalam pengobatan berbagai penyakit yang berhubungan dengan retensi abnormal
garam dan air dalam kompartemen ekstraseluler akibat gagal jantung, sirosis hati,
gangguan ginjal atau akibat efek samping obat (Junior, 2012).
Efek diuresis suatu senyawa ditentukan berdasarkan volume urin dan
pengeluaran elektrolit. Elektrolit merupakan salah satu unsur yang memegang
peranan penting dalam pemeliharaan fungsi tubuh baik tingkat sel, jaringan,
organ, maupun fungsi tubuh secara keseluruhan. Natrium merupakan kation
utama dalam darah dan cairan ekstraseluler. Elektrolit natrium akan membantu
pengeluaran urin yang disebut efek diuresis (Ravishankar and Priya, 2012).
Kalium merupakan salah satu mineral makro yang berperan dalam pengaturan
keseimbangan cairan tubuh. Masukan natrium yang tinggi dapat meningkatkan
ekskresi kalium. Hubungan ini diperkirakan disebabkan sebagian oleh reabsorbsi
kalium secara pasif mengikuti natrium dan air pada tubulus proksimal dan
sepanjang lengkung Henle.
Kadar Natrium dan kaliun dalam urin diukur menggunakan alat SSA
(Spektrofotometer serapan atom). Berdasarkan hasil pengukuran kurva kalibrasi
natrium diperoleh persamaaan garis regresi yaitu Y = 0,1106 x – 0,0025 dengan
nilai r = 0,9993 (Lampiran 7). Pengukuran kurva kalibrasi kalium diperoleh
persamaaan garis regresi yaitu Y = 0,0009 x + 0,0009 dengan nilai r = 0,9998. Hal
ini menunjukkan adanya korelasi linier yang menyatakan adanya hubungan antara
X (konsentrasi) dan Y (absorbansi) (Lampiran 8). Hasil pengukuran elektrolit
dalam urin tikus putih jantan setelah pemberian EnHPT menunjukkan
peningkatan kadar natrium dengan adanya peningkatan dosis namun kadar kalium
menunjukkan penurunan (Tabel 4.3; Gambar 4.3).
75

Tabel 4.3 Efek EnHPT terhadap kadar natrium dan kalium dalam urin tikus
No Perlakuan (n=4) Elektrolit (mEq/L) ± Saliuretik Na+/K+

SEM
Na+ K+ Na+ K+
1 169,84± 145,09± - -
CMC-Na 1%
30,26 16,45 1,17
2 Furosemid 10 mg/kg 235,48± 298,68± 1,39 2,06
bb 15,39 45,45 0,79
3 EnHPT 100 mg/kg 56,1± 98,94± 0,33 0,68
bb 15,98 36,37 0,57
4 EnHPT 200 mg/kg 83,75± 193,81± 0,49 1,36
bb 32,56 30,58 0,43
5 EnHPT 400 mg/kg 110,18± 70,42± 0,65 0,49
bb 64,03 30,76 1,56
6 EnHPT 800 mg/kg 186,76± 105,19± 1,10 0,73
bb 50,38 20,42 1,78
Gambar 4.3 Efek EnHPT terhadap Kadar elektrolit pada urin tikus putih jantan
EnHPT 100, 200, 400 dan 800 mg/kg bb menunjukkan efek diuretika
terhadap kadar natrium dalam urin. Dari keempat dosis tersebut, EnHPT 800
mg/kg bb menunjukkan efek pengeluaran natrium yang paling baik. Hal ini sesuai
dengan volume urin total yang dikeluarkan oleh tikus selama 6 jam. Pemberian
EnHPT dosis 100, 200, 400 mg/kg bb mempunyai efek diuretika terhadap
pengeluaran natrium lebih kecil dibandingkan dengan tikus kontrol dan
76

furosemid (p > 0,05) (Lampiran 10). Penelitian ini menunjukkan bahwa semakin
tinggi dosis ekstrak yang diberikan maka semakin tinggi pengeluaran volume urin
dan ekskresi natrium. Peningkatan pengeluaran natrium dalam urin
mengindikasikan adanya efek diuretik yang dihasilkan dari fraksi puguntano.
EnHPT 200 mg/kg bb menyebabkan pengeluaran kalium yang paling tinggi
dibandingkan EnHPT 100, 400 dan 800 mg/kg bb namun lebih rendah
dibandingkan furosemid. Kadar kalium keempat ekstrak tidak berbeda dengan
kontrol (P > 0,05) tetapi berbeda secara signifikan dengan furosemid (P < 0,05).
Hal ini sesuai dengan sifat furosemid, yaitu diuretika kuat dengan pengeluaran
kalium yang tinggi sehingga dapat menyebabkan hipokalemia. Puguntano dosis
800 mg/kg bb menunjukan sifat diuretik yang baik karena dapat meningkatkan
volume urin dengan sedikit menyebabkan pengeluaran kalium.
Senyawa yang diduga berpengaruh pada aktivitas diuretika EnHPT adalah
triterpenoid dan steroid. Salah satu senyawa triterpenoid yang terkandung dalam
puguntano adalah kukurbitasin. Kukurbitasin merupakan senyawa turunan
triterpenoid tetrasiklik yang memiliki rasa pahit dan beracun (Saboo, et.al., 2013).
Triterpenoid tetrasiklik memiliki struktur yang mirip dengan aldosteron dan
spironolokton (antagonis aldosteron). Mekanisme kerja senyawa ini menyebabkan
diuresis diduga akibat penghambatan reabsorpsi air dan anion di tubular (Pantoja
et.al, 1991). Hal ini sesuai dengan penelitian sebelumnya yang menunjukkan
bahwa triterpenoid tetrasiklik dari Poria cocos berikatan dengan reseptor
aldosteron di sitoplasma ginjal secara in vitro sehingga menghambat kerja
aldosteron dan tidak mempengaruhi konsentrasi aldosteron dalam plasma tikus
(Deng and Xu, 1992; Feng, et.al.,2013). Hal ini menunjukkan bahwa senyawa
77

triterpenoid tetrasiklik dalam EnHPT (kukurbitasin) memiliki efek antagonis
aldosteron.
Rerata volume urin tikus meningkat setiap jam setelah pemberian EEAPT .
Peningkatan volume urin EEAPT dosis 100,200, 400 dan 800 mg/kg bb tidak
berbeda dengan kontrol negatif (p>0,05) namun lebih rendah dibandingkan
furosemid (p< 0,05) (Gambar 4.4).
Gambar 4.4 Efek EEAPT terhadap volume urin setiap jam selama 6 jam
Rerata volume urin total kontrol negatif adalah 2,13 ± 0,49 ml, furosemid
7,23 ± 2,08, EEAPT 100 mg/kg bb 1,93 ± 0,26, EEAPT 200 mg/kg bb 2,68 ±
1,33, EEAPT 400 mg/kg bb 2,55 ± 0,50 , EEAPT 800 mg/kg bb 1,98 ± 0,43
(Gambar 4.5). Rerata volume urin total EEAPT lebih rendah dibandingkan
kontol negatif dan furosemid.
Gambar 4.5 Efek EEAPT terhadap volume total urin pada tikus putih jantan
78

Kadar natrium pada setiap kelompok uji menurun dengan adanya
peningkatan dosis EEAPT. Kadar natrium EEAPT 800 mg/kg bb berbeda
signifikan dengan kelompok kontrol negatif dan furosemid (P< 0,05). Kadar
kalium dosis 100, 200, 400 dan 800 mg/kg bb lebih rendah dibandingkan kontrol
negatif dan furosemid (P<0,05). Hal ini menujukkan bahwa EEAPT memiliki efek
diuretik yang lebih rendah dibandingkan furosemid ( Tabel 4.4 ; Gambar 4.6).
Tabel 4.4 Efek EEAPT terhadap kadar natrium dan kalium dalam urin tikus
SEM
Na+ K+ Na+ K+
1 169,84± 145,09± - -
CMC-Na 1%
30,26 16,45 1,17
2 Furosemid 10 mg/kg 235,48± 298,68± 1,39 2,06
bb 15,39 45,45 0,79
3 197,64± 109,83± 1,16 0,76
EEAPT 100 mg/kg bb
54,91 14,21 1,79
4 244,69± 73,45± 1,44 0,51
EEAPT 200 mg/kg bb
118,79 8,11 3,33
5 161,45± 66,76± 0,95 0,46
EEAPT 400 mg/kg bb
31,56 8,62 2,42
6 109,78± 92,29± 0,65 0,64
EEAPT 800 mg/kg bb
22,68 21,13 1,19
Gambar 4.6 Efek EEAPT terhadap Kadar natrium dan kalium pada urin tikus
putih jantan
79

Berdasarkan hasil skrining fitokimia, EEAPT mengandung flavonoid,
glikosida, saponin dan tannin. Senyawa polar meningkatkan sirkulasi ginjal dan
laju filtrasi glomerular sehingga meningkatkan pembentukan urin primer (Feng
et.al., 2013). Flavonoid juga dapat meningkatkan pengeluaran volume urin dan
elektrolit pada tikus dengan cara menghambat reabsorpsi Na+, K+ dan Cl- di
tubulus. Aktivitas antioksidan puguntano diduga berperan melindungi ginjal dari
kerusakan sehingga membantu mobilisasi kelebihan cairan (Thuan, et.al.2007).
Antioksidan telah terbukti secara ilmiah memiliki efek renoprotektif pada
sejumlah hewan percobaan dan diberikan kepada pasien hipertensi dengan
gangguan ginjal sebagai terapi adjuvan (Asif, et.al 2014). Selain itu, kandungan
flavonoid diduga memberikan efek diuretik dengan cara berikatan dengan
reseptor adenosin A1 (Yuliana, 2009).
Volume urin tikus meningkat setelah pemberian EEPT dan furosemid. EEPT
100, 200, 400 dan 800 mg/kg bb memiliki efek diuretik yang lebih rendah
dibandingkan dengan furosemid (P<0,05) namun tidak berbeda dengan kontrol
negatif (P>0,05) (Gambar 4.7).
Gambar 4.7 Efek EEAPT terhadap volume urin setiap jam selama 6 jam
80

Rerata volume urin kelompok kontrol negatif 2,13 ± 0,49 ml, Furosemid 7,23 ±
2,08, EEPT 100 mg/kg bb 1,28 ± 0,39 , EEPT 200 mg/kg bb 2,60 ± 1,53, EEPT
400 mg/kg bb 2,95 ± 2,32 , EEPT 800 mg/kg bb 3,1 ± 2,13. Berdasarkan hasil
yang diperoleh, EEPT dosis 100, 200, 400 dan 800 mg/kg bb menunjukkan efek
diuretik terhadap volume urin namun lebih rendah daripada furosemid (Gambar
4.8).
Gambar 4.8 Efek EEPT terhadap volume total urin pada tikus putih jantan
Pengukuran kadar natrium dan kalium pada setiap kelompok uji setelah
pemberian EEPT dapat dilihat pada Tabel 4.5 dan Gambar 4.9.
Tabel 4.5 Efek EEPT terhadap kadar natrium dan kalium dalam urin tikus
SEM
Na+ K+ Na+ K+
1 169,84± 145,09± - -
CMC-Na 1%
30,26 16,45 1,17
2 Furosemid 10 mg/kg 235,48± 298,68± 1,39 2,06
bb 15,39 45,45 0,79
3 150,66± 119,46± 0,89 0,83
EEPT 100 mg/kg bb
67,91 82,20 1,26
4 107,54± 84,89± 0,63 0,59
EEPT 200 mg/kg bb
13,88 11,38 1,27
5 180,34± 119,49± 1,06 0,82
EEPT 400 mg/kg bb
74,91 55,87 1,51
6 156,25± 111,73± 0,92 0,77
EEPT 800 mg/kg bb
59,91 47,06 1,39
81

Gambar 4.9 Efek EEPT terhadap Kadar natrium dan kalium pada urin tikus putih
jantan
Berdasarkan skrining fitokimia, EEPT mengandung glikosida dan saponin.
Golongan glikosida yang terdapat dalam puguntano adalah kukurbitasin glikosida.
Senyawa-senyawa ini bekerja tunggal ataupun saling sinergis meningkatkan
volume urin dengan cara menstimulasi aliran darah sehingga terjadi vasodilatasi
atau dengan menghambat reabsorpsi air dan anion di tubular (Tthambi, 2013).
Penelitian ini juga memberikan hasil bahwa kadar natrium pada urin tikus lebih
besar dari kadar kalium sesuai dari fungsi diuretik yang merupakan senyawa yang
dapat meningkatkan pengeluaran ekskresi air dan garam-garam.
Aktivitas diuretik EnHPT, EEAPT dan EEPT dapat ditentukan menggunakan
indeks diuretika dan nilai Lipschtiz. Indeks diuretika suatu senyawa merupakan
hasil perbandingan volume urin kelompok uji terhadap volume urin kelompok
kontrol. Nilai Lipschtiz menunjukkan perbandingan volume urin kelompok uji
terhadap kontrol positif (furosemid). Hal ini bertujuan untuk mengetahui kekuatan
diuresis kelompok uji dibanding furosemid (Tabel 4.6).
82

Tabel 4.6 Indeks diuretika dan Nilai Lipschtiz EnHPT, EEAPT dan EEPT
Perlakuan Vol Urin Total (mL) Indeks Diuretika Nilai Lipschtiz

