DASAR TEORI

1. Media Brilliant Green Lactose Bile Broth ( BGLB )

Media BGLB ini diklasifikasikan berdasarkan atas sususan kimiawi, konsistensi atau
kepadatannya, wadah yang digunakan serta fungsinya.

- Berdasarkan susunan kimiawi, termasuk media sintesis karena semua komponen

penyusunnya merupakan zat kimia.

- Berdasarkan konsistensi atau kepadatannya, termasuk media cair broth karena media tidak
mengandung agar.

- Berdasarkan wadah atau tempatnya, termasuk media tabung karena disimpan dalam tabung
reaksi.

- Berdasarkan fungsinya, termasuk media selektif untuk pertumbuhan bakteri Coliform dan
menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif.

Media Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLB) merupakan media yang mendeteksi
adanya bakteri Coliform ( Gram Negatif ) didalam air, makanan, dan produk lainnya. Media
ini dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram positig dan menggiatkan pertumbuhan
bakteri coliform. Ada tidaknya bakteri Coliform pada media BGLB ditandai dengan
terbentuknya asam dan gas yang disebabkan karena memfermentasi lactose oleh bakteri
golongan coli ( fardias, 1989).

Media Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLB) khususnya digunakan untuk
pemeriksaan MPN Coliform, yaitu pemeriksaan yang digunakan untuk mengethaui perkiraan
jumlah terdekat bakteri Coliform dan E.coli dalam 100 ml sampel. Penggunaan media BGLB
ini digunakan untuk tahap uji penguat ( Confirmed Test ). Media BGLB ini digunakan
dengan maksud sebagai media selektif bagi bakteri selain bakteri Coliform dan juga sebagai
penyubur bagi bakteri Coliform, komposisi media yang mengandung laktosa dan garam
empedu yang dapat mendorong dan mengizinkan bakteri bakteri coliform tumbuh dengan
optimal pada suhu 35,50C.

2. Media Nutrient Agar ( NA )

Nutrient Agar ( NA ) merupakan suatu media yang berbentuk padat, yang

merupakan perpaduan antara bahan alamiah dan senyawa-senyawa kimia. Nutrient
Agar (NA) merupakan suatu media yang mengandung sumber nitrogen dalam jumlah
cukup yang dapat digunakan untuk budidaya bakteri dan untuk penghitungan
mikroorganisme dalam air, limbah, kotoran dan bahan lainnya. Komposisi Nutrient
Agar (NA) terdiri dari ekstrak daging sapi 3 gram, peptone 5 gram dan agar 15 gram.
Formula ini tergolong relatif simpel untuk menyediakan nutrisi-nutrisi yang
dibutuhkan oleh sejumlah besar mikroorganisme. Pada Nutrient Agar (NA), ekstrak
daging sapi dan peptone digunakan sebagai bahan dasar karena merupakan sumber
protein, nitrogen, vitamin, serta karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh
mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembang. Ekstrak daging sapi mengandung
senyawa-senyawa yang larut di dalam air termasuk karbohidrat, vitamin, nitrogen
organik dan juga garam. Peptone merupakan sumber utama dari nitrogen organik, yang
sebagian merupakan asam amino dan peptida rantai panjang. Dalam hal ini agar
digunakan sebagai bahan pemadat, karena sifatnya yang mudah membeku dan
mengandung karbohidrat sehingga tidak mudah diuraikan oleh mikroorganisme. Media
Nutrient Agar (NA) merupakan suatu media berwarna coklat muda yang memiliki
konsistensi yang padat dimana media ini berasal dari sintetik dan memiliki kegunaan
sebagai media untuk menumbuhkan bakteri. Di Indonesia sendiri, Nutrient Agar (NA)
sudah banyak dipakai oleh industri khususnya industri produk susu dan juga di
pengolahan air dan limbah pabrik. Tidak semua bakteri dapat dibiakkan pada media ini
karena media ini hanya mengisolasi bakteri antraks dan stafilokokus.

