PERBANDINGAN TINGKAT ETANOL PASCA KEMATIAN DALAM DARAH

DAN SUMSUM TULANG

1. PENDAHULUAN

Meskipun perkembangan dinamis ilmu kimia dan biologi, tanatologi legal dan
medis kontemporer masih menghadapi sejumlah tantangan. Salah satu masalah
saat ini adalah pencarian matriks biologis alternatif untuk studi toksikologi.
Meskipun darah, urin dan humor vitreous biasanya digunakan sebagai bahan
biologis dalam tes toksikologi rutin, ada banyak situasi di mana ketersediaan
bahan biologis ini sebagian atau sepenuhnya terbatas. Untuk menjawab pertanyaan
apakah xenobiotik hadir di tubuh almarhum pada saat kematian, dan jika demikian,
pada konsentrasi apa dan jika itu bisa menjadi penyebab kematian, perlu untuk
memperkenalkan apa yang disebut bahan biologis alternatif ke dalam analisis
toksikologis.

Sumsum tulang adalah salah satu dari bahan-bahan tersebut. Dari sudut
pandang toksikologi forensik, keunggulannya adalah ketersediaan dan daya tahan.
Berkat lokasi sumsum tulang yang ada di dalam tulang, material nya terlindungi
dari dampak faktor eksternal dan efek destruktif bakteri dan jamur; pada saat yang
sama, perlindungan ini menunda proses dekomposisi sumsum tulang dibandingkan
dengan jaringan lainnya. Fitur-fitur ini sangat penting ketika diperlukan untuk
mengambil sampel toksikologis dari jaringan tubuh yang membusuk atau digali.
Tambahan untuk analisis standar yang berfokus pada etanol dan narkotika,
sumsum tulang dapat juga digunakan untuk analisis obat, misalnya obat opioid,
karena vaskularisasi sangat tinggi dan kadar lipid tinggi. Oleh karena itu,
sehubungan dengan toksikologi forensik, sumsum tulang dapat dianggap sebagai
tempat penyimpanan spesifik berbagai xenobiotik.
 Sejauh ini hanya sedikit makalah tentang kegunaan sumsum tulang dalam
toksikologi forensik. Studi-studi ini menunjukkan hubungan linear antara
konsentrasi xenobiotik dalam darah dan sumsum tulang. Penulis mereka juga
menunjukkan perlunya evaluasi fase pra-analitis ketika menafsirkan hasil. Dalam
kasus sumsum tulang, standar untuk pengumpulan, persiapan dan penyimpanan
bahan biologis serta metode analitik yang digunakan belum dikembangkan.
Sementara itu, data dari literatur menginformasikan bahwa lokasi koleksi (sumsum
tulang femoral lebih gemuk dari sumsum tulang iga), kondisi dan lamanya
penyimpanan bahan (sumsum tulang harus segera dianalisis secepat mungkin)
mempengaruhi hasil tes toksikologi. Tujuan dari makalah ini adalah untuk menilai
tingkat korelasi konsentrasi etil alkohol dalam dua bahan biologis yang berasal
dari otopsi - darah dan sumsum tulang.

2. BAHAN DAN METODE

2.1. BAHAN

Bahan biologis (darah tepi dan sumsum tulang) dikumpulkan dari 100
orang yang melakukan otopsi forensik dan otopsi medis yang dilakukan di
Departemen Kedokteran Forensik antara 2015 dan 2017. Kelompok uji terdiri
dari kasus-kasus di mana kecurigaan penyebab kematiannya karena keracunan
dengan xenobiotik yang diberikan atau di mana ada probabilitas tinggi hasil
positif dari tes toksikologi (bau alkohol yang tercium, penyalahgunaan
alkohol). Sampel darah tepi dikumpulkan dengan cara menusuk vena
femoralis selama pemeriksaan eksternal, sedangkan sumsum tulang
dikumpulkan dengan aspirasi atau kuretase dari sayap ilium. Sampai
penelitian selesai dilakukan, bahan diamankan di tabung reaksi dengan
penambahan natrium fluorida, yang diberi label dengan tepat dan disimpan
dalam lemari es pada suhu 4 ° C. Disalurkan dalam waktu maksimal dua hari
sejak saat bahan biologis dikumpulkan.
 Untuk penyelidikan lebih lanjut kelompok studi dibagi menjadi 5 sub-
kelompok berdasarkan usia (orang yg berusia di bawah 30, orang berusia
antara 31 dan 40 tahun, orang dengan usia antara 41 dan 50, orang berusia
antara 51 dan 60, orang berusia di atas 60). Ukuran berbagai kelompok
disajikan pada Tabel 1.

