RECIBIDO/RECEIVED: 2018-08-28 | ACEPTADO/ACCEPTED: 2018-08-28 | PP.

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Determinación de la presencia de levaduras en el cultivo

madre utilizado en el proceso de fermentación alcohólica del
mosto de caña azucarera en las unidades de producción del
cantón Portovelo.
Determination of the presence of yeasts in the starter culture used in
the alcoholic fermentation process of the sugarcane must in the
Portovelo canton production units.








Jean Carlos Cabrera Hidalgo
Universidad Técnica de Machala
(Ecuador)
jccabrera_est@utmachala.edu.ec

















Revista Cumbres Vol.5 Nº1
Versión impresa ISSN 1390-9541
Versión electrónica ISSN 1390-3365
http://investigacion.utmachala.edu.ec/revistas/index.php/Cumbres

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REVISTA CIENTÍFICA

Revista CUMBRES. 5(1) 2018: pp. 01 - 07 Cabrera J.

RESUMEN

La investigación tuvo como objetivo, determinar la presencia de levaduras en el cultivo
iniciador utilizado en el proceso de fermentación alcohólica del mosto de caña azucarera
en las unidades de producción del cantón Portovelo. El método utilizado para la siembra o
inoculación en medio agar papa dextrosa fue realizado por inmersión. Los resultados
obtenidos muestran presencia de levadura y mohos tanto en la muestra de cultivo
conservada en refrigeración como a temperatura ambiente. Con los resultados de la
presente investigación, se concluye que existe la presencia de levaduras y de mohos.


Palabras clave: cultivo iniciador, levadura, siembra o inoculación


ABSTRACT

The objective of the research was to determine the presence of yeasts in the starter
culture used in the process of alcoholic fermentation of the sugarcane must in the
Portovelo canton production units. The method used for sowing or inoculation in potato
dextrose agar medium was performed by immersion. The results obtained show the
presence of yeast and molds both in the culture sample stored in refrigeration and at
room temperature. With the results of the present investigation, it is concluded that there
is the presence of yeasts and molds.

Keywords: starter culture, yeast, sowing or inoculation

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CIENTÍFICA
 Determinación de la presencia de levaduras en el cultivo madre utilizado en el proceso de
fermentación alcohólica del mosto de caña azucarera en las unidades de producción del cantón
Portovelo.

INTRODUCCIÓN

En el campo de la micología industrial, se estudia tanto la acción nociva de los hongos
microscópicos, que pudren y malogran materias primas y productos manufacturados
(incluidos los distintos alimentos), como el empleo de estos organismos en fermentaciones
industriales y en el campo de la biotecnología. Se trata de organismos fúngicos que muestran
diferencias considerables en su estructura. Pertenecen a grupos taxonómicos muy diversos
y, si bien se pueden observar a simple vista, no obstante, producen estructuras diminutas,
reproductoras y vegetativas, que no es posible estudiar sin la ayuda del microscopio. (Pascual
& Calderón, 1999)
Levaduras
Las levaduras son hongos que crecen generalmente en forma de agregados sueltos de
células independientes, que pueden ser globosas, ovoides, piriformes, alargadas o casi
cilíndricas. En algunos casos, forman cadenas de células alargadas, adheridas de modo suelto,
semejantes a un micelio, por lo que se las denomina seudomicelio. Algunas especies forman
breves extensiones de verdadero micelio, con frecuencia ramificado. De acuerdo con lo
expuesto, y según se ha comentado ya, no existe un limite de separación definido entre
levaduras y otros hongos que forman un micelio típico.
Las levaduras, cuando crecen sobre medios sólidos, forman colonias de aspecto
característico que recuerdan a las colonias bacterianas. En casi todas las especies de interés
industrial, el modo habitual de reproducción vegetativa es por gemación. Muchas de ellas
presentan reproducción sexual por medio de ascosporas y, a diferencia de los mohos, las
levaduras no pueden identificarse solamente por sus caracteres morfológicos; se precisa la
ayuda de pruebas bioquímicas para la identificación específica. (Pascual & Calderón, 1999)
Medios de cultivo
Muchos hongos y bacterias fitopatógenas pueden cultivarse en medios de cultivo
artificiales, sólidos o líquidos. La mayoría de los hongos crecen en medios de cultivo de alto
contenido de carbohidratos, con un pH que fluctúa entre 5 y 6, mientras que las bacterias
crecen mejor a un pH próximo a 7. No existe un medio ideal para el cultivo de hongos y
bacterias ya que las exigencias de las diferentes especies varían considerablemente. Los
medios de cultivo se clasifican de acuerdo a su composición en dos grandes grupos: medios
naturales, compuestos de infusiones de productos naturales, cuya composición exacta no se
conoce y medios sintéticos, que contienen ingredientes de composición química conocida y
por lo tanto pueden duplicarse con cierto grado de precisión.
Agar papa dextrosa
El agar papa dextrosa es un medio de cultivo microbiológico que se preparan a partir de
infusión de patata y dextrosa. La base del medio es altamente nutritiva, favorece el
crecimiento de hongos y levaduras y permite la esporulación y la producción de pigmentos
en algunos dermatofitos. Algunos procedimientos señalan bajar el pH del medio a 3.5 ± 0.1
con ácido tartárico al 10 %, para inhibir el crecimiento bacteriano. El agar es adicionado como
agente solidificante.
Siembra
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un
medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada
para el crecimiento. (Santambrosio, Ortega, & Garibaldi, 2009)
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

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• Que se efectúe asépticamente

• Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
• Que se realicen solo los manipuleos indispensables
• Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un
mechero o bien Flujo laminar.

