UNIVERSIDAD REGIONAL AUTÓNOMA DE LOS ANDES

´´UNIANDES´´

CARRERA: Medicina

LABORATORIO: Microbiología I

DOCENTE: MSc. Lázaro López Fernández

NIVEL: Tercero

Ambato – Ecuador

2019
 INTRODUCCIÓN

La Microbiología es la ciencia encargada del estudio de los microorganismos,

seres vivos pequeños no visibles al ojo humano, también conocidos como
microbios. Se dedica a estudiar los organismos que son solo visibles a través del
microscopio: organismos procariotas y eucariotas simples.

Son considerados microbios todos los seres vivos microscópicos, estos pueden
estar constituidos por una sola célula (unicelulares), así como pequeños
agregados celulares formados por células equivalentes (sin diferenciación
celular); estos pueden ser eucariotas (células con núcleo) tales como hongos y
protistas, procariotas (células sin núcleo definido) como las bacterias.

Sin embargo la microbiología tradicional se ha ocupado especialmente de los

microorganismos patógenos entre bacterias, virus y hongos, dejando a otros
microorganismos en manos de la parasitología y otras categorías de la biología.
Aunque los conocimientos microbiológicos de que se dispone en la actualidad
son muy amplios, todavía es mucho lo que queda por conocer y constantemente
se realizan nuevos descubrimientos en este campo.

El diagnóstico de las infecciones y el estudio de la Microbiologia

́ Médica se basan
fundamentalmente en métodos de laboratorio.

OBJETIVO

El objetivo de estas prácticas consiste en familiarizar al alumno con algunas de

las técnicas más comúnmente utilizadas en los laboratorios de Microbiología y
permitir la observación experimental de los conceptos aprendidos durante las
clases de teoría.
 Laboratorio # 1
NORMAS DE SEGURIDAD

La bioseguridad es un conjunto de normas, medidas y protocolos que son

aplicados en múltiples procedimientos realizados en investigaciones científicas
y trabajos docentes con el objetivo de contribuir a la prevención de riesgos o
infecciones derivadas de la exposición a agentes potencialmente infecciosos o
con cargas significativas de riesgo biológico, químico y/ físicos, como por ejemplo
el manejo de residuos especiales, almacenamiento de reactivos y uso de
barreras protectoras entre otros.

Barreras primarias
Las barreras primarias corresponden al uso de equipos de protección personal
de parte de los usuarios que permitan reducir el riego biológico de la
manipulación de microorganismos. Entre ellas tenemos:
 Mandil/Bata: El uso de mandil es obligatorio dentro del laboratorio para todas
las actividades que se realicen dentro del mismo. Pueden usarse mandiles
desechables o no desechables.
 Guantes: El uso de guantes será obligatorio para todo procedimiento que
involucre el contacto con fluidos corporales, microorganismos, sustancias
contaminantes, reactivos tóxicos y/o materiales infecciosos en todas las
áreas del laboratorio.
 Mascarilla: El uso de mascarilla es obligatorio para el lavado y manipulación
de material contaminado o desechos. Para el pesado y preparación de
medios de cultivo se debe usar la mascarilla obligatoriamente.
 Gafas de seguridad: Es obligatorio el uso de gafas para disolver medios de
cultivo en microondas, como para el lavado de material contaminado o
manejo de desechos infecciosos.
 Cámara de seguridad biológica: es obligatorio usar CSB para procesar
muestras y cepas potencialmente infecciosas; previamente se debe colocar
UV a los materiales y dejar la cámara encendida 5 minutos antes de su uso.
Luego limpiar todo y colocar los desechos en un envase único para este uso,
colocar UV luego de su uso.
Barreras secundarias
Corresponden a los medios físicos del laboratorio que permiten reducir el
riesgo biológico al usuario y el escape al medio ambiente e indican tipos de
material que se debe usar, tipos de instalaciones, flujos de personal, flujos de
muestras, flujos de desechos, etc.
Instalaciones y diseño:
- El laboratorio cuenta con mesones de trabajo lisos, instalaciones de gas
con llave de gas.
- Existe una salida de emergencia en el laboratorio de microbiología.
- Las áreas de trabajo están delimitadas para cada tipo de actividad.
- Se dispone de un área para autoclaves.
- El material de construcción (puertas, mesones, pisos, techos) no es
absorbente ni poroso, es resistente a químicos, calor y permite su fácil
limpieza.
- Los mesones resisten el peso de los equipos.
- Contamos con lavamanos en el laboratorio.
- Los tanques de gas comprimido están ubicados fuera del laboratorio. El
circuito de gas cuenta con múltiples válvulas de seguridad ubicadas en cada
mechero. Y tenemos válvulas de paso para cada mesón de trabajo.
- El laboratorio cuenta con una extensión telefónica.
- Contamos con un botiquín de primeros auxilios.