2.2. PROSEDUR ANALITIK

Konsentrasi etil alkohol ditentukan dengan penggunaan kromatografi

dengan detektor FID dan teknologi teknik analisis headspace. Studi dilakukan
pada Agilent 7890A GC System kromatografi gas dengan dua kolom J&W
dengan polaritas berbeda: DB-ALC1 30 m × 0,25 mm × 1,8 μm dan DB-
ALC2 30 m × 0,25 mm × 1,2 μm. Untuk menentukan konsentrasi etil alkohol,
bahan biologis pada volume 50 μl dan 2 ml larutan 1-Propanol pada
konsentrasi 0,24 mg / ml sebagai standar internal diperkenalkan ke dalam
tabung kaca tes kromatografi. Tabung reaksi yang disegel ditempatkan dalam
pengumpan sampel otomatis - Agilent G1888 Network Headspace Sampler.
Pemisahan kromatografi dilakukan pada 40° C menggunakan helium dengan
kemurnian 5.0 (99,999%) sebagai gas pembawa.

Tabel 1

Hubungan antara tingkat alkohol dalam bahan biologis tertentu dalam

kaitannya dengan usia subjek. *** Secara statistik signifikan.
Bahan Biologis Sumsum
Tulang
Darah < =30 years old [n= 25] 0.9***
31–40 years old [n =21] 0.97***
41–50 years old [n =15] 0.98***
51–60 years old [n =19] 0.99***
> 60 years old [n = 20] 1***
***p < 0.001.
2.3. VALIDASI

Metode ini spesifik untuk etanol, menghasilkan setiap kali waktu

retensi (WT) yang telah ditentukan, 2,169 menit (ALC1, FID-1) dan 2388
menit. (ALC2, FID-2). Untuk n-propanol, nilai WT adalah 3.581 menit.
(ALC1, FID-1), masing-masing 4278 mnt (ALC2, FID-2). Kurva kalibrasi
yang diperoleh adalah linear, dan koefisien korelasi yang diperoleh adalah
0,99994 (ALC1-FID-1) dan 0,99994 (ALC2-FID-2). Nilai ini sudah
melampaui 0,999, menunjukkan hubungan proporsionalitas langsung antara
konsentrasi larutan standar dan area puncak.

Untuk evaluasi presisi, pemulihan, dan kesalahan relatif, kami analisis

sepuluh kali solusi yang sesuai dengan tiga poin dari kurva kalibrasi, masing-
masing dengan konsentrasi: 0,2, 1,0 dan 3,0 %. Nilai untuk rasio pemulihan
antara 99,90% dan 102,6%. Nilai untuk rasio presisi antara 2,7% dan 3,1%.
Nilai untuk rasio kesalahan relatif antara 2,67% dan 3,33%. Batas kuantitasi
(BT) adalah 0,1 %.

