UJI AKTIVITAS KOMBINASI PROPOLIS DAN TEMULAWAK

SEBAGAI ANTIMIKROBA Saccharomyces cerevisiae DAN UJI

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN METODE DPPH

HASIL PENELITIAN

Oleh:
CHAIRUL IMAM MARDIANSYAH
O66114140

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS PAKUAN
BOGOR
2019
 HALAMAN PENGESAHAN

Judul Tugas Akhir : Uji Aktivitas Kombinasi Propolis dan Temulawak Sebagai
Antimikroba Saccharomyces cerevisiae dan Antioksidan
dengan Metode DPPH
Nama : Chairul Imam Mardiansyah

NPM : 066114140

Program Studi : Farmasi

Skripsi ini telah disetujui dan disahkan:

Bogor, 21 Juni 2019

Pembimbing II Pembimbing I

Dr. Ir. Akhmad Endang Zainal Hasan, M.Si. Sri Wardatun, M. Farm., Apt

Mengetahui,
Ketua Program Studi Farmasi

Sri Wardatun, M. Farm., Apt.

ii
 KATA PENGANTAR

Segala puji bagi Allah SWT yang telah memberikan nikmat iman dan islam,
nikmat ilmu dan amal, serta nikmat umur dan sehat kepada penulis, sehingga karena
Nya penulis dapat menyelesaikan penulisan tugas akhir dengan judul “UJI
AKTIVITAS KOMBINASI PROPOLIS DAN TEMULAWAK SEBAGAI
ANTIMIKROBA Saccharomyces cerevisiae DAN ANTIOKSIDAN DENGAN
METODE DPPH”. Tugas akhir ini diajukan sebagai salahsatu syarat untuk
mendapatkan gelar Sarjana Farmasi dari Program Studi Farmasi, Fakultas
Matematikan dan Ilmu pengetahuan Alam, Universitas Pakuan.

Selama melakukan penulisan tugas akhir ini, penulis banyak memperoleh

bimbingan, bantuan, dukungan dari berbagai pihak. Sehubungan dengan hal
tersebut, penulis mengucapkan terimakasih dan penghargaan yang setinggi-
tingginya kepada:

1. Sri Wardatun, M.Farm., Apt. selaku pembimbing I dan Dr. Ir. Akhmad
Endang Zainal Hasan, M.Si. selaku pembimbing II atas bimbingan yang
diberikan.
2. Dekan Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Pakuan-Bogor dan Ketua Program Studi Farmasi.
3. Ayah, Ibu, kakak, adik dan seluruh keluarga yang tercinta terimakasih atas
dukungannya sehingga bisa menjadi kekuatan dan semangat bagi penulis.
4. Teman – teman seperjuangan Farmasi 2014 dan sahabat tercinta terimakasih
telah memberi dukungan dan semangat untuk meraih gelar sarjana.
Penulis menyadari bahwa penulisan hasil penelitian ini masih memiliki banyak
kekurangan, oleh karena itu saran dan kritik yang bersifat membangun demi
kesempurnaan tulisan ini sangat penulis harapkan.
Bogor, Juni 2019

Penulis

iii
 RINGKASAN

CHAIRUL IMAM MARDIANSYAH. 066114140. Uji Aktivitas Kombinasi

Propolis dan Temulawak sebagai Antimikroba Saccharomyces Cerevisiae dan
Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH. Di Bawah Bimbingan: Sri
Wardatun dan Akhmad Endang Zainal Hasan.

Propolis merupakan substansi resin (sejenis getah tanaman) yang berasal

dari kulit kayu dan pucuk-pucuk tanaman yang dikumpulkan oleh lebah dan
kemudian dicampur dengan lilin dan air liur lebah. Temulawak (Curcuma
xanthorhiza Roxb) adalah salah satu tumbuhan obat keluarga Zingiberaceae yang
banyak tumbuh dan digunakan sebagai bahan baku obat tradisional di Indonesia.
Uji antioksidan metode DPPH dan uji induksi apoptosis terhadap sel
Saccharomyces cerevisiae dilakukan terhadap kombinasi propolis dan temulawak.
Rancangan percobaan menggunakan metode Response Surface (RSM) untuk
menentukan batasan dan taraf dari dua peubah bebas (propolis dan temulawak).

Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas antioksidan pada

kombinasi propolis dan temulawak terbagi menjadi 13 kombinasi, dan untuk
menentukan aktivitas penghambatan propolis dan temulawak terhadap sel
saccharomyces cereviciae. Persentase IC50 digunakan sebagai parameter dalam
menetukan aktivitas antioksidan. Jumlah persentase sel petite digunakan sebagai
parameter dalam kemampuan induksi apoptosis sel saccharomyces cereviciae.

Hasil uji aktivitas antioksidan maksimum terdapat pada sampel no 4 dengan

kombinasi propolis 95,340 ppm dan temulawak 107,010 ppm dengan nilai IC50
sebesar 48.572 μg/ml dan aktivitas antioksidan minimum terdapat pada sampel no
1 dengan kombinasi propolis 55,340 ppm dan temulawak 67,010 ppm dengan nilai
IC50 70,258 μg/mL. Hasil uji induksi apoptosis maksimum terdapat pada sampel no
8 dengan kombinasi propolis 6,015 ppm dan temulawak 9,068 ppm dengan
persentase sel petit sebesar 91,870 % dan uji induksi apoptosis minimum terdapat
pada sampel no 1 dengan kombinasi propolis 4,515 ppm dan temulawak 5,447 ppm
dengan persentase sel petit 64,8579 %.

iv
Kata Kunci: Propolis, Temulawak, Antioksidan, Induksi apoptosis, Response
Surface Methodology.

v
 SUMMARY

CHAIRUL IMAM MARDIANSYAH. 066114140. Test of Combination of

Propolis and Temulawak as Antimicrobial Saccharomyces Cerevisiae and
Antioxidant Activity Test with DPPH Method. Under Guidance: Sri
Wardatun and Akhmad Endang Zainal Hasan.

Propolis is a resin substance (a type of plant sap) that comes from bark and
shoots of plants collected by bees and then mixed with wax and bee saliva. Curcuma
xanthorhiza Roxb is one of the medicinal plants of the Zingiberaceae family that
grows a lot and is used as a raw material for traditional medicines in Indonesia.
Antioxidant test of DPPH method and apoptosis induction test on Saccharomyces
cerevisiae cells was carried out on a combination of propolis and ginger. The
experimental design uses the Response Surface (RSM) method to determine the
boundaries and levels of two independent variables (propolis and ginger).

This study aims to determine the antioxidant activity in the combination of

propolis and ginger, and to determine the inhibitory activity of propolis and ginger
against saccharomyces cereviciae cells. The percentage of IC50 is used as a
parameter in determining antioxidant activity. The percentage percentage of petite
cells was used as a parameter in the ability of induction of apoptosis of
saccharomyces cereviciae cells.

The maximum antioxidant activity test results found in sample No. 4 with
IC50 values of 48.57204μg / ml and minimum antioxidant activity found in sample
number 1 with IC50 value of 70.25756μg / mL. The maximum apoptosis induction
test results were found in sample number 8 with a percentage of petite cells of
91.8699% and a minimum apoptosis induction test found in sample number 1 with
a percentage of petitic cells 64.8579%.

Keywords: Propolis, Curcuma, Antioxidants, Induction of Apoptosis,

Response Surface Methodology.

vi
 DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................. ii

KATA PENGANTAR ........................................................................................... iii

RINGKASAN ........................................................................................................ iv

SUMMARY ........................................................................................................... vi

DAFTAR ISI ......................................................................................................... vii

DAFTAR TABEL ................................................................................................... x

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. xi

DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xii

BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 1

1.1. Latar Belakang................................................................................. 1

1.2. Tujuan Penelitian ............................................................................. 3

1.3. Hipotesis .......................................................................................... 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................ 4

2.1. Propolis ............................................................................................ 4

2.2. Temulawak ...................................................................................... 4

2.3. Ekstraksi .......................................................................................... 5

2.4. Antioksidan...................................................................................... 5

2.5. Saccharomyces cereviciae ............................................................... 6

BAB III METODE PENELITIAN.......................................................................... 7

3.1. Tempat dan Waktu .......................................................................... 7

3.2. Bahan dan Alat ................................................................................ 7

vii
 3.2.1. Bahan ................................................................................. 7

3.2.2. Alat .................................................................................... 7

3.3. Metode Penelitian ............................................................................ 7

3.3.1. Pengumpulan Bahan .......................................................... 7

3.3.2. Determinasi ....................................................................... 7

3.3.3. Pembuatan Serbuk Simplisia ............................................. 8

3.3.4. Karakterisasi Serbuk Simplisia ........................................ 8

3.3.5. Skrining Fitokimia............................................................. 9

3.3.6. Ekstraksi Temulawak ...................................................... 10

3.3.6. Uji Aktivitas Antioksidan................................................ 11

3.3.7. Pengujian Kemampuan Apoptosis Terhadap Sel

Saccharomyces cerevisiae ............................................... 14

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................. 17

4.1. Karakterisasi Serbuk Simplisia...................................................... 17

4.1.1. Kadar Air ......................................................................... 17

4.1.2. Kadar Abu ....................................................................... 17

4.2. Hasil Uji Fitokimia ........................................................................ 18

4.3. Ekstraksi Temulawak .................................................................... 19

4.4. Hasil Kemampuan Antioksidan Metode DPPH ............................ 19

4.4.1. Hasil Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH... 19

4.4.2. Hasil Peredaman Pembanding (Vitamin C) .................... 20

4.4.3. Hasil Peredaman Kombinasi Propolis Temulawak ......... 20

4.4.4. Persamaan RSM Aktivitas Antioksidan .......................... 22

4.5. Hasil Kemampuan Apoptosis Terhadap Sel Saccharomyces

cerevisiae .............................................................................................. 23

viii
 4.5.1. Persentase Jumlah Sel Petit ............................................. 23

