Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi n-Heksana Batang Kecombrang (Etlingera elatior

(Jack))
Anita Halimah1, Asep Supriadin, Tety Sudiarti
Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sunan Gunung Djati Bandung,
Bandung, Indonesia
e-mail: anitahalimah7@gmail.com

ABSTRACT

ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF KECOMBRANG (Etlingera elatior (Jack))

STEM n-HEXANE FRACTION

Kecombrang plant (Etlingera elatior (Jack)) is a spice plant which has not been much
researched the content of secondary metabolite compounds and its bioactivity as
antibacterialulis, especially in the stem. The research aims to determine what secondary
metabolite compounds contained in the fraction and its activity as antibacterial to
bacteria Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Concentrated extract of n-hexane
are separated using Liquid Vacuum Chromatography (LVC), Gravity Column
Chromatography (GCC) and Thin Layer Chromatography (TLC). Phytochemical test
were carried out on concentrated extracts of n-hexane which showed positive results of
alkaloids and steroid, as well fractionation results show positive terpenoids. Antibacterial
activity test results of fraction of GGC number 1 of kecombrang stem againts bacteria
Staphylococcus aureus have weak antebacterial potential proven from the diameter of
the inhibitory power <5mm and inactive in Escherichia coli. While the results of the
fraction of GGC number 2 are not active in bacteria Staphylococcus aureus and
Escherichia coli.

Keywords: Etlingera elatior (Jack); Chromatography; Staphylococcus aureus;

Escherichia coli; Antibacterial.

PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara yang
kaya akan sumber daya alam. Sekitar
30.000 spesies tanaman tumbuh di
Indonesia dan sekitar 1.260 spesies
berkhasiat sebagai obat. Kajian ilmiah
mengenai tanaman obat-obatan di
Indonesia masih sangat terbatas.
Umumnya masyarakat memanfaatkan
tanaman obat-obatan berdasarkan
pengetahuan tradisional. Selain
berkhasiat sebagai obat, beberapa
tanaman banyak dimanfaatkan sebagai
pemberi citarasa pada masakan [1].
Tanaman kecombrang merupakan
salah satu tanaman obat-obatan yang
juga banyak dimanfaatkan sebagai
penghilang bau badan dan mulut, serta
obat luka. Tanaman ini merupakan
tanaman rempah-rempah yang termasuk
ke dalam golongan Zingiberaceae.
Kecombrang memiliki dua varietas yaitu
berdaun merah (Etlingera
hemisphaerica (Blume)) yang biasa
digunakan untuk obat demam dan
berdaun hijau (Etlingera elatior (Jack)
yang biasa digunakan dalam bumbu
masakan dan obat-obatan tradisional.
Penggunaannya sebagai sumber obat-
obatan hanya didasarkan pada
pengetahuan tradisional. Sehingga perlu
kajian imiah mengenai khasiatnya
sebagai tanaman obat dan senyawa
bioaktif yang terkandung di dalamnya
[2].
Berbagai penelitian telah
dilakukan mengenai kandungan
senyawa dalam tumbuhan kecombrang.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan
Naufalin dkk (2009), dilaporkan bahwa
batang kecombrang bagian dalam
mengandung senyawa alkaloid, saponin,
fenolik, flavonoid, triterpenoid, steroid,
dan glikosida yang dapat berfungsi
sebagai antimikroba [3]. Penelitian yang
dilakukan Hudaya (2010) menyatakan
bahwa ekstrak air bunga kecombrang
bersifat antibakteri terhadap
Staphylococcus aureus dan Escherichia
coli. Penelitian lain mengungkapkan
bahwa fraksi n-heksana ekstrak batang
kecombrang dapat memberikan efek
larvasida pada larva III Aedes aegypty
yang menyebabkan kematian pada larva
tersebut [4].
Informasi mengenai pengujian zat
antibakteri batang kecombrang masih
sangat terbatas. Berdasarkan hal
tersebut, maka perlu adanya penelitian
lebih lanjut terhadap batang kecombrang
untuk mengetahui senyawa metabolit
sekunder dan bioaktivitasnya. Maka dari
itu, dalam penelitian ini akan dilakukan
uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana
batang kecombrang (Etlingera elatior
(Jack)).
EKSPERIMEN
Material
Sampel yang digunakan dalam
penelitian ini adalah batang kecombrang
merah (Etlingera elatior (Jack)) yang
diperoleh dari Pangandaran, Jawa Barat.
Bahan bahan yang digunakan
dalam penelitian ini adalah n-heksana
p.a, etilasetat p.a, H2SO4 pekat, FeCl3
1%, dan HCl pekat, pita Mg, amil
alkohol, anhidrida asetat, reagensia
pendeteksi senyawa bahan alam, bakteri
Escherichia coli ATCC 11229 dan
Staphylococcus aureus ATCC 6538,
Mueller Hinton Broth (MHB), Nutrient
Broth (NB), AB (Agar Bacterial),
DMSO, n-heksana, amoxicilin.
Alat-alat yang digunakan meliputi
bejana maserasi, kaca arloji, spatula,
blender, neraca analitik, filter 20 mikron,
corong, botol vial, tabung reaksi,
seperangkat alat kromatografi kolom
berbagai ukuran, botol semprot, sprayer,
tisu, lampu UV 315-400 nm dan 100-280
nm, rotatory evaporator, plat silika
GF254, mikro tube, cawan petri, tips,
mikropipet, kertas cakram, kapas lidi,
inkubator, vortex, laminar, autoklap,
jangka sorong, dan colony counter.
Instrumentasi
Instrumen yang digunakan dalam
penelitian ini yaitu UV-VIS.
Prosedur
Preparasi Sampel
Batang Kecombrang dipotong
menjadi ukuran yang lebih kecil dan
dikeringkan dengan cara diangin-
anginkan. Batang kecombrang kering
dihaluskan menggunakan blender
hingga menjadi serbuk. Serbuk kering
yang diperoleh sebanyak 2,5 kg
Pemisahan Senyawa Metabolit Sekunder
Serbuk kering sebanyak 2,5 kg
dimaserasi dengan n-heksana selama
3x24 jam pada suhu ruang. Ekstrak kasar
disaring dan dipekatkan, sehingga
menghasilkan ekstrak pekat n-heksana
13,7487 gram.
Ekstrak pekat yang didapat
selanjutnya dipisahkan dengan
kromatografi vakum cair (KVC) yang
menghasilkan 14 fraksi senyawa. Fraksi
tersebut dipisahkan dengan kromatografi
kolom gravitasi yang menghasilkan 140
fraksi. Fraksi tersebut dikelompokkan
sesuai dengan noda yang sama. Fraksi
30-70 memiliki noda target yang
selanjutnya dipisahkan kembali dengan
KKG menghasilkan 26 fraksi. Setiap
selesai pemisahan dilakukan monitoring