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan IBM SPSS Statistics

24. Nilai p <0,05 dianggap signifikan secara statistik. Dengan menggunakan
analisis korelasi Spearman, diperiksa apakah ada hubungan yang signifikan
secara statistik antara variabel yang diteliti. Analisis dengan uji Mann-
Whitney U dibuat untuk menguji apakah ada perbedaan yang signifikan
secara statistik antara kedua kelompok independen. Saat membandingkan
lebih banyak dari dua kelompok, analisis ragam digunakan. Tes Post-hoc yang
relevan digunakan dalam kasus perbedaan yang signifikan secara statistik.
Seleksi didasarkan pada homogenitas varians dibandingkan kelompok. Rerata
aritmatika dan standar deviasi digunakan untuk variabel kuantitatif dalam
analisis statistik hasil.
3. HASIL

Analisis konsentrasi etil alkohol dalam bahan biologis (darah dan sumsum
tulang) dilakukan dalam sebuah kelompok, 100 kasus. 78 dari mereka adalah pria
berusia 19-78 tahun (rata-rata - 46 tahun, SD ± 17,4) dan 22 adalah wanita berusia
17-74 (rata-rata - 44 tahun, SD ± 17.2). Hasil positif dari tes konten etil alkohol (di
atas 0,1 mg / g) dicatat dalam 56 kasus; 41 kasus negatif dalam hal konten etil
alkohol di kedua bahan biologist yang dianalisis, 3 kasus positif hanya untuk satu
bahan biologis (darah atau sumsum tulang).

Penyebab kematian paling umum termasuk keracunan fatal dan gantung diri,
waktu rata-rata dari saat kematian hingga saat pengumpulan bahan biologis adalah
131 jam, dan tidak ada kasus pembusukan lanjut yang diamati. Konsentrasi rata-
rata etil alkohol dalam darah adalah 0,68 (SD ± 1,09) mg / g, dan dalam sumsum
tulang 0,59 (SD ± 0,96) mg / g. Langkah selanjutnya adalah memeriksa apakah
kelompok usia individu berbeda dalam cara yang signifikan secara statistik dalam
hal konsentrasi etil alkohol dalam matriks biologis yang berbeda. Yang menarik
adalah faktanya bahwa dalam kasus orang di atas 60, konsentrasi etil alkohol yang
sedikit lebih tinggi diamati di sumsum tulang dibandingkan dengan darah
dibandingkan dengan kelompok usia lainnya.
 Gambar 1. Hubungan antara konsentrasi alkohol dalam sumsum tulang dan darah
pada kelompok studi (n = 100, R = 0,97, p <0,001).

Unsur penting dari analisis statistik dari hasil yang diperoleh adalah
penentuan faktor korelasi antara konsentrasi etil alkohol dalam sumsum tulang dan
konsentrasinya pada darah. Sangat kuat, korelasi linier antara konsentrasi alkohol
ditemukan dalam darah dan sumsum tulang (R = 0,97, p <0,001), data yang
diperoleh ditunjukkan pada Gambar. 1. Itu juga diperiksa apakah usia dan jenis
kelamin berpengaruh pada hasil. Data yang diperoleh mengungkapkan bahwa
koefisien korelasi sedikit berbeda dalam jenis kelamin (untuk wanita dan laki-laki,
masing-masing: darah vs sumsum tulang R = 0,96 dan 0,98), dan usia. Diamati
bahwa korelasi terkuat terjadi dalam yang kelompok umur tertua. Namun,
perbedaan ini tidak signifikan, yang menunjukkan kegunaan sumsum tulang
terlepas dari usia atau jenis kelamin
 Subyek. Tabel 1 menyajikan koefisien korelasi konsentrasi etanol yang
diperoleh dalam bahan biologis individu tergantung pada usia subyek. Selain itu,
dengan membagi kelompok studi tergantung pada konsentrasi etil alkohol dalam
darah, perbedaan yang signifikan dalam koefisien korelasi juga diamati. Untuk
darah dan sumsum tulang, koefisien ini adalah: 0,6 (0,1-1,0 etanol dalam darah),
0,6 (1,01-2,0 dari etanol dalam darah) dan 0,92 (lebih dari 2,01 etanol dalam
darah). Nilai-nilai yang diperoleh menunjukkan bahwa perlu untuk mencoba
menjelaskan fenomena ini.

