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ESPECTROSCOPIA UV-VIS ANÁLISIS CUANTITATIVO

Sebastian Lopez Ochoa
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA, LABORATORIO DE QUÍMICA INSTRUMENTAL II, PAMPLONA, NORTE DE
SANTANDER, COLOMBIA.

Resumen: La determinación cualitativa de compuestos moleculares mediante la medición de absorbancia y tramitancia en

la región del espectro ultravioleta y visible ha sido una de las técnicas más empleada en estos procedimientos, sin embargo,
para hacer uso de esta técnica se necesita conocer pequeñas propiedades del instrumento, la muestra, el solvente y el medio
en que se produce el análisis. Por esto, en el presente trabajo se muestra alguna de estas propiedades y las características
que debe tener la muestra a la hora del análisis, el material con el cual está hecha la celda, el solvente que se quiere emplear
para las diluciones y el rango del espectro en el que se desea medir.

Palabras Claves: espectro electromagnético, longitud de onda, celda, solvente, transiciones electrónicas.

Abstract: The qualitative determination of molecular compounds by measuring absorbance and tramittance in the ultraviolet
and visible spectrum region has been one of the techniques most used in these procedures, however, to make use of this
technique it is necessary to know small properties of the instrument, the sample, the solvent and the medium in which the
analysis takes place. For this reason, in this work some of these properties are shown and the characteristics that the sample
must have at the time of the analysis, the material with which the cell is made, the solvent that is to be used for the dilutions
and the range of the spectrum in which you want to measure.

Key words: electromagnetic spectrum, bandwidth, cell, solvent, electronic transitions.

1. Introducción electromagnético. Cualquier especie con un sistema

La espectroscopia por absorción molecular en las
regiones ultravioleta y visible del espectro se usa
ampliamente en la determinación cuantitativa de una
gran cantidad de especies inorgánicas, orgánicas y
biológicas (Skoog, Holler, & Crouch, 2008). En 1941,
se introdujo el espectrofotómetro Beckman DU
ultravioleta y visible (UV-vis) (Cary & Beckman,
1941), con el objetico de determinar las vitaminas
presentes en algunos alimentos, y de este modo poder
proporcionar una dieta adecuada a los soldados
participantes de la segunda guerra mundial;
actualmente es uno de los instrumentos analíticos que
ha servido en amplias ramas de la ciencia para
determinar y cuantificar cantidades moleculares de un
analito.
La espectroscopia UV-vis detecta las transiciones
electrónicas de las moléculas, ya que absorben la luz
en las regiones UV y visibles del espectro
extendido de enlaces dobles y únicos alternantes
absorberá la luz ultravioleta, y cualquier cosa con
color absorberá la luz visible, haciendo que la
espectroscopia UV-vis sea aplicable a una amplia
gama de muestras (Cary & Beckman, 1941); Los
electrones implicados en dobles o triples enlaces de
moléculas orgánicas no están tan fuertemente
retenidos, y son, por tanto, más fácilmente excitados
por la radiación. Así pues, las especies con enlaces
múltiples (dobles o triples) generalmente presentan
unos máximos de absorción útiles. Los grupos
funcionales orgánicos insaturados que absorben en las
regiones UV o VIS se denominan cromóforos
(Amézquita & Mendoza, 2008) debido a la transición
de los electrones n y π al estado excitado 𝜋 ∗ porque la
energía requerida para estos procesos llevan las
bandas de absorbancia dentro de la región UV-Vis
(200 a 700 nm).