Prácticas Microbiológicas:
Las Prácticas microbiológicas son procedimientos recomendados, permitidos y
prohibidos que permiten a los usuarios disminuir el riesgo biológico. Entre ellas
cuentan:
 Acceso al laboratorio restringido al personal autorizado (personal de laboratorio,
personal de mantenimiento).
 Las puertas de acceso al laboratorio deben permanecer cerradas.
 Se prohíbe, comer, beber, fumar, aplicar cosméticos, ponerse o removerse los
lentes de contacto en las áreas de laboratorio.
 Se debe recoger el cabello para que no entre en contacto con las manos,
especímenes, contenedores, mesones o equipo.
 Heridas abiertas, lastimaduras y rozaduras deben cubrirse con curitas a prueba de
agua.
 Debe utilizarse guantes en todos los procedimientos que involucren contacto con
la piel o material contaminado. Los guantes deben ser desechables y deben
removerse antes de salir del laboratorio y desecharse en el recipiente de
desechos biológicos (funda roja).
 Todo el personal de laboratorio debe utilizar ropa de protección: mandil, usar
zapatos cerrados y guantes.
 La ropa de protección (mandil de laboratorio, overol) no debe utilizarse en áreas
fuera del laboratorio.
 Se prohíbe pipetear con la boca.
 Adecuado manejo de desechos. Los desechos de cortopunzantes (jeringas,
agujas, bisturís, portaobjetos, cubreobjetos, pipetas Pasteur, tubos capilares)
deben colocarse en recipientes metálicos rotulados como DESECHOS
CORTOPUNZANTES. Otros elementos cortopunzantes como puntas de pipeta,
palillos de madera, asas desechables, jeringas (sin aguja) deben colocarse en
recipientes plásticos rotulados como DESECHOS. Estos recipientes deben
llenarse hasta el 70% de su capacidad y ser autoclavados previo a ser
desechados en las fundas negras.
 Deben lavarse las manos antes de salir del laboratorio y después de cualquier
manipulación de material contaminado.
 Debe limpiarse y descontaminarse las áreas de trabajo con un desinfectante
adecuado antes de realizar cualquier procedimiento experimental y después de
cualquier derrame de material potencialmente contaminado.
 Todo el material contaminado, sólido o líquido, debe ser descontaminado
(autoclavado) antes de ser desechados o reutilizados.
 Desinfectantes efectivos (alcohol 70%) contra los agentes en uso deben estar
disponibles todo el tiempo en las áreas en las que se trabaja con material
peligroso.
 Derrames, accidentes o exposición accidental al material contaminado y pérdida
de medidas de contención deben ser reportadas inmediatamente al docente o
coordinador de laboratorio.
 Debe haber dos basureros en cada área de trabajo, una para material
contaminado el cual debe estar adecuadamente rotulado (funda roja) y uno para
material no contaminado (funda negra).
Clasificación de Grupos de Riesgo de Microorganismos
Clasificación de Grupo National Health Institutes, USA,
de Riesgo 2002
Grupo de riesgo 1 Agentes que no se asocian con
enfermedad en humanos adultos y
sanos.
Grupo de riesgo 2 Agentes asociados con
enfermedad en humanos de baja
virulencia para las cuales existen
medidas terapéuticas y
preventivas disponibles.
Grupo de riesgo 3 Agentes asociados a
enfermedades graves o letales
para los cuales las medidas
preventivas o intervenciones
terapéuticas no están fácilmente
disponibles. (alto riesgo individual
y bajo riesgo a la comunidad)
Grupo de riesgo 4 Agentes que causan
enfermedades serias o fatales en
humanos para los cuales las
medidas terapéuticas y las
medidas de prevención no están
disponibles. (alto riesgo individual, tratamiento ni de prevención.
alto riesgo a la comunidad)
Fuente: CDC, 2009. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. U.S. Department of Health
and Human Services Public Health ServiceCenters for Disease Control and Prevention, National Institutes
of Health. HHS Publication No. (CDC) 21-1112
Organización Mundial de la Salud, 2004
No o bajo riesgo a la comunidad.
Microorganismo que no produce enfermedad
humana o animal.
Riesgo individual moderado, bajo riesgo a la
comunidad. Un patógeno que puede causar
enfermedad en animales y en humanos pero
que presenta una baja probabilidad de peligro
para los trabajadores del laboratorio, ganado, o
el ambiente. Las exposiciones en el laboratorio
pueden causar una infección seria, pero se
encuentran disponibles tratamientos efectivos y
medidas preventivas que disminuyan el riesgo
de propagación.
Alto riesgo individual y bajo riesgo comunitario.
Un patógeno que usualmente causa
enfermedades graves en humanos y en
animales, pero que no se disemina fácilmente
de un individuo infectado a otro. Se dispone de
tratamientos efectivos y medidas de prevención
Alto riesgo individual y comunitario. Un
patógeno que causa enfermedad animal o
humana seria que puede propagarse fácilmente
de un individuo a otro, directa o indirectamente.
No se disponen de medidas efectivas de
Niveles de Seguridad Biológica