4. DISKUSI

Studi tentang penilaian tingkat korelasi konsentrasi xenobiotik individu dalam

sumsum tulang dan darah diprakarsai pada 1990-an oleh Winek et al. Pada saat itu,
studi juga dilakukan pada model hewan, dan tidak hanya etanol, tetapi juga
isopropanol dan pentobarbital ditentukan dalam bahan biologis di serangkaian
publikasi. Bahkan pada saat itu, para penulis menarik perhatian tentang masalah
penting konten lipid dalam sumsum tulang. Karena kelarutan alkohol lebih tinggi
dalam air dibandingkan dengan lipid, kandungan alkohol akan lebih rendah di
sumsum tulang dengan lapisan lipid. Dalam studi berikutnya, diamati bahwa
konsentrasi rata-rata etanol dalam sumsum tulang lebih rendah dibandingkan
dengan bahan biologis lainnya. Hubungan serupa juga diamati dalam penelitian
kami. Di kasus darah, fenomena ini bisa berhubungan dengan perbedaan hidrasi
jaringan, dan dalam kasus sampel urin, mungkin berhubungan dengan fase
eliminasi etanol dari tubuh pada saat kematian.

Juga harus diingat bahwa dengan bertambahnya usia, konversi fisiologis dari
sumsum tulang merah menjadi sumsum tulang kuning terjadi, dan jumlah
komponen lemak meningkat sekitar 7% dalam setahun. Data ini membuat penulis
bertanya-tanya apakah konsentrasi etanol dalam sumsum tulang dibandingkan
dengan bahan lain akan tergantung pada usia dan jenis kelamin. Sejauh ini, belum
ada studi yang diterbitkan di mana sub-kelompok akan dibedakan berdasarkan usia
atau jenis kelamin; Namun, data yang diperoleh oleh kami menunjukkan bahwa
jenis kelamin tidak mempengaruhi rata-rata secara signifikan konsentrasi etanol
dalam bahan individual. Sepertinya usia akan juga memiliki dampak yang lebih
signifikan pada koefisien korelasi yang diperoleh untuk rata-rata hasil konsentrasi
etanol sumsum tulang dibandingkan bahan biologis lainnya .

Data yang diperoleh oleh kami menunjukkan korelasi yang kuat antara hasil
yang dicapai untuk sumsum tulang dan darah. Publikasi dimana koefisien korelasi
konsentrasi etil alkohol dalam darah dan sumsum tulang atau dalam urin dan
sumsum tulang jarang ditentukan. Di studi mereka, Tomingawa et al. dilakukan
cukup lama, analisis retrospektif lebih dari 300 kasus. Studi dilakukan selama
lebih dari 16 tahun, dan rentang waktu yang lama me mungkin kan diferensiasi
kelompok studi dalam hal jenis kelamin, usia, kematian, atau kondisi di mana
mayat disimpan. Terima kasih kepada pemisahan "subkelompok" yang tepat,
adalah mungkin untuk menentukan

Apakah keadaan kematian tertentu, mis. tenggelam atau usia tua,

mempengaruhi korelasi hasil yang diperoleh. Menurut penulis, koefisien korelasi
darah versus sumsum tulang berada pada level r = 0,98 dan sedikit lebih rendah
dalam kasus orang yang tenggelam. Studi yang berlangsung selama beberapa
tahun juga dilakukan di Osaka. Meskipun kelompok studi terdiri dari hampir 150
kasus, tidak ada etanol terdeteksi dalam darah dan sumsum tulang di sebagian
besar dari mereka. Hasil positif dalam hal adanya etil alkohol dan kemungkinan
terbatas pada koleksi sumsum tulang mempersempit kelompok studi menjadi
hanya 20 kasus otopsi, atas dasar yang koefisien korelasinya sama dengan r =
0,983.