4.5.2. Persamaan RSM Induksi Apoptosis ................................ 25

BAB V KESIMPULAN ........................................................................................ 27

5.1. Kesimpulan .................................................................................... 27

5.2. Saran .............................................................................................. 27

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 28

LAMPIRAN .......................................................................................................... 32

ix
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

Tabel 1. Batasan dan Taraf dari Dua Peubah Bebas ..................... 12

Tabel 2. Batasan dan taraf dari dua peubah ................................... 15

Tabel 3. Hasil Uji Fitokimia simplisia serbuk temulawak, ekstrak

temulawak, dan ekstrak propolis ..................................... 18

Tabel 4. Hasil Pengujian Kemampuan Antioksidan...................... 21

Tabel 5. Hasil Pengujian Induksi Apoptosis ................................. 24

x
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

Gambar 1. Kurva Nilai % Inhibisi Vitamin C....................................................... 20

Gambar 2. Diagram Perbandingan Nilai IC50 ....................................................... 22
Gambar 3. Contour Plot Response Optimasi Nilai IC50 ....................................... 23
Gambar 4. Diagram Perbandingan Persentase Jumlah Sel Petit ........................... 25
Gambar 5. Contour Plot Response Optimasi Nilai IC50 ....................................... 26

xi
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

Lampiran 1. Bagan Alur Penelitian ....................................................................... 33

Lampiran 2. Hasil perhitungan % Kadar Air Simplisia Temulawak .................... 34

Lampiran 3. Hasil Perhitungan Kadar Abu Simplisia Temulawak ....................... 34

Lampiran 4. Perhitungan Rendemen Simplisia Temulawak ................................. 34

Lampiran 5. Perhitungan Rendemen Ekstrak Temulawak .................................... 35

Lampiran 6. Peredaman Aktivitas Antioksidan .................................................... 35

Lampiran 7. Pengujian Kemampuan Apoptosis.................................................... 45

xii
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Propolis merupakan substansi resin (sejenis getah tanaman) yang berasal
dari kulit kayu dan pucuk-pucuk tanaman yang dikumpulkan oleh lebah dan
kemudian dicampur dengan lilin dan air liur lebah (Bankova dan Popova, 2007).
Propolis mempunyai aktivitas antibakteri, antikapang, antivirus dan aktivitas
biologis lain seperti antiinflamasi, anestesi lokal, hepatoprotektor, antitumor, dan
imunostimulan (Bankova, 2007; Fearnley, 2005; Lotfy, 2006). Bahan aktif dalam
propolis, seperti senyawa flavonoid dan capeic acid phenethyl ester, telah banyak
dimanfaatkan untuk kesehatan terutama sebagai bahan antikanker. Saccharomyces
cerevisiae merupakan sel eukariot yang dapat dijadikan model pengujian aktivitas
antikanker suatu bahan (de Castro et al., 2011). Pola kerja yang ditunjukkan hasil
dari perlakuan bahan terhadap S. cerevisiae merupakan pola yang setara dengan
daya kerja bahan sebagai antikanker (Lotti et al., 2011).
Propolis merupakan salahsatu bahan yang mengandung antioksidan alami
dari senyawa metabolit sekunder berupa fenol dan flavonoid. Menurut Robinson
(1995) dikutip Jaya et al., (2006) menjelaskan bahwa kemampuan propolis sebagai
antioksidan dapat menangkap radikal hidroksi dan superoksida kemudian
menetralkan radikal bebas, sehingga melindungi sel dan mempertahankan keutuhan
struktur sel dan jaringan serta dapat melindungi membran lipid terhadap reaksi yang
merusak.

Temulawak (Curcuma xanthorhiza Roxb) adalah salah satu tumbuhan obat

keluarga Zingiberaceae yang banyak tumbuh dan digunakan sebagai bahan baku
obat tradisional di Indonesia (Sidik dkk. 1992; Prana 2008). Menurut penelitian,
temulawak memiliki efek antimikrobial terhadap beberapa mikroorganisme,
khususnya terhadap bakteri Bacillus subtilis, Escherichia coli, dan Staphylococcus
aureus. Temulawak juga dapat memberikan efek pada jamur sehingga dapat
berguna sebagai antifungal, contoh jamur yang dapat terpengaruhi temulawak

1
 2

adalah Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus niger, dan Penicillium notatum (Un

SH et al., 2014).
Secara empiris rimpang temulawak diketahui memiliki banyak manfaat
salah satunya potensi sebagai antioksidan (WHO, 1999). Komponen aktif yang
bertanggung jawab sebagai antioksidan dalam rimpang temulawak adalah
kurkumin, demetoksikurkumin dan bisdemetoksikurkumin (Masuda, 1992).
Maserasi merupakan teknik yang umum dilakukan untuk mengekstrak
bahan aktif. Pelarut yang umum digunakan dalam mengekstrak propolis adalah
etanol yang dicampur dengan air (etanol 70%). Etanol merupakan senyawa yang
memiliki sifat semipolar sehingga komponen aktif dengan kepolaran yang berbeda
yang terkandung di dalam propolis dapat terekstrak. Harborne (1987) menyatakan
bahwa etanol 70% dapat mengekstraksi flavonoid yang merupakan senyawa aktif
terbanyak dan terpenting di dalam propolis.
Maserasi merupakan teknik yang umum dilakukan untuk mengekstrak
senyawa metabolit sekunder. Ekstraksi mengunakan pelarut etanol 70% dan air
dengan metode maserasi dan perkolasi dengan perbandingan 1 : 10 selama 2 jam
dalam suhu ±60ºC memiliki aktivitas antioksidan sebesar 87,01 ppm tergolong aktif
sehingga berpotensi sebagai antioksidan alami yang baik (Ali et al, 2013). Etanol
merupakan senyawa yang memiliki sifat semipolar sehingga komponen aktif
dengan kepolaran yang berbeda yang terkandung di dalam temulawak dapat
terekstrak.
Teknik ekstraksi dengan maserasi dapat dimodifikasi dengan penambahan
komponen panas untuk meningkatkan jumlah terekstrak. Menurut Trusheva et al.
(2007) teknik ekstraksi menggunakan pemanasan gelombang mikro merupakan
cara yang sangat cepat dalam menghasilkan asam fenolat dan flavonoid. Teknik
ekstraksi dengan pemanasan gelombang mikro merupakan cara terbaik
dibandingkan dengan teknik Soxhlet maupun pemanasan gelombang suara (Dean,
1998). Demikian pula dengan pendapat Zhang et al. (2011) bahwa ekstraksi
menggunakan pemanasan gelombang mikro merupakan cara yang dapat
mengekstrak metabolit sekunder seperti flavonoid.
 3

Berdasarkan hal-hal tersebut di atas, maka penelitian kali ini akan menguji
pengaruh kombinasi propolis dan temulawak sebagai penginduksi apoptosis sel
Saccharomyces cerevisiae dan sebagai antioksidan. Metode ekstraksi yang
digunakan untuk propolis yaitu maserasi dengan kombinasi gelombang mikro,
sedangkan pelarut yang digunakan adalah etanol 70%. Metode ekstraksi yang
digunakan untuk temulawak yaitu maserasi, sedangkan pelarut yang digunakan
adalah etanol 70%. Kombinasi komposisi propolis dan temulawak dirancang
dengan rancangan percobaan Response Surface Methodology (RSM) untuk
memperoleh pencapaian kombinasi terbaik.

1.2. Tujuan Penelitian

1. Menentukan aktivitas antioksidan dengan metode DPPH pada kombinasi
propolis dan temulawak.
2. Menentukan aktivitas induksi apoptosis sel Saccharomyces cereviciae pada
kombinasi propolis dan temulawak.

1.3. Hipotesis
Kombinasi propolis dan temulawak mempunyai efek yang berhubungan
dibandingkan dengan tidak kombinasi terhadap aktivitas antioksidan dan aktivitas
induksi apoptosis sel Saccharomyces cereviciae.
 4

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Propolis
Propolis merupakan nama generik dari resin lebah. Kata propolis berasal
dari bahasa Yunani, yaitu “pro” artinya sebelum atau pertahanan dan “polis” artinya
kota. Propolis adalah pertahanan kota atau memiliki arti sebagai sistem pertahanan
pada sarang lebah. Karena sifatnya yang lengket seperti lem, propolis disebut
sebagai beeglue (Anonim, 2006).

Gojmerac (1983) menyatakan bahwa propolis mengandung bahan

campuran kompleks malam, resin, balsam, minyak, dan sedikit polen.
Komposisinya bervariasi tergantung dari tumbuhan asal. Propolis juga
mengandung zat aromatik, zat wangi, dan berbagai mineral. Menurut Akhmad et
al. (2013) bahwa propolis memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 75.34 µg
ml-1. Akhmad (2013) menyatakan bahwa propolis memiliki aktivitas induksi
apoptosis S. cereviciae dengan nilai IC50 6.015 µg ml-1.

2.2. Temulawak
Curcuma xanthoriza Roxb termasuk ke dalam keluarga Zingiberaceae. Curcuma
xanthorhiza Roxb merupakan tanaman terna berbatang semu dengan tinggi hingga
lebih dari 1 m tetapi kurang dari 2 m, berwarna hijau atau coklat gelap (Rahmat,
1995).

Berdasarkan Analisis secara kualitatif dengan pengujian skrining fitokimia

diperoleh bahwa didalam rimpang temulawak terdapat alkaloid, flavonoid, fenolik,
saponin, triterpenoid dan glikosida. Menurut Ali et al. (2013) menyatakan bahwa
temulawak memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 mencapai 87.01 ppm.
Sedangkan penentuan nilai IC50 temulawak untuk aktivitas antisaccharomyces
yaitu dengan metode perhitungan matematika perbandingan lurus dengan hasilnya
yaitu 6.947.
 5

2.3. Ekstraksi
Maserasi dilakukan dengan melakukan perendaman bagian tanaman secara
utuh atau yang sudah digiling kasar dengan pelarut dalam bejana tertutup pada suhu
kamar selama sekurang-kurangnya 3 hari dengan pengadukan berkali-kali sampai
semua bagian tanaman yang dapat larut melarut dalam cairan pelarut. Campuran ini
kemudian disaring dan ampas yang diperoleh dipress untuk memperoleh bagian
cairnya saja. Cairan yang diperoleh kemudian dijernihkan dengan penyaringan atau
dekantasi setelah dibiarkan selama waktu tertentu.