Niveles de Seguridad Características

Biológica (Bio-Safety
leves)
BSL-1 Se permite el trabajo con agentes bien conocidos que no causan enfermedad
en humanos adultos inmunocompetentes y representan un riesgo mínimo
para el personal del laboratorio y para el ambiente. No se requieren medidas
especiales de contención. El personal de laboratorio debe estar entrenado
específicamente para los procedimientos conducidos en el laboratorio y deben
ser supervisados por un científico con entrenamiento en microbiología o en
una ciencia relacionada.
BSL-2 Se permite el trabajo con agentes que poseen peligros moderados para el
personal y el medio ambiente. El personal debe tener entrenamiento especial
en el manejo de agentes infecciosos y deben estar supervisados por
científicos competentes entrenados en el manejo de agentes infecciosos. El
acceso es restringido cuando se está trabajando. Todos los procedimientos
que puedan conducir a la producción de aerosoles deben ser realizados en
cabinas de bioseguridad u otro equipo de contención.
BSL-3 Se aplica a laboratorios donde se trabaje con agentes exóticos que pueden
causar enfermedades graves o inclusive letales que se propagan por rutas
aéreas. El personal debe recibir un entrenamiento específico en el manejo de
agentes patógenos y potencialmente letales y debe estar supervisado por
científicos especializados en el tema. Todos los procedimientos que involucren
el manejo de material infeccioso deben ser llevados a cabo en una cabina de
bioseguridad tipo III.

BSL-4 Se permite el trabajo con agentes exóticos que poseen un alto riego de causar
enfermedad letal para los cuales no existen tratamientos adecuados
disponibles. Se requiere capacitación especial en bioseguridad.

Fuente: CDC, 2009. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. U.S. Department of Health
and Human Services Public Health ServiceCenters for Disease Control and Prevention, National Institutes
of Health. HHS Publication No. (CDC) 21-1112
Manejo de Desechos
El manejo de desechos permite reducir el riesgo biológico al ambiente. La
clasificación de los desechos es importante para el adecuado manejo de los
mismos. A continuación se describen las formas de clasificación de los
desechos producidos en el Laboratorio así como su respectivo manejo.
1. Desechos comunes (recipientes con funda negra: papel usado para limpieza,
restos de comida, restos de material descontaminado, residuos de barrido):
son retirados diariamente y llevados a los contenedores de basura común de
la UNIANDES.
2. Desechos infecciosos (recipientes con funda roja: papel usado para limpiar
derrames, guantes usados, material contaminado con fluidos corporales,
jeringuillas sin aguja, tubos de sangre, mandiles desechables): son retirados
diariamente y son llevados a los contenedores de basura infecciosa de la
UNIANDES.
3. Desechos punzantes (botellas: palillos, hisopos, asas desechable,
bajalenguas, tubos de pequeño volumen (hasta 2ml)) : cuando llegan al 70%
de su capacidad son tratados en el autoclave por 20 minutos a 121ºC, para
luego ser desechados en los Desechos comunes
4. Desechos cortantes (recipiente: agujas hipodérmicas, hojas de bisturí, etc.):
cuando llegan al 70% de su capacidad son tapados herméticamente y nunca
más abiertos, y son llevados a los contenedores de basura infecciosa de la
UNIANDES.
5. Desechos de vidrio roto (cartón): son cerrados herméticamente, identificados
como vidrio roto y llevados a los contenedores de basura común de la
UNIANDES.
6. Material contaminado (cajas Petri, tubos, medios de cultivo inoculados, etc.):
se almacenan en bandejas o en áreas especiales alejadas del material
limpio y del material estéril, son retirados luego de su procesamiento y son
tratados en el autoclave por 20 minutos a 121ºC. Algún material puede ser
reutilizable, al cual luego del tratamiento en autoclave se le retira el
contenido, y luego se lo limpia con agua y jabón, se desala vertiéndolo en
una lavacara con agua destilada, y luego se lo deja secar. Algún material
una vez seco puede ser empacado y llevado a esterilizar.
7. Portaobjetos: si han sido sometidas a fijación y coloración Gram o Ziehl
Nielsen son colocados en un recipiente con agua y jabón. Cuando el
recipiente con agua y jabón llega al 70% de su capacidad es tratado en el
autoclave por 20 minutos a 121ºC, luego si está indemne puede ser lavado
con agua y jabón, secado y vuelto a usar. De lo contario si están rotos se los
botará en el cartón de vidrio roto.
Referencias Bibliográficas:

Organización Mundial de la Salud. 2005. Manual de Bioseguridad En El

Laboratorio. Organización Mundial de la Salud.

Richmond, Jonathan Y., and Robert W. McKinney. 2002. “Bioseguridad En

Laboratorios de Microbiología y Biomedicina.”
https://stacks.cdc.gov/view/cdc/50285 (April 28, 2019).