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Como ya se sabe los átomos, iones y moléculas
tiene un número limitado de niveles discretos de
energía cuantiada. Para que se produzca la absorción,
la energía del fotón debe coincidir exactamente con la
diferencia de energía existente entre el estado
fundamental de las especies absorbentes y uno de sus
niveles energéticos excitados. Estas diferencias de
energía son únicas para cada especie y originas
espectros característicos que se utilizan
frecuentemente para la identificación cualitativa y la
determinación cuantitativa tanto de sustancias
inorgánicas como orgánicas (Amézquita & Mendoza,
2008). Todos los compuestos orgánicos son capaces
de absorber radiación electromagnética porque
contienen electrones de valencia que pueden ser
excitados para llegar a niveles de energía superiores
(Skoog et al., 2008).
La espectroscopía por absorbancia se basa en la
medición de la tramitancia T o de la absorbancia A de
las soluciones que están en celdas transparentes que
tienen una longitud de trayectoria b cm.
Habitualmente, la concentración de un analito
absorbente se relaciona en forma lineal con la
absorbancia según la ley de Beer (ecuación 1) (Skoog
et al., 2008).
𝑃0
𝐴 = − log 𝑇 = log = 𝜖𝑏𝑐 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 1.
𝑃
Donde T es la tramitancia, 𝑃0 potencia radiante
incidente, 𝑃 potencia radiante transmitida, 𝜖
absortividad molar, b longitud de celda o ancho de
celda, y c concentración del absorbente o muestra.
De la mismas forma que los demás instrumentos
de absorción, es esencial el uso de celdas o cubetas
en las que se colocan la muestra, las cuales puede ser
de distintos materiales tale como cuarzo o sílice
fundida, vidrio y plástico; la trayectoria de celda o
ancho de la celda por lo general es de 1 cm (10 mm),
aunque hay anchos de celda más cortos (hasta 0,1 cm)
y más largos (hasta de 10 cm); este último son muy
utilizadas en análisis de soluciones muy diluidas o
muestras gaseosas (Harvey, 2008). Se requiere una
celda de cuarzo o sílice fundida cuando se trabaja a
una longitud de onda <300 nm donde otros materiales
muestran una absorción significativa (Harvey, 2008).
La calidad de las medidas de absorbancia depende
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en gran medida del uso y mantenimiento que se haga
de las cubetas. Las huellas dactilares, la grasa u otras
señales sobre las paredes de las celdas alteran las
características de transmisión (Skoog et al., 2008).
Las mejores celdas tienen ventanas perfectamente
perpendiculares a la dirección del haz para reducir al
mínimo las pérdidas por reflexión, ya que este error
es uno de los principales efectos de la deviación de la
ley de Beer por casusa del comúnmente llamado
celdas desiguales (Skoog & Holler, 2015).
Los solventes o disolventes cumplen un papel muy
importante en el análisis por métodos
espectroscópicos, o especialmente en este, ya que
ellos ayudan a disminuir concentraciones de muestra,
sin embargo, estos deben cumplir una serie de
requisitos (Amézquita & Mendoza, 2008):
- El disolvente escogido debe disolver por
completo la muestra y debe de ser compatible con
los materiales de las celdas.
- El disolvente debe ser relativamente transparente
en las regiones espectrales de interés.
- Para evitar una pobre resolución y dificultades en
la interpretación de los espectros, un disolvente
no debe ser utilizado para mediciones cerca o por
debajo de su longitud ultravioleta de corte, esto
es, la longitud de onda en la cual la absorbancia
del disolvente solo se aproxima a una unidad e
absorbancia.
- La curva de absorbancia de un disolvente tal
como se suministra, no debe de tener picos de
impurezas extrañas en la región de interés.
En espectroscopia UV- Vis, existen dos tipos de
instrumentos, el primero de un solo haz, en el cual se
mide la absorbancia el blanco primero (donde, por lo
general contiene el solvente) y luego pasando la
muestra. Y el segundo de dos haces, en el que no es
necesario medir por separado las celdas que contienen
la muestra y el blanco.
Una molécula en estado de condensación o en
solución, pierden un poco de libertad para girar o
realizar oscilaciones no uniformes al momento de
impactar el haz de luz con la misma, esto genera un
estado particular de la molécula, el cual se ve
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reflejado cuando aparece un pico ancho y

pronunciado, este efecto es más notable en
disolventes polares, como el agua, que en los medios
de hidrocarburos no polares (Skoog et al., 2008).

En el presente artículo se presentará las

conclusiones y diferencias a las que se llegaron tras
analizar la absorbancia de Benceno gaseoso a
distintos intervalos de ondas, la comparación de las
distintas celdas, donde, en este caso incluye celdas de
cuarzo, plástico y vidrio; el análisis del agua,
ciclohexano, hexano y metanol como solventes y los
espectros obtenidos al examinar antraceno, benceno y
naftaleno empleando como solvente ciclohexano.

