UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

CARRERA: QUIMICA Y FARMACIA

INFORME DE LABORATORIO
Práctica Tema:
11
BIOQUÍMICA Dra. Nilda Cedeño Albán
Integrantes:
 Córdova Pardo Mónica Valeria
 Zambrano Espinoza Génesis Isabel
 Olvera Cedillo Freddy José

Semestre: 4to Paralelo: GRUPO 3-A

Objetivo General :
 Estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimática, como la temperatura, el pH, la
concentración del sustrato y de la enzima y la presencia de inhibidores y activadores.

Objetivo específicos:
 Confrontar los conocimientos teóricos adquiridos en clases con las actividades experimentales en el
laboratorio.
 Analizar el efecto de un inhibidor y activador sobre los parámetros cinéticos de la enzima.
 Determinar el porcentaje de activación e inhibición de la enzima amilasa.

Marco Teórico

ACTIVADORES E INHIBIDORES ENZIMÁTICOS

Se define un activador como un efector que aumenta la velocidad de una reacción enzimática .desde el
punto de vista, fisiológico los principales activadores son iones inorgánicos. Numerosas enzimas
requieren para su actividad la presencia de cationes y en particular de cationes divalentes. En algunos
casos los cationes se unen a enzima en centros específicos,
haciendo posible o haciendo más fácil la unión de la enzima
con su sustrato. Su papel puede consistir en establecer la
estructura correcta de la enzima para su mayor eficacia. En
otros casos en cambio, el ion activador se une con el sustrato
y así lo convierte en el verdadero sustrato de la enzima. Unas
veces las enzimas son relativamente poco especificas con
respecto a la naturaleza del catión activador, otras en cambio
muestra un alto grado de especificidad.
Se pueden considerar dos tipos principales de activación:
 Activación esencial:
En la que la enzima no actúa en ausencia del activador. La razón de este comportamiento puede radicar
en que el verdadero sustrato sea el sustrato unido al activador o bien en que el complejo no se forme o
no sea eficaz en la catálisis. (Arreaga & Soler , 1998)
Activación esencial:
Cuando la reacción enzimática tiene lugar en ausencia de activador, si bien con una velocidad menor.
A continuación se describen primero casos de activación esenciales (excluido el caso en que el sustrato
verdadero sea SA que no se discute) para pasar luego a la activación no esencial .Se procura en lo
posible señalar las semejanzas que pueden existir con sistemas de inhibición que ya se han descrito
con el fin de resaltar la unidad del tratamiento.
Los activadores son moléculas que se unen a enzima y disminuyen s actividad puesto que el bloqueo
de una enzima puede matar a un organismo patógeno corregir un desequilibrio metabólico. (Arreaga &
Soler , 1998)
INHIBIDORES ENZIMÁTICOS

Molécula o ion que al unirse a la enzima produce una

disminución en la velocidad de la reacción catalizada.
Si a un sistema enzimático se añaden sustancias que
impidan la realización de la actividad propia de la enzima,
se dice que el sistema ha sido inhibido, y la sustancia
usada con estos fines se denomina inhibidor.
Muchos inhibidores son agentes que desnaturalizan a las
enzimas, ya que éstas son moléculas proteínicas, susceptibles a una diversidad de agentes,
especialmente químicos, como aniones complejos o metales pesados, Zn++ , Pb++ , Ag ++ , etc. A menudo
estos agentes que impiden la actividad enzimática actúan sobre casi todas las enzimas, lo que
demuestra que su acción no es específica, sino que afectan a tosa molécula proteínica. Tal es el caso
de los inhibidores de sufhidrilos, - SH , los cuales forman parte de una gran variedad de enzimas.
Inhibidores irreversibles:
Reaccionan con la enzima de forma covalente y modifican su estructura química a nivel de residuos
esenciales de los aminoácidos necesarios para la actividad enzimática.
Inhibidores reversibles:
Cuando el inhibidor se fija a la enzima mediante una combinación apropiadas de fuerzas de van der
Waals, puentes de hidrógenos. Enlaces electrostáticos y fuerzas de atracción hidrófoba.
La intensidad de dicha unión está determinada por la constante de equilibrio K , para la disociación de
complejos enzima-inhibidos-sustrato en el caso de los inhibidores clásicos(aunque la situación puede
ser más compleja para los inhibidores de asociación lenta y fuerte. (Flores , 2003)
Fundamento de la práctica (VALERIA)


Reactivos
 ClNa (1%)
 SO4Cu (1%)
 α amilasa
 Lugol
 Agua destilada
Materiales
 Tubos de ensayo
 Mortero
 Espátula
 Pipetas
 Auxiliar de pipeta
 Probeta
 Vidrio reloj
Equipos de laboratorio
 Hornilla
 Balanza analítica
Procedimiento

Tubos 1 2 3 4
Almidón 2.5 2.5 2.5 2.5 mL
ClNa ----------- ------------ 50 ------------ uL
-
SO4 Cu ----------- ------------ ------------ 50 uL
-
Mezclar Baño 37° C / 3’
α amilasa ----------- 50 50 50 uL
-
Mezclar Baño 37° C / 10’
Lugol 50 50 50 50 uL
Mezclar retirar del baño
H2 O 5 5 5 5 mL
Mezclar – leer Absorbancias 640 nm frente a H2 O
Resultados (OLVERA)

Conclusiones
 En esta práctica se observó las reacciones químicas que se producen en una amilasa, en estas
reacciones las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, donde podemos
determinar a través de la absorbancia y el sustrato el porcentaje de activación de:
Aprendizaje (OLVERA)


Bibliografía:
Arreaga , D., & Soler , J. (1998). Cinetica Enzimatica: Manejo de Datos.
Flores , J. (2003). Farmacología Humana. Barcelona - España : MASSON.