Keuntungan proses maserasi diantaranya adalah bahwa bagian tanaman

yang akan diekstraksi tidak harus dalam wujud serbuk yang halus, tidak diperlukan
keahlian khusus dan lebih sedikit kehilangan alkohol sebagai pelarut seperti pada
proses perkolasi atau sokhletasi. Sedangkan kerugian proses maserasi adalah
perlunya dilakukan pengadukan, pengepresan dan penyaringan, terjadinya residu
pelarut di dalam ampas, serta mutu produk akhir yang tidak konsisten (Lully, 2016).

2.4. Antioksidan
Secara kimia senyawa antioksidan adalah senyawa pemberi elektron
(electron donor). Secara biologis, pengertian antioksidan adalah senyawa yang
dapat menangkal atau meredam dampak negatif oksidan. Antioksidan bekerja
dengan cara mendonorkan satu elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan
sehingga aktivitas senyawa oksidan tersebut dapat di hambat (Winarti, 2010).
Metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhidrazyl) merupakan salah satu uji
untuk menentukan aktivitas antioksidan penangkap radikal. DPPH memberikan
serapan kuat pada panjang gelombang 517 nm dengan warna violet gelap.
Penangkap radikal bebas menyebabkan elektron menjadi berpasangan yang
kemudian menyebabkan penghilangan warna yang sebanding dengan jumlah
elektron yang diambil (Sunarni, 2005).
Radikal bebas yang umumnya digunakan sebagai model dalam penelitian
antioksidan atau peredam radikal bebas adalah 1,1-difenil- 2-pikrilhidrazil (DPPH)
(Sawai et al., 1998; Senba et al., 1999; Yokozawa et al., 1998 cit Windono et al.,
2001 cit Pratimasari, 2009).
 6

Klasifikasi aktivitas antioksidan ini dinyatakan oleh Chow et al. (2003)

bahwa nilai IC50 menunjukkan kekuatan antivitas antioksidan, apabila nilai IC50
suatu ekstrak di bawah 50 μg ml-1 berarti kemampuannya sangat aktif sebagai
antioksidan, nilai 51-100 μg ml-1 aktif sebagai antioksidan, nilai 100-150 μg ml-1
kurang aktif dan diatas 150 μg ml-1 tidak aktif sebagai antioksidan.

2.5. Saccharomyces cereviciae

Saccharomyces berasal dari bahasa Latin Yunani yang berarti “gula jamur”
sedangkan cerevisiae berasal dari bahasa Latin yang berarti bir (Sukoco, 2010).
Saccharomyces cerevisiae merupakan jenis khamir yang mempunyai sel tunggal.
Sel khamir terdiri dari kapsul, dinding sel, membrane sitoplasma, nucleus, vakuola,
globula lipid dan mitokondria. Bentuk dari khamir ini oval (bulat telur) dengan
ukuran sekitar 1-5μm atau 20-25μm dengan lebar sekitar 1-10μm. Koloninya
berbentuk rata, lembab, mengkilap dan halus (Fardiaz, 1992). Saccharomyces
cerevisiae termasuk kedalam famili Saccharomycetaceae.
Saccharomyces cerevisiae termasuk dalam golongan Ascomycomycetes
karena dapat membentuk askospora dalam askus. Spesies ini dapat bereproduksi
secara seksual dengan membentuk spora seksual berupa konidium atau juga
bereproduksi secara aseksual dengan membentuk spora aseksual berupa askospora
sebanyak 4-8 buah dalam askus serta melakukan pertunasan. Pertunasan pada
spesies ini dapat berupa pertunasan multilateral, yaitu tunas dapat tumbuh disekitar
ujung sel (Fardiaz, 1992).
Menurut Fardiaz (1992), sel Saccharomyces cerevisiae dapat tumbuh pada
medium yang mengandung air gula dengan konsentrasi tinggi. Saccharomyces
cerevisiae merupakan golongan khamir yang mampu memanfaatkan senyawa gula
yang dihasilakan oleh mikroorganisme selulotik untuk pertumbuhannya. Spesies ini
dapat memfermentasikan berbagai karbohidrat dan menghasilkan enzim invertase
yang bisa memecah sukrosa menjadi glukosa dan frukosa serta dapat mengubah
glukosa menjadi alcohol dan karbondioksida sehingga banyak digunakan dalam
industri pembuatan bir, roti ataupun anggur.
 7

BAB III
METODE PENELITIAN

3.1. Tempat dan Waktu

Tempat penelitian dilaksanakan di Laboratorium Farmasi, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pakuan, Bogor. Waktu
penelitian dilaksanakan selama ±2 bulan.

3.2. Bahan dan Alat

3.2.1. Bahan

Bahan utama yang digunakan adalah raw propolis yang diambil dari sarang
lebah Trigona spp dari Pandeglang dan temulawak. Bahan-bahan kimia yang
digunakan adalah Etanol, 1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH), aquadest,
Saccharomyces cerevisiae merk Fermipan, media padat agar (yeast extract potato
dextrose, YEPD), NaCl fisiologis.

3.2.2. Alat

Alat-alat yang digunakan ialah rotavapor, spektrofotometer, mikroskop, cawan

petri dan beberapa alat gelas lainnya.

3.3. Metode Penelitian

3.3.1. Pengumpulan Bahan

Bahan yang digunakan adalah propolis yang diperoleh dari daerah

Pandeglang dan rimpang Temulawak yang diperoleh dari daerah Nagrak kabupaten
Sukabumi.

3.3.2. Determinasi
Determinasi adalah proses yang dilakukan untuk memastikan bahan baku
yang digunakan adalah bahan baku yang benar dan seragam, determinasi bagian
tanaman dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indoneia, Jl. Ir. Haji Djuanda
No. 13, Bogor Tengah, Kota Bogor, Jawa Barat 16122.
 8

3.3.3. Pembuatan Serbuk Simplisia

Rimpang Temulawak dibersihkan dengan menggunakan air yang mengalir

untuk memisahkan pengotor atau cemaran anorganik yang menempel pada kulit
luar, kemudian rimpang Temulawak dirajang menjadi rajangan yang ukuran nya
lebih kecil untuk memudahkan proses pengeringan menggunakan oven dengan
suhu 40°C yang dilapisi dengan kertas sehingga rajangan tidak menempel pada
permukaan loyang oven. Rajangan yang telah kering ditimbang kemudian diblender
hingga menjadi serbuk. Serbuk yang diperoleh diayak menggunakan ayakan mesh
no. 40, kemudian ditimbang kembali serbuk simplisia yang didapatkan. Rendemen
dihitung dengan rumus:

𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝐴𝑘ℎ𝑖𝑟
Rendemen = x 100%
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝐴𝑤𝑎𝑙

3.3.4. Karakterisasi Serbuk Simplisia

3.3.4.1. Kadar Air

Penetapan kadar air yang akan dilakukan menggunakan metode gravimetri

yaitu, ditimbang secara seksama sebanyak lebih kurang 10 g serbuk simplisia
kemudian dimasukan dimasukan kedalam wadah yang telah ditara. Selanjutnya,
dikeringkan pada suhu 105°C selama 5 jam, dan ditimbang. Dilanjutkan
pengeringan dan timbang pada jarak 1 jam sampai perbedaan kedua penimbangan
berturut – turut tidak lebih dari 0,25 % (DepKes RI, 1995).

𝑤1−𝑤2
Kadar air = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 x 100%

Keterangan: w1 = berat cawan (g) + isi sebelum dipanaskan (g)

w2 = berat cawan (g) + isi setelah dipanaskan (g)

3.3.4.2. Kadar Abu

Penetapan kadar abu dilakukan dengan cara menimbang secara seksama 2g

– 3g serbuk simplisia dimasukkan ke dalam krus yang sebelumnya telah dipijar dan
 9

ditara, diratakan. sampel dipijarkan dengan suhu 600°C perlahan – lahan hingga
arang habis, didinginkan dan ditimbang hingga bobot konstan ±0,25% jika dengan
cara ini arang tidak dapat dihilangkan, ditambahkan air panas, disaring dengan
kertas saring. Pijarkan sisa kertas dan kertas saring pada kurs yang sama. Filtrat
dimasukkan ke dalam kurs, diuapkan, dipijarkan, hingga bobot tetap, ditimbang.
Dihitung kadar abu terhadap bahan yang telah dikeringkan diudara (DepKes RI,
2000).
𝐶−𝐵
Kadar abu = x 100 %
𝐴

Keterangan: A = Berat awal simplisia

B = Berat kurs kosong

C = Berat kurs (g) + simplisia setelah tanur

3.3.5. Skrining Fitokimia

Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa aktif

yang terdapat pada biji alpukat secara kualitatfit. Penapisan fitokimia dilakukan
dengan menguji adanya senyawa golongan alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin
dengan prosedur sebagai berikut (Harborne, 1987).

3.3.5.1. Uji Flavonoid

Sebanyak 50 mg sampel dilarutkan dengan 3 mL metanol (larutan uji)

kemudian diuapkan hingga kering sampel yang telah diuapkan kemuadian
dimasukan kedalam tabung reaksi ditambahkan 2-3 tetes etanol, serbuk Mg atau Zn
dan beberapa tetes asam klorida 5M. Warna merah hingga merah lembayung
menujukan adanya flavonoid (Hanani, 2015).