3. Media MacConkey Agar ( MCA )

Mac Conkey Agar adalah salah satu jenis media yang digunakan untuk identifikasi
mikroorganisme. Mac Conkey agar termasuk dalam media selektif dan diferensial bagi
mikroba. Jenis mikroba tertentu akan membentuk koloni dengan ciri tertentu yang khas
apabila ditumbuhkan pada media ini. Bakteri gram negatif yang tumbuh dapat dibedakan
dalam kemampuannya memfermentasikan laktosa. Koloni bakteri yang memfermentasikan
laktosa berwarna merah bata dan dapat dikelilingi oleh endapan garam empedu. Endapan ini
disebabkan oleh penguraian laktosa menjadi asam yang akan bereaksi dengan garam empedu.
Bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa biasanya bersifat patogen. Golongan bakteri ini
tidak memperlihatkan perubahan pada media.Warna koloni dapat dilihat pada bagian koloni
yang terpisah. Beberapa contoh pertumbuhan koloni pada Mac Conkey Agar :

1. Salmonella dan Shigella : serupa media

2. Escherichia coli : merah dikelilingin zona keruh

3. Enterobacter dan Klebsiella : merah muda dan mukoid

4. Media MacConkey Broth purple ( MCB)

Selama 50 tahun terakhir, Mac Conkey Broth telah menjadi media standart untuk isolasi
utama bakteri Coliform dan telah direkomendasikan untuk tujuan ini oleh Public Health
Laboratory Service Water dan World Health Organization. Produk oxoid sesuai dengan
spesifikasi mereka untuk pengujian air dan juga pada formulasi yang ditentukan oleh Dept. Of
Health for milk grading. Kelebihan Mac Conkey Broth dalam uji kolumum dugaan adalah
proporsi rendah reaksi positif palsu dan fakta bahwa kebanyakan strain E.coli menghasilkan
reaksi positif dalam 24 jam. Kekurangannya, karena variabilitas pepton dan garam empedu
yang terkandung dalam media asli, telah diatasi dengan produksi skala besar, penyatuan batch
dan control kualitas yang cermat termasuk standarisasi titrimetrik garam empedu dengan
metode yang dijelaskan oleh Burman. Merah kental telah diuji sebelumnya karena tidak
adanya zat beracun sebelum sebelum dimasukkan kedalam media oxoid. Childs & Allen telah
menunjukkan bahwa beberapa sampel warna merah netral bersifat hambat. Bagi yang lebih
suka, media ini juga tersedia dengan warna ungu bromocresol sebagai indicator untuk rincian
media alternative ini dan juga uji kolumum dugaan lihat Mac Conkey Broth purple

PEMBAHASAN

1. Media Brilliant Green Lactose Broth ( BGLB )

Media Brilliant Green Lactose Broth ( BGLB ) merupakan suatu media yang digunakan
untuk mendeteksi adanya bakteri Coliform yang biasanya terdapat didalam air minum, air
bersih, air badan air, air limbah rumah sakit / klinik, air kolam renang, makanan, minuman
dan produk lainnya yang perlu diperhatikan sanitasinya. Komposisi media BGLB dalam per
liternya mengandung Peptone 10 gram untuk menyediakan nitrogen, vitamin, mineral dan
asam amino essensial untuk pertumbuhan bakteri. Laktosa 10 gram merupakan karbohidrat
yang difermentasi sehingga dapat menyediakan karbon dan emerge. Oxibile 20 gram dan
Brilliant Green 0,0133 gram dapat menghambat bakteri Gram positif dan bakteri Gram
negatif kecuali Coliform. Media Brilliant Green Lactose Broth ( BGLB ) dibuat dengan
menimbang bubuk media sebanyak 40 gram dan dilarutkan dengan aquadest sebanyak 1000
ml dalam beaker glass 2000 ml kemudian dilarutkan dan dipanaskan diatas nyala api atau
kompor listrik aduk media hingga homogen dengan sempurna dan dicek pH media BGLB 7,4
± 0,2 kemudian tuang media BGLB kedalam tabung reaksi yang sudah berisi tabung durham
( dalam posisi terbalik ) masing - masing diisi media BGLB sebanyak 8 ml kemudian tabung
reaksi ditutup dengan kapas dan kertas coklat selanjutnya diikat rapi dengan karet setelah itu
disterilisasi menggunakan autoklaf dengan suhu 1210C selama 15 - 20 menit. Yang harus
diperhatikan saat pembuatan media BGLB :
1. Pelarut : pelarut yang digunakan untuk melarutkan media BGLB aquadest steril.
Penambahan aquadest harus disesuaikan dengan massa bubuk media yang akan digunakan.
Karena apabila tidak sesuai maka konsentrasi dari media BGLB akan berubah.