En las siguientes graficas se hace representación Fig. 3 espectro UV-VIS repostado del naftaleno
de los espectros de las sustancias que se analizaron en
este trabajo y que han sido publicadas por la NIST:

Fig. 4 espectro UV-VIS reportado del vapor de benceno

2. Método Experimental.
2.1.1. instrumento
Fig. 1 espectro UV-VIS reportado del antraceno
La obtención de las curvas espectrales se ha
realizado mediante un espectrofotómetro Shimadzu
serie UV- Vis 2401 PC.

Celdas de cuarzo de 1 cm, celda de plástico de 0.5

cm y vial de vidrio 1 mL.

2.1.2. Productos químicos

Agua destilada, antraceno, benceno, ciclohexano,

hexano, metanol y naftaleno.

2.2. Procedimiento.
2.2.1. Efecto de ancho de banda (Bandwdith)
Fig. 2 espectro UV-VIS reportado del becneo

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Dentro de una celda de cuarzo (1 cm), se adiciono
una gota de benceno, la cual posteriormente tapada
fue introducida dentro del instrumento en el
compartimiento de la celda, luego de meter la segunda
celda que actuó como blanco (celda cuarzo vacía) y
de cerrar la compuerta del equipo, se procedió a
analizar la muestra en distintos anchos de banda: 5.0,
2.0, 1.0, 0.5 y 0.1 nm.
2.2.2. Celdas y solventes
En esta etapa de la práctica se procedió a medir la
absorbancia de celdas de distintos materiales: Cuarzo,
Vidrio y Plástico.
Con respecto a los solventes, se analizó el agua,
metanol, hexano y ciclohexano. (en esta etapa se no
se adiciono ninguna sustancia al blanco).
2.2.1. Transiciones electrónicas de moléculas
orgánicas
En esta fase se procedió a medir antraceno,
benceno y naftaleno en solución, empleando
como solvente ciclohexano y preparadas a
concentraciones inferiores al 0,1 molar.

3. Resultados y discusiones.

Para hacer evaluación de efecto de ancho de banda o como se denomina en ingles Bandwidth, se midió benceno
gaseoso en diferentes intervalos de banda (0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 y 5.0 nm) los cuales se pueden observar en la Fig.
5, y donde se puede afirmar que cuando el ancho de banda aumenta, la estructura fina y con mayores picos se pierde.
A un ancho de banda de 5 nm solo se observa una banda ancha de absorción y a medida que esta disminuye se
observa con mayor definición la formación de dos picos fundamentales, que en comparación con la gráfica de la
Fig. 4, presenta la misma presencia de picos y en los mismos intervalos, 253 nm y 259 nm.

Benceno 0,1
Benceno 0,2
Benceno 0,5
5
Benceno 1
Benceno 2
Benceno 5
4
Abs

200 220 240 260 280 300

Wavelength nm.

Fig. 5: espectro UV-Vis del benceno gaseoso, analizadas en intervalos de banda de 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 y 5.0 nm.

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Las celdas analizadas, son empleadas con alta frecuencia en procesos analíticos, pero la más usada es la de cuarzo,
pues, como se observar en la gráfica de la Fig. 6, esta tiene un nivel de absorbancia muy bajo, el más bajo de las
tres evaluadas. Esto confirma la preferencia por la celda elaborada en este material para muestras con absorbancias
menores a 300 nm, sin embargo, las otras dos también son importantes y aunque tiene una absorbancia de cercana
dimensión estas pueden ser empleadas sin ninguna dificultad ni probabilidad de error en la región del espectro
visible.

celda de cuarzo
5 celda de plastico
celda de vidrio

4
Abs

0
200 300 400 500 600 700 800 900 1000
Wavelength nm.

Fig. 6: Espectro UV-Vis del análisis de los tres tipos de celdas cuarzo, plástico y vidrio.

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ciclohexano
hexano
metanol
2,5

2,0

1,5
Abs

1,0

0,5

0,0

200 300 400 500 600 700 800

Wavelength nm.

Fig. 7: Espectros UV-Vis del metanol, hexano y ciclohexano, como análisis de solvente.