3.3.5.2. Uji Tanin

Sebanyak 50 mg sampel dipanaskan dengan menggunakan etanol 96% (30

mL) lalu didinginkan selama 15 menit, kemudian disaring. Filtrat yang diperoleh
diuapkan kemudian dimasukan kedalam 3 tabung reaksi dan dilakukan pengujian
sebagai berikut:
 10

a. Larutan ditambahkan 2 mL gelatin 10% kedalam tabung reaksi, jika sampel

mengandung tanin akan terbentuk endapan putih.
b. Larutan ditambahkan NaCl- gelatin (larutan 1% gelatin dalam 10 mL NaCl
dengan perbandingan 1:1) kedalam tabung reaksi. Adanya tanin ditandai
dengan timbulnya endapan berwarna putih.
c. Larutan ditambahkan 2 mL FeCl3 3% kedalam tabung reaksi, jika sampel
mengandung tanin akan terjadi perubahan warna menjadi hijau biru hingga
kehitaman (Hanani, 2015).

3.3.5.3. Uji Alkaloid

Sebanyak 50 mg sampel ditambahkan denagan 1 mL asam klorida 2 N dan

9 mL air dipanaskan selama 15 menit, kemudian disaring. Filtrat ditambahkan
larutan pereaksi sebagai berikut:
a. Filtrat pada kaca arloji ditambahkan 2 tetes LP Dragendorff. Hasil positif
jika terjadi endapan jingga coklat.
b. Fitrat pada kaca arloji ditambahkan 2 tetes LP Mayer. Hasil positif jika
terbentuk endapan putih atau kuning yang larut dalam metanol.
c. Filtrat pada kaca arloji ditambahkkan 2 tetes LP Bouchardat. Hasil positif
jika terbentuk endapan coklat sampai hitam.

3.3.5.4. Uji Saponin

Sebanyak 50 mg sampel dilarutkan dengan akuades 10 mL dan dipanaskan

diatas penanggas air selama 10 menit. Setelah dingin larutan dikocok kuat- kuat
sehingga akan terbentuk buih yang stabil (selama tidak kurang dari 10 menit)
(Hanani, 2015).

3.3.6. Ekstraksi Temulawak

Serbuk temulawak yang telah kering sebanyak 31,25 gram, diekstraksi

mengunakan pelarut etanol 70% dan air dengan metode maserasi dengan
perbandingan 1 : 10 selama 2 jam dalam suhu ±60ºC di dalam labu ekstraksi yang
dibantu dengan pengadukan. Setelah ekstraksi selesai, ekstrak disaring
 11

menggunakan kertas saring. Residu diekstrak ulang dengan perlakuan yang sama
dengan sebelumnya. Langkah selanjutnya dilakukan evaporasi dalam suhu ±60ºC,
pengeringan dengan pemanasan ±60ºC pada penangas air. Ekstrak yang diperoleh
kemudian ditimbang dan dihitung rendemennya. Rendemen ditentukan dengan
rumus sebagai berikut:
Bobot serbuk
Rendemen ekstrak (%) = (Bobot awal simplisia) x 100

3.3.6. Uji Aktivitas Antioksidan

Pengujian kemampuan antioksidan dilakukan dengan mengacu pada metode

Bouftira (2007) menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada suhu kamar (25ºC)
pada panjang gelombang 516 nm dan larutan DPPH (2,2-diphenyl-1-
picrylhidrazyl) digunakan sebagai radikal bebas serta vitamin C sebagai
pembanding.

3.3.6.1. Penyiapan Larutan DPPH

Kristal DPPH ditimbang sebanyak 8 mg dan dilarutkan dengan 100 mL

etanol di dalam labu ukur gelap sehingga didapatkan larutan DPPH dengan
konsentrasi 0,08 mg/mL yang digunakan pada pengujian. Larutan disimpan pada
tempat tertutup rapat dan terlindung dari cahaya.

3.3.6.2. Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH

Dipipet sebanyak 1 mL larutan DPPH 0,08 mg/mL dan ditambahkan dengan

1 mL etanol. Setelah dibiarkan selama 30 menit ditempat gelap serapan larutan
diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 516 nm untuk
mendapatkan panjang gelombang maksimum.

3.3.6.3. Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Sampel

Konsentrasi ekstrak sampel ditentukan dengan bantuan rancangan

percobaan Response Surface Methodology (RSM) untuk menentukan batasan dan
taraf dari dua peubah bebas (propolis dan temulawak). Batasan dan taraf dua peubah
yang digunakan pada penelitian ini disajikan pada Tabel di bawah ini:
 12

Tabel 1. Batasan dan Taraf dari Dua Peubah Bebas

Batas dan Taraf
Peubah
-α -1 0 +1 +α
Propolis
47.056 55.34 75.34 95.34 103.624
(ppm)
Temulawak
58.726 67.01 87.01 107.01 115.294
(ppm)

Analisis statistika dilakukan dengan menggunakan bantuan Minitab 17

(free trial). Model matematika yang digunakan sebagai berikut:
k k
Y =  0 +   i X i +   ii X i2 +   ij X i X j +
i =1 i =1 i j

Keterangan: Y = respon (aktivitas antioksidan)

𝛽0 = tetapan, 𝛽i, 𝛽ii, 𝛽ij : koefisien dari peubah bebas (X)
X = peubah bebas dengan tanpa sandi (propolis = X1 taraf 55.340
ppm, 75.340 ppm dan 95.340 ppm; temulawak = X2 taraf
67.010 ppm, 87.101 ppm dan 107.010 ppm)
ε = galat.
Penentuan kondisi terbaik dari penelitian ini dilakukan dengan
menggunakan metode Response Surface dengan dua peubah. Parameter yang
digunakan untuk menentukan kondisi terbaik adalah persentase IC50 yang
merupakan respon kemampuan propolis dan temulawak dalam penghambatan
oksidasi radikal bebas DPPH dari setiap tingkat konsentrasi percobaan.
Ekstrak kering propolis dan temulawak ditimbang masing-masing 100 mg,
kemudian dilarutkan dengan etanol sampai volumenya 100 mL dalam labu yang
berbeda. Kemudian ekstrak propolis dan temulawak masing-masing diencerkan
sesuai hasil rancangan percobaan Response Surface Methodology (RSM),
kemudian ditambah etanol sampai volumenya 100 ml dan dikombinasikan.
Kemudian kombinasi propolis temulawak diencerkan untuk mendapatkan
konsentrasi 10, 25, 50, 75 dan 100 ppm dan masing-masing konsentrasi dibuat 3
pengulangan.
 13

3.3.6.4. Pembuatan Konsentrasi Pembanding

Vitamin C baku ditimbang sebanyak 10 mg dan dilarutkan dengan etanol

sampai volumenya 10 mL menggunakan labu ukur, sehingga didapat larutan induk
vitamin C dengan konsentrasi 1000 ppm, kemudian diambil 1 mL larutan induk
vitamin C dan dilarutkan dengan etanol sampai volumenya 10 mL menggunakan
labu ukur coklat, sehingga didapat konsentrasi vitamin C 100 ppm. Setelah itu, dari
konsentrasi vitamin C 100 ppm dibuat seri konsentrasi larutan vitamin C dengan
konsentrasi berturut-turut 5, 10, 15, 20 dan 25 ppm dan masing-masing konsentrasi
dibuat 3 pengulangan.

3.3.6.5. Penentuan Persen Peredaman Sampel

Masing-masing konsentrasi kombinasi ekstrak dipipet sebanyak 1 mL dan

dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 1 mL larutan DPPH
0,08 mg/mL, dihomogenkan dan diinkubasi selama 30 menit ditempat gelap.
Selanjutnya diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang maksimum.

3.3.6.6. Penentuan Persen Peredaman Pembanding

Masing-masing konsentrasi vitamin C (konsentrasi 5, 10, 15, 20, 25 ppm)

dipipet sebanyak 1 mL dan dimasukan ke dalam tabung reaksi. Kemudian
ditambahkan 1 mL larutan DPPH 0,08 mg/mL, dihomogenkan dan diinkubasi
selama 30 menit ditempat gelap. Selanjutnya diukur absorbansinya dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum.

3.3.6.7. Pembuatan Kurva dan Persamaan

Setelah diketahui persentase penangkapan radikal bebas DPPH, dibuat

kurva dan persamaan antara konsentrasi kombinasi propolis temulawak (sumbu X)
dan nilai persentase penangkapan radikal bebas DPPH (sumbu Y) diperoleh
persamaan Y = aX + b. Untuk menghitung konsentrasi yang menghasilkan
penangkapan radikal bebas sebanyak 50% adalah dengan cara memasukkan angka
50 pada sumbu Y kemudian diperoleh nilai konsentrasi kombinasi propolis
 14

temulawak pada sumbu X dari kurva antara konsentrasi kombinasi propolis

temulawak dan nilai persentase penangkapan radikal bebas DPPH. Nilai
konsentrasi kombinasi propolis temulawak yang diperoleh merupakan nilai IC50
aktivitas antioksidan.

3.3.7. Pengujian Kemampuan Apoptosis Terhadap Sel Saccharomyces

cerevisiae

3.3.7.1. Sterilisasi Alat

Dibungkus cawan petri, tabung raksi dan alat lainnya dengan kertas, lalu
disterilisasi dengan oven pada suhu 180ºC selama 2 jam (Vita, 2014).

3.3.7.2. Pembuatan Media Agar

Kentang yang telah dikupas dan dipotong-potong dengan ukuran ± 1 x 1 x

1 cm sebanyak 200 gram di rebus dalam 500 ml air suling sampai cukup empuk.
Hal ini dapat diketahui dengan menusuk kentang dengan garpu. Jika di tusuk terasa
mudah, berarti kentang telah mengeluarkan sarinya. Kemudian 15 gram agar-agar
larut, selanjutnya dekstrosa (dapat diganti dengan gula pasir) sebanyak 15 gram
dimasukkan ke dalamnya. Air ekstrak kentang selanjutnya dituangkan ke dalam
larutan agar-agar. Larutan ini kemudian disaring dengan kain katun yang tipis,
larutan ditambahkan air steril sampai volumenya menjadi 100 ml. setelah
dididihkan, larutan PDA dimasukkan ke dalam erlenmayer kemudian ditutup
dengan kapas steril dan ditutup lagi dengan menggunakan aluminium foil.
Kemudian di sterilkan di dalam autoclave selama kurang lebih 15 menit dengan
suhu 121-124ºC pada tekanan 1,25 atm. Stelah itu PDA dikeluarkan dan dibiarkan
hingga dingin (10-20ºC), kemudian di tuangkan kedalam cawan petri (Hisar et al,
2011).

