Banyak penelitian sebelumnya menyarankan peran yang mungkin untuk aplikasi topikal dari tea

tree oil (TTO) sebagai antiseptik; Namun, meskipun telah digunakan selama bertahun-tahun,
iritasi tetap menjadi masalah ketika TTO diterapkan pada kulit manusia; Seperti yang baru-baru
ini kami tunjukkan bahwa 4-terpineol (T4O), komponen utama TTO efektif dalam membunuh
Demodex Mite; kami memperluas penelitian dan menunjukkan bahwa:
- Formulasi 2% T4O aman. Formulasi ini tidak menyebabkan iritasi mata, iritasi kulit,
sensitisasi, atau dermatitis kontak alergi.
- Formulasi 2% T4O efektif dalam membunuh mikroorganisme yang berhubungan dengan
penyakit mata dengan cepat. Terutama, itu juga dapat membunuh Acanthamoeba
castellanii yang menjadi penyebab atas kesulitan untuk mengobati kasus keratitis
menular.
Berdasarkan hasil penelitian ini, kami menunjukkan bahwa T4O pada konsentrasi rendah
berpotensi dapat digunakan dalam formulasi untuk pemeliharaan kebersihan mata karena
kemampuannya untuk memberikan efek antimikroba spektrum luas tanpa menyebabkan iritasi
mata atau kulit.
Mata terus menerus terpapar ke lingkungan eksternal dan karenanya sangat rentan terhadap
banyak patogen. Margin kelopak mata adalah lingkungan yang sangat menguntungkan untuk
kolonisasi patogen karena perlindungan bulu mata dan kelenjar adneksa terkait. Proliferasi
patogen yang berlebihan di area ini dapat menyebabkan dua penyakit mata yang paling umum,
yaitu, blepharitis dan meibomitis pada kelopak mata, yang merupakan penyakit mata lazim
sedikitnya 37% dan 47% pasien yang dijumpai dalam praktik klinis dokter spesialis mata dan
optometris, dan umumnya terkait dengan Staphylococcus aureus, Propionibacterium acnes,
Candida spp, Penicillium spp dan Moraxella catarrhalis. Faktanya, mikroorganisme ini diisolasi
di sekitar 50% dari swab yang diambil dari konjungtiva dan air mata, dan > 50% dari kelopak
mata. Selain itu, jamur dan Demodex mite juga ditemukan masing-masing pada 79% dan 42%
pada pasien dengan blepharitis. Karena keunggulannya, mikroorganisme dan patogen ini juga
dapat menyerang permukaan mata yang menyebabkan konjungtivitis, keratitis, dan bahkan
endophthalmitis yang mengancam penglihatan.
Antibiotik atau steroid topikal dapat digunakan untuk mengatasi penyakit yang disebutkan di
atas; Namun, metode ini dapat memfasilitasi pembentukan biofilm dan juga menyebabkan
munculnya strain bakteri resisten. Selain itu, penggunaan jangka panjang steroid topikal telah
dikaitkan dengan risiko peningkatan tekanan intraokular dan pembentukan katarak. Karena
sedikitnya yang masuk, kebersihan mata pada kelopak mata adalah langkah lain yang disukai
untuk mengurangi kolonisasi mikroba. Dalam hal ini, agen higiene okular yang mengandung 4-
terpineol (T4O), komponen utama yang dimurnikan dari minyak esensial alami dari tea tree oil,
dapat menjadi pilihan yang menarik karena telah terbukti efektif pada konsentrasi antara 0,125%
dan 8% terhadap berbagai mikroorganisme yang bertanggung jawab untuk infeksi, seperti S.
aureus, Pseudomonas aeruginosa dan stafilokokus koagulase-negatif (CoNS). Selain itu, T4O
juga telah terbukti memberikan efek anti-jamur terhadap jamur seperti Candida spp,
Saccharomyces cerevisiae, Trichophyton rubrum dan Penicillium spp pada konsentrasi 0,125%
hingga 0,5%. Baru-baru ini, kami juga telah melaporkan bahwa T4O pada konsentrasi serendah
1% efektif dalam mengerahkan efek mitisidal terhadap tungau Demodex, yang memainkan peran
dalam blepharitis, keratitis yang tidak dapat dijelaskan, vaskularisasi kornea superfisial, infiltrasi
marginal, infiltrasi marginal, lesi seperti phlyctenule, nodular, nodular jaringan parut dan
rosacea. Selain sifat antimikroba, T4O juga memiliki sifat anti-inflamasi dengan menekan
produksi superoksida dan sitokin proinflamasi. Potensi terapi yang luar biasa ini mendorong
kami untuk mengembangkan formulasi 2% T4O untuk kebersihan mata dan mengevaluasi
keamanan dan kemanjurannya.

Bahan dan metode

Persiapan formulasi T4O 2%T4O diperoleh dari Takasago (CAS: 562-74-3) dan disiapkan oleh
Solusi Formulasi (Largo, Florida, AS) hingga konsentrasi akhir 2% sebagai formulasi busa dan
disimpan dalam tabung aerosol tertutup 35x95 mm. (CCL Container, Hermitage, Pennsylvania,
USA) dengan menambahkan eksipien berikut: 90,8% air, 2% cocamidopropyl betaine (Glenn
Corporation, Lake Elmo, Minnesota, USA), 2% glycerin, 1% caprylic/capric triglyceride, 1%
butylene glycol, 0.2% allantoin, 0.75% polysorbate 20% and 0.25% sorbitan oleate (semua dari
Univar USA, Redmond, Washington, USA).