Kontrol 2,13 - -
Furosemid 7,28 3,42 -
EnHPT 100 1,60 0,75 0,22
EnHPT 200 1,88 0,88 0,26
EnHPT 400 2,55 1,20 0,35
EnHPT 800 6,75 3,17 0,93
EEAPT 100 1,93 0,91 0,27
EEAPT 200 2,68 1,26 0,37
EEAPT 400 2,55 1,20 0,35
EEAPT 800 1,98 0,93 0,27
EEPT 100 1,28 0,60 0,18
EEPT 200 2,6 1,22 0,36
EEPT 400 2,95 1,38 0,41
EEPT 800 3,10 1,46 0,43
EnHPT 800 mg memiliki indeks diuretika yang sama dengan furosemid. Hal
ini menunjukkan bahwa EnHPT memiliki aktivitas diuretika kuat. Aktivitas
diuretika suatu senyawa dinyatakan kuat jika memiliki indeks diuretika lebih
besar dari 1,5; sedang jika memiliki indeks diuretika 1 -1,5; lemah jika indeks
diuretika 0,72 – 1; dan tidak memiliki efek jika indeks diuretika kurang dari 0,72
(Asif, 2014). Berdasarkan hasil pengukuran indeks diuretika terlihat bahwa EEPT
100 mg tidak memiliki efek diuretika. Aktivitas diuretik EnHPT 100 mg, EnHPT
200 mg, EEAPT 100 mg dan EEAPT 800 mg lemah. Aktivitas diuretik sedang
ditunjukkan oleh EEAPT 200 mg, EEAPT 400 mg, EEPT 200 mg, EEPT 400 mg
dan EtPT 800 mg. Berdasarkan nilai lipschitz, EnHPT 800 mg/kg bb memiliki
aktivitas diuretik sebesar 93% dibandingkan furosemid. Furosemid merupakan

83

diuretik kuat yang bekerja pada Ansa Henle bagian asenden dengan cara
menghambat simport natrium, kalium dan klorida (Dipiro, 2008).
4.5 Efek Toksisitas Akut Fraksi n-Heksan, Etilasetat, dan Etanol Daun
Puguntano
Pengujian efek toksik EnHPT, EEAPT dan EEPT dilakukan terhadap mencit
jantan berdasarkan pada tata cara uji toksisitas Badan Pengawasan Obat dan
Makanan (BPOM) (BPOM, 2001). Pada penelitian ini, dosis EnHPT, EEAPT dan
EEPT yaitu 2000 dan 5000 mg/kg BB. Pengamatan dilakukan selama 14 hari
terhadap gejala toksik yang terjadi secara kuantitatif, yaitu berdasarkan jumlah
kematian, konsumsi makanan, berat badan rata-rata, berat organ relatif,
makropatologi dan mikropatologi organ. Berdasarkan hasil uji toksisitas yang
dilakukan, tidak ada satu mencit pun yang mati setelah pemberian EnHPT,
EEAPT dan EEPT (Tabel 4.7). Menurut Jenova (2009), jika dosis maksimal tidak
menimbulkan kematian hewan coba, maka LD50 dinyatakan LD50 ‘semu’ yaitu
5000 mg/kg BB.
Nilai LD50 bukan suatu tetapan biologi yang mutlak, melainkan hanya
merupakan salah satu petunjuk toksisitas akut. Bila toksisitas akutnya rendah
LD50 tidak perlu ditentukan secara tepat (Retnomurti, 2008). Dosis 5000 mg/kg
BB merupakan konversi dosis maksimal pada manusia ke mencit berdasarkan
ratio luas permukaan tubuh. Berdasarkan kesepakatan para ahli, bila pada dosis
maksimal tidak ada kematian pada hewan coba, maka jelas senyawa tersebut
termasuk dalam kriteria “praktis tidak toksik” (Jenova, 2009; Iwuanyanwu, et al.,
2012).
84

Tabel 4.7 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap Jumlah mencit yang mati
Perlakuan Jumlah Mencit Jumlah Mencit yang Mati

Kontrol 5 0
EnHPT 2000 mg/KgBB 5 0
EnHPT 5000 mg/KgBB 5 0
EEAPT 2000 mg/KgBB 5 0
EEAPT 5000 mg/KgBB 5 0
EEPT 2000 mg/KgBB 5 0
EEPT 5000 mg/KgBB 5 0
Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan bahwa terjadi penurunan konsumsi
makanan pada mencit. Berdasarkan penelitian Smith dan Mangkoewidjojo (1988),
seekor mencit dewasa dapat mengkonsumsi makanan 3-5 g/hari sedangkan hasil
yang diperoleh yaitu untuk EnHPT 2,1 g/hari; EEPT 0,97 g/hari dan EEAPT 1,07
g/hari (Tabel 4.8) . Hasil konsumsi makanan dan minuman antar kelompok tidak
menunjukkan perbedaan yang signifikan. Penurunan konsumsi makanan pada
mencit diduga akibat kandungan dari ekstrak yaitu cucurbitasin yang
menyebabkan rasa pahit ketika mengkonsumsi tumbuhan ini.
Tabel 4.8 Efek EnHPT, EEAPT, EEPT terhadap rerata konsumsi makanan dan
minuman
Rata-rata konsumsi makanan (g)

Minggu
EnHPT EEPT EEAPT
14,70
I 6,82 7,46
II 14, 85 7,82 7,30
85

Hasil rata-rata berat badan tiap kelompok setelah pemberian EnHPT, EEAPT
dan EEPT menunjukkan tidak terdapat perbedaan berat badan antara kelompok
kontrol dan perlakuan (p>0,05) (Tabel 4.9).
Tabel 4.9 Efek EnHPT, EEAPT, EEPT terhadap rerata berat badan tiap kelompok
Berat badan (g)

Lama
pengamatan EnHPT EnHPT EEPT EEPT EEAPT EEAPT
Kontrol
2000 5000 2000 5000 2000 5000
2 minggu 32,92 29,44 32,69 28,72 33,3 33,01 34.47
Berat organ relatif ditentukan pada akhir perlakuan dengan cara menimbang
tiap organ vital mencit kemudian dibandingkan dengan berat badan (Tabel 4.10).
Pada parameter rasio berat organ tidak terdapat perbedaan yang signifikan antara
berat organ hati, ginjal, dan jantung dibanding kelompok kontrol dengan
perlakuan dengan nilai signifikansi 1,000 (p > 0,05). Hal ini menunjukkan bahwa
EnHPT, EEAPT dan EEPT tidak berpengaruh terhadap perbandingan berat organ
dengan berat badan.
Tabel 4.10 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap berat organ relatif
Berat organ per 100 g ± SEM

Organ
EnHPT EnHPT EEPT EEPT EEAP EEAP
Kontrol
2000 5000 2000 5000 T 2000 T 5000
Hati 1,942 1,6015 2,057 1,547 2,008 1,578 1,352
Jantung 0,207 0,158 0,181 0,156 0,202 0,192 0,196
Ginjal Kanan 0,224 0,204 0,192 0,189 0,188 0,248 0,234
Ginjal Kiri 0,217 0,207 0,188 0,191 0,235 0,236 0,22
Testis Kanan 0,111 0,083 0,0604 0,106 0,116 0,092 0,098
Testis Kiri 0,104 0,102 0,043 0,105 0,114 0,088 0,1
86

Perubahan warna organ menjadi salah satu parameter efek toksik pada organ
(Lu, 1994). Umumnya toksikan hanya mempengaruhi satu atau beberapa organ
saja. Hal ini terjadi akibat tinggi kadar bahan kimia dan metabolit di organ (Lu,
1994). Hati dan ginjal normal berwarna merah kecoklatan, permukaannya licin
dan konsistensinya kenyal. Kriteria abnormal hati dan ginjal terjadi jika
ditemukan perubahan warna, perubahan struktur permukaan dan perubahan
konsistensi (Anggraini, 2008).
Hasil pengamatan makroskopik, warna organ hati mencit tidak terjadi
perubahan, struktur permukaan hati terlihat licin dan konsistensi hati kenyal pada
semua kelompok. Hati terlibat dalam metabolisme zat makanan serta sebagian
besar obat dan toksikan (Retnomurti, 2008). Zat makanan, sebagian besar obat-
obatan serta toksikan yang masuk melalui saluran cerna setelah diserap oleh epitel
usus akan dibawa oleh vena porta ke hati. Oleh sebab itu, hati menjadi organ yang
sangat potensial mengalami keracunan lebih dahulu sebelum organ lain (Santoso,
et al., 2006).
Hasil pengamatan mikroskopik menunjukkan bahwa kelompok kontrol
memiliki hepatosit tersusun secara radial dalam lobulus hati dan belum terlihat
adanya degenerasi hidrofik. Kelompok EnHPT, EEAPT dan EEPT 5000
mg/kgBB menunjukkan hepatosit mengalami degenerasi hidrofik dan nekrosis
(Gambar 4.10). Degenerasi hidrofik terjadi akibat gangguan membran sel
sehingga cairan masuk ke dalam sitoplasma dan menimbulkan vakuola-vakuola
kecil hingga besar karena adanya gangguan transport aktif sehingga sel tidak
mampu memompa ion Na+ keluar dan terjadi akumulasi. Nekrosis merupakan
kematian sel atau jaringan pada organisme hidup. Hal ini disebabkan karena
87

stimulus yang bersifat patologis. Inti sel yang mati berbentuk lebih kecil, kromatin
dan serabut retikuler menjadi berlipat-lipat. Inti menjadi lebih padat (piknotik)
yang dapat hancur bersegmen-segmen (karioreksis) atau pecah (kariolisis)
(Underwood, 1994)
(a) Kontrol (b) EnHPT 5000 mg/kgBB
(c) EEAPT 5000 mg/kgBB d)EEPT 5000 mg/kgBB
Gambar 4.10 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT dosis 5000 mg/kgbb terhadap
gambaran mikroskopik organ hati
Ginjal merupakan organ berbentuk seperti kacang berwarna merah kecoklatan
(Irianto, 2004). Hasil pengamatan makroskopis, tidak terjadi perubahan warna
pada organ ginjal mencit jika dibandingkan dengan kontrol, permukaan ginjal
tampak licin dan konsistensinya kenyal pada semua kelompok. Fungsi utama
ginjal adalah organ eliminasi, yaitu memusnahkan zat toksik tertentu. Beberapa
obat atau zat kimia yang beredar dalam sirkulasi sistemik akan dibawa ke ginjal
88

dalam kadar yang cukup tinggi untuk dikeluarkan bersama urin. Oleh karena
fungsi ginjal yang strategis, sehingga menjadikan ginjal sebagai sasaran utama
dari toksikan (Retnomurti, 2008).
Hasil mikroskopik ginjal menunjukkan bahwa EnHPT, EEAPT dan EEPT
5000 mg/KgBB menunjukkan adanya nekrosis akibat perubahan histopatologi
ginjal. Hal ini ditandai dengan berkurangnya penyerapan warna oleh ini dan
lepasnya sel tubulus ke dalam lumen (Gambar 4.11) (Mayori, 2013).
(c) EEAPT 5000 mg/kgBB (d)EEPT 5000 mg/kgBB
gambaran mikroskopik organ ginjal
Hasil pengamatan pada organ jantung mencit, tidak terjadi perubahan warna
dibandingkan dengan kontrol, bentuk dan konsistensi organ jantung mencit
89

tampak normal. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian EnHPT, EEAPT dan
EEPT tidak berpengaruh terhadap organ jantung. Jantung mudah dirusak oleh
berbagai jenis zat kimia karena merupakan salah satu organ sasaran. Zat kimia
bekerja secara langsung pada otot jantung atau secara tidak langsung melalui
susunan saraf atau pembuluh darah. Suatu toksikan dapat mempengaruhi salah
satu dari pembuluh darah dan akibat yang ditimbulkan tergantung dari seberapa
penting organ yang disuplai darah oleh pembuluh darah yang terkena
(Retnomurti, 2008).
(c) EEAPT 5000 mg/kgBB (d)EEPT 5000 mg/kgBB
gambaran mikroskopik organ jantung
Hasil mikroskopik jantung menunjukkan terjadinya piknosis pada miosit,
kerusakan miofibril dan hipertropi (Gambar 4.12) (Widyawati, 2012).
90

4.6. Aktivitas Antihipertensi Ekstrak n-Heksan, Etilasetat dan Etanol Daun
Puguntano
Aktivitas antihipertensi EnHPT, EEAPT dan EEPT dilakukan berdasarkan
parameter penurunan tekanan darah (TD) tikus normotensi dan dua model tikus
hipertensi, yaitu model tikus hipertensi yang diinduksi NaCl 2,5% NaCl dan
metilprednisolon serta model tikus hipertensi yang diinduksi L-Name.
4.6.1 Penurunan Tekanan Darah Tikus Normotensi
Hasil uji EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap penurunan tekanan darah pada
tikus normotensi diperoleh berdasarkan parameter TDS, TDD, DJ, dan TAR.
Tekanan darah merupakan tekanan yang dialami darah terhadap pembuluh arteri
darah ketika darah dipompakan oleh jantung ke seluruh tubuh. Tekanan darah
dibagi dua, yaitu TDS dan TDD. TDS adalah tekanan maksimum pada arteri
ketika darah dipompa dari ventrikel menuju ke arteri sedangkan TDD adalah
tekanan darah minimum pada arteri ketika ventrikel mengalami fase diastolik
(relaksasi) dimana tidak ada darah yang dipompa dari ventrikel ke arteri.
Tabel 4.11 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap rerata TDS (mmHg) tikus
normotensi hari ke-0, 7, dan 14
Kelompok Dosis TDS (mmHg) ±SEM pada hari ke
No (mg/KgBB)
(n=4) 0 7 14
1 Kontrol - 126,50±2,39 126,50±2,50 128,50±2,22
2 EEPT 400 128,75±2,29 120,25±1,79 125,50±4,66
3 EEPT 800 135,25±3,25 124,75±5,23 122,25±4,64*
4 EEAPT 400 139,75±3,47 124,00±3,08* 123,75±2,89*
5 EEAPT 800 130,00±2,12 117,50±2,33* 117,00±2,12*
6 EnHPT 400 130,75±2,18 119,50±1,71* 120,00±1,96*
7 EnHPT 800 132,46±1,22 122,39±1,14* 122,93±1,23*
91

Keterangan: Mean±SEM, n=4
* Berbeda secara signifikan terhadap TDS hari ke 0
Gambar 4.13 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap perubahan TDS (mmHg)
tikus normotensi (Mean±SEM, n=4)
TDS rerata awal tikus yang digunakan dalam penelitian ini adalah 132,46
±1,22 mmHg. Pemberian EnHPT, EEAPT dan EEPT dilakukan setiap hari
selama 14 hari. Pengukuran TDS dilakukan pada hari ke 7 dan 14 setelah
pemberian ekstrak (Tabel 4.11; Gambar 4.13).
Berdasarkan hasil penelitian menunjukan bahwa EnHPT dan EEAPT
menurunkan TDS tikus normotensi setelah pemberian selama 7 dan 14 hari
(p<0,05) sedangkan EEPT tidak menurunkan TDS (P>0,05). Pemberian CMC-Na
pada tikus normotensi tidak menyebabkan penurunan TDS. Hal ini menunjukkan
bahwa CMC-Na (pelarut) tidak mempengaruhi TDS. TDS tikus normotensi yang
diberi EEPT 400 dan 800 mg/kgBB selama 7 hari tidak berbeda dengan TDS hari
ke 0. Pemberian EEPT 400 mg/kgBB selama 14 tidak menurunkan TDS
sedangkan EEPT 800 mampu menurunkan TDS (P<0,05). TDS tikus normotensi
yang diberi EEAPT dan EnHPT 400 serta 800 hari ke 7 dan 14 berbeda dengan
92

