Replicação do DNA em Genética Microbiana

Disciplina: Genética Microbiana
Semestre 2019/1
Replicação do DNA
CONTEÚDO
 Recordar a estrutura dos ácidos nucléicos (DNA e RNA)
 Dogma central da Biologia Molecular
 Replicação semiconservativa
 Aspectos fundamentais da replicação do DNA
 Principais moléculas que participam da síntese do DNA
 Visão geral do processo de replicação
 Replicação do DNA em Procariotos
 Replicação do DNA em Eucariotos
2
DNA e RNA
 Composto por nucleotídeos
 Nucleotídeos:
 Base nitrogenada: citosina, guanina, adenina e timina
(DNA), uracila (RNA)
 Açúcar pentose: ribose (RNA) e desoxirribose (DNA)
 Grupo fosfato
3
Molécula de DNA
Antiparalelismo
As 2 fitas do DNA estão
dispostas em direções opostas
Complementariedade
Adenina Timina
Guanina Citosina
4
Funções do material genético
Dogma Central da Biologia Molecular
REPLICAÇÃO TRANSCRIÇÃO TRADUÇÃO
Cadeia
DNA mRNA
polipeptídica
ou proteína
5
Replicação do DNA
6
Replicação do DNA
Experimentos de Meselson & Sthal (1958)
7
Replicação Semiconservativa do DNA
Fita nova
DNA
Dupla hélice Fita velha
 Possibilidade de erros = pequena = precisão na passagem da

8
informação genética
REPLICAÇÃO DO DNA
Aspectos Fundamentais REPLICAÇÃO DO DNA
As fitas de DNA parental são completamente

desenroladas antes que cada uma seja replicada?
A replicação do DNA prossegue em uma direção

ou em ambas?
O início da replicação ocorre em locais aleatórios

ou em um único ponto?
A replicação do DNA começa na origem e usualmente

prossegue bidirecionalmente.
9
Aspectos Fundamentais
Ambas as fitas de DNA são replicadas simultaneamente
FORQUILHA DE REPLICAÇÃO: É o ponto de desenrolamento, onde as

duas fitas únicas de nucleotídios se separam da hélice de fita dupla do
DNA para serem replicadas.
10
REPLICAÇÃO DO DNA
Direção da replicação
 Bidirecional: quando duas
forquilhas de replicação são
formadas na origem e seguem
em direções opostas.
 Unidirecional: quando uma

única forquilha é criada em
uma origem.
11
ORIGEM DE REPLICAÇÃO (Ori C)
 Sequência de DNA reconhecida por proteínas específicas para
dar início a um evento de replicação.
 Ponto inicial da replicação.
 Apresentam característica em comum: formadas por

sequências ricas em nucleotídeos AT.
12
REPLICAÇÃO DO DNA
REPLICAÇÃO DO DNA EM Procariotos
 O genoma bacteriano circular contém uma

origem de replicação
Ponto de origem da Replicação

A velocidade da forquillha de
replicação bacteriana é 50.000pb/min.
 Uma única origem de replicação em

E.coli (OriC, 245 pb).
 Para moléculas de DNA circular as

forquilhas de replicação se encontram
em um ponto do círculo oposto à
13
origem.
REPLICAÇÃO DO DNA EM Procariotos
Replicação teta
14
REPLICAÇÃO DO DNA EM Vírus e no fator F (plasmídeo)
Replicação círculo rolante
15
REPLICAÇÃO DO DNA Eucariotos
O genoma eucariótico contém várias origens de replicação
 Por ser muito extenso o

DNA é aberto em locais
específicos
Origens de Replicação.
As origens de replicação

formam “bolhas de
replicação” que avançam
para os dois lados
16 simultaneamente
REPLICAÇÃO DO DNA Eucariotos
Pontos de origem da Replicação
 A velocidade da forquillha de replicação eucariótica é 2000pb/min

 Em leveduras, cerca de 500 origens de replicação estão distribuídas
17
entre os 16 cromossomos.
18
Uma nova fita de DNA é sempre sintetizada em uma direção 5’  3’, com a
OH 3’ livre como ponto de alongamento do DNA.
19
REPLICAÇÃO DO DNA
Regras Fundamentais REPLICAÇÃO DO DNA
Fitas do DNA – antiparalelas 