Dalam penelitian kami, koefisien korelasi yang diperoleh adalah sebagai

berikut: darah vs sumsum tulang r = 0,97; Koefisien korelasi yang diperoleh tidak
dibedakan tergantung pada usia dan jenis kelamin subjek dalam salah satu studi
yang disebutkan di atas. Makalah ini merupakan upaya untuk melakukan
diferensiasi tersebut dan menganalisis koefisien korelasi klien dalam subkelompok
tertentu. Analisis ini menunjukkan bahwa dengan bertambahnya usia, maka
diperoleh korelasi konsentrasi etanol antara darah dan sumsum tulang menjadi
lebih kuat (darah vs sumsum tulang r = 0,91 untuk kelompok di bawah 30 tahun
dan r = 0,99 untuk kelompok umur lebih dari 60 tahun).
Hasil penelitian kami mengungkapkan bahwa hubungan yang paling linier
antara kadar etil alkohol dalam sumsum tulang dan dalam darah terjadi ketika
konsentrasi etanol dalam darah di atas 2,0 mg / g. Itu harus disebutkan di sini
bahwa proses distribusi yang tepat dan proses farmakokinetik lainnya yang terjadi
di sumsum tulang tidak dimengerti secara baik. Mungkin ini hasil dari kasus di
mana meskipun rendah atau bahkan tanpa konsentrasi etanol dalam darah, terdapat
kandungan konsentrasi etanol yang lebih tinggi dalam sumsum tulang, yang
memunculkan pertanyaan tentang kemungkinan akumulasi dan neoformasi
potensial. Tampaknya bahwa waktu yang berlalu dari saat kematian ke saat
mengumpulkan bahan biologis mungkin juga penting. Dalam studi kasus kami,
waktu rata-rata antara saat kematian dan otopsi medis dan legal adalah 131 jam.
Data yang diperoleh mengungkapkan bahwa saat ini secara statistik lebih lama
secara signifikan dalam hal konsentrasi alkohol sama dengan 0 dibandingkan
dengan kasus-kasus di mana konsentrasi etanol berbeda dari nol. Makalah yang
diterbitkan sejauh ini menunjukkan bahwa stabilitas sampel sumsum tulang
tergantung pada suhu di mana bahan biologis disimpan. Namun, ketidakmampuan
untuk memperkirakan etil alkohol dalam sumsum tulang berkaitan dengan kasus
ketika bahan disimpan pada suhu kamar selama proses eliminasi xenobiotik lebih
dari 28 hari dalam kaitannya dengan sumsum tulang belum sepenuhnya dijelaskan;
Namun, telah terbukti bahwa bahkan di kasus mayat yang sudah menjadi
kerangka atau pembakaran mayat, yaitu dalam suatu situasi di mana tidak mungkin
 untuk mengumpulkan bahan biologis rutin, masih mungkin untuk melakukan tes
toksikologi kuantitatif di sumsum tulang.

Sehubungan dengan menentukan konsentrasi etanol dalam tubuh pada saat

kematian, selain penentuan etanol saja, mungkin juga berguna untuk menentukan
etil glukuronida dalam bahan ini, yaitu dibentuk oleh konjugasi enzimatik etanol
dengan asam glukuronat. Schloegl et al. membuktikan bahwa senyawa ini berhasil
dideteksi di sumsum tulang. Lebih penting lagi, telah terbukti bahwa senyawa ini
dapat bertahan di sumsum tulang untuk waktu yang lama dan kemungkinan
sintesis etil glukuronida pasca kematian telah dihilangkan. Kesimpulan ini sangat
penting karena penentuan metabolit etanol simultan dan etanol itu sendiri dapat
membantu memverifikasi hipotesis tentang kemungkinan pembentukan alkohol
endogen dan, dengan demikian, membantu dalam penafsiran hasil toksikologis
yang diperoleh.

5. KESIMPULAN
Singkatnya, meskipun banyak masalah yang belum terselesaikan terkait
dengan farmakokinetik sumsum tulang, bahan ini dapat digunakan untuk
mengevaluasi keberadaan etil alkohol dalam tubuh ketika bahan biologis rutin
tidak tersedia. Koefisien korelasi darah versus sumsum tulang menunjukkan
hubungan yang kuat antara bahan biologis pada bagian diskusi, yang menunjukkan
kegunaan pemeriksaan sumsum tulang dalam toksikologi forensik dan medis.