dengan KLT. Noda target terdapat pada
fraksi 3- yang sudah berbentuk kristal.
Selanjutnya kristal digabungkan dan
dimurnikan. Isolat yang dihasilkan diuji
fitokimia dan diuji aktivitasnya sebagai
antibakteri.
Uji Fitokimia
Uji fitokimia dilakukan terhadap
golongan senyawa alkaloid, flavonoid,
terpenoid, steroid, tanin, dan saponin.
Prosedur kerjanya sebagai berikut:
a. Terpenoid dan Steroid
Sebanyak 1 mL ekstrak
ditambahkan 2 tetes anhidrida asetat dan
diaduk. Setelah itu diteteskan 1-2 tetes
H2SO4 pekat kemudian diamati warna
yang terbentuk. Adanya steroid
ditunjukkan oleh warna biru atau hijau,
sedangkan terpenoid memberikan warna
merah atau ungu [5].
b. Alkaloid
Pengujian alkaloid dilakukan
dengan 3 metode yaitu dengan pereaksi
Bouchardat, pereaksi Meyer dan
pereaksi Dragendorff. Sebanyak 1 mL
ekstrak ditambahkan dengan 1-2 tetes
pereaksi Bouchardat, Meyer dan
Dragendorff pada masing-masing
tabung reaksi kemudian diamati
perubahan yang terjadi. Pada uji dengan
pereaksi Bouchardat, bila terbentuk
endapan maka positif alkaloid. Pada uji
dengan pereaksi Meyer, adanya alkaloid
ditandai dengan terbentuknya endapan
kuning muda. Pada uji dengan pereaksi
Dragendorff, adanya alkaloid ditandai
dengan terbentuknya endapan jingga [6].
c. Flavonoid
Sebanyak 1 mL ekstrak
ditambahkan 5 tetes etanol dan dikocok
sampai homogen, kemudian
ditambahkan serbuk Mg dan 5 tetes HCl
pekat. Timbulnya warna kuning, orange
atau merah menunjukkan adanya
flavonoid [7].
d. Tanin
Sebanyak 1 mL ekstrak
ditambahkan beberapa tetes FeCl3 1%.
Timbulnya warna hijau, ungu, atau hitam
menunjukkan adanya senyawa tanin [8].
e. Saponin
Sebanyak 1 mL ekstrak
dimasukkan ke dalam tabung reaksi
kemudian dikocok secara vertikal
selama satu detik. Lalu diamati
perubahan yang terjadi. Terbentuknya
busa atau buih setelah penambahan HCl
2 N menunjukkan reaksi yang positif
untuk saponin [8].
Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri dilakukan
dengan metode cakram kertas terhadap
bakteri Staphylococcus aureus ATCC
6538 dan Escherichia coli ATCC 11229
[9].
a. Pembuatan Media Mueller Hinton
Agar (MHA)
Serbuk Mueller Hinton Broth
(MHB) dan Agar Bacterial (AB)
ditimbang masing-masing sebanyak 2,3
gram dan 2 gram. Kedua serbuk tersebut
dicampurkan dan dilarutkan dengan 100
mL akuabides dalam erlenmeyer
kemudian dihomogenkan serta
disterilisasikan dalam autoklaf. Media
yang telah steril dituangkan ke dalam
cawan petri steril. Cawan petri kemudian
digoyangkan berlawanan arah jarum jam
sebanyak 5-10x dan digoyangkan lagi
searah jarum jam sebanyak 5-10x agar
media. Selanjutnya dibiarkan hingga
memadat.
b. Pembuatan Media Nutrient Agar (NA)
Serbuk Nutrient Broth (NB) dan
Agar Bacterial (AB) ditimbang masing-
masing sebanyak 0,8 gram dan 2 gram,
keduanya dicampurkan dan dilarutkan
dengan 100 mL akuabides dalam
erlenmeyer kemudian dihomogenkan.
Media yang homogen disterilisasi dalam
autoklaf. Setelah media disterilisasi,
kemudian dituangkan ke dalam cawan
petri steril. Cawan petri kemudian
digoyangkan berlawanan arah jarum jam
sebanyak 5-10x dan digoyangkan lagi
searah jarum jam sebanyak 5-10x agar
media. Selanjutnya dibiarkan hingga
memadat.
c. Sterilisasi Alat dan Bahan
Semua alat dan bahan yang
digunakan dalam pengujian antibakteri
dilakukan sterilisasi terlebih dahulu.
Cawan petri, tabung reaksi, vial, tip,
mikro tube, beserta wadah yang telah
dicuci bersih dan dikeringkan dibungkus
dengan kertas sedangkan kertas cakram
dimasukkan ke dalam cawan petri
bersih. Semua alat serta media Mueller
Hinton Broth (MHB) dan media Nutrient
Agar (NA) disterilisasi dalam autoklaf
121 ℃ selama 120 menit.
d. Pembuatan Suspensi Bakteri
Bakteri Staphylococcus aureus
ATCC 6538 yang telah diinokulasi
diambil dengan kawat ose steril lalu
disuspensikan ke dalam tabung yang
berisi 7 mL Nutrient Broth (NB) dan 3
mL bakteri. Perlakuan sama dilakuka
pada bakteri Escherichia coli ATCC
11229 namun disuspensikan ke dalam
tabung yang berisi 8 mL Mueller Hinton
Broth (MHB) dan 2 ml bakteri.
e. Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan
melarutkan fraksi n-heksana batang
kecombrang pada pelarut DMSO untuk
fraksi KKG ke-2 (C3-C6) dan pelarut n-
heksana untuk fraksi KKG ke-1 (B20-
B29). Kedua fraksi dibuat dengan
mengencerkannya menjadi 10%, 7,5%,