Fita molde é lida a partir da extremidade
3’ em direção à sua extremidade 5’
Se a síntese prossegue
sempre na direção 5’3’,
como podem ambas as fitas
serem sintetizadas
simultaneamente?
20
 A síntese do DNA prossegue

na direção 5’→3’ e em uma
das fitas é contínua enquanto
na outra é descontínua.
Sentido da
forquilha de
replicação
Uma das novas fitas de DNA é sintetizada

em pedaços curtos
 FRAGMENTOS DE
21
OKAZAKI
REPLICAÇÃO DO DNA
Uma das novas fitas de DNA é sintetizada em pedaços curtos
 FRAGMENTOS DE OKAZAKI
Fita contínua
DNA sintetizado
+ recentemente
Fita descontínua com

fragmentos de Okazaki
22
REPLICAÇÃO DO DNA
RESUMINDO
A replicação do DNA é semiconservativa
A replicação começa na origem e usualmente

prossegue bidirecionalmente
A síntese do DNA prossegue em uma direção 5’3’ e

é semidescontínua
23
REPLICAÇÃO DO DNA
O DNA é degradado por nucleases

NUCLEASES OU DNAses: enzimas que degradam o DNA.
o Exonucleases: degradam ácidos nucleicos a partir

de uma extremidade da molécula.
Podem operar na direção 5’3’ ou 3’5’ –
removendo nucleotídeos a partir de uma extremidade
5’ ou 3’, respectivamente.
o Endonucleases: podem começar a degradar sítios

internos específicos em fragmentos cada vez menores.
Endonucleases de restrição  clivam apenas em
24 sequências nucleotídicas específicas.
O que é necessário para que ocorra a
replicação?
1 - Um molde de DNA de fita dupla.
2 - Matérias-primas (substratos) a serem montadas em uma

nova fita de nucleotídeos.
Trifosfatos de desoxirribonucleosídio (dNTPs), cada um
composto por um açúcar desoxirribose e uma base (um
nucleosídio) ligados a três grupos fosfato
3 - Enzimas e outras proteínas que “leem” o molde e reúnem

os substratos em uma molécula de DNA.
25
REPLICAÇÃO DO DNA
DNAs polimerases
 São as enzimas responsáveis pela

síntese e reparo do DNA (incorpora
nucleotídeos na extremidade 3’OH livre)
 No processo de replicação a DNA

polimerase requer uma fita molde
 E requer um iniciador (fita iniciadora

que fornece um grupo hidroxila livre (OH)
na extremidade 3’, onde novos
nucleotídeos serão adicionados).
26
REPLICAÇÃO DO DNA
Iniciadores
Os iniciadores, também chamados de

primers são oligonucleotídeos de RNA
Responsáveis por sinalizar o local de

ação da DNA polimerase e oferecer a
extremidade 3’ OH livre
Sintetizados por enzimas

especializadas (Primases)
Um oligonucleotídeo é um
fragmento curto de uma cadeia
simples de ácido nucléico com 20
27
ou menos bases
REPLICAÇÃO DO DNA- PROCESSO
3- PROTEÍNAS ENVOLVIDAS (REPLISSOMO)
 DNA Polimerase
 SSB (Single Strand Binding –ligação a fita simples)
 Primase
 Helicases (DnaB)
 Topoisomerases
 DNA ligase
28
* DNA-polimerases
 São enzimas necessárias para todos os organismos para

replicação do DNA (polimerização) quanto para o reparação
(exonucleases) do DNA.
 Todas realizam a mesma função enzimática: incorporação de
nucleotídeos trifosfatados na extremidade 3`-OH livre (5` - 3` ).
29
* DNA-polimerases
 E. coli: DNA Polimerase I, II e III
 Eucariotos: DNA polimerases , 
 Bacteriófagos: T4 DNA Polimerase
 Outras: Taq DNA Polimerase (Thermus aquaticus) 
30
31
3- PROTEÍNAS ENVOLVIDAS
* Helicase
 Função: quebrar as pontes de hidrogênio entre as bases,

separando as duas fitas de DNA.
 Essa abertura é necessária para que a forquilha possa se

movimentar.
32
* SSB (ligação a fita simples)