TDS hari ke 0 (P<0,05) tetapi TDS hari ke 7 tidak berbeda dengan hari ke 14 . Hal
ini menunjukkan bahwa EEAPT dan EnHPT dapat menurunkan TDS setelah
pemberian ekstrak selama 7 hari.
Persentase penurunan TDS yang paling besar ditunjukkan oleh EEAPT 400
mg/kgBB dibandingkan dengan kontrol dan kelompok perlakuan lainnya
(p<0,05). Kelompok EEAPT 400 mg/kgBB menurunkan TDS sebesar 11,23%
pada hari ke 7 dan 11,39% pada hari ke 14 (Gambar 4.14).
Gambar 4.14 Grafik persentase perubahan TDS (%) tikus normotensi
Keterangan: (Mean±SEM, n=4); * berbeda secara signifikan terhadap kontrol
TDD awal tikus yang diperoleh yaitu 96,32 ± 1,49 mmHg. Data standar TDD
tikus wistar normal belum ditemukan namun menurut Siska, et al., (2011), TDD
normal adalah 119 mmHg dan menurut Iranloye, et al., (2011), TDD normal
berkisar antar 96 ± 4,08 mmHg. Hasil rerata pengukuran TDD tikus normotensi
setelah pemberian EnHPT, EEAPT dan EEPT selama 7 dan 14 hari dapat dilihat
pada Tabel 4.12 dan Gambar 4.15
93

Tabel 4.12 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap rerata TDD (mmHg) tikus
TDS (mmHg) ±SEM pada hari ke
No Kelompok (n=4) Dosis (mg/KgBB)
0 7 14
1 Kontrol - 99,5±2,10 97,25±2,69 96,00±3,34
2 EEPT 400 99,25±5,27 87,50±2,06 100,25±3,19
3 EEPT 800 103,75±2,46 92,75±4,89 91,75±4,48*
4 EEAPT 400 87,25±1,31 93,50±1,19* 93,50±1,19*
5 EEAPT 800 91,50±4,09 87,50±2,18 87,00±1,87
6 EnHPT 400 93,00±3,72 85,50±2,72* 87,25±3,12*
7 EnHPT 800 100,00±1,08 93,75±1,44* 94,00±2,48
Keterangan : * Berbeda secara signifikan terhadap hari ke 0
Gambar 4.15 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap perubahan TDD (mmHg)
tikus normotensi (Mean±SEM, n=4)
Berdasarkan hasil penelitian menunjukan bahwa EEPT 400 mg/kg BB tidak
menurunkan TDD setelah 7 dan 14 hari pemberian. Pemberian EEPT 800 mg/kg
BB mampu menurunan TDD setelah 14 hari (P < 0,05). EEAPT 400 mg/kg BB
menyebabkan penurunan TDD secara signifikan setelah pemberian selama 7 dan
14 hari, EEAPT 800 mg/kg BB tidak mempengaruhi TDD selama 14 hari. EnHPT
400 dan 800 mg/kg bb menyebabkan penurunan TDD secara signifikan selama 7
dan 14 hari.
94

Data persentase penurunan TDD menunjukkan tidak adanya perbedaan yang
signifikan (p > 0,05) antar kelompok perlakuan pada hari ke-7 dan ke-14
dibandingkan kontrol tetapi terjadi perbedaan antar kelompok pelakuan. Pada
penelitian ini terdapat perbedaan persen penurunan TDD antara EEAPT 400
mg/kg bb dengan EnHPT 400, EEPT 400 dan EEPT 800 mg/kg bb pada hari ke 7
sedangkan pada hari ke 14, terjadi perbedaan antara EEAPT 400 dengan EEPT
800 mg/kg bb. Persen penurunan TDD terbesar ditunjukkan oleh EEPT 400
(11,02%) pada hari ke 7 dan EEPT 800 (11,61%) pada hari ke 14. (Gambar
4.16).
Gambar 4.16 Grafik persentase perubahan TDD (%) tikus normotensi
Rerata DJ tikus sebelum perlakuan berbeda signifikan (p<0,05) antar
kelompok. Hal ini diduga terjadi karena kondisi pengukuran. Prinsip kerja NIBP
mengukur DJ berdasarkan sensitivitas sensor yang melekat pada vena ekor tikus.
Jika ekor sering bergerak, maka akan berpengaruh pada pengukuran DJ.
Pemberian EnHPT, EEAPT dan EEPT dosis 400 dan 800 mg/kgbb tidak
memberikan penurunan DJ yang signifikan pada tikus normotensi. Analisis
statistik menunjukkan tidak terdapat perbedaan yang signifikan DJ (p > 0,05) pada
hari ke-7 dan ke-14 antar kelompok perlakuan ( Tabel 4.13 ; Gambar 4.17).
95

Tabel 4.13 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap rerata DJ (BPM) tikus
DJ (BPM) ±SEM pada hari ke

0 7 14
1 Kontrol - 322,25±10,08 309,75±24,42 320,25±17,29
2 EEPT 400 209,50±20,98 174,50±6,61 289,00±21,78#
3 EEPT 800 328,00±5,76 285,25±25,16 292,75±23,94
4 EEAPT 400 259,75±41,05 147,75±17,53 176,00±9,01
5 EEAPT 800 188,25±5,12 172,50±8,85 178,25±3,94
6 EnHPT 400 192,00±4,38 204,75±11,28 200,75±7,88
7 EnHPT 800 209,25±7,71 210,00±8,07 210,25±6,76
Gambar 4.17 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap perubahan DJ (BPM)
tikus normotensi
Berdasarkan Tabel 4.14 nampak bahwa EnHPT, EEAPT, dan EEPT tidak
menyebabkan penurunan DJ yang signifikan dibandingkan DJ sebelum perlakuan
(P>0,05), dengan demikian pemberian EnHPT, EEAPT, dan EEPT dosis 400 dan
800 mg/kg BB tidak mempengaruhi DJ. Persentase penurunan DJ menunjukkan
perbedaan yang signifikan (p > 0,05) antar kelompok perlakuan pada hari ke-7
dan ke-14. Kelompok EnHPT 400 mg/kgBB menunjukkan perbedaan yang
signifikan dibandingkan EEAPT 400 mg/kgBB pada hari ke 7, sedangkan EEPT
400 berbeda dengan EEAPT 400 mg/kgBB pada hari ke 14. Persentase
96

penurunan DJ terbesar ditunjukkan oleh EEAPT 400 mg/kgBB yaitu sebesar
37,27% pada hari ke 7 dan 28,87% pada hari ke 14 (Gambar 4.18).
Gambar 4.18 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap DJ (%) tikus normotensi
TAR kelompok kontrol, EEPT dan EEAPT 400 mg/kgBB tidak mengalami
perubahan setelah pemberian 7 dan 14 hari. Pemberian EEPT 800 mg/kgBB
selama 7 hari tidak mempengaruhi TAR namun terjadi penurunan TAR yang
berbeda dengan sebelum perlakuan setelah pemberian 14 hari. EEAPT 800
mg/kgBB, EnHPT 400 dan 800 mg/kgBB dapat menurunkan TAR tikus
normotensi setalah pemberian 7 dan 14 hari (Tabel 4.14 dan Gambar 4.19).
Tabel 4.14 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap rerata TAR (mmHg) tikus
Kelompok Dosis TAR (mmHg) ±SEM pada hari ke

No
(n=4) (mg/KgBB) 0 7 14
1 Kontrol - 108,50±1,76 107,25±2,06 107,00±3,03
2 EEPT 400 109,00±3,49 98,50±1,94 108,25±3,03
3 EEPT 800 114,25±2,63 103,50±5,07 102,00±4,53*
4 EEAPT 400 104,75±2,14 103,75±1,65 103,75±1,65
5 EEAPT 800 104,25±2,95 97,25±2,25* 96,75±1,89*
6 EnHPT 400 105,75±2,66 96,75±1,65* 98,25±2,46*
7 EnHPT 800 112,25±1,65 104,00±1,41* 104,00±1,58*
Keterangan : * berbeda secara signifikan terhadap hari ke-0
97

Gambar 4.19 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap perubahan TAR
(mmHg) tikus normotensi
Persen penurunan TAR menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan signifikan
antara kontrol dengan kelompok perlakuan maupun antar kelompok perlakuan
(Gambar 4.20)
Gambar 4.20 Grafik hasil persentase perubahan TAR (%) tikus normotensi vs
hari pengukuran pada tiap kelompok
98

Berdasarkan hasil pengukuran tekanan darah tikus normotensi menunjukkan
bahwa EEPT tidak menurunkan TDS, TDD dan TAR selama 14 hari sedangkan
EEAPT dan EnHPT menurunkan TDS, TDD dan TAR. Semua ekstrak tidak
mempengaruhi DJ tikus normotensi. Hal ini menunjukkan bahwa EEAPT dan
EnHPT memiliki efek hipotensi pada tikus normotensi tanpa mempengaruhi DJ.
Mekanisme EEAPT dan EnHPT menurunkan tekanan darah diduga berdasarkan
kerja senyawa kimia dalam ekstrak pada pembuluh darah dan tidak bekerja
langsung pada jantung (shih, et.al., 2006). Hasil skrining fitokimia menunjukan
bahwa EEAPT mengandung flavonoid, glikosida, saponin dan tanin. Senyawa
kimia ini berkerja secara sinergis menurunkan tekanan darah. Tumbuhan yang
mengandung saponin menpunyai efek hipotensi disebabkan oleh efek diuresis
senyawa ini, memperbaiki fungsi endotelium dan menstimulasi pelepasan NO,
dan menghambat enzim pengubah angiotensi (ACE) (Oztasan, et. al., 2008),
sedangkan triterpenoid/steroid memiliki efek diuresis sehingga menurunkan
tekanan perifer pembuluh darah dan tekanan darah (Harwoko, et.al., 2014 ;
Dalimunthe, dkk., 2015). .
4.6.2 Penurunan Tekanan Darah Tikus Hipertensi Yang Diinduksi NaCl

2,5% dan Metilprednisolon
Uji antihipertensi dilakukan pada tikus hipertensi. Pada penelitian ini
digunakan tikus yang dibuat hipertensi menggunakan kombinasi NaCl 2,5% dan
metilprednisolon. Induksi hipertensi menggunakan NaCl hipertonis menyebabkan
kenaikan osmolaritas cairan tubuh sehingga osmoreseptor di hipofisa akan
terangsang untuk meningkatkan sekresi ADH (vasopresin) dan memacu timbulnya
rasa haus. Peningkatan kadar ADH menyebabkan peningkataah retensi cairan
oleh ginjal sehingga terjadi kenaikan volume darah, curah jantung dan tekanan
99

arteri (Guyton, 2007). Asupan tinggi garam juga menyebabkan hipertrofi ventrikel
kiri akibat terbentuknya Angiotensin II. Angiotensin II mengatur keseimbangan
elektrolit, menyebabkan vasokontriksi, dan meningkatkan tekanan darah (Zhu,
2004). Kombinasi NaCl hipertonis dengan metilprednisolon sebagai induksi
diharapkan mampu mempertahankan tekanan darah tikus hipertensi sebab
metilprednisolon akan meningkatkan retensi Na+ dan ekskresi K+ di ginjal
(Guyton, 2007).
Hasil peningkatan tekanan darah diukur berdasarkan parameter TDS, TDD,
TAR, dan DJ. Menurut Siska, et al., (2011), TDS, TDD, DJ dan TAR tikus
Wistar meningkat berturut-turut sampai 181 mmHg, 157 mmHg, 330 BPM dan
170 mmHg setelah pemberian larutan NaCl 2,5% dan metilprednison dosis 1,5
mg/kgBB selama 14 hari. Hal ini sesuai dengan Lailani, et al., (2013), pemberian
larutan NaCl 8% (8 ml/hari) selama 4 minggu dapat meningkatkan TDS, TDD,
DJ, dan TAR berturut-turut sampai 191 ± 17 mmHg, 162 ± 17 mmHg, 317 ± 40
kali per menit dan 176 ± 17 mmHg sedangakn menurut Jawi et.al., (2012),
pemberian NaCl 2% selama 14 hari dapat meningkatkan TDS tikus Wistar hingga
231 ± 6,05 mmHg .
Rerata TDS tikus sebelum hipertensi dalam penelitian ini adalah 126,50±2,39
mmHg dan setelah induksi menjadi 162,25±1,65 mmHg. Hipertensi merupakan
suatu kondisi ketika tekanan darah meningkat di atas normal. Secara patofisiologi,
hipertensi terjadi karena perubahan parameter hemodinamik yaitu menurunnya
ukuran intravaskular selama vasokontriksi atau meningkatnya volume
intravaskular (Nyadjeu et al., 2011). Pemberian NaCl 2,5% dan metilprednisolon
selama 14 hari menyebabkan peningkatan TDS yang signifikan. Hal ini
100

