INFLUENCIA DE LA COLCHICINA SOBRE LA DIVISIÓN CELULAR

I. COMPETENCIAS

1. Aplica tratamientos con colchicina sobre meristemos en división celular y comprende

los cambios producidos por la acción del alcaloide.

2. Determina el índice mitótico y el índice de fase, y el aumento en células en metafase.

3. Explica los daños que pueden producirse a nivel molecular por la acción de fármacos o
químicos

4. Demuestra interés y responsabilidad.

II. INTRODUCCIÓN:

El proceso de división celular puede sufrir modificaciones tanto por factores naturales como la
presencia de factores llamados exógenos o medio ambientales. Tales modificaciones, según su
mecanismo formador reciben denominaciones propias como endomitosis, C-mitosis,
poliploidía, endoreduplicación, etc.

Se tiene por entendido que al finalizar la profase desaparece la membrana nuclear, sin
embargo, por tratamiento con agentes químicos no desaparece la membrana nuclear,
continuando el proceso mitótico así llamado endomitosis en le interior de la misma
(endoprofase, endometafase,endoanafase,endotelafase).En la endoanafase las cromátides se
separan, pero no migran hacia los polos ni hay citocinesis , de manera que los 4n cromátides
entran en interfase y al reproducirse en el periodo S siguiente darán lugar a 4n cromosomas ;
es decir se ha duplicado el número cromosomico.es el fenómeno de la endopoliploidia , si bien
este término general abarca también la endoreduplicación.

La endoreduplicacion es el fenómeno en la que después de un periodo de síntesis (S) el núcleo

no entra en mitosis, sino que vuelve a experimentar otro periodo S, los cromosomas vuelven a
reproducir sus cromátides, formándose cromosomas con 4 cromátides (duplocromosomas),
con ocho (cuadruplocromosomas), etc. El caso extremo de la endoreduplicación es el de la
Politenia, que da lugar a los cromosomas gigantes o cromosomas politénicos encontrados en
las glándulas salivales y otros tejidos de gran actividad metabólica de los dípteros.

La colchicina es un alcaloide soluble en agua derivado del Colchicum autumnale que bloquea la
división celular, es decir provoca la despolimerización de la tubulina que forma las fibras del
huso acromático. A la no formación del huso los cromosomas no se colocan en placa y siguen
espiralizándose acortando su longitud, separándose más entre sí y facilitando su conteo.

De otro lado la colchicina actúa de forma casi instantánea pues penetra en las células
rápidamente, y de la misma manera se elimina fácilmente al lavar y poner de nuevo en agua la
germinación de los bulbos. Si el tiempo de tratamiento es prolongado las células tratadas se
mueren, pero si el tratamiento no es suficientemente largo como para producir el bloqueo de
la célula, cuando se elimina la colchicina se recupera la actividad metabólico normal y se
continua la división.
Si el tratamiento con colchicina es muy corto, solo se alterarán las etapas de las mitosis muy
próximas al momento de acción de la droga y mientras más se prolongue el tratamiento más
se extenderán los efectos, alcanzando así progresivamente distintas fases mitóticas.

Por los efectos que produce este alcaloide, al obtener un mayor número de células en
metafase, en los estudios de cariotipo es una sustancia de uso obligado. Las mitosis que se
realizan bajo la acción de esta droga se llaman c- mitosis.

III. MATERIAL Y MÉTODOS

• MATERIALES

1. Bulbos frescos de Allium cepa (20-30 grs)

2. Frascos de vidrio de 8 ml. De capacidad

3. Aereador de acuario

4. Equipo de venoclisis

5. Orceina acética 2%

6. Colchicina en solución acuosa 0.125%(125 ug/l)

7. Mechero de alcohol

8. Papel filtro

9. Laminas, laminillas

10. Microscopio

IV. MÉTODO

1. Mantener los bulbos en un sistema para lograr el crecimiento de los meristemos

radiculares, en frasco cilíndricos de vidrio, con agua corriente filtrada y removida cada 24
horas, en cuarto oscuro. Permitir el crecimiento durante 2-3 días.

2. Cuando las raíces presentan 2 – 3 cm de longitud, colectar 4 ó 6 raicillas y colocarlas en

solución fijadora de Carnoy (puede permanecer en el fijador entre 12 – 24 horas), después el
material es enjuagado con agua destilada y transferido a una solución de alcohol a 70° y
conservado a refrigeración. Este material posteriormente será procesado como testigo.

3. Un grupo de raicillas (2-3 cm.) del mismo bulbo serán colocadas en una solución de
colchicina al 0.125% y mantener un tratamiento por una hora.

4. Colorear por separado en lunas de reloj con orceína acética clorhídrica, calentando
hasta la emisión de vapores, dejando enfriar 5 minutos; repetir la operación dos veces y dejar
enfriar 10 minutos.
5. Cortar 2 -3 mm de los extremos apicales de la muestra testigo y del tratamiento por
separado, en laminillas portaobjetos y añadirles una gota de colorante orceína. Cubrir la
preparación con una laminilla y golpear suavemente con un lápiz a fin de lograr una extensión
adecuada del preparado.

6. Cubrir con un pedazo de papel filtro, presionar con el pulgar el cubreobjeto (squash)y
así eliminar el resto de colorante.

7. Realizar observación microscópica

fórmula IM = (Número de células en mitosis / Total de células) x

100,