 Função: se ligam ao DNA de fita simples e evitam que as
regiões sofram torções ou estruturas secundárias, induzindo a
conformação ideal para a replicação e pareamento de bases.
 Essa proteína tem alta afinidade pelo DNA na forma de fita

simples, ocorrendo ligação sempre de forma cooperativa.
33
* SSB (ligação a fita simples)
34
* Girase (Topoisomerases)
 Função: promovem a quebra transitória de ligação

fosfodiéster da fita de DNA, introduzindo ou removendo o
superenrolamento.
 Manutenção da homeostasia do superenrolamento e da

conformação do DNA, permitem alterações no grau de
superenrolamento.
35
* Topoisomerases
36
* DNA ligase
 Catalisa a
formação de
uma ligação
fosfodiéster.
37
Proteínas relacionadas a Replicação REPLICAÇÃO DO DNA
38
Fonte: Tortora, Funke & Case, 2012
Processo de Replicação do DNA Passo 1
Iniciação
• Origem ou Forquilha de replicação:
posição onde começa a separação das
bases
• Rompimento das pontes de H
• Helicase
• Primase – “primer” ou iniciador (~10 bases)
39
Alongamento
• Primers atraem DNA polimerase DNA
Polimerase
• DNA polimerase: reúne os

nucleotídeos complementares as
bases da fita-molde de DNA.
• Nova fita começa crescer = formação de pontes H entre as

bases complementares.
40
•Fita Descontínua Alongamento
• DNA polimerase alonga o primer de RNA com novo DNA
• Fragmentos de Okazaki: pequenos segmentos de 1.000 a 2.000b
41
Termino
Procariotos: sequências de término específicas

(chamadas sítios Ter) bloqueiam a replicação.
Uma proteína de término, chamada Tus na E.
coli, liga-se a essas sequências, criando um
complexo Tus-Ter.
Eucariotos:
A terminação da replicação nos cromossomos eucarióticos lineares
envolve a síntese de estruturas especiais nas extremidades de cada
cromossomo  Telômeros.
42
Resumo dos eventos na forquilha de replicação
43 Fonte: Tortora, Funke & Case, 2012

Replicação do DNA em Procariotos - E. coli
3 tipos de DNA polimerases

• DNA polimerase I: Reparo do DNA e retirada do primer de RNA e sua
substituição por uma fita de DNA.
• DNA polimerase II: Reparo do DNA
 DNA polimerase III: Replicação do DNA
• Forquilha de Replicação: Helicase + Proteínas de ligação (SSBs)

(impedem que os dois filamentos se reassociem).
• DNA girase: realiza o corte de uma das cadeias da molécula

relaxando-a = enovelando-a ao contrário.
44
REPLICAÇÃO DO DNA
DNA polimerases
45
Fonte: Nelson e Cox, 2014
REPLICAÇÃO DO DNA
INICIAÇÃO
A origem de replicação da E.coli (OriC - 245pb) é extremamente
conservada, com sequencias específicas
46
oriC
 Região de 245 pb do cromossomo essencial à replicação.

É dividida em 2 grupos:
 1- quatro blocos contendo sequências repetidas de 9pb

5`TTAT(C/A)CA(C/A)A3` sítio de ligação para a proteína
iniciadora chave (DnaA)
 2- três regiões de sequências repetidas de 13 pb ricas em

nucleotídeos A ou T, localizadas adjacentes a sequência 1.
47
oriC
São sítios específicos de reconhecimento da proteína

iniciadora DnaA
Funções: reconhecimento da sequência nucleotídica,
indução da abertura das fitas de DNA e possibilita a ligação
da helicase na oriC.
48
Proteínas presentes na origem de Replicação de E.coli
DnaA Reconhece a origem (oriC) e abre a dupla fita

em sítios específicos
DnaB (helicase) Desenrola o DNA
DnaC Auxilia a ligação de DnaB na origem
HU Proteína do tipo histona que estimula a iniciação
FIS e IHF Ligação ao DNA; estimula a iniciação
Iniciase (DnaG) Sintetiza os iniciadores de RNA
Proteína de ligação à
fita simples de DNA Liga a fita simples de DNA
(SSB)
DNA girase
Alivia a tensão torcional gerada pela abertura da
(DNA topoisomerase dupla-fita
II)
Dam Metilase Metila as sequências (5’)GATC na OriC
49
O início da replicação em oriC pode ser dividido em três