2. penimbangan media pertumbuhan : proses penimbangan dilakukan dengan menggunakan

neraca analitik. Penimbangan media yang dilakukan harus tepat karena apabila
penimbangannya tidak tepat maka akan mempengaruhi konsentrasi dari media tersebut.

3. pengaturan pH : pH media BGLB harus diukur sebelun disterilisasi. pH media BGLB 7,4 ±
0,2 dan diukur pada suhu 250C. pH media harus sesuai dengan yang ditentukan karena pH
sangat berpengaruh terhadap kualitas media.

4. Proses pelarutan : media harus dilarutkan dengan sempurna. Proses pelarutannya dibantu
dengan proses pemanasan. Namun media tidak boleh dipanaskan hingga mendidih karena
akan mempengaruhi komposisi dari media tersebut.

5. Proses sterilisasi : media BGLB disterilisasi menggunakan autoklaf dengan suhu 1210C
selama 15 - 20 menit.

6. Posisi tabung durham dalam tabung reaksi : tabung durham diletakkan terbalik pada tabung
reaksi. Setelah memasukkan media BGLB kedalam tabung reaksi, media harus dibolak balik
agar tidak ada gelembung udara pada tabung durham. Karena apabila ada gelembung udara
maka kita akan kesulitan saat mengamati fermentasi dari Coliform dalam media BGLB

2. Media Nutrient Agar ( NA )

Nutrien Agar adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. NA juga digunakan
untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif, dalam artian
mikroorganisme heterotrof. NA dibuat dari campuran ekstrak daging dan peptone dengan
menggunakan agar sebagai pemadat. Dalam hal ini agar digunakan sebagai pemadat, karena
sifatnya yang mudah membeku dan mengandung karbohidrat yang berupa galaktam sehingga
tidak mudah diuraikan oleh mikroorganisme. Dalam hal ini ekstrak beef dan pepton
digunakan sebagai bahan dasar karena merupakan sumber protein, nitrogen, vitamin serta
karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembang.
Medium Nutrient Agar (NA) merupakan medium yang berwarna coklat muda yang memiliki
konsistensi yang padat dimana medium ini berasal dari sintetik dan memiliki kegunaan
sebagai medium untuk menumbuhkan bakteri. Na merupakan salah satu media yang umum
digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air, sewage, produk pangan,
untuk membawa stok kultur, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk
mengisolasi organisme dalam kultur murni. Media Nutrient Agar dibuat dengan menimbang
media sebanyak 111 gram kemudian menambahkan aquadest steril sebanyak 1000 ml
kedalam beaker glass berukuran 2000 ml selanjutnya dipanaskan diatas kompor listrik aduk
hingga media tersebut homogen dengan sempurna selanjutnya tuangkan media kedalam
erlenmenyer kemudian tutup mulut erlenmenyer dengan kapas dan kertas coklat lalu diikat
rapi dengan karet selanjutnya media disterilisasi menggunakan autoklaf dengan suhu 1210C
selama 15 - 20 menit. Bila media tidak akan segera digunakan sebaiknya media disimpan
dalam kulkas, dan jika media hendak digunakan untuk pemeriksaan bakteriologi ,media
dipanaskan dahulu dengan kompor listrik dan dituang kedalam petridisk.

3. . Media MacConkey Agar ( MCA )

