Anda di halaman 1dari 7

3.4.

2 Vitamin D (cholecalciferol)

TLC banyak digunakan untuk memisahkan jumlah pikogram vitamin D


dengan silika gel. TLC secara khusus digunakan untuk pra-pemurnian sampel yang
disabunkan untuk memisahkan vitamin D dari kolesterol dengan menggunakan GC
dan untuk meminimalkan oksidasi vitamin di plat TLC dilakukan dengan
mengembangkan pelat pada 0˚C di bawah atmosfer N2.

3.4.3 Vitamin E (tokoferol)

Vitamin E atau tokoferol adalah antioksidan yang penting dalam banyak


proses fisiologis dan juga terkait dengan banyak penyakit. Tokoferol dapat bertindak
sebagai antioksidan larut lemak yang melindungi asam lemak tak jenuh ganda (atau
residu lemak asil lemak dari lipid) dalam membran sel dan lipoprotein dari proses
peroksidasi yang berbahaya.

Sistem TLC 1D sudah mampu memisahkan homolog tokoferol dan


tocotrienol. Namun, hanya beberapa sistem berbasis silika yang mampu membedakan
antara isomer posisi. Sistem 1D ini sangat rentan terhadap kecelakaan karena
digunakan fase gerak kompleks yang mengandung empat atau lima komponen pelarut
yang berbeda. Metode 2D yang lebih sederhana dapat juga diterapkan pada matriks
yang lebih kompleks, yaitu ekstrak dari plasma darah atau sel darah merah manusia
(telah dijelaskan oleh Lovelady).

α-Tokoferol dalam makanan dan minyak dapat langsung ditentukan (yaitu


tanpa pembersihan) dengan HPTLC . Silika sederhana juga memungkinkan
pemisahan α -tokoferol dari produk dekomposisi teroksidasi, termasuk α -
tokoferherylquinone, α -tokoferil hidrokuinon, dan berbagai senyawa lain yang terjadi
pada jaringan yang berbeda seperti hati tikus dalam konsentrasi yang signifikan.

3.4.4 Vitamin K

Silika gel merupakan sorben yang paling umum untuk TLC vitamin K. Salah
satu keuntungan utama dari silika gel adalah ia hanya memiliki sedikit kecenderungan
untuk mengkatalisasi degradasi yang tidak diinginkan (berbeda dengan alumina). Plat
silika gel H yang dikembangkan dengan kloroform berhasil digunakan oleh Baczyk et
al. dalam studi mereka tentang dekomposisi vitamin D2 dan K1 oleh paparan sinar
UV. Karena molekul vitamin K1 labil maka dapat menyebabkan degradasi pada
lempeng TLC, yang bahkan terjadi di bawah cahaya redup dan dalam atmosfer gas
inert. Karbon tetraklorida dan benzena atau etil asetat dalam kombinasi dengan
metiletilketon adalah pelarut yang sesuai.

Vitamin K1 dapat dengan mudah dipisahkan dari α-tokoferol, carkaroten, dan


vitamin A dan D2 dalam makanan. Pelat dikembangkan dengan campuran bensin
eter-benzena (6: 1, v / v), atau heksana-dietil eter (70:30, v / v). Misalnya, vitamin K1
(satu ikatan rangkap) dapat dengan mudah dipisahkan dari vitamin K4 (empat ikatan
rangkap) pada pelat gel silika yang diimpregnasi AgNO3.

3.5 Gliserida

Triasilgliserol (TAG) sangat penting untuk penyimpanan energi dalam


organisme, diacylglycerols (DAGs) mewakili molekul messenger kedua yang penting.
TAG dihasilkan dari gliserol dan tiga asam lemak bebas melalui kondensasi ester.
TAG (terutama dari minyak nabati seperti kelapa sawit atau minyak zaitun) juga
merupakan bahan kimia yang sangat penting dalam industri makanan, kosmetik, dan
farmasi. Metode pemisahan yang memungkinkan analisis cepat yaituTLC yang lebih
murah daripada metode berbasis HPLC untuk hasil yang serupa.

3.5.1 Pemisahan asilgliserol

Sebagai contoh, enzim lipoprotein lipase (LPase) menghidrolisis lipoprotein


TAG yang bersirkulasi. Sayangnya, enzim ini tidak membelah residu asil lemak
secara selektif, tetapi menghasilkan campuran isomer yang berbeda: 1,2 - dan 2,3-
DAG; 2-MAG; 3-MAG.

Selama proses LPase in vitro, produk hidrolisis parsial TAG dapat


terakumulasi. Produk-produk ini dapat mewakili hampir 10% dari total asilgliserol
dalam plasma manusia dan sebanyak 30% dalam plasma tikus. Oleh karena itu,
penentuan bagian-bagiannya dengan kromatografi atau metode analitik lainnya sangat
diperlukan karena beberapa uji enzimatik yang umum digunakan tidak mampu
membedakan spesies individu.