3.3.7.3. Pembuatan Suspensi S. cerevisiae

Pembuatan suspensi S. cerevisiae dilakukan sesuai dengan metoda Laun et

al. (2001) yang dimodifikasi. Ditimbang 1 gram serbuk S cerevisiae (merk
Fermipan), lalu disupensikan dengan 10 ml NaCl fisiologis. Selanjutnya, dipipet 1
 15

ml suspensi kedalam tebung reaksi lain dan ditambahkan NaCl fisiologis sampai 10
ml. Selanjutnya, diulang pengenceran sebanyak tiga kali. Semua langkah prosedur
dilakukan dalam keadaan aseptik.

3.3.7.4. Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Sampel

Konsentrasi ekstrak sampel ditentukan dengan bantuan rancangan

percobaan Response Surface Methodology (RSM) untuk menentukan batasan dan
taraf dari dua peubah bebas (propolis dan temulawak). Batasan dan taraf dua peubah
yang digunakan pada penelitian ini disajikan pada Tabel di bawah ini:
Tabel 2. Batasan dan taraf dari dua peubah
Batas dan Taraf
Peubah
-α -1 0 +1 +α
Propolis
3.89368 4.515 6.015 7.515 8.13632
(ppm)
Temulawak
4.82568 5.447 6.947 8.447 9.06832
(ppm)

Analisis statistika dilakukan dengan menggunakan bantuan Minitab 17 (free

trial). Model matematika yang digunakan sebagai berikut:
k k
Y =  0 +   i X i +   ii X i2 +   ij X i X j + 
i =1 i =1 i j

Keterangan: Y = respon (jumlah persentase sel petite)

𝛽0 = tetapan, 𝛽i, 𝛽ii, 𝛽ij : koefisien dari peubah bebas (X)
X = peubah bebas dengan tanpa sandi (propolis = X1 taraf 4.51500
ppm, 6.01500 ppm dan 7.51500 ppm; temulawak =
X2 taraf 5.44700 ppm, 6.94700 ppm dan 8.44700 ppm)
ε = galat
Penentuan kondisi terbaik dari penelitian ini dilakukan dengan
menggunakan metode Response Surface dengan dua peubah. Parameter yang
digunakan untuk menentukan kondisi terbaik adalah jumlah persentase sel petite
 16

yang merupakan respon kemampuan kombinasi propolis dan temulawak dalam

menginduksi apoptosis terhadap sel S. cerevisiae dari setiap satuan percobaan.

3.3.7.5. Uji Kemampuan Apoptosis terhadap S. cerevisiae

Pengujian induksi apoptosis terhadap S. cerevisiae dilakukan sesuai dengan

metoda Laun et al. (2001) yang dimodifikasi. Ke dalam media PDA ditambahkan
kombinasi propolis temulawak (50 μg ml-1) yang telah dituang 50 μl sel S.
cerevisiae kemudian diinkubasikan pada suhu 30±2ºC selama 2 x 24 jam dan dilihat
pertumbuhan S. cerevisiae secara langsung dengan penghitung koloni. Jumlah sel
yang mengalami petit dan sel normal dihitung, kemudian dihitung persentasenya.

3.3.7.6. Perhitungan Jumlah Sel Petite

Disuspensikan media PDA dengan 10 ml NaCl fisiologis, lalu dilakukan

pengenceran 10 kali dengan cara mengambil 1 ml dan ditambahkan 9 ml NaCl
fisiologis, lalu homogenkan. Dilakukan perhitungan dengan mikroskop perbesaran
40x10. Perhitungan jumlah sel petit dilakukan dengan metode counting chamber
perhitungan secara langsung. Hemositometer terdiri dari 5 bilik hitung. Setiap bilik
hitung terdiri dari 16 kotak. Perhitungan jumlah sel per mL dengan rumus dibawah:
𝑛 . 𝐹𝑝
Σ= x 103 sel/mL
0,02

Keterangan: Σ = Jumlah sel keseluruhan

n = jumlah sel dari 5 bilik hitung
FP = Faktor Pengenceran
 17

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Karakterisasi Serbuk Simplisia

4.1.1. Kadar Air

Salah satu parameter utama dari kualitas simplisia temulawak adalah kadar
airnya (RSNI, 2006). Mengingat mikroorganisme dapat tumbuh pada rimpang
temulawak dengan kadar air >10% yang akan mempengaruhi reaksi enzimatis
sehingga mempercepat pembusukan. Penetapan kadar air simplisia dilakukan
dengan metode gravimetri. Hasil rata-rata penetepan kadar air serbuk simplisia
temulawak sebesar 7,6931%.

Berdasar hasil di atas serbuk simplisia temulawak telah memenuhi syarat

untuk kadar air simplisia yaitu >10% (Dep Kes RI, 1978). Dengan persentase kadar
air yang baik serbuk simplisia temulawak tidak mudah rusak dan dapat disimpan
dalam waktu yang lama serta kerusakan akibat mikroba dapat dikurangi. Data
perhitungan hasil pengujian kadar air simplisia kering temulawak dapat dilihat pada
Lampiran 2.

4.1.2. Kadar Abu

Kadar abu merupakan parameter untuk menunjukkan nilai kandungan

mineral (bahan anorganik) yang ada di dalam suatu bahan atau produk. Kandungan
bahan anorganik yang terdapat di dalam suatu bahan diantaranya kalsium, kalium,
fosfor, besi, magnesium, dan lainnya. Yusron et al (2009), menyatakan bahwa
kadar abu pada jahe emprit (Ginger) galur 1 sebesar 9,18%, kunyit (Tumeric) galur
1 sebesar 5,28% sedangkan kadar abu temulawak galur 1 sebesar 3,67%. Hasil rata-
rata penetepan kadar abu serbuk simplisia temulawak sebesar 4,1113%, telah sesuai
dengan standar dari DepKes RI (1978) yaitu kurang dari 4,8%. Data perhitungan
 18

hasil pengujian kadar abu simplisia dan ekstrak temulawak dapat dilihat pada
Lampiran 3.

4.2. Hasil Uji Fitokimia

Uji fitokimia merupakan uji kualitatif yang digunakan untuk mengetahui
kandungan senyawa metabolit skunder yang terkandung di dalam sampel. Uji yang
dilakukan meliputi senyawa flavonoid, tanin, alkaloid, saponin, terpenoid dan
steroid terhadap simplisia serbuk temulawak, ekstrak temulawak, dan ekstrak
propolis. Hasil uji fitokimia dapat disimpulkan pada Tabel 3.

Tabel 3. Hasil Uji Fitokimia simplisia serbuk temulawak, ekstrak temulawak, dan
ekstrak propolis
Golongan Senyawa Temulawak Ekstrak
Serbuk Ekstrak Propolis
Simplisia
Flavonoid + + +
Tanin - - +
Alkaloid + - -
Saponin - - +
Keterangan: + = terdapat, -= tidak terdapat

Secara kualitatif, temulawak mengandung air, minyak atsiri, pati, serat, abu
(terlarut dan tak terlarut dalam asam), alkohol dan kurkumin. Sedangkan secara
fitokimia, temulawak mengandung alkaloid, flavonoid, fenolik, saponin,
triterpenoid, dan glikosida. Kandungan alkaloid, flavonoid, fenolik, triterpenoid
dan glikosida lebih dominan dibanding tanin, saponin dan steroid alkaloid yang
bersifat racun bagi manusia (Tetan, 2014).

Kandungan flavonoid propolis setara dengan 500 jeruk (Khismatullina

2005). Menurut Kasahara et al. (2004) dan Khismatullina (2005), lebih dari 180
senyawa yang terkandung di dalam propolis sudah diketahui dengan unsur aktif
yang penting dalam farmakologi dan aktivitas biologis adalah flavonoid (flavon,
flavonol, flavonon) dan senyawa fenolat serta senyawa aromatik.
 19

4.3. Ekstraksi Temulawak

Ektraksi merupakan kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak larut dengan pelarut cair (Dep Kes RI,
2000). Metode ekstaksi yang digunakan yaitu maserasi pada suhu 60ºC dengan
pengadukan.

Rendemen ekstraksi etanol temulawak yaitu sebesar 13,216%. Penelitian

Rosiyani (2010), menemukan rendemen ekstrak temulawak berkisar antara
9.092%-10.605%. Penelitian Ria (1989) dengan metode maserasi diperoleh
rendemen 15,70-19,19%. Berdasarkan dua penelitian tersebut, bahwasanya hasil
rendemen yang didapat tidak jauh berbeda. Perhitungan rendemen ekstrak dapat
dilihat pada Lampiran 5.

4.4. Hasil Kemampuan Antioksidan Metode DPPH

Penghambatan radikal dengan metoda DPPH merupakan salah satu metode

untuk menentukkan aktivitas antioksidan. Perubahan warna ungu DPPH menjadi
warna kuning mengindikasikan bahwa suatu bahan atau senyawa memiliki aktivitas
sebagai antioksidan. Parameter yang digunakan adalah nilai IC50, yaitu konsentrasi
yang diperlukan untuk menghambat 50% dari radikal bebas DPPH. Nilai IC50
diperoleh dari persamaan hubungan antara konsentrasi dengan persen
penghambatan. Nilai IC50 yang kecil berarti kemampuan dalam menghambat
radikal dari DPPH sangat besar.