dan 5%. Sebagai kontrol positif berupa
larutan amoxicillin dan kontrol negatif
berupa pelarut sampel larutan uji.
f. Prosedur Uji Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri
fraksi n-heksana batang kecombrang
dilakukan dengan menggunakan metode
cakram kertas. Prosedur pengujiannya
yaitu dengan mengambil suspensi
bakteri uji dengan kapas lidi dan
dioleskan ke dalam media agar.
Selanjutnya variasi konsentrasi larutan
uji, kontrol positif dan kontrol negatif
diteteskan pada kertas cakram steril
sebanyak 15 µL dan dibiarkan beberapa
saat. Kertas cakram yang telah ditetesi
diletakan secara teratur di atas medium
agar dan diinkubasi selama 24 jam pada
suhu 37 ˚C. Uji antibakteri ini dilakukan
pengulangan dua kali. Diameter zona
hambat diukur dengan menggunakan
jangka sorong dan dibandingkan dengan
zona hambat pada kontrol positif
amoxicillin. Daya hambat ditentukan
dengan cara mengurangi diameter zona
hambat yang terbentuk dengan diameter
kertas cakram.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Batang Kecombrang
Ekstraksi merupakan proses
pemisahan suatu komponen kimia yang
terdapat dalam simplisia. Ekstraksi ini
didasarkan pada perpindahan massa
komponen zat padat kedalam pelarut
dimana perpindahan mulai terjadi pada
lapisan antar muka, kemudian berdisfusi
masuk kedalam pelarut. Metode yang
digunakan dalam penelitian ini yaitu
metode ekstraksi maserasi. Maserasi
dilakukan dengan cara perendaman
simplisia dalam pelarut. Proses
perendaman akan mengakibatkan
perbedaan konsentrasi antara diluar sel
dan didalam sel akan menyebabkan
terjadinya pemecahan dinding dan
membran sel pada sampel tumbuhan,
sehingga senyawa metabolit sekunder
yang ada dalam membran sel akan
terlarut dalam pelarut. Pelarut akan
masuk ke dalam sel melewati dinding
sel. Isi sel akan larut karena adanya
perbedaan konsentrasi antara larutan di
dalam sel dengan di luar sel. Larutan
yang konsentrasinya tinggi akan
terdesak keluar dan diganti oleh pelarut
dengan konsentrasi rendah (proses
difusi). Peristiwa tersebut berulang
sampai terjadi keseimbangan
konsentrasi antara larutan di luar sel dan
a b
Gambar 1 a. KLT hasil KVC A1-A14 di bawah sinar UV dekat (λ=254 nm), b. KLT hasil KVC A1-
A14 di bawah sinar UV jauh (λ=365 nm)
di dalam sel.
Fraksinasi Senyawa
Ekstrak pekat batang kecombrang
(Etlingera elatior (Jack)) sebanyak
13,7487 gram dipisahkan dengan
menggunakan metode kromatografi
yang didasarkan pada perbedaan
kepolaran antara fasa gerak dan fasa
diam.
Pemisahan dilakukan dengan
kromatografi vakum cair (KVC),
kromatografi kolom gravitasi (KKG),
dan kromatografi lapis tipis (KLT).
Pemisahan dengan kromatografi vakum
cair (KVC) dilakukan untuk
mempercepat pemisahan karena sampel
yang akan dipisahkan relatif banyak.
Hasil pemisahan dari kromatografi
vakum cair adalah fraksi-fraksi yang
dapat dikelompokkan menjadi kelompok
senyawa non poar, semi polar dan polar.
Proses pemisahan dengan KVC ini
menghasilkan 14 fraksi yang selanjutnya
dianalisis dengan kromatografi lapis
tipis (KLT) pada plat silika GF254
menggunakan eluen n-heksana:etil
asetat (9:1) yang dapat dilihat pada
Gambar 1.
Hasil KLT dapat dilihat dengan
menggunakan sinar UV dekat dengan
λ=254 nm dan sinar UV jauh λ=365 nm.
Pada UV dekat, lempeng akan
berflourensi sedangkan noda sampel
akan berwarna gelap. Penampakan noda
terjadi karena adanya daya interaksi
antara sinar UV dengan indikator
fluoresensi yang terdapat pada lempeng.
Fluoresensi cahaya tampak merupakan
emisi cahaya yang dipancarkan oleh
komponen tersebut ketika elektron yang
tereksitasi dari tingkat energi dasar ke
tingkat energi yang lebih tinggi
kemudian kembali ke keadaan semula
sambil melepaskan energi.
Sementara itu, pada sinar UV jauh
noda sampel akan berfluoresensi dan
lempeng akan berwarna gelap.
Penampakan noda pada lampu UV365
karena adanya interaksi antara sinar UV
dengan gugus kromofor yang terikat oleh
ausokrom yang ada pada noda sampel
tersebut. Sehingga noda yang tampak
terlihat terang karena silika gel tidak
berfluoresensi pada sinar tersebut.
Hasil KVC fraksi A2-A6 memiliki
plot noda, yang selanjutnya dianalisis
 a b
Gambar 2 a. KLT hasil KVC A3-A6 di bawah sinar UV dekat (λ=254 nm), b. KLT hasil
KVC A3-A6 di bawah sinar UV jauh (λ=365 nm)