MATERIALES Y MÉTODOS

Ubicación geográfica donde se efectuó la Investigación.
El presente trabajo de investigación se efectuó en Laboratorio de Microbiología de la
Unidad Académica de Ciencias Químicas y de la Salud de la Universidad Técnica de Machala,
localizado en el km 5 1⁄2 vía Pasaje. Se utilizó como materia prima el cultivo iniciador
utilizado en el proceso de fermentación alcohólica del mosto de caña azucarera en las
unidades de producción del cantón Portovelo.
Diseño del experimento.
Para desarrollar el experimento, se tomaron 2 muestras de cultivo madre de 100ml
cada una en frascos esterilizados. Las muestras fueron transportadas protegidas de la luz
solar y conservadas; la una en refrigeración a 5ºC y la otra a temperatura ambiente hasta
su llegada al laboratorio para ser inoculadas en el medio de cultivo adecuado. Con la
refrigeración se pretendió evitar un crecimiento excesivo de flora acompañante y mantener
viables los posibles microorganismos. (López, 2001)
Tabla No 1. Diseño del experimento
Número de muestra Modo de conservación
1 Sin refrigerar
2 Refrigerado
Metodología empleada para la identificación de hongos y levaduras.
• Preparación del medio de cultivo
Se siguen las instrucciones del rótulo del medio de acuerdo a la cantidad a preparar. Se
transfiere el medio a un erlenmeyer y se agrega la cantidad de agua destilada establecida.
Con ayuda de un vigilante se disuelven los grumos que puedan formarse y se lleva la
suspensión a baño maría hasta que el medio se torne transparente, se cubre el erlenmeyer
con un tapón de algodón (torunda) envuelto en gasa. Se cubre la torunda con material
impermeable y se esteriliza en autoclave a 121ºC durante 15 minutos.
Si se utiliza de inmediato, dejar enfriar a temperatura alrededor de 45ºC.
En caso de que el medio solidifique, fundirlo nuevamente a baño maría antes de su uso.
(Santambrosio, Ortega, & Garibaldi, 2009)

Figura 1. Preparación de Agar Papa Dextrosa y Agar Papa Dextrosa enriquecida

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fermentación alcohólica del mosto de caña azucarera en las unidades de producción del cantón
Portovelo.

• Siembra por inmersión

Se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de
cultivo previamente fundido.

Figura 2. Siembra del inóculo en caja de Petri y vertido de medio de cultivo
• Incubación muestra
72 horas a 25 - 30°C.
Equipos.
• Baño María memmert
• Incubadora memmert

Figura 3. Baño María e Incubadora marca memmert
Reactivos y materiales
• Reactivos: DifcoTM Agar nutriente, DifcoTM Tryptic Soy Agar

Figura 4. Difco TM Agar Papa dextrosa
• Materiales: Erlenmeyer de 250 ml, Cajas de Petri, Pipeta, Muestra de
analizar

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Figura 5. Materiales de laboratorio esterilizados y utilizados

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Figura 6. Muestra 1 luego de incubación
En la figura 6 se evidencia la presencia de levaduras y mohos en las muestras sin refrigerar
enriquecidas con DifcoTM Agar nutriente, DifcoTM Tryptic Soy Agar puestas a incubación por un
período de 5 días a temperatura constante de 25ºC.

Figura 7. Muestra 2 luego de incubación
En la figura 8 se evidencia la presencia de levaduras y mohos en las muestras conservadas
en refrigeración enriquecidas con DifcoTM Agar nutriente, DifcoTM Tryptic Soy Agar puestas a
incubación por un período de 5 días a temperatura constante de 25ºC.

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fermentación alcohólica del mosto de caña azucarera en las unidades de producción del cantón
Portovelo.

CONCLUSIONES

En la presente investigación se puede concluir, que las muestras de cultivo iniciador
sometidas a incubación durante 5 días a una temperatura constante de 25ºC corroboró la
hipótesis de que sı́ existen levaduras y mohos en la composición del cultivo madre.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

López, R. (2001). Manejo y transporte de muestras en microbiología. Offarm, 122-126.
Santambrosio, E., Ortega, M., & Garibaldi, P. (2009). Siembra y recuento de
microorganismos. Rosario, Argentina.
Pascual, M., & Calderón, V. (1999). Microbiología Alimentaria: Metodología Analítica para
Alimentos y Bebidas. Ediciones Díaz de Santos.

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