4.4.1. Hasil Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH

Mauizatul et al (2017) menyatakan bahwasanya panjang gelombang

serapan maksimum DPPH adalah antara rentang 515 – 520 nm. Aswin et al (2016)
menyatakan bahwasanya panjang gelombang serapan maksimum DPPH adalah 516
nm. Ali et al (2013) menyatakan bahwasanya panjang gelombang serapan
maksimum DPPH adalah 517 nm. Richard (2016) menyatakan bahwasanya panjang
gelombang serapan maksimum DPPH adalah 517 nm.
 20

Penetapan panjang gelombang maksimum DPPH dilakukan pada panjang

gelombang 500 – 520 nm. Hasil penetapan panjang gelombang DPPH yaitu λ 516
nm sesuai dengan literatur (Aswin et al, 2016), dan termasuk kedalam rentang
panjang gelombang maksimum DPPH (Mauizatul et al, 2017). Data dan grafik
panjang gelombang serapan maksimum DPPH dapat dilihat pada Lampiran 6.

4.4.2. Hasil Peredaman Pembanding (Vitamin C)

Pembanding yang digunakan pada penelitian ini adalah Vitamin C (Asam

askorbat). Nilai persen peredaman/inhibisi Vitamin C dapat dilihat pada Gambar 1.

Vitamin C
90
80
70 y = 1.6416x + 42.193
R² = 0.9906
60
Inhibisi (%)

50
40 % inhibisi
30 Linear (% inhibisi)
20
10
0
0 5 10 15 20 25 30
Konsentrasi (ppm)

Gambar 1. Kurva Nilai % Inhibisi Vitamin C

Nilai IC50 yang diperoleh pada peredaman aktivitas antioksidan Vitamin C

adalah 4,7557 μg ml-1 dengan persamaan regresi linear y=1,6416x+42.193 dan
koefisien kolerasi R2=0,9906. Nilai IC50 Vitamin C 4,7557 μg ml-1 < 50 μg ml-1,
mengindikasikan Vitamin C memiliki aktivitas yang sangat aktif sebagai
antioksidan karena dapat menghambat kurang dari 50% radikal bebas.

4.4.3. Hasil Peredaman Kombinasi Propolis Temulawak

Aktivitas antioksidan maksimum terdapat pada sampel no 4 pada

konsentrasi propolis 95,340 µg/ml dan konsentrasi temulawak 107.010 µg/ml yang
menghasilkan nilai IC50 sebesar 48,572 μg/ml dan aktivitas antioksidan minimum
 21

terdapat pada sampel no 1 pada konsentrasi propolis 55,340 µg/ml dan konsentrasi
temulawak 67,010 µg/ml yang menghasilkan nilai IC50 70,258 μg/mL. Nilai IC50
semua konsentrasi kombinasi percobaan terdapat pada tabel 4.

Tabel 4. Hasil Pengujian Kemampuan Antioksidan

No Konsentrasi Konsentrasi Nilai IC50
Propolis Temulawak (µ𝐠⁄𝐦𝐥)
(µ𝐠⁄𝐦𝐥) (µ𝐠⁄𝐦𝐥)
1 55,340 67,010 70,258
2 95,340 67,010 58,321
3 55,340 107,010 60,969
4 95,340 107,010 48,572
5 47,056 87,010 68,486
6 103,624 87,010 54,968
7 75,340 58,726 66,319
8 75,340 115,294 52,819
9 75,340 87,010 61,264
10 75,340 87,010 60,433
11 75,340 87,010 61,241
12 75,340 87,010 61,344
13 75,340 87,010 61,378

Menurut Akhmad et al. (2013) bahwa propolis memiliki aktivitas

antioksidan dengan nilai IC50 75,34 µg ml-1. Menurut Ali et al. (2013) menyatakan
bahwa temulawak memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 mencapai 87,01
ppm. Bila dibandingkan nilai IC50 antara proplis, temulawak, kombinasi propolis
temulawak maksimum, dan kombinasi propolis teemulawak minimum menunjukan
hasil seperti pada Gambar 3.
 22

100
90
80
Nilai IC50 (μg/ml) 70
60
50
40 nilai ic50
30
20
10
0
vitamin C propolis temulawak pt maks pt min
Sampel

Gambar 2. Diagram Perbandingan Nilai IC50

Berdasarkan diagram di atas terbukti kombinasi propolis temulawak baik

hasil maksimum maupun minimum memiliki nilai IC50 yang lebih besar
dibandingkan dengan propolos tanpa kombinasi dan temulawak tanpa kombinasi.
Namun kombinasi propolis temulawak bila dibandingkan dengan vitamin C
memang masih lebih kecil.

4.4.4. Persamaan RSM Aktivitas Antioksidan

Aktivitas antioksidan kombinasi ekstrak propolis dan ekstrak temulawak

dilakukan dengan pengujian analisis statistik menggunakan RSM dengan
kecocokan CCD sehingga diperoleh persamaan:
Y = 61,132 – 5,431 X1 – 4,766 X2
Persamaan RSM terlihat bahwa konsentrasi ekstrak temulawak mempunyai
pengaruh terhadap nilai IC50. Hal ini dapat dilihat dari koefisien konsentrasi
temulawak (X2) yang memiliki nilai lebih besar daripada konsentrasi propolis (X1).
Perhitungan statistik menunjukan bahwa R2 = 98,49% dengan demikian hasil
penelitian menunjukan 98,49% merupakan pengaruh dari faktor-faktor perlakuan
dan 97,41% berasal dari faktor-faktor diluar perlakuan yang diamati.
 23

Contour Plot of ic50 vs temulawak, propolis

ic50
110 < 45
45 – 50
50 – 55
55 – 60
100 60 – 65
65 – 70
> 70
temulawak

90

80

70

60
50 60 70 80 90 100
propolis

Gambar 3. Contour Plot Response Optimasi Nilai IC50

Berdasarkan Gambar 3 dapat disimpulkan bahwa konsentrasi propolis

mempengaruhi nilai IC50 dimana kombinasi dengan konsentrasi temulawak
menghasilkan nilai IC50 >70 μg/mL, yang menandakan bahwa antioksidan bersifat
aktif. Konsetrasi propolis optimum dan konsentrasi temulawak optimum pada
rancangan statistik RSM diperoleh yaitu konsentrasi propolis 73,578 μg/mL dan
konsentrasi temulawak 33,326 μg/mL dapat diperoleh nilai IC50 sebesar 67,7685
μg/mL.

4.5. Hasil Kemampuan Apoptosis Terhadap Sel Saccharomyces cerevisiae

Apoptosis, atau kematian terprogram, merupakan perkembangan dan

kesehatan yang normal dari organisme sel banyak. Kematian sel merupakan akibat
dari berbagai sebab dan selama terjadinya apoptosis kondisi organisme tersebut
dalam kondisi mengatur diri atau terkendali. Hal ini yang membedakan dengan
kematian sel yang disebut nekrosis, yaitu lisis sel yang tidak terkontrol akibat
inflamasi dan masalah kesehatan yang serius (Granot 2003).

4.5.1. Persentase Jumlah Sel Petit

 24

Kemampuan apoptosis kombinasi propolis dan temulawak terhadap sel

Saccharomyces cerevisiae disajikan pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil Pengujian Induksi Apoptosis
Konsentrasi Konsentrasi
Jumlah sel petit
No. Propolis Temulawak
(%)
(ppm) (ppm)
1 4,515 5,447 64,858
2 7,515 5,447 86,158
3 4,515 8,447 73,607
4 7,515 8,447 74,257
5 3,894 6,947 73,394
6 8,136 6,947 79,747
7 6,015 4,826 90,179
8 6,015 9,068 91,87
9 6,015 6,947 86,4
10 6,015 6,947 85,124
11 6,015 6,947 78,899
12 6,015 6,947 81,967
13 6,015 6,947 84,821

Kemampuan induksi apoptosis maksimum terdapat pada sampel no 8 pada

konsentrasi propolis 6,015 ppm dan konsentrasi temulawak 9,068 ppm dengan
persentase sel petit sebesar 91,870% dan kemampuan induksi apoptosis minimum
terdapat pada sampel no 1 pada konsentrasi propolis 4,515 ppm dan konsentrasi
temulawak 5,447 ppm dengan persentase sel petit 64,858%.

Akhmad et al. (2013) menyatakan bahwa propolis memiliki aktivitas

induksi apoptosis sel S. cerevisiae sebesar 70,323%. Un et al. (2014), menyatakan
bahwa temulawak memiliki kemampuan induksi apoptosis sel S. cerevisiae sebesar
81,231%. Bila dibandingkan persentase jumlah sel petit antara proplis, temulawak,
 25

kombinasi propolis temulawak maksimum, dan kombinasi propolis temulawak

minimum menunjukkan hasil seperti pada Gambar 4.

100
90
80
Jumlah sel petit (%)

70
60
50
40 jumlah sel petit (%)
30
20
10
0
propolis temulawak pt maks pt min
Sampel

Gambar 4. Diagram Perbandingan Persentase Jumlah Sel Petit

Berdasarkan diagram di atas, terbukti kombinasi propolis temulawak

maksimum memiliki persentase jumlah sel petit yang lebih besar dibandingkan
dengan propolos tanpa kombinasi dan temulawak tanpa kombinasi. Namun
kombinasi propolis temulawak minimum memiliki persentase jumlah sel petit lebih
kecil bila dibandingkan dengan vitamin C.

4.5.2. Persamaan RSM Induksi Apoptosis

Induksi apoptosis kombinasi ekstrak propolis dan ekstrak temulawak

dilakukan dengan pengujian analisis statistik menggunakan RSM dengan
kecocokan CCD sehingga diperoleh persamaan:
Y = 83,44 + 3,87 X1 – 0,09 X2
Persamaan RSM terlihat bahwa konsentrasi ekstrak propolis mempunyai
pengaruh terhadap jumlah sel petit. Hal ini dapat dilihat dari koefisien konsentrasi
propolis (X1) yang memiliki nilai lebih besar daripada konsentrasi temulawak (X2).
Perhitungan statistik menunjukan bahwa R2 = 68,40% dengan demikian hasil
 26

penelitian menunjukan 68,40% merupakan pengaruh dari faktor-faktor perlakuan

dan 45,83% berasal dari faktor-faktor diluar perlakuan yang diamati.