Al momento de seleccionar el solvente con el cual se desea diluir una sustancia muestra, se debe pensar en la
solubilidad de este, y que no cause cambios no deseados en la molécula y en la celda, adicional algo muy importante
es que esta tenga un punto de absorbancia relativamente bajo, aunque esta se puede reajustar con el cálculo del
blanco. Sin embargo, teniendo en cuenta los espectros representados en la gráfica de la Fig. 7, se puede decir que
el ciclohexano, el hexano y metanol, Pueden ser utilizados como buenos solventes polares y apolares tanto en la
región del ultravioleta como el visible, y el agua con la buena característica, incolora, puede ser tratada como
solvente para el análisis de la región visible y UV, con la excepción de que esta podría solvatar las interacciones de
la molécula con la radiación recibida, la cual se ve como resultados la aparición de picos muy pronunciados.

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antraceno en ciclohexano
benceno en ciclohexano
naftaleno en ciclohexano
5

4
Abs

0
200 300 400 500 600 700 800
Wavelength nm.

Fig. 8: Espectros UV-Vis del antraceno, benceno y naftaleno, empleando como solvente ciclohexano.

En las Fig. 8 se pueden ver claramente los espectros del antraceno, benceno y naftaleno preparados en solución
con ciclohexano como solvente; de este modo se puede hacer una comparación cualitativa con cada uno de los
elementos analizados en el laboratorio y ver diferencias con las gráficas de la Fig. 1, 2 y 3. El antraceno muestra
tres picos importantes (340, 357 y 376 nm) y del cual se le puede dar un buen usos cualitativo, ya que en este no
presenta ninguna transposición con otra moléculas, o de las evaluadas en el momento. En el espectro del benceno
en comparación con el publicado en NIST, se ve una gran diferencia de picos o posición de los mismos, lo que
puede ser debido principalmente a la medición en este trabajo ya que solo fueron corridos en un parámetro de 200
hasta 710 nm, sin embargo, se puede evidenciar la aparición de varios picos en un ancho de banda que comprende
los 220 a 270 nm, y de los cuales pueden ser utilizados para futuros análisis cualitativos. Y por último el naftaleno,
al no estar lo suficientemente diluido se salió de la escala a la cual el quipo podía dectectar , este se presenta en
distintos anchos de banda, debido a menor cantidad de anillos aromáticos que esta presenta con respecto al
antraceno, en 230 nm aparece el pico con máxima intensidad de absorbancia y luego tres más en 276, 286 y 296
nm, los cuales comparados con los publicados en la NIST presentan cierta similitud, pero no con los mimas
longitudes de ondas, esto puede ser debido a una pequeña diferencia de concentración o posiblemente alguna
interacción que tuvo el analito con el solvente, o la presencia de una sustancia parasita dentro del análisis.

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4. Conclusiones

La espectroscopia UV- Vis puede ser empleada

como fórmula para la determinación de compuestos
inorgánicos y orgánicos que cuente con estructuras
insaturadas o con grupos cromóforos, y tal afirmación
se puede ver evidenciado en este trabajo. El
instrumento espectroscópico UV-Vis puede ser
utilizado en diversos análisis tanto cualitativos como
cuantitativos teniendo en cuenta una gran cantidad de
características con la que debe contar la muestra y el
disolvente en el que se diluya.

Las celdas y solventes deben presentar una serie de

propiedades para el análisis cualitativo como
cuantitativo al momento de hacerse un análisis
espectral en las regiones del UV- Vis, tales
propiedades deben obedecer a características del
material y las propiedades cromóforas de las mimas.

La toma de datos con intervalos de anchos de banda

cortos genera una repuesta espectral que se presenta
con aparición y mayor definición de picos (Fig. 5), sin
interesar el estado físico de la muestra, y entre más
amplios sean estos intervalos, el número de picos
disminuirán y se verá la formación de una línea
continua.

5. Bibliografía

Amézquita, F., & Mendoza, D. Taller básico de espectroscopía

UV-Vis. (U. de Guanajuato, Ed.) (2008). Gunajuato.

Cary, H. H., & Beckman, A. O. (1941). A quartz photoelectric

spectrophotometer. J Opt Soc Am, 31(11), 682–689.
https://doi.org/10.1016/S0371-1951(41)80239-2

Harvey, D. (2008). Analytical chemistry 2.0 (p. 1158). McGraw-

Hill.

Skoog, D. A., & Holler, J. F. (2015). Fundamentos de química

analítica (9th ed.). CENGAGE Learning.

Skoog, D. A., Holler, J. F., & Crouch, S. R. (2008). Principios de

análsis instrumental. CENGAGE Learning (Vol. 53).
https://doi.org/10.1017/CBO9781107415324.004

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