menunjukkan bahwa pemberian NaCl 2,5% dan metilprednisolon secara kronis
meningkatkan kadar elektrolit sehingga terjadi retensi air dan natrium (Tabel
4.15).
Tabel 4.15 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap rerata TDS (mmHg) tikus
hipertensi hari ke-0 dan 14
Dosis TDS (mmHg) ±SEM pada hari ke
No Kelompok (n=4)
(mg/KgBB) 0 14
1 Tanpa Perlakuan - 131,75±2,81 157,50±1,50 a
2 CMC Na 0,5% 126,50±2,39 162,25±1,65 a
3 EEPT 400 134,00±5,07 166,50±4,87 a
4 EEPT 800 129,00±0,71 161,00±1,08 a
5 EEAPT 400 132,75±1,65 157,25±4,15 a
6 EEAPT 800 128,75±1,79 162,25±2,66 a
7 EnHPT 400 126,75±1,25 156,75±2,02 a
8 EnHPT 800 131,25±2,39 161,50±2,02 a
9 Bisoprolol 0,0714 128,25±2,43 170,75±3,82 a
Keterangan : a berbeda signifikan terhadap hari ke 0
Hasil perubahan TDS pada tikus hipertensi menunjukan aktivitas suatu
senyawa atau ekstrak untuk menurunkan TDS. Pada penelitian ini, ekstrak
diberikan pada hari ke 15 hingga 21. Perubahan TDS diukur pada hari ke 17, 19
dan 21.
Tabel 4.16 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap Rerata TDS (mmHg) tikus
hipertensi hari ke-17, 19 dan 21
No Kelompok Dosis TDS (mmHg) ±SEM pada hari ke
(n=4) (mg/KgBB) 17 19 21
1 Tanpa - 156,75±2,14 a 156,50±1,66 a 151,75±1,03 a
perlakuan
2 CMC Na 1% 165,75±2,17 a 165,25±1,25 a 164,50±4,33 a
b b3
3 EEPT 400 154,25±4,96 139,75±9,49 131,75±3,92bcd
ab ab
4 EEPT 800 148,50±2,73 139,75±3,71 132,75±4,09bcd
5 EEAPT 400 147,75±4,15 139,50±1,32b 133,75±1,31bd
ab abc
6 EEAPT 800 152,25±2,14 144,25±2,29 137,50±3,62bc
7 EnHPT 400 146,50±3,52 a 141,25±3,49 abc 136,50±2,53abc
ab bc
8 EnHPT 800 151,50±1,89 140,75±2,78 128,75±1.03bcd
ab a bc
9 Bisoprolol 0,0714 158,00±3,89 146,75±3,35 136,00±3,87bc
101

b
berbeda signifikan terhadap hari ke 14
c
d
Gambar 4.21Grafik tekanan darah sistol tiap kelompok perlakuan yang diinduksi
NaCl 2,5% dan Metilprednisolon (Mean ± SEM, n=4)
Berdasarkan hasil pengukuran terlihat bahwa TDS tikus hipertensi kelompok
tanpa perlakuan dan kontrol negatif tidak mengalami penurunan selama 7 hari
setelah induksi (P<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa fungsi fisiologi tikus tidak
mampu menurunkan TDS sehingga tikus tetap mengalami hipertensi permanen.
(Tabel 4.16; Gambar 4.21).
Semua fraksi menunjukkan penurunan TDS. EEPT 400 mg/kgBB, EEPT 800
mg/kgBB, EEAPT 400 mg/kgBB, EnHPT 800 mg/kgBB dan bisoprolol
menurunkan TDS setelah pemberian selama 3 hari tetapi belum sama dengan TDS
hari ke 0. EEPT 400 mg/kgBB, EEAPT 400 mg/kgBB dan EnHPT 800 mg/kgBB
menurunkan TDS setelah pemberian selama 5 hari dan sudah sama dengan TDS
hari ke 0.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa rata-rata penurunan TDS tikus hipertensi
adalah 10-12 mmHg untuk 3 hari pemberian ekstrak. Hal ini membuktikan bahwa
EEPT, EEAPT dan EnHPT mempunyai potensi sebagai antihipertensi. Penurunan

102

tekanan darah rerata 5-6 mmHg untuk diastolik dan 10-12 mmHg untuk sistolik
pada pasien hipertensi dapat mengurangi resiko kena stroke sampai 18%, penyakit
jantung koroner 16% dan kematian pecah pembuluh darah 21%. (Lindholm ,
2003). Persen perubahan TDS terbesar ditunjukkan oleh oleh EEPT 400 mg/kgBB
dan EnHPT 800 mg/kbBB karena memiliki kemampuan menurunkan TDS
sebanding dengan bisoprolol pada hari ke 21 (Tabel 4.17 ; Gambar 4.22).
Tabel 4.17 Persentase perubahan TDS (%) pada hari ke-14, 17, 19 dan 21 tiap
kelompok perlakuan yang diinduksi NaCl 2,5% dan
metilprednisolon
Kelompok Dosis Persen Perubahan TDS ±SEM pada hari ke

No
(n=4) (mg/KgBB) 14 17 19 21
Tanpa - 19,66±2,08 0,49±0,59 0,60±1,52 3,63±0,95
1
perlakuan
2 CmcNa 1% 28,37±2,33 -2,20±1,79 -1,88±1,33 -1,49±3,55
3 EEPT 400 24,92±6,85 7,35±1,42* 16,02±1,02*# 20,87±0,63*#
4 EEPT 800 24,81±0,41 7,78±1,22* 13,22±1,93*# 17,57±2,19*#
5 EEAPT 400 18,53±3,67 5,95±2,54* 11,16±1,62*# 14,76±2,43*#
6 EEAPT 800 26,10±2,77 6,14±0,83* 11,08±0,85*# 15,27±1,46*#
7 EnHPT 400 23,74±2,52 6,52±2,14* 9,86±2,27*# 12,86±2,20*#
8 EnHPT 800 23,21±3,23 6,19±0,23* 12,86±0,99*# 20,24±1,17*#
9 Bisoprolol 0,0714 33,23±3,18 7,47±0,70*# 13,99±2,07*# 20,43±2,17*#
Keterangan : * Berbeda signifikan terhadap kontrol Pelarut
# Berbeda signifikan terhadap kontrol negatif
Gambar 4. 22 Grafik persen perubahan TDS tiap kelompok perlakuan yang

diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon (Mean ± SEM, n=4)
103

TDD tikus yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon mengalami
kenaikkan dibandingkan sebelum diinduksi (P<0,05). Rerata TDD awal tikus
yang digunakan dalam penelitian ini adalah 95,58 ± 0,96 mmHg dan setelah
induksi rerata TDD meningkat 123,17 mmHg. ( Tabel 4.18)
Tabel 4.18 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap TDD (mmHg) tikus
No Kelompok (n=4) Dosis TDD (mmHg) ±SEM pada hari ke

(mg/KgBB) 0 14
1 Tanpa perlakuan - 99,75±2,05 117,00±3,08 a
2 CMC Na 0,5% 1% 94,50±4,87 119,50±3,40 a
3 EEPT 400 99,50±3,97 128,00±5,85 a
4 EEPT 800 93,25±0,25 125,75±1,49 a
5 EEAPT 400 99,00±2,58 122,25±3,45 a
6 EEAPT 800 93,50±1,94 119,75±3,25 a
7 EnHPT 400 93,50±2,02 125,50±3,33 a
8 EnHPT 800 92,75±3,22 121,00±1,08 a
9 Bisoprolol 0,0714 94,50±2,22 129,75±6,52 a
Keterangan : 1 Berbeda signifikan terhadap hari ke 0
Pemberian EnHPT, EEAPT, dan EEPT menunjukkan aktivitas menurunkan
TDD tikus hipertensi. EEPT, EEAPT dan EnHPT dosis 400 mg/kgBB mampu
menurunkan TDD secara signifikan dibandingkan TDD tikus hipertensi pada hari
ke 17 dan sebanding dengan bisoprolol. Penurunanan ini sudah sama dengan TDD
rerata sebelum penginduksian. EEPT dan EnHPT dosis 800 mg/kgBB juga
mampu menurunkan TDD secara signifikan dibandingakan TDD tikus hipertensi
pada hari ke 17 tetapi tidak sama dengan TDD rerata sebelum induksi Kelompok
EEAPT 800 mg/kgBB memiliki aktivitas menurunkan TDD setelah 7 hari
pemberian ekstrak (hari ke 21). Rerata TDD setelah pemberian EEPT, EEAPT
dan EnHPT dapat dilihat pada (Tabel 4.19 dan Gambar 4.20).
104

Tabel 4.19 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap TDD (mmHg) tikus
(mg/KgBB) 17 19 21
1 Tanpa perlakuan 120,75±2,06 a 120,25±1,70 a 123,75±3,19 a
2 CMC Na 1% 116,75±2,63 a 113,50±3,86b 114,25±3,42
3 EEPT 400 120,25±5,042 113,50±4,94bc 98,50±3,62bcd
4 EEPT 800 115,00±2,94 ab 115,00±4,39b 107,00±6,15b
5 EEAPT 400 110,75±4,33b 102,25±2,93b 96,50±0,65bc
6 EEAPT 800 107,25±1,93 a 105,50±4,52 96,50±3,12b
b bc
7 EnHPT 400 114,40±3,43 107,00±3,85 98,00±1,87bcd
8 EnHPT 800 113,25±0,75 ab 105,25±1,55 abc 97,00±0,58bcd
9 Bisoprolol 0,0714 117,00±5,31b 110,25±149 ab 96,25±4,77b
Keterangan : 1 berbeda signifikan terhadap hari ke 0

2
3
4
Gambar 4. 23 Grafik TDD tiap kelompok perlakuan yang diinduksi NaCl 2,5%
dan metilprednisolon (Mean ± SEM, n=4)
Profil persentase perubahan TDD dapat dilihat pada Tabel 4.20 dan Gambar
4.24
105

Tabel 4.20 Persentase perubahan TDD (%) pada hari ke-14, 17, 19 dan 21 tiap
metilprednisolon
Dosis Persen Perubahan TDD ±SEM pada hari ke

No Kelompok (mg/KgBB) 14 17 19 21
Tanpa 2,24±1,09 5,04±1,52 4,39±1,20
1
perlakuan 27,57±7,98
2 CmcNa 1% 17,47±4,12 -3,32±1,95 -2,99±3,02 -6,05±4,49
3 EEPT 400 29,47±9,14 6,00±0,87 11,28±0,96* 22,87±2,24*#
4 EEPT 800 34,85±1,54 8,47±3,06* 8,50±3,77 14,87±5,05*
5 EEAPT 400 23,96±6,44 9,45±1,91* 16,32±1,49* 20,91±1,79*
6 EEAPT 800 28,18±3,63 10,13±3,81* 11,68±4,60* 17,52±3,75*
7 EnHPT 400 34,46±5,06 8,73±1,94* 14,78±1,56* 21,67±3,18*
8 EnHPT 800 30,85±3,80 6,40±0,35 13,03±0,75* 19,83±0,43*
9 Bisoprolol 0,0714 37,92±9,71 9,75±1,12* 14,50±3,64* 24,93±6,45*#
Keterangan : * Berbeda signifikan terhadap kontrol Pelarut
# Berbeda signifikan terhadap kontrol negatif
Gambar 4. 24 Grafik persen perubahan TDD tiap kelompok perlakuan yang

diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon (Mean ± SEM, n=4)
Pada penelitian ini, TDD awal tiap kelompok adalah sama. Tikus diinduksi
dengan NaCl 2,5% dan metilprednisolon selama 14 hari dan menunjukkan TDD
rerata tikus naik dibandingkan sebelumnya. Berdasarkan analisis statistik,
persentase kenaikan TDD adalah sama untuk setiap kelompok perlakuan.
Persentase penurunan TDD EEPT 800 mg/kgBB, EEAPT 400 mg/kgBB dan 800
mg/kgBB, serta EnHPT 400 mg/kgBB sebanding dengan bisoprolol pada hari ke
106

17. Persentase penurunan TDD bisoprolol juga sebanding dengan EEPT 400
mg/kgBB pada hari ke 19 dan 21 (Gambar 4.24).
DJ merupakan laju detak jantung yang diukur dengan jumlah kontraksi
jantung per satuan waktu (beat per minute =BPM). Berdasarkan hasil penelitian
terlihat bahwa DJ tikus hipertensi tidak berbeda dengan DJ tikus sebelum
hipertensi kecuali pada kelompok tikus yang diinduksi hipertensi dan diberi
EnHPT dosis 400 dan 800 mg/kgBB (Tabel 4.11).
Tabel 4.21 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap DJ (BPM) tikus hipertensi
hari ke-0 dan 14
No Kelompok Dosis DJ (BPM) ±SEM pada hari ke
(n=4) (mg/KgBB) 0 14
1 Tanpa - 323,50±8,97 411,50±7,96
perlakuan
2 CMC Na 1% 312,50±33,22 317,00±4,08
3 EEPT 400 251,50±47,80 358,50±8,09
4 EEPT 800 276,00±20,37 251,75±19,31
5 EEAPT 400 297,50±48,48 273,75±18,38
6 EEAPT 800 238,00±41,02 352,25±65,96
7 EnHPT 400 316,00±8,05 385,25±7,53 a
8 EnHPT 800 255,50±34,11 391,00±6,65 a
9 Bisoprolol 0,0714 348,00±9,01 383,00±23,53
Setelah pemberian ekstrak terlihat perubahan DJ pada kelompok EEPT 400
mg/kgBB, EEAPT 400 mg/kgBB, EnHPT 400 mg/kgBB dan EnHPT 800
mg/kgBB. Kelompok yang paling baik menurunkan DJ adalah EnHPT 400
mg/kgBB (Tabel 4.22; Gambar 4.25). Kelompok ini mampu menurunkan DJ
tikus hipertensi pada hari ke 17 namun belum sama dengan DJ sebelum
perlakuan. DJ kembali normal setelah pemberian ekstrak dilanjutkan hingga hari
ke 21. Kelompok perlakuan lain menunjukkan kemampuan menurunkan DJ
107

setelah hari ke 21. Kelompok kontrol positif tidak menunjukan adanya pengaruh
pemberian bisoprolol terhadap denyut jantung tikus hipertensi.
Tabel 4.22 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap DJ (BPM) tikus hipertensi
hari ke-17, 19 dan 21
No Kelompok (n=4) Dosis DJ (BPM) ±SEM pada hari ke
(mg/KgBB) 17 19 21
1 Tanpa perlakuan 382,75±16,42 406,25±19,34 364,75±21,23
2 CMC Na 1% 334,75±9,33 316,50±8,70 320,25±4,57
3 EEPT 400 312,25±29,14 293,75±6,14 236,50±9,67b
4 EEPT 800 279,00±13,74 271,50±14,20 178,25±24,36c
5 EEAPT 400 235,50±26,75 229,75±27,23 167,50±16,15 ab
6 EEAPT 800 265,00±31,55 301,75±53,75 293,00±67,46
7 EnHPT 400 325,75±17,61b 310,50±15,29b 288,00±12,08 ab
8 EnHPT 800 360,00±19,60 401,50±9,92 a 457,00±19,42 ab
9 Bisoprolol 0,0714 388,00±10,02 341,00±18,17 321,00±11,34

b
c
d
Profil perubahan DJ tikus hipertensi setelah pemberian fraksi dan
pembanding dapat dilihat pada Gambar 4.25
Gambar 4.25 Grafik DJ tiap kelompok perlakuan yang diinduksi NaCl 2,5%
dan Metilprednisolon (Mean ± SEM, n=4)
108