Contour Plot of jumlah sel apoptosis vs temulawak, propolis

9
jumlah
sel
apoptosis
< 60
60 – 65
8
65 – 70
70 – 75
75 – 80
temulawak

80 – 85
7 85 – 90
> 90

4 5 6 7 8
propolis

Gambar 5. Contour Plot Response Optimasi Nilai IC50

Berdasarkan Gambar 5 dapat disimpulkan konsentrasi propolis

mempengaruhi jumlah sel petit dimana kombinasi dengan konsentrasi temulawak
menghasilkan jumalah sel petit (%) >90, yang menandakan bahwa induksi
apoptosis terjadi. Konsentrasi propolis optimum dan konsentrasi temulawak
optimum pada rancangan statistik RSM diperoleh yaitu konsentrasi propolis
22,4141 μg/mL dan komsetrasi temulawak 14,5681 μg/mL dapat diperoleh
persentase sel petit sebesar 104,3671 %.
 27

BAB V
KESIMPULAN

5.1. Kesimpulan

1. Kombinasi propolis dan temulawak memiliki aktivitas antioksidan dengan

nilai IC50 maksimum 48.57204μg/ml dan nilai IC50 minimum
70.25756μg/ml.
2. Kombinasi propolis dan temulawak memiliki aktivitas induksi apoptosis
sel saccharomyces cereviciae dengan persentase jumlah sel petit
maksimum 91,8699% dan persentase jumlah sel petit minimum 64,8579%.
3. Kombinasi propolis dan temulawak meningkatkan aktivitas antioksidan
maupun aktivitas induksi apoptosis sel saccharomyces cereviciae, jika
dibandingkan dengan tanpa kombinasi.

5.2. Saran

Perlu dilanjutkan penelitian terhadap sifat (karakteristik) propolis dan

temulawak lainnya secara rinci sehingga dapat ditentukan penilaian dan standar
yang dapat digunakan dalam menentukan mutu propolis dan temulawak di
Indonesia. Dengan demikian, dapat ditentukan manfaat farmakologis propolis dan
temulawak secara jelas.
 28

DAFTAR PUSTAKA

[WHO] World Health Organization. 1999. Monograph on selected medicinal plant.

Vol 1. Jenewa: WHO.

Akhmad E.Z.H. 2013. Ekstraksi Propolis Trigona spp Asal Pandeglang

Menggunakan Pelarut Etanol 70% dan Pemanasan Gelombang Mikro
serta Karakterisasinya. IPB: Bogor.

Akhmad E.Z.H., Djumali M., Titi C.S., Ono S., Agus S. 2013. Optimasi Ekstraksi
Propolis Menggunakan Cara Maserasi dengan Pelarut Etanol 70% dan
Pemanasan Gelombang Mikro serta Karakterisasinya sebagai Antikanker
Payudara. Fakultas Kedokteran Hewan IPB : Bogor.

Ali R., Ali K., Budi S., Hadi R., Dodik B. 2013. Potensi Temulawak (Curcuma
xanthorrhiza Roxb) sebagai Antioksidan. Institut Pertanian Bogor : Bogor.

Anonim. 2006. Bee Propolis. Http://www.droperbee.com/info/propolis.htm.

Diakses 06 Semtember 2018

Aswin T., Erwin1, Syafrizal. 2016. Uji Fitokimia, Toksisitas serta Antioksidan
Ekstrak Propolis Pembungkus Madu Lebah Trigona Incisa Dengan
Metode 2,2-Diphenyl-1-Picrylhidrazyl (DPPH). Universitas
Mulawarman: Samarinda

Bankova V dan Popova M, 2007. Propolis of stingless bee: a promosing source of

biologically active compounds. Phcog Rev 1 (1): 82-92.

Bankova V. 2007. Propolis of Stingless Bee: A Promising Source of Biologically

Active Compounds. Pharmacog Rev. 1: 88-92.

Choil WS, Kwak SS, Kim HI. 2006. Improvement of bioaviability of water
insoluble drugs: potential of nano-sized grinding technique. Asian J
Pharm Sci. 1:27-30.
 29

de Castro PA, Savoldi M, Bonattio D, Barros MH, Goldman MHS, Berretta AA,
Goldman GH. 2011. Molecular Characterization of Propolis Induced Cell
Death in Saccharo-myces cerevisiae. Eucariotic Cell. 10 (3):398-411.

Dep. Kes. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV. Departemen Keehatan Republik
Indonesia

Dep. Kes. 2000. Parameter Standar Umum Ektrak Tumbuhan Obat. Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta. Halaman: 10 -11

Ekambaram P, Sathali AAH, Priyanka K. 2012. Solid Lipid Nanoparticles: a

Review. Sci Rev Chem Commun. 2(1):80-102.

Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama.

Gordon MH J. Pokorny, N. Yanishlieve, M. Gordon.2001. Antioksidants in Food.

New York: CRC Press

Harborne JB. 1987. Phytochemical Methods. Chapman and Hall, London, UK.
Pages: 97.

Hernani, Raharjo, M., (2005). Tanaman berkhasiat Antioksidan, Penebar Swadya,

Jakarta.

Hisar Panjaitan, Ridwanti Batubara, Yunasfi. 2011. Identifikasi Fungi Yang

Berkembang Pada Batang Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Pasca
Penebangan. USU: Sumatra Utara

Juniarti, D. Osmelia dan Yuhernita. 2009. Kandungan Senyawa Kimia, Uji

Toksisitas (Brine Shrimp Lethality Test) dan Antioksidan (1,1-diphenyl-2-
pikrilhydrazyl) dari Ekstrak Daun Saga (Abrus precatorius L.). Makara
Sains.

Los Banos. 2004. BEENET Symposium and Technofora. Los Banos: Univ. of the
Philippines. 311-315.
 30

Lotfy M. 2006. Biological Activity of Bee Propolis in Health and Disease. Asian
Pac J Cancer Prev. 7:22-31.

Lotti C, de Castro GMM, de Sá LFR, da Silva BAFS, Tessis AC, Piccinelli AL,
Rastrelli L, Pereira AF. 2011. Inhibiton of Saccharomyces cerevisiae
Pdr5p by a natural com-pound extracted from Brazillian Red Propolis. J
Pharma Braz. 21(5): 901-908.

Lully, H. E. 2016. Farmakognosi dan Fitokimia. KemenkesRI: Jakarta Selatan

Lustosa SR, Galindo AB, Nunes LCC, Randau KP, Neto PJR. 2008. Própolis:
atualizações sobre a química e a farmacologia. Rev Bras Farmacog.
18:447- 454.

Masuda T, Isobe J, Jitoe A, Naktani, Nobuji. 1992. Antioxidative curcuminoids

from rhizomes of Curcuma xanthorrhiza. Phytochemistry. 31(10):
36453647.

Meghana SK, Vaidya KK, Bhosale AV, Chaudhari PD. 2012. Solid Lipid
Nanoparticles and Nanostructured Lipid Carriers - an Overview. IJPCBS.
2(4):681-691.

Patravale VB, Date AA, Kulkani RM. 2004. Nanosuspensions: a promising drug
delivery strategy. J Pham Pharmacol. 56:827-840.

Prana, MS. 2008. The biologi of temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.). Bogor
(ID): Biopharmaca Research Center Bogor Agricultural University. Hal.
151-156.

Rahmat Rukmana, Ir. 1995. Temulawak Tanaman Rempah dan Obat. Yogyakarta.
Kanisius.

Sidik, Mulyono MW, Muhtadi A. 1992. Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb).

Jakarta (ID) : Yayasan Pengembangan Obat Bahan Alam Phytomedica.
 31

Sukoco, Shagita N. 2010. Aplikasi Saccharomyces cereviceae, Pichia ohmeri dan

Glucanobacter thailandicus Dalam Bentuk Sel Bebas dan Termobilisasi
Gel Alginas Untuk Produksi Arabitol dan Xylitol Nir Tebu. Jember:
Jurusan Tekhnologi Hasil Pertanian FTP UNEJ.

Tahir, I., Wijaya, K., Widianingsih, D., (2003). Seminar on Chemometrics-

Chemistry Dept Gadjah Mada University, Terapan Analisis Hansch Untuk
Aktivitas Antioksidan senyawa Turunan Flavon/Flavonol, 25 Januari.

Tamat, S. R., T. Wikanta dan L. S. Maulina. 2007. Aktivitas Antioksidan dan

Toksisitas Senyawa Bioaktif dari Ekstrak Rumput Laut Hijau Ulva
reticulata Forsskal. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 5 (1) : 31-36.

Trusheva B, Trunkova D, Bankova V. 2007. Preliminary communication, Different

extrac-tion methods of biologically active components from propolis: a
preliminary study. Chem Center.1(13):1-4.

Un SH, Kim S, Rong K. Curcumin Reverse Methicillin Resistance in

Staphylococcus aureus. Molecules. 2014; 19: 18283–95.

Vita Ratri Cahyani. 2014. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Pertanian. Universitas

Sebelas Maret: Surakarta.

Winarsi, H. 2007. Antioksidan Alami & Radikal Bebas, Kanisius: Yogyakarta.