kembali dengan KLT untuk mengetahui
noda yang sama sehingga bisa
digabungkan. Hasilnya menunjukkan
bahwa fraksi A3-A6 memiliki noda yang
sama yang dapat dilihat pada Gambar 2.
Fraksi A3-A6 digabungkan dan
dievaporasi sehingga didapat fraksi n-
heksana pekat sebanyak 5,2965 gram.
Fraksi A3-A6 yang telah pekat dilakukan
pemisahan dengan kromatografi kolom
gravitasi (KKG).
polar akan keluar terlebih dahulu karena
akan terelusi atau terbawa oleh pelarut
pengelusi (fasa gerak). Pemisahan KKG
ini menghasilkan 140 tampungan.
Senyawa target yang akan diuji
aktivitas antibakterinya berada pada
tampungan B30-B70 yang dapat dilihat
pada Gambar 3, dan tampungan B20-
B29 menjadi pembanding dalam uji
aktivitas antibakteri yang dapat dilihat
pada Gambar 4. Fraksi pada tampungan

a b
Gambar 3 a. KLT hasil KKG B1-B140 di bawah sinar UV dekat (λ=254 nm), b. KLT hasil KKG B1-
B140 di bawah sinar UV jauh (λ=365 nm)

Prinsip dasar dari kromatografi B30-B70 digabungkan dan dievaporasi

kolom gravitasi adalah perbedaan sehingga didapat fraksi n–heksana pekat
kecepatan gerak antara komponen dalam sebanyak 0,5361 gram.
sampel dengan fasa diam. Sehingga
senyawa yang lebih polar akan tertahan
oleh fasa diam dan senyawa yang kurang

Gambar 4 KLT hasil KKG B20-B29
Fraksi B30-B70 yang telah pekat
dilakukan pemisahan kembali dengan
KKG karena memiliki noda yang relatif
masih banyak. Pemisahan KKG ke-2 ini
menghasilkan 26 tampungan yang
dianalisis dengan KLT yang dielusi
dengan eluen n–heksana:etil asetat (7:3)
yang dapat dilihat pada. Hasil KLT
menunjukkan noda yang sama pada
tampungan C3-C6 yang telah berbentuk
kristal yang dapat dilihat pada Gambar
5.
Gambar 5 Kristal C3-C6
Kristal yang terbentuk masih
terlihat adanya bercak warna hijau
sehingga perlu proses pemurnian dengan
menggunakan metode rekristalisasi.
Rekristalisasi yaitu pemurnian suatu zat
padat berdasarkan perbedaan kelarutan.
Pelarut yang digunakan dipilih
berdasarkan kemampuan melarutkan zat
yang akan dimurnikan.
Setelah rekristalisasi, dilakukan
proses pencucian menggunakan pelarut
metanol agar sisa pengotor yang
menempel pada sampel bisa terpisah
sehingga didapatkan kristal yang lebih
murni, ditandai dengan warna kristal
yang lebih putih. Kristal yang telah
dicuci dianalisis dengan KLT yang
dielusi dengan eluen n-heksana:etil
asetat (7:3) yang dapat dilihat pada
Gambar 6. Kristal ini selanjutnya
dilakukan pengujian antibakteri dengan
Gambar 6 KLT hasil rekristalisasi
metode cakram kertas.
Uji Fitokimia
Uji fitokimia merupakan uji
kualitatif yang dilakukan untuk
mengetahui kandungan senyawa
metabolit sekunder yang terdapat pada
sampel. Uji fitokimia dilakukan pada
ekstrak kasar dan hasil fraksi KKG ke 1
(B20-B29) serta hasil fraksi KKG ke-2
(C3-C6). Hasil skrining fitokimia
ekstrak dan fraksi n-heksana batang
kecombrang (Etlingera elatior (Jack)
disajikan dalam Tabel 1.
Berdasarkan uji fitokimia pada
ekstrak menunjukkan hasil positif
steroid dan alkaloid pada uji
Dragendroff. Sedangkan pada fraksi
KKG ke-1 (B20-B29) dan fraksi KKG
ke-2 (C3-C6) menunjukkan hasil positif
terpenoid. Identikasi terpenoid dan
steroid dalam percobaan ini
menggunakan uji Lieberman-Burchard
(anhidrida asetat-H2SO4 pekat) yang
memberikan warna hijau-biru.
Perubahan warna yang terjadi
dikarenakan adanya oksidasi pada
golongan senyawa terpenoid/steroid
melalui pembentukan ikatan rangkap
terkonjugasi.
 Tabel 1 Hasil skrining fitokimia batang (Etlingera elatior (Jack))
Uji Fitokimia Pereaksi Hasil
Ekstrak KKG ke-1 KKG ke-2
Terpenoid +++ ++ +
Steroid - - -
Saponin Dikocok - - -
Tanin FeCl3 1% - - -
Alkaloid Bouchardat - - -
Meyer - - -
Dragendroff + - -
Flavonoid Etanol+HCl - - -
encer+serbuk Mg