Produk-produk hidrolisis TAG yang dikatalisis lipase dapat dengan mudah


dipisahkan pada pelat silika biasa. Fase gerak asam heksana-dietil eter-asetat (70: 30:
1, v / v / v) menghasilkan pemisahan TAG, asam lemak bebas, 1,2- dan 1,3-DAG
yang baik seperti halnya MAG. Nilai RF perkiraan senyawa ini masing-masing adalah
0,7, 0,45, 0,26, 0,23, dan 0,05. Dapat juga ditunjukkan bahwa pelat silika yang
diimpregnasi Na2CO3 dapat secara menguntungkan digunakan untuk jenis pemisahan
seperti itu: Menggunakan pelarut yang terdiri dari dietil eter-heksana-metanol (65: 35:
3, v / v / v), asam lemak bebas, mono -, di-, dan triasilgliserol dapat dihasilkan dengan
baik dan nilai-nilai RF yang dicapai masing-masing sekitar 0,0, 0,18, 0,79-0,85 dan
0,98. Kromatogram yang dipilih ditunjukkan pada Gambar. 2.

Pertama, pelat dijalankan hingga 5 cm dari dasar asam kloroform-metanol-asetat (90: 10: 1, v
/ v / v). Setelah pengeringan pelat dijalankan dalam heksana-dietil eter-aseton (60: 40: 5, v / v
/ v) hingga 16 cm. Sekali lagi, pelat dikeringkan dan kemudian dijalankan dalam heksana-
dietil eter (97: 3, v / v) hingga 19 cm.

3.5.2 Pemisahan Bergantung Pada Tingkat Kejenuhan

TLC AgNO3 memungkinkan pemisahan TAG bergantung pada kandungan


residu asil lemak tak jenuh. Karena asam oleat (18: 1), asam linoleat (18: 2) dan asam
linolenat (18: 3) mendominasi dalam TAG umum, maka terdapat sembilan ikatan
rangkap terdapat dalam satu molekul. Didenotasikan S = jenuh, M = monoenoic, D =
dienoic dan T = asam trienoat, urutan pemisahan kromatografi berikut dapat
diperoleh:

SSS> SSM> SMM> SSD> MMM> SMD> MMD> SDD> SST> MDD

> SMT> MMT> DDD> SDT> MDT> DDT> STT> MTT> DTT> TTT

Ini diilustrasikan secara skematis pada Gambar. 3:

Pelat (a) dikembangkan dengan kloroform-metanol (99: 1, v / v). Pelat (B)


dikembangkan dengan kloroform-metanol (96: 4, v / v)

3.5.3 Analisis minyak nabati

Ag-TLC kuantitatif dari delapan sampel minyak bunga matahari dengan


kandungan asam linoleat yang berbeda dilakukan pada silika gel (diresapi dengan
mencelupkan ke dalam larutan metanol 0,5% dari AgNO3) dengan bensin eter-aseton
(25: 1, v / v), bensin eter-aseton-etil asetat (100: 5 : 2, v / v / v dan 50: 3: 2 (v / v / v)).
Hasil dicapai dengan perlakuan berturut-turut dengan uap brom dan sulfurilklorida
(masing-masing 30 menit) diikuti dengan pemanasan pada 180-200 ◦C. Evaluasi
kuantitatif dilakukan dengan pengukuran absorbansi pada 450 nm.

Campuran pelarut yang sepenuhnya stabil (asam diklorometana-etil asetat-


metanol-asetat (27: 22: 38: 13, v / v / v / v))telah terbukti sangat baik untuk memantau
minyak dari sumber tanaman (termasuk campuran minyak yang digunakan dalam
menggoreng) bersama dengan pemisahan mono, di-, dan triasilgliserida, dan asam lemak
pada lapisan gel silika HPTLC RP18. Batas deteksi untuk masing-masing komponen
sekitar 0,4 μg.
4.1.2 Gliserofosfolipid

Contohnya pemisahan ekstrak kuning telur oleh TLC dan spektra massa ion
positif MALDI-TOF : Hanya wilayah massa yang relevan dari setiap kelas PL yang
ditampilkan. Data yang diberikan dalam tanda kurung sesuai dengan massa teoretis dan
dapat dibandingkan dengan data eksperimental. Harap perhatikan juga bahwa fraksi PE
memberikan spektrum yang berbeda, tergantung pada posisi di mana laser mengenai titik
PE. Satu-satunya fragmentasi yang ditandai adalah hilangnya headgroup SM (mengarah
ke m / z = 677.5).

Dalam konteks data ini, dua aspek harus ditekankan: Pertama, bahkan lipid yang
kelimpahannya rendah (mis. Fosfatidlinositol (PI) yang menghasilkan kurang dari 1%
PL dari kuning telur) dapat dengan mudah dideteksi. Dengan demikian, batas deteksi
adalah sekitar 400 pmol. Kedua, dalam ketergantungan pada posisi di mana sinar laser
mengenai titik yang sesuai dengan fraksi lipid tertentu, spektrum massa yang berbeda
diperoleh. Khususnya untuk fraksi PE di mana residu asil lemak yang lebih pendek dan
lebih panjang dapat dibedakan. Ini jelas menunjukkan bahwa perubahan komposisi asil
lemak sedikit mempengaruhi sifat migrasi PL. Perbedaan ini tidak akan pernah
diselesaikan dengan inspeksi manual pada pelat TLC.