Zhang HF, Yang XH, Wang Y. 2011. Microwave assisted extraction of secondary
metabolites from plants: Current status and future directions. Trends Food
Sci Technol. 22: 672-688
 32

LAMPIRAN
 33

Lampiran 1. Bagan Alur Penelitian

Ekstraksi Propolis Ekstraksi Temulawak

Ekstrak Propolis Ekstrak Temulawak

Kombinasi Ekstrak Propolis

dan Ekstrak Temulawak

Pengujian Aktivitas Antioksidan Pengujian Kemampuan

Apoptosis Terhadap Sel
Saccharomyces cerevisiae

Data Absorbansi
Aktifitas Antioksidan Data Jumlah sel
yang mengalami
petit dan sel normal

Perhitungan data, pembuatan

kurva dan persamaan
Perhitungan koloni
dan persentasenya

Nilai IC50
Antioksidan
Nilai IC50
Kesimpulan Antisaccharomyces
 34

Lampiran 2. Hasil perhitungan % Kadar Air Simplisia T emulawak

Bobot Bobot Cawan + Bobot setelah pemanasan (g) % Kadar air
sampel cawan sampel
(g) (g) (g) = (w1) 1 2 3 (w2)

2,0016 45,9397 47,9414 47,7997 47,7914 47,7892 7,5989 %

2,0110 62,4711 46,4821 64,3375 64,3278 64,3255 7,7872 %
Rata-rata % kadar air 7,6931 % ±
0,1331

Rumus:
W1−W2
Kadar air (%) = Bobot sampel x 100%

47,9413−47,7892
Kadar air 1 (%) = x 100% = 7,5989%
2,0016

64,3375−64,3255
Kadar air 2 (%) = x 100% = 7,7872%
2,0110

Lampiran 3. Hasil Perhitungan Kadar Abu Simplisia Temulawak

Bobos Bobot Krus + Krus + abu setelah % Kadar
sample (g) krus (g) sampel (g) pemijaran (g) abu
2,0051 36,8903 38,8954 36,9717 4,0596 %
2,0034 32,4919 34,4953 32,5753 4,1629 %
Rata-rata % kadar abu 4,1113% ±
0,073

Rumus:
(Bobos krus+Bobot abu)−Bobot krus kosong
Kadar abu (%) = x 100%
Bobot sampel

36,9717−36,8903
Kadar abu 1 (%) = x 100% = 4,0596 %
2,0051

32,57537−32,4919
Kadar abu 2 (%) = x 100% = 4,1629 %
2,0034

Lampiran 4. Perhitungan Rendemen Simplisia Temulawak

Bobot rimpang temulawak basah = 6000 g
Bobot simplisia temulawak kering = 1100 g
Bobot simplisia serbuk temulawak = 880 g
 35

𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘
% Rendemen Simplisia = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑎𝑤𝑎𝑙 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔 x 100%
880 𝑔
= 1100 𝑔 x 100%

= 80%

Lampiran 5. Perhitungan Rendemen Ekstrak Temulawak

Bobot simplisia serbuk temulawak = 31,25 g

Bobot ekstrak kering = 4,13 g
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘
% Rendemen Simplisia = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑎𝑤𝑎𝑙 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔 x 100%
4,13 𝑔
= 31,25 𝑔 x 100%

= 13,216%

Lampiran 6. Peredaman Aktivitas Antioksidan

➢ Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH
Panjang
Absorbansi
gelombang
510 0,8514
511 0,8557
512 0,8584
513 0,8602
514 0,8622
515 0,8634
516 0,8642
517 0,8632
518 0,8611
519 0,8594
520 0,8558
 36

Panjang Gelombang Maksimum DPPH

0.866
0.864
0.862
Absorbansi

0.86
0.858
0.856 Absorbansi
0.854
0.852
0.85
508 510 512 514 516 518 520 522
Panjang Gelombang

➢ Persen Peredaman Vitamin C

Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (µg/ml)
5 0,4236 48,9577
10 0,3335 59,8144
15 0,2634 68,2612 4,7557
20 0,2133 74,2981
25 0,1431 82,7569
Blanko 0,8299
 37

Vitamin C
90
80
70 y = 1.6416x + 42.193
R² = 0.9906
60
Inhibisi (%)

50
40 % inhibisi
30 Linear (% inhibisi)
20
10
0
0 5 10 15 20 25 30
Konsentrasi (ppm)

Contoh perhitungan % inhibisi

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜−𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
% Inhibisi : 𝑥100%
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜
0,8299−0,4236
: 𝑥 100%
0,8299

: 48,9577 %
Contoh perhitungan Inhibisi
IC50 = bx + a
50 = 1,6416x + 42,193
1,6416x = 50 – 42,193
50−42,193
x = 1,6416

x = 4,7557 µg/ml
➢ Sampel 1
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,6127 26,17183
25 0,5546 33,17267
70,25756
50 0,4763 42,60754
75 0,3881 53,23533
 38

100 0,3313 60,07953

Sampel 1
70

60

50 y = 0.3805x + 23.267
Inhibisi (%)

R² = 0.994
40

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 2
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,531 36,01639
25 0,4925 40,6555
50 0,435 47,58405 58,32096
75 0,3675 55,71756
100 0,323 61,07965

Sampel 2
70

60

50
Inhibisi (%)

y = 0.2829x + 33.501
40 R² = 0.9962

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 3
 39

Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50

(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,5447 34,36559
25 0,5035 39,33004
50 0,4423 46,70442 60,9686
75 0,3712 55,27172
100 0,3245 60,8989

Sampel 3
70

60

50
Inhibisi (%)

y = 0.2994x + 31.746
40 R² = 0.996

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 4
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,4891 41,06519
25 0,4618 44,35474
50 0,4145 50,05422 48,57204
75 0,3573 56,94662
100 0,3189 61,57368
 40

Sampel 4
70

60

50
Inhibisi (%)

y = 0.2332x + 38.673
40 R² = 0.9969

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 5
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,5971 28,05157
25 0,5428 34,59453
50 0,4685 43,54742 68,48577
75 0,3843 53,69322
100 0,3297 60,27232

Sampel 5
70

60

50 y = 0.3619x + 25.215
Inhibisi (%)

40 R² = 0.9945

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 6
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
 41

10 0,5143 38,02868
25 0,4808 42,06531
50 0,4271 48,53597 54,96772
75 0,3636 56,18749
100 0,3214 61,27244

Sampel 6
70

60

50
Inhibisi (%)

y = 0.2633x + 35.527
40 R² = 0.9967

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 7
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,5798 30,13616
25 0,5298 36,16098
50 0,4599 44,58368 66,31887
75 0,3799 54,2234
100 0,328 60,47717
 42

Sampel 7
70

60

50 y = 0.3412x + 27.372
Inhibisi (%)

R² = 0.995
40

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sample 8
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,5051 39,13725
25 0,4738 42,90878
50 0,4225 49,09025 52,81919
75 0,3613 56,46463
100 0,3205 61,38089

Sampel 8
70

60

50
y = 0.2522x + 36.679
Inhibisi (%)

40 R² = 0.9968

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 9
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,5464 34,16074 61,26368
 43

25 0,5048 39,17339
50 0,4432 46,59598
75 0,3716 55,22352
100 0,3246 60,88685

Sampel 9
70

60

50
Inhibisi (%)

y = 0.3015x + 31.529
40 R² = 0.996

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 10
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,5416 34,73913
25 0,5012 39,60718
50 0,4408 46,88517 60.43287
75 0,3704 55,36812
100 0,3242 60,93505

Sampel 10
70

60

50
y = 0.2957x + 32.13
Inhibisi (%)

40 R² = 0.9961

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)
 44

➢ Sampel 11
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,5463 34,17279
25 0,5047 39,18544
50 0,4432 46,59598 61,24088
75 0,3716 55,22352
100 0,3246 60,88685

Sampel 11
70

60

50 y = 0.3014x + 31.542
Inhibisi (%)

R² = 0.996
40

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 12
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,5469 34,10049
25 0,5052 39,1252
50 0,4434 46,57188 61,34393
75 0,3717 55,21147
100 0,3247 60,8748
 45

Sampel 12
70

60

50
y = 0.3021x + 31.468
Inhibisi (%)

40 R² = 0.9959

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

➢ Sampel 13
Konsentrasi Absorbansi Inhibisi IC50
(ppm) rata-rata (%) (ppm)
10 0,5472 34,06435
25 0,5054 39,1011
50 0,4436 46,54778 61,37806
75 0,3718 55,19942
100 0,3246 60,88685

Sampel 13
70

60

50
Inhibisi (%)

y = 0.3026x + 31.427
40 R² = 0.996

30 % inhibisi

20 Linear (% inhibisi)

10

0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

Lampiran 7. Pengujian Kemampuan Apoptosis

 46

➢ Perhitungan jumlah sel petit, sel normal, sel petit dan sel normal, dan
persentase
Hasil mikroskopis Hasil perhitungan
% sel
No Sel Sel
Jumlah Sel petit Sel normal Jumlah petit
petit normal
1 251 136 387 125500000 68000000 193500000 64,86
2 361 58 419 180500000 29000000 209500000 86,16
3 251 90 341 125500000 45000000 170500000 73,61
4 150 52 202 75000000 26000000 101000000 74,26
5 160 58 218 80000000 29000000 109000000 73,39
6 126 32 158 63000000 16000000 79000000 79,75
7 101 11 112 50500000 5500000 56000000 90,18
8 113 10 123 56500000 5000000 61500000 91,87
9 216 34 250 108000000 17000000 125000000 86,40
10 103 18 121 51500000 9000000 60500000 85,12
11 172 46 218 86000000 23000000 109000000 78,90
12 150 33 183 75000000 16500000 91500000 81,97
13 190 34 224 95000000 17000000 112000000 84,82

Contoh perhitungan:

Sampel no. 1

• Sel petit
𝑛 . 𝐹𝑝
Σp = 0,02 x 103 sel/mL
251 . 10
Σp = x 103 sel/mL
0,02
Σp = 125500000 sel/mL

• Sel normal
𝑛 . 𝐹𝑝
Σn = 0,02 x 103 sel/mL
136 . 10
Σn = x 103 sel/mL
0,02
Σn = 68000000 sel/mL

• Sel petit dan sel normal

Σpn = Σp + Σn
Σpn = 125500000 sel/mL + 125500000 sel/mL
Σpn = 193500000 sel/mL

• Persentase
 47

Σp
% sel petit = Σpn x 100%
125500000 sel/mL
% sel petit = x 100%
68000000 sel/mL
% sel petit = 64.86%