Prinsip reaksi dalam mekanisme berpindah. Senyawa ini mengalami

reaksi uji terpenoid adalah kondensasi resonansi yang bertindak sebagai
atau pelepasan H2O dan penggabungan elektrofil atau karbokation. Serangan
karbokation yang disajikan dalam karbokation menyebabkan adisi
Gambar 7. Reaksinya diawali dengan elektrofilik, diikuti dengan pelepasan
proses asetilasi gugus hidroksil hidrogen. Kemudian gugus hidrogen
menggunakan asam asetat anhidrida. beserta elektronnya dilepas akibatnya
Gugus asetil yang merupakan gugus senyawa mengalami perpanjangan
pergi yang baik akan lepas, sehingga konjugasi. Hasil positif alkaloid pada uji
terbentuk ikatan rangkap. Dragendroff ditandai dengan

HOAc/H2SO4

HO
+
Ion Karbonium 3,5-Diena

Ac2O
(SO3)

+ SO2

SO3H
Kation Pentanilik
Asam Sulfonik Kolestanheksana

Gambar 7 Reaksi fitokimia terpenoid/steroid

Sumber: Tiwari dkk, 2011

Selanjutnya terjadi pelepasan terbentuknya endapan coklat muda

gugus hidrogen beserta elektronnya sampai kuning yang merupakan kalium-
mengakibatkan ikatan rangkap