Persentasi perubahan DJ pada kelompok perlakuan dapat dilihat pada Tabel
4.23 dan Gambar 4.26.
Tabel 4.23 Persentase perubahan DJ (%) pada hari ke-14, 17, 19 dan 21 tiap
metilprednisolon
No Kelompok Dosis Persen Perubahan DJ ±SEM pada hari ke

(mg/KgBB) 14 17 19 21
1 Tanpa - -5,60±13,13 -5,62±2,84 0,17±2,19 -1,08±1,98
perlakuan
2 CmcNa 1% -27,47±3,99 6,82±4,84 1,39±3,27 11,09±6,28
3 EEPT 400 -58,05±27,59 12,40±9,23 17,88±3,08 33,87±3,57#
4 EEPT 800 7,51±8,68 -12,84±10,63 -8,89±6,71 28,39±10,87
5 EEAPT 400 0,26±16,55 12,85±11,39 15,61±9,19 38,53±5,65#
6 EEAPT 800 -59,36±43,76 16,58±16,01 9,82±11,85 16,63±10,03
7 EnHPT 400 -22,13±3,49 15,48±3,94 19,54±2,65 25,17±3,32
8 EnHPT 800 -63,75±26,99 7,65±6,25 -2,71±2,24 -16,86±4,51
9 Bisoprolol 0,0714 -10,327,43 -3,12±9,86 10,33±5,11 14,52±9,15
Keterangan : # Berbeda bermakna terhadap kontrol negatif (Tanpa perlakuan)
Gambar 4.26 Efek fraksi terhadap persen perubahan DJ tikus yang diinduksi
NaCl 2,5% dan Metiprednisolon (Mean ± SEM, n=4)
109

Berdasarkan hasil penelitian, persentase perubahan DJ paling besar
ditunjukkan oleh EEAPT 400 mg/kgBB setelah pemberian fraksi hari ke 21 yaitu
38,39 ± 5,65%.
Berdasarkan hasil penelitian, TAR semua kelompok perlakuan naik setelah
diinduksi dengan NaCl 2,5% dan metilprednisolon (Tabel 4.24).
Tabel 4.24 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap TAR (mmHg) tikus
No Kelompok (n=4) Dosis (mg/KgBB) TAR (mmHg) ±SEM pada hari ke
0 14
1 Tanpa perlakuan 107,00±4,10 132,00±2,65 a
2 CMC Na 0,5% 1% 108,75±1,65 132,25±2,39 a
3 EEPT 400 111,00±4,43 141,00±5,45 a
4 EEPT 800 105,25±0,25 137,75±1,25 a
5 EEAPT 400 110,25±1,93 133,70±3,73 a
6 EEAPT 800 105,25±1,93 133,75±2,78 a
7 EnHPT 400 104,50±1,19 136,00±2,27 a
8 EnHPT 800 105,50±1,55 134,25±1,25 a
9 Bisoprolol 0,0714 105,50±2,06 143,25±5,20 a
TAR dipengaruhi oleh TDS dan TDD. Pemberian NaCl 2,5% dan
metilprednisolon secara kronis menaikkan TDS dan TDD. Hal ini mengakibatkan
TAR juga menaik. Pemberian ekstrak dan bisoprolol selama 7 hari menunjukkan
penurunan TAR tikus hipertensi (Tabel 4.25; Gambar 4.27). Kelompok EEPT
800 , EnHPT 400, EnHPT 800 mg/kgBB menunjukkan aktivitas menurunkan
TAR tikus hipertensi yang sama dengan kontrol positif, yaitu mampu menurunkan
TAR pada hari ke 17. Penurunan yang terjadi lebih baik dari TAR sebelum
induksi (P<0,05). Kelompok EEAPT 400 mg/kgBB mampu menurunkan TAR
tikus hipertensi tetapi belum menyamai TAR sebelum induksi (P>0,05).

110

Aktivitasnya menurunkan TAR hingga pada kondisi awal terjadi setelah
pemberian fraksi hari ke 5.
Tabel 4.25 Efek EnHPT, EEAPT dan EEPT terhadap TAR (mmHg) tikus
N Kelompok (n=4) Dosis TAR (mmHg) ±SEM pada hari ke

o (mg/KgBB) 17 19 21
a 12
1 Tanpa perlakuan 129,75±2,10 127,50±2,53 126,75±2,25 ab
2 CMC Na 0,5% 1% 135,75±1,93 a 135,25±1,25 a 137,25±3,42 a
3 EEPT 400 131,50±4,94b 122,25±4,3923 109,50±3,50bcd
4 EEPT 800 126,00±2,86 ab 123,75±3,47 ab 115,50±3,47b
5 EEAPT 400 122,75±2,63b 114,5±2,18b 109,00±0,71bc
6 EEAPT 800 122,25±1,31 a 118,50±2,90 ab 111,50±2,33 ab
7 EnHPT 400 125,25±2,14 ab 118,25±3,49 ab 111,00±1,58 abc
8 EnHPT 800 126,00±1,08 ab 117,25±1,89 abc 107,50±0,65bcd
9 Bisoprolol 0,0714 130,75±4,15 ab 122,75±1,31 ab 109,25±3,68b

b
c
d
Gambar 4. 27 Efek fraksi terhadap TAR tikus yang diinduksi NaCl 2,5 % dan
Metilprednisolon (Mean ± SEM, n=4)
111

Persentase perubahan TAR pada setiap kelompok perlakuan dapat dilihat
pada Tabel 4.26 dan Gambar 4.28
Tabel 4.26 Persentase perubahan TAR (%) pada hari ke-14, 17, 19 dan 21 tiap
metilprednisolon
Dosis Persen Perubahan TAR ±SEM pada hari ke

No Kelompok
(mg/KgBB) 14 17 19 21
Tanpa 23,89±5,16 1,68±0,54 3,39±0,88 3,95±0,89
1
perlakuan
2 CmcNa 1% 21,68±2,64 -2,71±1,71 -2,36±1,78 -3,94±3,85
3 EEPT 400 27,82±8,29 6,71±1,03* 13,26±0,71*# 22,25±1,48*#
4 EEPT 800 30,88±0,93 8,49±2,36* 10,15±2,65* 16,16±3,76*
5 EEAPT 400 21,56±5,20 8,17±0,86* 14,31±1,33*# 18,34±2,11*#
6 EEAPT 800 27,18±3,08 8,45±2,49* 11,27±3,02* 16,52±2,54*
7 EnHPT 400 30,19±2,57 7,88±1,39* 13,08±1,74*# 18,30±1,98*#
8 EnHPT 800 27,32±1,84 6,14±0,33* 12,67±0,85*# 19,91±0,77*
9 Bisoprolol 0,0714 36,09±6,67 8,68±0,53*# 14,03±2,77*# 23,34±4,39*#
Keterangan : * Berbeda bermakna terhadap kontrol Pelarut

# Berbeda bermakna terhadap kontrol negatif
Gambar 4.28 Efek fraksi terhadap persen perubahan TAR tikus yang diinduksi
NaCl 2,5% dan Metilprednisolon (Mean ± SEM, n=4)
112

TAR merupakan salah satu parameter yang dapat digunakan dalam
menunjukkan aktivitas antihipertensi suatu senyawa atau fraksi. Aktivitas
penurunan TAR yang paling besar ditunjukkan EEPT 400 mg/kb bb karena fraksi
menunjukkan persen perubahan TAR yang sama seperti Bisoprolol.
Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa EnHPT, EEAPT dan EEPT
mempunyai aktivitas sebagai diuretik (Dalimunthe, dkk., 2014). Diduga fraksi ini
menurunkan tekanan darah melalui mekanisme penurunan tahanan perifer
pembuluh darah tanpa menyebabkan penurunan laju jantung yang berarti.
Terjadinya diuresis menunjukkan adanya penambahan volume urin yang
diproduksi dan peningkatan jumlah pengeluaran zat-zat terlarut dan air. Hal ini
mengakibatkan penurunan cairan volume ekstrasel. Pada kondisi hipertensi,
proses diuresis akan menurunkan kadar natrium dalam cairan tubuh dan dengan
adanya efek vasodilatasi maka terjadi penurunan resistensi perifer yang kemudian
menurunkan tekanan darah (Loizoo, et. al., 2004; de Souza et.al, 2004).
Senyawa kimia dalam EEAPT yang diduga berperan aktif dalam mekanisme
antihipertensi antara lain flavonoid dan saponin. Flavonoid merupakan salah satu
golongan fenol yang memiliki efek sebagai antioksidan. Flavonoid mampu
memperbaiki fungsi endotel dan menghambat agregasi platelet. Selain itu,
flavonoid akan mempengaruhi ACE. Penghambatan ACE akan menginhibisi
perubahan angiotensin I menjadi angiotensin II sehingga terjadi vasodilatasi.
Akibatnya tahanan resistensi perifer turun dan menurunkan tekanan darah
(Loizoo, et. al., 2004; Jawi, et.al., 2012). Tanin mengurangi pengerasan pembuluh
darah sehingga peredaran darah menjadi lancar dan meringankan kerja jantung
(Diennazola, 2012).
113

Berdasarkan hasil penelitian, laju jantung tidak diturunkan secara nyata oleh
pemberian fraksi. Walaupun terjadi penurunan laju jantung, tetapi nilainya cukup
kecil. Secara fisiologis, tekanan darah ditentukan oleh curah jantung dan resistensi
perifer. Curah jantung adalah hasil kali denyut dengan volume sekuncup.
Resistensi perifer merupakan resultan dari resistensi pada pembuluh darah (arteri
dan arteriol) dengan viskositas darah. Resistensi pembuluh darah ditentukan oleh
tonus otot polos arteri dan arteriol dan elastisitas dinding pembuluh darah (Dipiro,
2008).
Pemberian garam dalam jangka wanktu yang lama (long-term administration)
menyebabkan hipertensi dan meningkatkan stress oksidatif pada tikus normotensi.
Peningkatan produksi radikal bebas (ROS) dapat menyebabkan kerusakan
oksidatif makromolekul dan akhirnya menyebabkan kerusakan organ salah
satunya endotelium pembuluh darah. Hal ini menyebabkan produksi NO akan
menurun (Wansi et.al., 2009; Zhu, et.al., 2004).
Kadar NO pada berbagai cairan tubuh dapat ditentukan berdasarkan
pengukuran nitrit dan nitrat yakni produk akhir yang stabil akibat oksidasi
nitrogen oksida. Metode ini merupakan metode tidak langsung yang umum
digunakan untuk menentukan NO.. Produksi NO endogen mempunyai hubungan
yang erat dengan kadar nitrit/nitrat serum, plasma, atau urin. Oleh karena itu,
perkiraan kadar nitrit/nitrat adalah suatu pengukuran relatif terhadap produksi NO
secara in vivo (Sastry, et. al., 2002),
Di dalam darah nitrat dibentuk secara langsung dari reaksi dioksigenasi NO
yaitu antara NO dan oksihemoglobin. NO bereaksi dengan oksihemoglobin
membentuk nitrat dan methemoglobin dengan persamaan NO ± Fe±2 — O2
114

NO3- ± Fe±3. Nitrit dibentuk secara langsung pada darah melalui autooksidasi NO
antara dua molekul NO dengan oksigen. Reaksi ini dikatalisis oleh protein
plasma ceruloplasmin dengan persamaan : 4 NO* ± O2 ± H2O 4 NO2- ± 4H±
(Lundberg, et al., 2011),
Pengukuran kadar nitrit dan nitrat secara spektrofotometri UV-Vis dilakukan
pada panjang gelombang 540 nm menggunakan pereaksi Griess (terdiri dari 1%
asam sulfanilat dan 0,1% NED dengan perbandingan 1:1) dengan prinsip diazotasi
nitrit dengan asam sulfanilat pada suasana asam menjadi senyawa azo dan dengan
penambahan NED akan membentuk warna ungu yang dapat diukur pada panjang
gelombang 540 nm. Berdasarkan hasil kurva kalibrasi diperoleh persamaan garis
linier, yaitu Y = 0,11232X ± 0,01607 dengan nilai r = 0,99913, yang
menunjukkan linieritas antara kadar (X) dengan absorbansi (Y).. Waktu
pengukuran sampel (operating time) pada penelitian ini adalah 12 menit.
Berdasarkan hasil penelitian, kadar nitrit dan nitrat menurun pada tikus
yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon serta diberi EnHPT dapat dilihat
pada Gambar 4.29.
Gambar 4.29 Efek EnHPT terhadap kadar nitrit dan nitrat plasma tikus yang
diinduksi NaCl 2,5% dan Metilprednisolon (Mean ± SEM, n=4)
115

Hasil pengukuran pada kelompok I (kontrol) adalah kadar nitrit 22,90 ± 1,24
µg/ml dan kadar nitrat 24,87 ± 1,49 µg/ml. Hasil pengukuran pada kelompok II,
kadar nitrit 20,94 ± 2,11 µg/ml dan nitrat 21,83 ± 2,39 µg/ml dan hasil
pengukuran pada kelompok III, kadar nitrit 19,89 ± 0,62 µg/ml dan nitrat 21,69 ±
0,29 µg/ml. Hasil ini menunjukkan bahwa pemberian EnHPT 400 dan 800
mg/kgbb menurunkan kadar nitrooksida dalam plasma tikus yang diinduksi NaC
2,5% dan metilprednisolonl. Berbagai penelitian menunjukkan bahwa asupan
garam yang tinggi menyebabkan produksi NO di ginjal dan vaskular menurun
(Zhu, 2004). Pemberian EnHPT pada kelompok tikus yang diinduksi NaCl 2,5%
dan metilprednisolon tidak mampu menaikkan produksi NO. Hal ini menunjukan
bahwa kandungan senyawa kimia dalam EnHPT (steroid/triterpenoid) tidak
memiliki mekanisme kerja yang mempengaruhi NO.
Parameter biokimia dan hematologi merupakan sistem homeostatik utama
pada manusia dan hewan yang menggambarkan kondisi kesehatannya. Pada
penelitian ini dilakukan uji parameter biokimia untuk mengetahui mekanisme
EnHPT sebagai antihipertensi pada tikus yang diinduksi NaCl 2,5% dan
metilprednisolon (Tabel 4.27)
Tabel 4.27 Efek EnHPT terhadap parameter biokimia dalam plasma darah tikus
yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon
Parameter Biokimia ± SEM (n=4) Kontrol EnHPT 400 EnHPT 800