Mac Conkey agar termasuk dalam media selektif dan diferensial bagi mikroba. Jenis
mikroba tertentu akan membentuk koloni dengan ciri tertentu yang khas apabila ditumbuhkan
pada media ini. Persenyawaan utama dalam media ini adalah laktosa, garam empedu, dan
merah netral sebagai indikator warna. Media ini akan menghambat pertumbuhan bakteri gram
positif dengan adanya garam empedu yang akan membentuk kristal violet. Bakteri gram
negatif yang tumbuh dapat dibedakan dalam kemampuannya memfermentasikan laktosa.
Koloni bakteri yang memfermentasikan laktosa berwarna merah bata dan dapat dikelilingi
oleh endapan garam empedu. Endapan ini disebabkan oleh penguraian laktosa menjadi asam
yang akan bereaksi dengan garam empedu. Penimbangan media dilakukan secara hati-hati
dan teliti dengan meggunakan neraca analitik. Komposisi media MCA mengandung Pepton :
untuk menyediakan nitrogen, vitamin, mineral dan asam amino esensial untuk pertumbuhan
bakteri. Laktosa : untuk menyediakan karbon dan energi serta untuk membedakan bakteri
yang bisa memfermentasi laktosa dengan bakteri yang tidak memfermentasi laktosa. Bile salts
(garam empedu): sebagai agen selektif yang berfungsi menghambat pertumbuhan
bakteri gram positif. Kristal Violet : sebagai agen selektif yang berfungsi menghambat
pertumbuhan bakteri gram positif. Natrium Klorida : untuk menyediakan elektrolit dan
keseimbangan osmotik. Neutral red : sebagai indikator pH, akan berwarna merah jika pH di
bawah ini 6,8. Agar : untuk memadatkan media. Media Nutrient Agar dibuat dengan
menimbang media sebanyak 80 gram kemudian dilarutkan dengan aquadest steril sebanyak
2000 ml kedalam beaker glass selanjutnya dipanaskan diatas kompor listrik aduk hingga
media tersebut homogen dengan sempurna selanjutnya tuangkan media kedalam erlenmenyer
kemudian tutup mulut erlenmenyer dengan kapas dan kertas coklat lalu diikat rapi dengan
karet selanjutnya media disterilisasi menggunakan autoklaf dengan suhu 1210C selama 15 -
20 menit.

4. Media MacConkey Broth purple ( MCB)

MacConkey Broth terdiri dari 3 unsur penting yang saling menunjang yaitu laktosa,
garam dan indikator. Laktosa, berfungsi sebagai agent yang bila tergradasi akan memproduksi
gas. Gas tersebut menunjukkan pertumbuhan E.coli, gas yang terbentuk “oxibile” berfungsi
sebagai selective agent. Garam menghambat pertumbuhan beberapa organisme pencernaan,
tetapi tidak untuk E.coli sedangkan bromocresol purple bertindak sebagai indikator E.coli
yang hidup akan memproduksi asam. Keberadaan asam tersebut akan mengubah warna
bromocresol purple dari ungu berubah menjadi kuning. MacConkey Broth purple
direkomendasikan untuk mendeteksi dan mempekirakan Coliform dalam bahan makanan dan
untuk identifikasi dengan dugaan Coliform dari berbagai specimen seperti air, susu, makanan.
Media ini direkomendasi untuk digunakan dalam pemeriksaan mikrobiologi dan bahan
makanan. Dan untuk inokulasi langsung sampel air untuk jumlah Coliform. Tindakan media
selektif media ini dikaitkan dengan sodium taurocholate yang merupakan penghambat bagi
sebagian besar spesies bakteri gram positif. Bakteri gram negative biasanya tumbuh dengan
baik pada media dan dibedakan oleh kemampuannya untuk memfermentasikn laktosa tumbuh
berwarna kuning. Warna kuningnya karena produksi asam dari laktosa strain non fermentasi
laktosa, seperti shigella dan salmonella tidak berwarna dan transparan biasanya tidak
mengubah penampilan media. Media MacConkey Broth purple dibuat dengan menimbang
media sebanyak 70 gram dan dilarutkan dengan aquadest sebanyak 2000 ml dalam beaker
glass 2000 ml kemudian dilarutkan dan dipanaskan diatas nyala api atau kompor listrik aduk
media hingga homogen dengan sempurna. kemudian tuang media MacConkey Broth purple
kedalam tabung reaksi yang sudah berisi tabung durham ( dalam posisi terbalik ) masing -
masing diisi media MacConkey Broth purple sebanyak 8 ml kemudian tabung reaksi ditutup
dengan kapas dan kertas coklat selanjutnya diikat rapi dengan karet setelah itu disterilisasi
menggunakan autoklaf dengan suhu 1210C selama 15 - 20 menit.