UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
PRÁCTICA N 9
PREPARACIÓN DE MEDIOS Y TÉCNICAS DE CULTIVO (PARTE I)
Nombre: Jhean Pierre Fuentes González
Fecha: 17/06/2019

TEORÍA
1. Cultivos y sus tipos
Según la proporción de agar, existen tres tipos:

 Líquidos (caldos). No contiene ningún agente gelificante, por lo que los microorganismos
crecen por todo el medio. El crecimiento en este tipo de medios es más rápido puesto que
la movilidad permite acceder de una forma más fácil a los nutrientes. (Cuevas, 2010)
 Sólidos. Tienen una proporción de agar de, aproximadamente, el 1,5%. El crecimiento se
desarrolla en la superficie del medio. Estos medios pueden depositarse en placas de Petri
o en tubos de ensayo. (Cuevas, 2010)
 Semisólidos. Son aquellos que contienen una proporción de agar inferior al 0,5%. Se
utilizan para pruebas bioquímicas y de movilidad. (Cuevas, 2010)
2. Formulación de los medios de cultivo
Preparación de inóculos. Se parte de un cultivo puro de Lactobacillus sembrado en caja Petri
con agar MRS por la técnica de estría masiva con aplicador de algodón estéril (césped). Se
recolecta todo el contenido de la caja Petri y se vertió en un matraz Erlenmeyer de 250 mL con
tapón de algodón con 100 mL de caldo modificado MRS; el cual consta de las sales y
micronutrientes del Cultivo MRS. El cultivo se incubó con pH inicial de 6.4 ± 0.2, 29°C ± 1 por
48 h sin agitación. Se determinó la concentración microbiana del inóculo por medio del método
de peso seco celular (Prit, 1975). En esterilidad, se tomaron 5 mL de muestra por duplicado cada
2 horas durante un periodo de 34 horas. Las muestras son centrifugadas a 2000 rpm durante 8
minutos en una centrífuga. El paquete celular se filtra al vacío, se lava con agua destilada y se
pone a secar a 45°C en estufa por 24 h o hasta que se registre peso constante. (Dante Israel León-
de la O, 2013)
Fig.1. Componentes que forman parte de las sales (micronutrientes) del medio de cultivo MRS
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Fuente: Formulación y optimización de un medio de cultivo económico

para Lactobacillus con potencial probiótico aislado del pulque. (Dante Israel León-de la O,
2013)
3. Esterilización de un Medio de Cultivo
La esterilización se realiza en un autoclave a 121 ºC durante 15-20 min. Los medios de cultivo
en tubo se fraccionan antes de esterilizar y se introducen en el autoclave tapados con algodón
graso y papel de aluminio. Sin embargo, los medios sólidos en placa se suelen esterilizar en
recipientes grandes (botellas o matraces) con tapón de plástico o algodón graso.
Posteriormente se recomienda esperar a que la temperatura baje a unos 45-50 ºC para
fraccionarlo en placas, siempre cerca del mechero para evitar contaminación ambiental. El
fraccionamiento consiste en depositar una pequeña cantidad en la placa, hasta que alcance
unos 4 mm de altura. Dejar enfriar a temperatura ambiente hasta que solidifique por completo.
Una vez sólido, se invierte (de tal forma que la superficie de apoyo sea la tapa de la placa) y se
almacena refrigerado a 4 ºC. . (Cuevas, 2010)
4. Preparación de medios de cultivo sólidos y líquidos
Antes de su esterilización los medios líquidos se reparten en los recipientes adecuados (tubos,
matraces, etc.). Si es un medio sólido y se ha de distribuir en tubos ó en matraces será
necesario fundir el agar en baño Maria u horno microondas, una vez fundido y homogenizado,
se distribuye en caliente a los tubos ó matraces (no en placas Petri) se tapa y se esteriliza en el
autoclave. Una vez finalizada la esterilización los medios se dejaran enfriar a temperatura
ambiente y en el caso de medios sólidos contenidos en tubos deberán, en su caso, inclinarse
para que al solidificarse adopten la forma de agar inclinado ó pico de flauta(slant) si tal es su
finalidad. (Manual básico de microbiología, 2012)
BIBLIOGRAFÍA
Cuevas, L. B. (2010). Microbiología clínica. Madrid: EDITORIAL SÍNTESIS, S. A.

Dante Israel León-de la O, B. C.-Y.-B. (2013). Formulación y optimización de un medio de

cultivo económico para Lactobacillus con potencial probiótico aislado del pulque.
Facultad de Ciencia y Tecnología, 134-135.

Manual básico de microbiología. (2012). CULTIMED, 26.