Kolesterol 43,50 ± 3,43 35,50 ± 1,19 47,00 ± 2,16
Trigliserida 46,25 ± 11,54 33,00 ± 5,21 13,00 ± 1,29*
HDL 17,00 ± 3,53 17,75 ± 2,72 15,00 ± 2,61
LDL 25,00 ± 2,41 3,50 ± 1,25* 28,88 ± 4,69
AST 222,63 ± 11,77 301,50 ± 56,28 187,50 ± 19,59
ALT 381,00 ± 30,44 482,83 ± 55,76 313,13 ± 43,59
Ureum 50,15 ± 2,16 59,13 ± 1,84* 54,25 ± 2,07
Kreatinin 0,29 ± 0,04 0,83 ± 0,08* 0,60 ± 0,06*
Keterangan : * berbeda secara signifikan terhadap kontrol (Mean ± SEM, n=4)
116

Pemberian EnHPT 400 dan 800 mg/kg bb tidak mempengaruhi kadar
kolesterol dan HDL tikus yang diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon. Hal ini
menunjukkan bahwa pemberian EnHPT 400 dan 800 mg/kg bb tidak akan
menimbulkan resiko gangguan penyakit kardiovaskular akibat kelebihan lipid
berdasarkan rasio kelesterol dengan HDL, koefisien aterogenik dan indeks
aterogenik dalam plasma. (P>0,05). Kadar AST dan ALT plasma tikus yang
diinduksi NaCl 2,5% dan metilprednisolon tidak dipengaruhi oleh EnHPT 400
dan 800 mg/KgBB. Hal ini menunjukkan bahwa EnHPT tidak mempengaruhi
hati. ALT dan AST merupakan enzim yang terdapat dalam hati. Adanya kerusak
pada hepatosit akan menyebabkan pelepasan ALT dan AST. Pemberian EnHPT
400mg/kg bb meningkatkan kadar ureum sedangkan kreatinin ditingkatkan oleh
EnHPT 400 dan 800 mg/kg bb. Kreatinin merupakan salah satu parameter
biokimia ginjal. Jika kreatinin meningkat dalam plasma maka hal ini
menunjukkan ginjal mengalami kerusakan (Ikewuchi et.al., 2013 ).
4.6.3 Penurunan Tekanan Darah Tikus Hipertensi Yang Diinduksi L-Name
L-Name merupakan suatu senyawa analog L-arginin yang berfungsi
menghambat NOS.. Hal ini menyebabkan produksi NO dihambat, akibatnya
pembuluh darah akan mengalami vasokontriksi, disfungsi ginjal dan
meningkatkan tekanan darah (Thaweekhort, et.al, 2012). Pada penelitian ini
terlihat bahwa L-Name meningkatkan TDS secara signifikan pada kelompok uji
(Tabel 4.28).
Endotelium dan nitriokside memegang peranan penting dalam regulasi
tekanan pembuluh darah, sehingga jika terjadi kerusakan pada endothelium dan
NO akan menyebabkan peningkatan tekanan darah. Pemberian L-Name secara
117

kronik pada hewan percobaan akan menghambat sintesis NO. Penghambatan ini
besifat kompetitif dan reversibel dengan adanya kelebihan L-Arginin sehingga
menyebabkan hipertensi akibat perubahan struktur vaskular dan disfungsi ginjal
(Thaweekhort, et.al, 2012; Talas, 2013).
Tabel 4.28 Efek EnHPT dan EEAPT terhadap TDS (mmHg) tikus hipertensi
hari ke-0 dan 14
N Dosis TDS (mmHg) ±SEM pada hari ke

Kelompok (n=4)
o (mg/KgBB) 0 14
1 CMC Na 0,5% 1% 123,25±1,38 162,00±0,71 a
2 EEAPT 400 123,75±2,53 166,75±2,29 a
3 EEAPT 800 125,25±0,85 162,25±1,65 a
4 EnHPT 400 126,00±2,08 168,50±1,71 a
5 EnHPT 800 121,75±1,38 169,00±2,12 a
Keterangan : a berbeda bermakna terhadap hari ke 0
Hipertensi yang diinduksi L-Name akan mirip/menyerupai hipertensi esensial
yang disebabkan oleh disfungsi endothelium akibat penghambatan sintesis NO
pada manusia (Abdulazeez et,al, 2015). NO yang dilepaskan oleh sel endothelial
pembuluh darah merupakan regulator penting yang mengatur tekanan darah pada
sistem vaskular. Hal ini disebabkan karena NO bersifat vasodilatasi dan
menghambat reabsorpsi natrium di tubular. Pada kondisi hipertensi, kadar NO
menurun di dalam tubuh (Jawi, et.al., 2012; Zhu et.al., 2004).
Berdasarkan hasil penelitian, pemberian EnHPT dan EEAPT menunjukkan
aktivitas penurunan TDS (Tabel 4. 29; Gambar 4.30).
118

Tabel 4.29 Efek EnHPT dan EEAPT terhadap TDS (mmHg) tikus hipertensi
N Kelompok Dosis TDS (mmHg) ±SEM pada hari ke

o (n=4) (mg/KgBB) 17 19 21
1 CMC Na 0,5% 1% 160,00±0,41 a 160,00±0,41 a 153,75±1,03 a
2 EEAPT 400 152,75±0,75 ab 145,50±1,66 abc 121,50±0,96bcd
3 EEAPT 800 145,75±0,75 ab 130,75±1,11bc 124,75±2,49bc
4 EnHPT 400 160,75±0,83 ab 152,50±1,55 abc 129,50±2,63bcd
5 EnHPT 800 159,25±1,11 ab 151,50±2,10 abc 128,25±2,32bcd
b
berbeda bermakna terhadap hari ke 14
c
d
Gambar 4. 30 Efek EEAPT terhadap TDS tikus yang diinduksi L-Name
Pemberian CMC-Na pada kelompok kontrol negatif tidak menurunkan TDS
setelah diinduksi L-Name sedangkan semua kelompok ektrak menunjukkan
aktivitas penurunan TDS mulai hari ke 17 (hari ke 3 setelah pemberian ekstrak)
namun belum sama dengan TD hari ke 0. Aktivitas penurunan TDS terbaik
ditunjukkan oleh EEAPT 800 mg/kgBB pada hari ke 19, karena sudah mampu
menurunkan TD sama dengan TD hari ke 0. Persen perubahan TDS pada tikus
hipertensi yang diinduksi L-Name dapat dilihat pada Gambar 4.31
119

Gambar 4.31 Efek EEAPT terhadap persen perubahan TDS tikus yang
diinduksi L-Name (Mean ± SEM, n=4)
Rerata TDS awal tikus yang digunakan dalam penelitian ini adalah 124,00 ±
0,77 mmHg. Rerata TDS setelah penginduksian menggunakan L-Name selama 14
hari naik menjadi 165,70 ± 0,99 mmHg (_33,69 ± 0,94%). Persen perubahan
TDS terbesar ditunjukkan oleh EEAPT 800 mg/kgBB pada hari ke 17 dan 19
sedangkan hari ke 21 ditunjukkan oleh EEAPT 400 mg/kgBB. Semua ekstrak
mampu menurunkan TDS yang berbeda terhadap kontrol (P<0,05).
Selain menaikkan TDS, pemberian L-Name selama 14 hari juga menaikkan
TDD tikus normotensi (P< 0,05) (Tabel 4.30).
Tabel 4.30 Efek EnHPT dan EEAPT terhadap TDD (mmHg) tikus hipertensi
hari ke-0 dan 14
TDD (mmHg) ±SEM pada hari ke
0 14
1 CMC Na 0,5% 1% 91,00±1,87 118,75±2,59 a
2 EEAPT 400 89,75±1,79 124,25±1,70 a
3 EEAPT 800 95,50±5,29 127,75±1,25 a
4 EnHPT 400 109,50±5,33 124,50±1,50
5 EnHPT 800 85,50±1,19 124,50±2,59 a
EEAPT dan EnHPT menyebabkan penurunan TDD pada tikus hipertensi
(Tabel 4.31; Gambar 4.32).Penurunan TDD yang paling baik ditunjukkan oleh
120

EnHPT 400 mg/kgBB karena ekstrak ini mampu menurunkan TDD tikus
hipertensi setelah tiga hari pemberian ekstrak dan besarnya TDD telah sama
dengan TDD hari ke 0. EEAPT 800 mg/kgBB juga mempunyai aktivitas
menurunkan TDD pada hari ke 3 tetapi belum bisa menyamai TDD hari ke 0.
EEAPT 400 mg/kgBB mampu menurunkan TDD setelah hari ke 5 pemberian
ekstrak.
Tabel 4.31 Efek EnHPT dan EEAPT terhadap TDD (mmHg) tikus hipertensi
hari ke-17,19 dan 21

(mg/KgBB) 17 19 21
1 CMC Na 0,5% 1% 112,75±1,93 ab 117,50±2,39 abc 111,50±1,26 abc
2 EEAPT 400 117,75±1,89 a 92,75±2,17bc 85,25±2,67bcd
3 EEAPT 800 116,50±2,84 ab 91,50±1,04bc 82,50±2,90bcd
4 EnHPT 400 118,00±0,91b 111,50±0,65bc 100±4,18bc
5 EnHPT 800 113,75±1,03 ab 103,00±1,47 abc 91,75±1,25 abcd
b
c
d
Gambar 4.32 Efek EEAPT terhadap TDD tikus yang diinduksi L-Name
(Mean±SEM, n=4)
121

Persen perubahan TDD tikus yang diinduksi L-Name dan penurunannya setelah
pemberian ekstrak dapat di lihat pada Gambar 4.33
Gambar 4.33 Efek EEAPT terhadap persen perubahan TDD tiap kelompok
perlakuan yang diinduksi L-Name (Mean ± SEM, n=4)
Berdasarkan hasil penelitian, semua ekstrak menunjukkan aktivitas
menurunkan TDD dibandingkan kontrol negatif. Hal ini ditunjukkan oleh persen
penurunan TDD. Persen penurunan TDD terbesar tikus hipertensi adalah EEAPT
800 mg/kgBB (35%) dan berbeda bermakna terhadap kontrol.Persen penurunan
TDD terkecil ditunjukkan oleh EnHPT 400 mg/kgBB.
DJ tikus setelah pemberian L-Name 14 hari mengalami kenaikan secara
signifikan pada kelompok kontrol negatif dan EnHPT 800 mg/kgBB sedangkan
pada kelompok EEAPT 400, 800 dan EnHPT 400 mg/kgBB tidak mengalami
kenaikan (Tabel 4. 32). Adanya variasi DJ pada tiap kelompok perlakuan
menunjukkan bahwa DJ bersifat individual dan sangat dipengaruhi kondisi psikis
dan lingkungan.
122

Tabel 4.32 Efek EnHPT dan EEAPT terhadap DJ (BPM) tikus hipertensi hari
ke-0 dan 14
DJ (BPM) ±SEM pada hari ke

0 14
1 CMC Na 0,5% 1% 355,00±6,36 378,75±5,91 a
2 EEAPT 400 330,50±39,82 367,00±2,04
3 EEAPT 800 338,50±18,37 355,00±2,86
4 EnHPT 400 277,00±27,89 365,50±9,99
5 EnHPT 800 346,50±5,95 407,00±10,86 a
Pemberian EEAPT dosis 400 dan 800 mg tidak mempengaruhi DJ tikus
(P>0,05) (Tabel 4.33; Gambar 4.34). Pemberian CMC-Na, EnHPT 400 dan 800
meningkatkan DJ tikus hipertensi. Hal ini menunjukkan bahwa penginduksian
dengan L-Name menyebabkan vasokontriksi akibat penghambatan eNOS.
Vasokontriksi akan menyebabkan jantung bekerja lebih kuat untuk memompakan
darah. Akibatnya denyut jantung akan meningkat. Pemberian EnHPT tidak
mampu untuk memperbaiki kondisi disfungsi endotel sehingga tekanan vaskular
tetap tinggi.
Tabel 4.33 Efek EnHPT dan EEAPT terhadap DJ (BPM) tikus hipertensi hari
ke-17, 19 dan 21
N Kelompok (n=4) Dosis DJ (BPM) ±SEM pada hari ke

o (mg/KgBB) 17 19 21
1 CMC Na 0,5% 1% 390,75±3,33 a 383,00±5,35 a 396,75±6,29 abd
2 EEAPT 400 372,50±4,33 340,00±8,19c 389,50±3,52bd
3 EEAPT 800 373,50±6,66 331,25±14,55 405,50±8,79 a
4 EnHPT 400 400,25±4,59 a 394,75±12,63 a 352,25±9,15c
5 EnHPT 800 416,00±7,26 a 373,75±9,05c 315,00±10,49bcd
123

b
c
d
Gambar 4.34 Efek EEAPT terhadap denyut jantung tikus yang diinduksi L-Name
(Mean±SEM, n=4)
Persen perubahan DJ setelah pemberian fraksi ditunjukkan oleh Gambar

4. 35
Gambar 4.35 Efek EEAPT terhadap persen perubahan DJ tikus yang diinduksi
L-Name (Mean ± SEM, n=4)
124

TAR tikus setelah diinduksi L-Name naik dibandingkan sebelum induksi
(P<0,05) (Tabel 4.34). L-name akan menghambat produksi NO sehingga
menaikkan tekanan darah termasuk TAR. Pemberian L-Name secara kronis akan
menyebabkan tekanan darah yang permanen akibat adanya kerusakan pada
jaringan endotelial.
Tabel 4.34 Efek EnHPT dan EEAPT terhadap TAR (mmHg) tikus hipertensi
hari ke-0 dan 14
Kelompok Dosis TAR (mmHg) ±SEM pada hari ke