usP <51> uji efektivitas antimikroba

Efektivitas antimikroba dari 2% T4O dan kontrol tanpa T4O (kosong) dievaluasi terhadap
mikroorganisme yang tercantum dalam Bab 51 dari Farmakope Amerika Serikat (USP <51>)
oleh Alcami Coporation (Wilmington, North Carolina, USA). Kontrol dan formulasi T4O 2%
dievaluasi secara terpisah mengikuti prosedur / teknik yang sama. Secara singkat, lima
mikroorganisme standar, yaitu, Escherichia coli (ATCC 8739), P. aeruginosa (ATCC 9027), S.
aureus (ATCC 6538), Candida albicans (ATCC 10231) dan Aspergillus brasiliensis (ATCC
16404), diinokulasi secara terpisah dan tumbuh pada suhu 30 ° C – 35 ° C pada Soybean-Casein
Digest Agar, sedangkan ragi dan jamur yang tumbuh pada suhu 20 ° C – 25 ° C pada Sabouraud
Dextrose Agar. Pada penyelesaian pembiakan, mikroorganisme yang disebutkan di atas
kemudian ditambahkan ke 0,5% -1% dari volume 2% T4O pada masing-masing konsentrasi 3,7
× 105, 2,3 × 105, 1,4 × 105, 4,1 × 105 dan 3,9 × 105 CFU / mL (unit pembentuk koloni /
mikroliter). Selanjutnya, pengurangan mikroorganisme dievaluasi pada hari 14 dan 28 dengan
menghitung tingkat pengurangan log 2.0. Penerimaan untuk spesies bakteri didasarkan pada
reduksi tidak <2,0 log pada 14 hari dibandingkan dengan baseline, dan tidak ada peningkatan
yang diamati dari 14 hingga 28 hari. Untuk ragi dan jamur, kriteria penerimaan didasarkan pada
peningkatan tidak ada pada 14 dan 28 hari dibandingkan dengan baseline.

Studi waktu membunuh cepat

Penelitian time kill dilakukan melalui standar ASTM E2315 oleh Accugen Laboratories
(Willowbrook, Illinois, USA) terhadap berbagai mikroorganisme. Sebelumnya, kemurnian semua
mikroorganisme dijamin dengan mengkonfirmasikan karakteristik mikroorganisme dengan
pewarnaan Gram dan morfologi koloni. Mikroorganisme kemudian diinkubasi pada 35 ° C – 37 °
C secara aerobik dengan 5% CO2 untuk bakteri aerob, pada 35 ° C – 37 ° C di bawah kondisi
anaerob untuk bakteri anaerob, dan pada 25 ° C – 28 ° C untuk ragi dan jamur. Agar yang sesuai,
air deionisasi steril dan buffer fosfat digunakan untuk mendukung pertumbuhan masing-masing
mikroorganisme. Setelah populasi mikroba mencapai setidaknya 106 CFU / mL, 0,5 mL suspensi
inokulum ditambahkan ke 10 mL T4O 2% atau 10 mL buffer fosfat steril sebagai kontrol.
Tabung kemudian vortex secara menyeluruh untuk mencampur organisme dan ditempatkan pada
suhu sekitar (21 ° C) selama 60 detik. Suspensi inokulum dihitung dengan menggunakan metode
tuang dan koloni dihitung untuk menghitung konsentrasi sel yang layak. Kami kemudian
mengubah populasi awal dan akhir yang diukur, suspensi inokulum, dan uji pemulihan ke skala
reduksi log10 sebagai berikut: Reduksi log10 (LR) = log rata-rata 10 (populasi mikroba) - log
rata-rata 10 (populasi uji yang bertahan). Persen reduksi (%) = 100 × (1 - 10 - LR). Organisme
yang bertahan diidentifikasi dengan pewarnaan gram.
Tes Insult Patch Test (rIPT) yang diulang untuk iritasi kulit
RIPT dilakukan sesuai dengan maksud dan tujuan Praktik Klinik yang Baik yang dijelaskan
dalam Judul 212 dari Peraturan Federal AS oleh Essex Testing Clinic (Verona, New Jersey).
Setelah memperoleh persetujuan berdasarkan informasi dari 58 subyek, prosedur dilakukan
dalam dua tahap. Tahap pertama adalah fase induksi, di mana 4 cm persegi kain katun patch
dibasahi oleh 0,2 mL 2% T4O diaplikasikan ke bagian belakang setiap subjek antara scapulae
dan pinggang selama 24 jam. Aplikasi ini diulangi setiap hari Senin, Rabu dan Jumat hingga total
9 aplikasi selesai. Situs ini diberi skor sebelum aplikasi tambalan berikutnya. Setelah
menyelesaikan fase induksi, dengan waktu istirahat 2 minggu tanpa aplikasi apa pun, tahap
kedua, yaitu, fase tantangan dilakukan dengan menerapkan tambalan yang sama ke lokasi
pengujian yang sebelumnya tidak ditambal selama 24 dan 72 jam. Semua subjek diperintahkan
untuk melaporkan reaktivitas kulit yang tertunda yang terjadi setelah pembacaan jalur tantangan
akhir. Respon dermal untuk fase induksi dan tantangan penelitian diberi skor sesuai dengan skala
6 poin berikut: 0 = tidak ada bukti efek, + = hampir tidak dapat dilihat (minimal, pingsan,
seragam atau eritema berbintik), 1 = ringan ( merah muda, eritema seragam yang menutupi
sebagian besar situs kontak), 2 = sedang (eritema merah muda-merah seragam di seluruh situs
kontak), 3 = ditandai (eritema merah cerah dengan / tanpa petekie atau papula) dan 4 = parah
(eritema merah tua) dengan / tanpa vesikulasi atau menangis).