estágios:
1-Formação do complexo
inicial: ligação da proteína
DnaA nos quatro sítios de
9pb e ligação de 20-40
monômeros, favorecendo a
alteração da estrutura do
DNA nesta região.
50

estágios:
2- Formação do complexo
aberto: alterações
estruturais e separação das
duas fitas na região das
sequências de 13pb.
Proteínas como HU e IHF

atuam estabilizando a
curvatura do DNA
51
estágios:
3- Formação do complexo pré-

priming: formação da bolha
de replicação, pela
separação das fitas e
posicionamento da helicase
+ DnaB.
A ligação de DnaB na oriC representa o

início da replicação, pois recruta a
primase para dar início a formação do
replissomo.
52
Replicação do DNA 1. Primase sintetiza pequenos pedaços
em Procariotos de RNA copiados do DNA
2. DNA polimerase III alonga o primer de RNA com novo DNA
Segmentos
~1000b
3. DNA polimerase I remove o RNA e preenche a falha
4. DNA ligase reune os fragmentos adjacentes
53
TERMINAÇÃO
 As forquilhas de replicação se
encontram na região terminal
contendo múltiplas cópias da
sequência Ter (terminal – 20pb).
 As sequências Ter estão

arranjadas no cromossomo de
forma tal a criar uma armadilha
que a forquilha de replicação possa
entrar, mas não possa sair.
54
REPLICAÇÃO DO DNA
Replicação do DNA em
Procariotos - E. coli
TERMINAÇÃO
 As sequências Ter funcionam como sítios de ligação para a

proteína Tus.
 O complexo Ter-Tus bloqueia a forquilha de replicação apenas em uma

direção – apenas um complexo funciona por ciclo de replicação (o primeiro a
ser encontrado pela forquilha).
 Quando qualquer uma das forquilhas de replicação encontra um complexo

Ter-Tus funcional, esta para e a outra forquilha para quando encontra a
primeira forquilha bloqueada.
55
REPLICAÇÃO DO DNA
TERMINAÇÃO
Os replissomos são ligados a um ponto da
membrana interna bacteriana.
 Assim que a replicação termina, a célula se

divide e os cromossomos sequestrados nas
duas metades da célula original são
separados entre as células-filhas.
56
Replicação do DNA em Eucariotos
• Em que fase dos processos de divisão celular acontece a
replicação?
Fase S da intérfase
(período de síntese)
duplicação do DNA
duplicação dos filamentos de
cromatina
síntese de histonas
duplicação dos centríolos
57
 As moléculas de DNA de eucariotos são
maiores que aquelas dos procariotos e são
organizadas em estruturas complexas de
nucleoproteínas (cromatina) de forma linear.
 As características essenciais da
replicação do DNA são as mesmas nos
procariotos e eucariotos  muitos complexos
protéicos são funcional e estruturalmente
conservados.
 A replicação do DNA em eucariotos é

regulada e coordenada com o ciclo celular
(complexidades adicionais).
58
5 tipos de DNA polimerases: (mamíferos)
1) DNA polimerase alfa : Replicação do DNA (descontínua)
2) DNA polimerase beta: Reparo do DNA
3) DNA polimerase gama: Replicação do DNA mitocondrial
4) DNA polimerase delta: Replicação do DNA nuclear (contínua)
5) DNA polimerase épsilon: Reparo do DNA ?
59
replicação em vários cromossomos com diferentes pontos de origem
• Em leveduras e alguns fungos

filamentosos foram isoladas
sequências com replicação
autônoma (ARS), ricas em bases
AT, que atuam como origens da
replicação.
•Em outros organismos não foi
estabelecido.
Em cada origem, um complexo multiproteico de reconhecimento