No
(n=4) (mg/KgBB) 0 14
1 CMC Na 0,5% 1% 101,50±0,01 133,25±0,02 a
2 EEAPT 400 101,25±1,97 138,50±0,96 a
3 EEAPT 800 105,50±3,28 139,25±1,03 a
4 EnHPT 400 115,25±3,73 139,25±1,31 a
5 EnHPT 800 97,75±1,11 139,00±2,12 a
a
Keterangan : berbeda bermakna terhadap hari ke 0
Semua fraksi menunjukkan aktivitas menurunkan TAR pada hari ke 19
(Tabel 4.35).
Tabel 4.35 Efek EnHPT dan EEAPT terhadap TAR (mmHg) tikus hipertensi
No Kelompok Dosis TAR (mmHg) ±SEM pada hari ke

(n=4) (mg/KgBB) 17 19 21
1 CMC Na 0,5% 1% 128,50±0,03 131,25±0,04 125,25±0,05
2 EEAPT 400 129,25±1,38ab 110,25±1,65bc 97,50±1,71bcd
3 EEAPT 800 126,25±1,75ab 104,75±0,75bc 96,50±1,71bd
4 EnHPT 400 132,25±0,75ab 125,00±1,71bc 109,75±2,49bcd
5 EnHPT 800 128,75±0,85ab 119,25±1,38bc 104,00±0,00abcd
b
c
d
125

Persen perubahan DJ setelah pemberian ekstrak ditunjukkan oleh Gambar 4. 36
Gambar 4.36 Efek EEAPT terhadap persen perubahan TAR tikus yang
diinduksi L-Name (Mean ± SEM, n=4)
Aktivitas antioksidan pada tumbuhan diduga dapat menurunkan tekanan
darah. Beberapa senyawa fenol dilaporkan dapat meningkatkan aktivitas NO di
pembuluh darah melalui mekanisme meningkatkan sintesis NO melalui jalur NOS
atau pencegah perusakan NO. Flavonoid bersifat kardioprotekstif dan
menurunkan tekanan darah dengan mekanisme kerja pada kanal ion
kardiovaskular dan berperan penting pada regulasi tekanan pembuluh darah.
Antioksidan berperan juga pada sintesis senyawa-senyawa vasodilator dan
menghambat pembentukan radikal bebas (Abdulazeez, et, al, 2015).
Hasil pengukuran kadar nitrit dan nitrat dalam plasma darah tikus yang
diinduksi L-NAME dapat dilihat pada Gambar 4.37
* *
Gambar 4.37 Efek EEAPT terrhadap kadar nitrit dan nitrat plasma tikus yang
diinduksi L-Name
126

Penelitian ini menggunakan 3 kelompok yaitu kelompok I (kontrol,),
kelompok II (tikus hipertensi L-Name ± EEAPT 400), dan kelompok III (tikus
hipertensi L-Name ± EEAPT 800). Berdasarkan penelitian sebelumnya diketahui
bahwa kadar nitrit rerata tikus normal adalah 3,16 ± 0,19 µg/ml dan kadar nitrat
rerata adalah 3,44 ± 0,16 µg/ml. Hasil pengukuran pada kelompok I (kontrol)
diperoleh kadar nitrit 2,10 ± 1,34 µg/ml dan kadar nitrat 2,24 ± 0,45 µg/ml, Hasil
ini menunjukkan bahwa pemberian L-Name dan larutan pembawa CMC-Na 0,5%
dapat menurunkan kadar nitrit dan nitrat plasma secara signifikan dibandingkan
dengan kelompok normal. L-Name merupakan suatu senyawa penghambat eNOS
sehingga produksi NO berkurang. Selain itu, karboksimetilselulosa (CMC)
merupakan senyawa turunan selulosa yang digunakan dalam formulasi pemberian
obat dan menunjukkan aktivitas antioksidan berupa resistensi terhadap degradasi
OH* dan mampu menangkap ROS dan menghambat pembentukan O2- (Trombino,
et al,, 2012).
Hasil pengukuran pada kelompok II diperoleh kadar nitrit 4,52 ± 0,40 µg/ml
dan nitrat 4,63 ± 1,29 µg/ml dan Hasil pengukuran pada kelompok III diperoleh
kadar nitrit 8,59 ± 3,23 µg/ml dan nitrat 9,19 ± 3,93 µg/ml. Hasil ini menunjukkan
bahwa pemberian EEAPT 400 dan 800 mg/kgBB dapat meningkatkan kadar
nitrooksida dalam plasma tikus yang diinduksi L-Name. Peningkatan kadar nitrit
dan nitrat oleh EEAPT diduga karena adanya senyawa fenilpropanoid glikosida
pada tumbuhan puguntano yang bersifat antioksidan dan dapat digunakan untuk
mengurangi stres oksidatif (Thuan, et al,, 2007),
Stres oksidatif merupakan salah satu patogenesis hipertensi. Pada kondisi
normal, endotelial penbuluh darah berperan pada relaksasi arterial. NO merupakan
127

suatu senyawa yang bersifat vasodilator, disintesis dan dilepaskan oleh endotelial
pembuluh darah. NO mudah dirusak oleh radikal bebas seperti anion superoxide
(O2-). Senyawa ini akan merubah fungsi endotelial sehingga produksi NO
berkurang. Hal ini menyebabkan peningkatan tekanan darah dan stress oksidatif.
Untuk mengatasi hal ini, diperlukan senyawa antioksidan (Kukongviriyapan et
al., 2015).
L-name menyebabkan hipertensi pada tikus dengan menghambat kerja enzim
NOS sehingga pembentukan NO dan siklik guanosin monofosfat (cGMP) aorta
menurun. Hal ini menyebabkan vasokontriksi dan tekanan darah meningkat.
Selain itu, NO juga mempunyai efek sebagai antioksidan, antiinflamasi, fungsi
hemostasis dan imunologi. Penghambatan NOS akan mengaktivasi enzim
angiotensin (ACE) sehingga menstimulasi oksidasi nikotinamide adenine
dinukleotida fosfat (NADPH) dan menyebabkan meningkatnya pembentukan
ROS. Adanya penurunan kadar NO dalam plasma dan meningkatnya ROS
menunjukkan terjadinya disfungsi sel endotelial (Nakmareong et. al., 2011;
Kukongviriyapan et. al., 2015; Berkban et al., 2015)
Berdasarkan hasil penelitian, kadar kolesterol dan LDL meningkat pada
kelompok tikus hipertensi yang diberi EEAPT 400 mg/kgBB dibandingkan
dengan kelompok kontrol namun menurunkan kadar kreatinin (P<0,05).
Pemberian EEAPT 800 mg/KgBB pada tikus hipertensi meningkatkan kadar
trigliserida dan kreatinin namun mampu menurunkan kadar LDL (P<0,05). Kadar
HDL, AST dan ALT tidak dipengaruhi oleh pemberian EEAPT 400 dan 800
mg/KgBB (P>0,05) (Tabel 4.36). Kadar kolesterol, trigliserida dan LDL yang
tinggi dalam plasma merupakan faktor resiko penyebab penyakit kardiovaskular
128

sera obesitas. Penurunan kadar LDL oleh EEAPT 800 mg/KgBB menunjukkan
kemampuan EEAPT menurunkan resiko terjadinya penyakit jantung koroner
(Ikewuchi et.al., 2013). Hal ini diduga akibat EEAPT mengandung senyawa
antioksidan seperti flavonoid, tanin dan saponin.
Aktivitas ALT dan AST meningkat pada tikus yang diinduksi L-Name dan
diberi Na-CMC 0,5% (kontrol) (Tabel 4.36). Hal ini menunjukkan bahwa tikus
yang diinduksi dengan L-Name mengalami dekomposisi fungsi hepatik akibat
efek kenaikan tekanan darah oleh L-Name. L-Name akan merusak permiabilitas
membran hati sehingga menyebabkan pelepasan enzim ALT dan AST dari sel
sitosol hati ke dalam plasma darah. Peningkatan enzim ini juga menunjukkan
kerusakan pada organ lain seperti jantung (Prytzyk et. al., 2003; Talas et. al,
2013). Aktivitas ALT dan AST menurun pada kelompok tikus yang diinduksi L-
Name dan EEAPT. Hal ini menunjukan bahwa EEAPT mempunyai efek
memperbaiki jaringan yang rusak akibat L-Name. Kemampuan memperbaiki
jaringan yang rusak diduga karena adanya flavonoid dalam ekstrak ini yang
memiliki aktivitas antioksidan.
Senyawa-senyawa antioksidan berperan penting pada proses pencegahan
berbagai penyakit jantung dan kanker. Beberapa literatur menunjukan bahwa
senyawa fenolik berfungsi menurunkan tekanan darah dengan cara meningkatkan
permiabilitas pembuluh darah kapiler (Prytzyk et al., 2003; Ryu et al., 2008;
Maruyama et al., 2009; Gogebakan et al., 2012; Talas et al., 2013).
129

Tabel 4.36 Efek EEAPT terhadap parameter darah dalam plasma darah tikus yang
diinduksi L-Name
Parameter Darah Kontrol EEAPT 400 EEAPT 800
± SEM (n=4)
Kolesterol 52,75 ± 4,33 74,50 ± 5,51* 46,75 ± 2,02
Trigliserida 31,00 ± 3,24 39,25 ± 1,25 63,00 ± 4,71*
HDL 22,25 ± 0,85 21,00 ± 0,58 23,25 ± 1,18
LDL 28,45 ± 4,37 45,98 ± 2,01* 10,55 ± 1,65*
AST 145,38 ± 8,14 138,25 ± 8,50 137,25 ± 5,36
ALT 310,00 ± 35,48 298,63 ± 6,64 250,60 ± 32,19
Ureum 55,5 ± 0,50 53,45 ± 0,67 55,25 ± 0,39
Kreatinin 0,43 ± 0,05 0,19 ± 0,01* 0,64 ± 0,04*
Keterangan : * berbeda bermakna terhadap kontrol

Kadar kolesterol dan LDL meningkat secara bermakna pada kelompok tikus
hipertensi dan diberi L-Name 400 mg/kgBB dibandingkan terhadap kontrol.
Bentuk kolesterol LDL yang teroksidasi (oxLDL) berperan penting pada
patogenesis disfungsi endotel. Keadaan vaskuler yang dapat menyebabkan
aterosklerosis mengakibatkan dinding vaskuler permeabel terhadap berbagai
lipoprotein seperti VLDL kolesterol, kilolomikron, dan kolesterol LDL, sehingga
mengakibatkan terperangkapnya lipid pada lapisan intima vaskuler. Kolesterol
LDL kemudian akan mengalami oksidasi oleh superoxide yang dihasilkan oleh
NAD(P)H oxidase makrofag. OxLDL dapat merangsang sejumlah proses redox-
sensitive yang mempunyai dampak jelek terhadap fungsi endotel sehingga
menurunkan bioavailabilitas NO dengan cara menghambatan eNOS dan inaktifasi
NO. Sel endotel adalah lapisan yang meliputi permukaan dalam pembuluh darah
yang berfungsi sebagai membrane selektif yang membatasi darah dengan jaringan
130

sekitar pembuluh darah. Sel endotel berperan penting dalam mempertahankan
fungsi homeostasis sistim kardiovaskuler. Sel endotel bertanggung jawab dalam
mempertahankan permeabilitas serta pertukaran zat antara darah dan jaringan
sekitarnya, menghasilkan zat vasoaktif dan proses angiogenesis, juga berfungsi
sebagai tromboresisten.
Selain itu, tumbuhan yang banyak mengandung saponin menpunyai efek
hipotensi disebabkan oleh efek diuresis senyawa ini, memperbaiki fungsi
endotelium dan menstimulasi pelepasan NO, dan menghambat enzim pengubah
angiotensi (ACE) (Oztasan, et. al., 2008).
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa tumbuh-tumbuhan yang banyak
mengandung polifenol mempunyai efek sebagai antioksidan yang akan
meminimalkan disfungsi (kerusakan) sel endotelial dengan cara meningkatkan
pembentukan NO, menurunkan pembentukan LDL, meningkatkan pembentukan
prostasiklin, meningkatkan EDHF sehingga terjadi vasorelaksan dan menurunkan
pembentukan endothelin 1 (Alamgeer et.al., 2015).
Berdasarkan hasil penelitian, kadar kreatinin menurun pada kelompok EEAPT
400 mg/kgBB dibandingkan kontrol tetapi menaik pada EEAPT 800 mg/kgBB.
4.7 Efek Fraksi n-Heksan, Etiasetat dan Etanol Puguntano Terhadap

Kontraktilitas dan Denyut Jantung Tikus
Aktivitas cardiotonik EnHPT, EEAPT dan EEPT dilakukan berdasarkan efek
inotropik dan kronotropik ekstrak terhadap isolat jantung tikus secara invitro.
4.7.1 Efek Inotropik
Uji inotropik adalah pengujian yang dilakukan untuk melihat peningkatan
kontraktilitas isolat jantung. Hasil uji inotropik pada isolat jantung berupa adanya
peningkatan kontraktilitas (Niazmand dan Saberi, 2010). Berdasarkan hasil
131

penelitian menunjukkan bahwa EnHPT dapat meningkatkan kontraksi isolat
jantung tikus. Peningkatan kontrasi jantung terbesar dihasilkan oleh EnHPT 1
mg/ml (Gambar 4.38), meskipun peningkatannya tidak sama dengan peningkatan
kontraksi oleh digoksin (P<0,05). Digoksin merupakan glikosida jantung dari
Digitalis lanata yang memiliki efek meningkatkan kontraksi otot jantung (Dipiro,
2008).
Gambar 4.38 Efek EnHPT terhadap peningkatan kontraksi otot jantung
Peningkatan kontraksi jantung setelah pemberian EnHPT 1 mg sebanyak 0,5
mL sebanding dengan digoksin 0,025 mg sebanyak 0,5 mL (P> 0,05) sedangkan
peningkatan kontraksi jantung setelah pemberian EnHPT 1 mg sebanyak 0,25 mL
lebih besar dibandingkan dengan digoksin 0,025 mg sebanyak 0,25 mL. Efek
paling tinggi meningkatkan kontraksi otot jantung ditunjukkan oleh fraksi
etilasetat dosis 1 mg yang diberikan sebanyak 0,5 mL. Peningkatan ini sebanding
dengan digoksin 0,025 mg sebanyak 0,5 mL (P>0,05) (.Gambar 4.39)
132