Gambar IV.5 KLT hasil rekristalisasi

alkaloid yang reaksinya ditunjukkan ATCC 1229. Metode tersebut dilakukan
pada Gambar 8. dengan cara mengukur diameter daerah
Pereaksi Dragendroff terbuat dari bening di sekitar kertas cakram yang
bismut nitrat yang dilarutkan dalam HCl menunjukkan aktivitas antibakteri.
agar tidak terjadi hidrolisis karena Daerah bening merupakan petunjuk
garam-garam bismut mudah terhidrolisis kepekaan bakteri terhadap antibiotik
membentuk ion bismutil (BiO+). Agar atau bahan antibakteri lainnya yang
ion Bi3+ teteap berada dalam larutan, digunakan sebagai bahan uji yang
dinyatakan dengan lebar diameter zona
Bi(NO3)3 + 3KI BiI3 + 3KNO3 hambat. Diameter zona hambat diukur
Coklat
dalam satuan millimeter (mm)
menggunakan jangka sorong dengan
BiI3 + KI K[BiI4]
cara diameter keseluruhan dikurangi
Kalium tetraiodobismut diameter kertas cakram sebesar 6 mm.
Kemudian diameter zona hambat
+ K[BiI4] + [BiI4] tersebut dikategorikan kekuatan daya
N N oranye
anti bakterinya berdasarkan
K+
Kalium-Alkaloid
penggolongan Davis and Stout (1971)
endapan
[10].
Gambar 8 Reaksi alkaloid dengan reagen Bakteri S. Aureus dan E. Coli
Dragendroff diinokulasikan pada media yang
berbeda. S. aureus diinokulasikan pada
Sumber: Tiwari dkk, 2011
media MHA (Mueller Hinton Agar),
sedangkan E. coli diinokulasikan pada
media NA (NutrientAgar) . Media MHA
terdiri dari campuran MHB (Mueller
Hinton Broth) dan AB (Agar Bacterial),
sedangkan media NA terdiri dari
maka larutan ditambah asam sehingga campuran NB (Nutrient Broth) dan AB
kesetimbangan akan bergeser ke arah (Agar Bacterial). Media MHA memiliki
kiri. Gambar IV.6ion
Selanjutnya Bi3+hasil
a. KLT dari KVC di
bismut komposisi yaitu ekstrak beef, kasein
nitrat bereaksi
bawah dengan
sinar UV dekatkalium iodideb.
(λ=254 nm), hidrolisat, pati dan agar. Sementara itu,
membentuk endapan hitam Bismut(III) media NA terdiri dari ekstrak beef,
KLT yang
iodida hasil KVC di bawah
kemudian sinar UV
melarut jauh
dalam pepton, NaCl, dan agar. Ekstrak beef dan
kalium iodida (λ=365berlebih
nm) membentuk pepton berfungsi sebagai sumber
kalium tetraiodobismutat [26]. Pada uji protein, nitrogen, vitamin dan
alkaloid dengan pereaksi Dragendorff, karbohidrat bagi bakteri. NaCl berfungsi
nitrogen digunakan untuk membentuk untuk mempertahankan keseimbangan
ikatan kovalen koordinat dengan K+ osmotik, dan agar digunakan sebagai
yang merupakan ion logam. medium pembeku yang mengandung
karbohidrat berupa galaktam yang tidak
Uji Aktivitas Antibakteri mudah diurai oleh mikroorganisme.
Pengujian antibakteri batang Penentuan media tumbuh ini
kecombrang (Etlingera elatior (Jack)) didasarkan pada product sheet ATCC
dilakukan dengan mengukur Diameter bakteri tersebut dimana media untuk
Daya Hambat (DDH) terhadap bakteri E. coli ATCC 1229 yaitu NA dan
pertumbuhan bakteri Staphylococcus media untuk bakteri S. aureus yaitu
aureus ATCC 6538 dan Escherichia coli MHA. Sebenarnya, media MHA dan NA
merupakan media yang umum untuk
pertumbuhan mikroorganisme tidak
selektif (heterotrof) seperti E. coli dan S.
aureus. Artinya baik E. coli maupun S.
aureus dapat tumbuh pada kedua media
tersebut. Akan tetapi berdasarkan nutrisi
yang dibutuhkannya, S. aureus akan
tumbuh optimal pada media MHA
dibandingkan NA. Media MHA
mengandung kasein hidrolisat sebagai
sumber asam amino prolin yang mana
asam amino tersebut merupakan salah
satu faktor yang dapat mengoptimalkan
pertumbuhan bakteri aureus.
Uji aktivitas antibakteri pada hasil
fraksi KKG ke-1 dan fraksi KKG ke-2
menggunakan variasi konsentrasi
dengan kontrol positif amoxicillin dan
kontrol negatif yang berbeda sesuai
dengan pelarut yang dapat melarutkan
sampel. Kontrol negatif n-heksana
digunakan pada fraksi KKG ke-1 dan
kontrol negatif DMSO digunakan pada
fraksi KKG ke-2. Sampel KKG ke-2
(tampungan 3-6) menggunakan pelarut
Tabel 02 Aktivitas Antibakteri batang Etlingera elatior terhadap
bakteri E.Coli dan S.aureus
Zona Hambat E. coli
Konsentrasi
KKG ke-1 KKG ke-2
Kontrol + 7,05 mm 4,85 mm
Kontrol - - -
10% - -
7,5% - -
5% - -
Berdasarkan data Tabel 0.2 terjadi
aktivitas antibakteri pada bakteri S.
aureus oleh fraksi KKG ke-1, sebaliknya
tidak terjadi aktivitas antibakteri atau
penghambatan oleh fraksi KKG ke-2.