(ORC, de origin recognition complex) se liga para iniciar o
desenrolamento do DNA.
60
Diferentes pontos de
origem
o genoma inteiro precisa ser

replicado com precisão
Fator de licenciamento de
replicação se prende a uma
origem Ex.: complexo MCM
(para manutenção de
minicromossomo)
61
TERMINAÇÃO
A terminação da replicação nos cromossomos eucarióticos lineares
envolve a síntese de estruturas especiais nas extremidades de cada
cromossomo  Telômeros.
 Telômeros
 Sintetizados pelas telomerases
62  cópias repetidas de uma sequência curta de oligonucleotídeos
63
Replicação do DNA
A replicação do DNA ocorre com uma fidelidade muito

alta e em um tempo designado no ciclo celular.
É semiconservativa, cada fita atuando como molde

para a nova fita filha.
Realizada em três fases: iniciação, alongamento e

terminação.
A reação começa na origem e usualmente prossegue

bidirecionalmente.
O DNA é sintetizado na direção 5’3’ pelas DNA

polimerases
64
Replicação do DNA
Na forquilha de replicação: a fita líder é sintetizada continuamente na

mesma direção da movimentação da forquilha de replicação.
Na forquilha de replicação: a fita atrasada é sintetizada

descontinuamente como fragmentos de Okazaki, que são
subsequentemente ligados.
Na E.coli a DNA polimerase III é a principal enzima de replicação (em

eucariotos DNA polimerase δ).
A replicação do cromossomo de E.coli envolve muitas enzimas e fatores

proteicos organizados e ligados à parte interna da membrana celular.
A replicação é semelhante nas células eucarióticas, mas os cromossomos

eucarióticos possuem muitas origens de replicação e a terminação se dá
nos telômeros.
65
Só para lembrar . . .
66
Mutações e Reparo do DNA
67

Replicação do DNA em Genética Microbiana

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Disciplina: Genética Microbiana

 Recordar a estrutura dos ácidos nucléicos (DNA e RNA)

 Dogma central da Biologia Molecular

 Aspectos fundamentais da replicação do DNA

 Principais moléculas que participam da síntese do DNA

 Visão geral do processo de replicação

 Replicação do DNA em Procariotos

 Replicação do DNA em Eucariotos

Dogma Central da Biologia Molecular

REPLICAÇÃO TRANSCRIÇÃO TRADUÇÃO

 Possibilidade de erros = pequena = precisão na passagem da

As fitas de DNA parental são completamente

A replicação do DNA prossegue em uma direção

O início da replicação ocorre em locais aleatórios

A replicação do DNA começa na origem e usualmente

FORQUILHA DE REPLICAÇÃO: É o ponto de desenrolamento, onde as

 Unidirecional: quando uma

ORIGEM DE REPLICAÇÃO (Ori C)

 Sequência de DNA reconhecida por proteínas específicas para

dar início a um evento de replicação.

 Ponto inicial da replicação.

 Apresentam característica em comum: formadas por

 O genoma bacteriano circular contém uma

Ponto de origem da Replicação

 Uma única origem de replicação em

 Para moléculas de DNA circular as

Replicação círculo rolante

O genoma eucariótico contém várias origens de replicação

 Por ser muito extenso o

As origens de replicação

Pontos de origem da Replicação

 A velocidade da forquillha de replicação eucariótica é 2000pb/min

Fitas do DNA – antiparalelas 

 A síntese do DNA prossegue

Uma das novas fitas de DNA é sintetizada

Fita descontínua com

A replicação do DNA é semiconservativa

A replicação começa na origem e usualmente

A síntese do DNA prossegue em uma direção 5’3’ e

O DNA é degradado por nucleases

o Exonucleases: degradam ácidos nucleicos a partir

o Endonucleases: podem começar a degradar sítios

2 - Matérias-primas (substratos) a serem montadas em uma

3 - Enzimas e outras proteínas que “leem” o molde e reúnem

 São as enzimas responsáveis pela

 No processo de replicação a DNA

 E requer um iniciador (fita iniciadora

Os iniciadores, também chamados de

Responsáveis por sinalizar o local de

Sintetizados por enzimas

3- PROTEÍNAS ENVOLVIDAS (REPLISSOMO)

 SSB (Single Strand Binding –ligação a fita simples)

3- PROTEÍNAS ENVOLVIDAS (REPLISSOMO)

 São enzimas necessárias para todos os organismos para

3- PROTEÍNAS ENVOLVIDAS (REPLISSOMO)

 E. coli: DNA Polimerase I, II e III

 Eucariotos: DNA polimerases , 

 Bacteriófagos: T4 DNA Polimerase

 Outras: Taq DNA Polimerase (Thermus aquaticus) 

 Função: quebrar as pontes de hidrogênio entre as bases,

 Essa abertura é necessária para que a forquilha possa se

* SSB (ligação a fita simples)