Gambar 4.39 Efek EEAPT terhadap peningkatan kontraksi otot jantung.
EEAPT 0,5 mg sebanyak 0,25 mL mampu meningkatkan kontraksi otot
jantung lebih besar dari pemberian digoksin 0,025 mg sebanyak 0,25 mL,
sedangkan pada pemberian EEAPT dosis 0,25; 0,5; dan 1 mg tiap 1 mL tidak
menunjukkan efek meningkatkan kontraksi jantung. Kontraksi otot jantung tidak
ditingkatkan oleh EEPT, baik pada dosis 0,25; 0,5; maupun 1 mg dibandingkan
dengan digoksin (P<0,05), (Gambar 4.40). Hal ini menunjukkan bahwa EEPT
tidak bersifat inotropik.
Gambar 4.40 Efek EEPT terhadap peningkatan kontraksi otot jantung
Digoksin merupakan senyawa glikosida jantung yang dapat meningkatkan
kontraksi otot jantung. Glikosida jantung mempunyai mekanisme kerja
penghambatan Na+/K+ ATPase yang merupakan inhibitor transport aktif Na+ dan
K+ yang kuat dan sangat selektif untuk melintasi membran sel, dengan cara
133

berikatan pada suatu tempat khusus pada sisi ekstrasitoplasma di sub unit α pada
Na+/K+-ATPase, sejenis enzim “pompa Na” dalam sel. Pengikatan glikosida
jantung dengan Na+/K+-ATPase dan penghambatan pompa ion dalam sel ini
bersifat reversible dan dihantarkan secara entropik. Obat-obatan ini khususnya
berikatan dengan enzim tersebut setelah fosforilasi pada suatu β-aspartat di sisi
sitoplasma pada sub unit α dan menstabilkan konformasi ini. K+ eksternal
menyebabkan defosforilasi enzim tersebut sebagai tahap awal translokasi aktif
kation ini ke dalam sitosol, sehingga menurunkan afinitas enzim tersebut untuk
mengikat glikosida jantung (Melero, et al., 2000).
Inotropik positif (peningkatan daya kontraksi) yang diinduksikan oleh
glikosida jantung adalah karena kemampuannya menghambat secara langsung
ikatan antara membran dan Na+/K+-ATPase. Akibat hambatan tersebut terjadi
peningkatan Ca2+ intrasel dan memperpanjang slow inward Ca2+ selama
berlangsung potensial aksi. Digitalis pada konsentrasi terapeutik pengaruhnya
tidak secara langsung terhadap protein kontraktil jantung. Begitu juga efek
inotropik positif digitalis bukan disebabkan tindakannya terhadap mekanisme
intraseluler yang menyediakan energi kimia untuk proses kontraksi tersebut.
Hidrolisis ATP oleh enzim Na+/K+-ATPase adalah suatu pengaruh yang disebut
Na+ pump, yaitu sistem yang terdapat di dalam sarkolema serat jantung yang
secara aktif mengekstrusi Na+ dan memindahkan K+ ke dalam serat jantung.
Glikosida jantung secara spesifik berikatan dengan Na+/K+-ATPase untuk
menghambat aktivitasnya. Dengan demikian tranpor aktif kedua kation
monovalen tadi akan terganggu. Akibatnya secara perlahan-lahan terjadi
peningkatan Na+ intraseluler dan secara perlahan pula penurunan K+. Digitalis
134

pada konsentrasi terapeutik, perubahan keluar masuk kedua kation tersebut sangat
kecil. Peningkatan Na+ inilah yang secara krusial menghasilkan inotropik positif
akibat pemberian digitalis. Hal ini adalah karena Ca2+ yang terdapat di dalam
intraseluler dipertukarkan dengan Na+ intraseluler oleh sistem transport yang
dikendalikan oleh konsentrasi gradient dan potensial trans membran. Apabila Na+
meningkat akibat inhibisi pump oleh digitalis, maka pertukaran Na-ekstraseluler
untuk Ca2+ intraseluler diperkecil, dan Ca2+ ditingkatkan (sebelum dan selama
kontraksi). Akibat dari peristiwa itu terjadilah peningkatan simpanan Ca2+ di
dalam retikulum sarkoplasma (RS), pada setiap potensial aksi pembebasan Ca2+
dalam jumlah besar akan terjadi untuk mengaktifkan alat-alat kontraktil yang
terdapat di dalam serat otot jantung (Dipiro, 2008).
4.7.2.Efek Kronotropik
Efek kronotropik merupakan efek suatu senyawa meningkatkan atau
menurunkan denyut jantung. Kondisi yang ditunjukkan oleh adanya peningkatan
denyut jantung disebut dengan kronotropik positif sedangkan jika terjadi
menurunan denyut jantung disebut dengan kronotropik negatif (Dipiro, 2008).
Denyut jantung adalah debaran jantung yang terjadi akibat aliran darah melalui
jantung. Denyut jantung normal pada kondisi normal dinyatakan dalam detak tiap
menit (beat per minute = BPM). Secara normal, denyut jantung orang dewasa
adalah 80-100 BPM. Hasil uji efek kronotropik setelah pemberian EnHPT,
EEAPT, EEPT ditunjukkan Gambar 4.41; 4.42; dan 4.43.
135

Gambar 4.41 Efek EnHPT terhadap peningkatan denyut otot jantung.
Berdasarkan hasil penelitian, EnHPT dosis 0,25; 0,5 dan 1 mg menunjukkan
efek meningkatkan denyut isolat jantung tikus baik pada volume 0,25; 0,5 ataupun
1 mL dibandingkan dengan kontrol (KH). EnHPT 1 mg tiap 0,25; 0,5 dan 1 mL
dapat meningkatkan denyut jantung lebih besar dibandingkan dengan digoksin.
Digoksin merupakan senyawa glikosida jantung yang dapat meningkatkan
kontraksi otot jantung tanpa meningkatkan denyut jantung. Hal ini memberikan
nilai lebih terhadap penggunaan klinis pada pasien yang gagal jantung, dimana
dengan pemberian digoksin akan meningkatkan kerja otot jantung tanpa
meningkatkan denyut jantung sehingga pasien nyaman. Namun karena indeks
terapinya yang sempit, penggunaan digoksin sering menyebabkan pasien toksik
(Babu, 2012).
Gambar 4.42 Efek EEAPT terhadap peningkatan denyut otot jantung

136

EEAPT dosis 0,25; 0,5; dan 1 mg tidak meningkatkan denyut isolat jantung
dibandingkan dengan digoksin (P<0,05) namun jika dibandingkan dengan kontrol
(KH), maka EEAPT dapat meningkatkan denyut jantung (Gambar 4.42). EEPT
tidak dapat menaikkan denyut jantung dibandingkan dengan kontrol (p>0,05) dan
digoksin (P<0,05) (Gambar 4.43).
Gambar 4.43 Efek EEPT terhadap peningkatan denyut otot jantung
Senyawa glikosida jantung adalah suatu senyawa spesifik yang bekerja pada
otot jantung, dapat meningkatkan rangsangan denyut jantung dan kontraktilitas
jantung. Aglikon dari glikosida terkadang disebut sebagai cardiak genin. Selama
beberapa tahun lalu, aglikon dari glikosida tersebut menjadi subjek dari konstituen
kimia yang dapat mempengaruhi aktivitas dari glikosida tersebut. Aglikon dari
glikosida jantung adalah steroid. Inti steroid yang terdapat pada glikosida jantung
merupakan turunan steroid berupa siklopenantren yang terdapat cincin lakton tak
jenuh pada atom C17β. Kekuatan dari glikosida jantung untuk menaikkan denyut
jantung dan kontraksi jantung tergantung pada gugus gula dan cincin lakton yang
terdapat pada komponen penyusun senyawa tersebut (Dipiro, 2008).
137

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan penelitian ini dapat disimpulkan bahwa :
a. fraksi n-heksan, etil asetat, dan etanol daun pugun tanoh dosis 100, 200, 400
dan 800 mg/kg bb memiliki aktivitas diuretik dengan meningkatkan volume
urin, kadar natrium dan kadar kalium dalam urin. Aktivitas diuretik yang
paling tinggi setara dengan furosemid, ditunjukkan oleh fraksi n-heksan dosis
800 mg/kg bb (p > 0,05).
b. fraksi n-heksan, etil asetat, dan etanol daun puguntano dinyatakan sebagai
bahan praktis tidak toksik.
c. fraksi etanol daun puguntano tidak menurunkan tekanan darah tikus
normotensi sedangkan fraksi n-heksan dan etil asetat menurunkan tekanan
darah tikus normotensi
d. fraksi n-heksan, etil asetat daun puguntano menurunkan tekanan darah tikus
hipertensi yang diinduksi NaCl 2,5% dan Metilprednisolon
e. fraksi n-heksan dan etil asetat daun puguntano menurunkan tekanan darah
tikus hipertensi yang diinduksi L-Name
f. fraksi n-heksan, etil asetat, dan etanol daun puguntano berpengaruh terhadap
kadar parameter biokimia tikus hipertensi
g. fraksi n-heksan, etil asetat, dan etanol daun puguntano meningkatkan
kontraksi dan denyut isolat jantung dibandingkan dengan kontrol (P < 0,05)
138

5.2 Saran
Berdasarkan kesimpulan diatas, maka saran dari penelitian ini adalah agar
mengisolasi senyawa aktif dan menguji mekanisme molekular fraksi n-heksan, etil
asetat dan etanol daun puguntano terhadap sistem kardiovaskular tikus.
139

Chapter III-V PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Chapter III-V PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

BAB III

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan rancangan acak

penurunan tekanan darah tikus normotensi, penurunan tekanan darah kelompok

isolat jantung tikus secara in vitro. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium

Farmakologi Fakultas Farmasi USU setelah mendapat persetujuan Komisi Etik

Penelitian Kesehatan yang beralamat di Fakultas MIPA USU.

3.1 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah kandang metabolik,

Spektroskopis serapan atom (SSA), oral sonde, lemari pengering, rotary

pengaduk), syringe (Terumo), seperangkat alat pengukur tekanan darah NIBP

(Non invasive blood pressure) (AD Instrument), restainer tikus, lampu

penghangat, microtube, spektofotometer UV-Vis, seperangkat alat Langendorf

(AD Instrumen), seperangkat alat bedah.

(teknis), n-heksan (teknis), etilasetat (teknis), tablet furosemide, saline, aqua

Sonography), tablet metilprednisolon (Dexa Medica), tablet bisoprolol (Dexa

Universitas Sumatera Utara

TCA, asam asetat glasial 15%, asam sulfanilat, N-(1-naftil) etilendiamina

dihidroklorida (NED), NaCl (Merck), KCl (Merck), NaH2PO4(Merck),

NaHCO3(Merck), MgCl2(Merck), CaCl2(Merck), Glukosa (Merck), Digoksin,

Karbogen, Ketamin, DMSO, Heparin.

3.2. Pembuatan Reagensia

3.2.1. Besi (III) Klorida 1%

Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam aquadest sampai 100 ml

(Depkes RI, 1978).

3.2.2 Larutan HCl 2N

Sebanyak 7 ml asam klorida pekat diencerkan dengan aquadest sampai 100 ml

(Depkes RI, 1978).

3.2.3 Timbal (II) asetat 0,4 M

hingga 100 ml (Depkes RI, 1978).

3.2.4 Pereaksi Mayer

Pada wadah lain ditimbang sebanyak 5 g kalium iodide dilarutkan dalam 10 ml

aquadest. Kedua larutan dicampurkan dan ditambahkan aquadest hingga 100 ml

(Depkes RI, 1978).

3.2.5 Pereaksi Molish

Sebanyak 3 g α-naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N secukupnya ,

ditambahkan 2 g iodida dan aquadest hingga 100 ml (Depkes RI, 1978).

Universitas Sumatera Utara

Sebanyak 0,8 g bismut nitrat dilarutkan dalam asam nitrat pekat 20 ml

kemudian dicampurkan dengan larutan kalium iodida sebanyak 27,2 g dalam 50

ml aquadest. Campuran didiamkan sampai memisah sempurna. Larutan jernih

3.2.7 Larutan Pereaksi Asam Sulfat 2 N

Sebanyak 18 ml asam sulfat pekat diencerkan dengan aquadest hingga 100 ml

(Depkes RI, 1978).

3.2.8 Sudan III

Sebanyak 100 mg sudan III dilarutkan dalam campuran 10 ml etanol (95%)

dan 10 ml gliserol (Depkes RI, 1978).

3.2.9 Pereaksi Bouchardat

Sebanyak 4 g kalium iodida dilarutkan dalam aquadest secukupnya kemudian

ditambahkan 2 g iodida sedikit demi sedikit cukupkan dengan aquadest (Depkes

3.2.10 Pembuatan larutan NaCl 2,5% (b/v)

Sebanyak 2,5 gram NaCl dimasukkan ke dalam lumpang, kemudian gerus

homogen. Masukkan sebagian aquadest gerus hingga NaCl larut. Masukkan

3.2.11 Pembuatan suspensi metilprednisolon

Timbang sebanyak 10 mg metilprednisolon yang telah disetarakan dengan

berat tablet. Masukkan ke dalam lumpang kemudian gerus hingga homogen.

Masukkan suspensi ke dalam labu tentukur 10 ml. Tambahkan kembali suspensi

CMC Na sampai garis tanda.

Universitas Sumatera Utara

Timbang setara 50 mg serbuk bisoprolol. Masukkan serbuk ke dalam

lumpang. Tambahkan perlahan-lahan sebagian suspensi CMC Na 0,5%, gerus

hingga homogen. Masukkan suspensi ke dalam labu tentukur 10 ml. Tambahkan

kembali suspensi CMC Na sampai garis tanda.

3.2.13 Pembuatan Pereaksi TCA 20% b/v