Sementara itu, pada bakteri E. coli tidak
terjadi penghambatan baik oleh sampel
fraksi KKG ke-1 maupun sampel fraksi
KKG ke-2.
Aktivitas antibakteri yang terjadi
pada bakteri S. aureus oleh fraksi KKG
ke-1 dapat dilihat dari adanya daerah
DMSO karena sampel tidak larut dalam
fraksinya yaitu n-heksana. Penggunaan
DMSO sebagai pelarut dikarenakan
dapat melarutkan hampir semua
senyawa baik polar maupun non-polar.
Selain itu, DMSO tidak mempunyai
daya hambat terhadap bakteri sehingga
tidak mempengaruhi aktivitas
antibakteri batang kecombrang. Kontrol
negatif yang berbeda tidak
mempengaruhi hasil kontrol, karena
kedua pelarut tidak mempunyai daya
hambat terhadap bakteri.
Pengujian antibakteri dilakukan
secara duplo untuk mendapatkan hasil
yang baik. Penentuan konsentrasi
sampel ditentukan oleh banyaknya
sampel. Konsentrasi sampel pada fraksi
KKG ke-1 dan KKG ke-2 yaitu 10%,
7,5% dan 5%. Variasi konsentrasi
sampel ditujukan untuk mengetahui
pengaruhnya terhadap penghambatan
pertumbuhan bakteri uji. Hasil uji
aktivitas antibakteri disajikan pada
Tabel 2.
Zona Hambat S. aureus
KKG ke-1 KKG ke-2
25,1 mm 7,31 mm
- -
2,9 mm -
2,08 mm -
1,5 mm -
bening di sekitar kertas cakram yang
menunjukkan terjadinya penghambatan
pertumbuhan koloni bakteri akibat
pengaruh senyawa bioaktif yang terdapat
pada fraksi batang kecombrang.
Aktivitasnya dikategorikan lemah
karena memiliki diameter zona hambat
<5 mm. Pengkategorian tersebut
berdasarkan Davis and Stout (1971),
yang menyatakan kriteria kekuatan daya
antibakteri dengan diameter zona
hambat <5 mm dikategorikan lemah,
zona hambat 5-10 mm dikategorikan
sedang, zona hambat 10-20 mm
dikategorikan kuat, dan zona hambat
>20 mm dikategorikan sangat kuat.
Zona hambat pada konsentrasi
10%, 7,5% dan 5% berturut-turut sebesar
2,9 mm, 2,08 mm dan1,5 mm. Semakin
besar konsentrasi fraksi maka semakin
baik dalam proses menghambat
pertumbuhan bakteri. Fraksi dengan
konsentrasi yang lebih kecil memiliki
jumlah kandungan senyawa metabolit
sekunder bersifat bioaktif yang lebih
sedikit sehingga memiliki daya hambat
yang lebih kecil dibandingkan fraksi
dengan konsentrasi yang lebih besar.
Senyawa bioaktif yang berperan
sebagai antibakteri yaitu terpenoid.
Berdasarkan uji fitokimia, sampel fraksi
KKG ke-1 dan ke-2 memiliki senyawa
bioaktif yang sama yaitu terpenoid.
Mekanisme terpenoid sebagai
antibakteri berhubungan dengan
membran lipid dan sensitivitas terhadap
komponen non polar yang menyebabkan
kebocoran pada liposom. Terpenoid
dapat berinteraksi dengan membran
fosfolipid yang bersifat permeabel
terhadap senyawa-senyawa lipofilik
sehingga menyebabkan integritas
membran menurun serta morfologi
membran sel berubah yang
menyebabkan sel rapuh dan lisis.
Fosfolipid merupakan golongan
senyawa lipid dan merupakan bagian
dari membran sel. Molekul fosfolipid
mempunyai sebuah “kepala” yang polar
dan hidrofilik yaitu gugus fosfatnya
sendiri dan dua buah “ekor” yang
nonpolar dan hidropobis yakni bagian
asam lemaknya. Bagian “ekor” inilah
yang dapat berinteraksi dengan senyawa
terpenoid dan menyebabkan sel lisis
sehingga terjadi kerusakan pada dinding
sel bakteri.
Sebaliknya, tidak terjadi aktivitas
antibakteri pada bakteri S. aureus oleh
fraksi KKG ke-2. Hal tersebut dapat
disebabkan karena faktor kepekatan
sampel. Kepekatan sampel
mengindikasikan banyaknya kandungan
senyawa bioaktif dalam sampel.
Semakin meningkat kepekatan sampel
maka kandungan senyawa bioaktif
semakin banyak, sebaliknya semakin
menurun kepekatan sampel maka
kandungan senyawa bioaktif semakin
sedikit. Berdasarkan hasil uji fitokimia,
fraksi KKG ke-2 memiliki kepekatan
yang lebih rendah dibandingkan fraksi
KKG ke-1. Artinya bahwa kandungan
senyawa bioakif pada fraksi KKG ke-2
lebih sedikit dibandingkan fraksi KKG
ke-1. Hal tersebut mempengaruhi hasil
uji aktivitas antibakteri.
Sementara itu, pada bakteri E. coli
tidak terjadi penghambatan baik oleh
fraksi KKG ke-1 maupun fraksi KKG
ke-2. Menurut Jenie dan Kuswanto
(1994), keefektifan suatu zat antibakteri
selain dipengaruhi oleh konsentrasi juga
dipengaruhi oleh sifat bakteri uji yang
disebabkan oleh perbedaan kepekaan
dari masing-masing bakteri terhadap zat
antimikroba karena mempunyai struktur
dan komposisi sel yang berbeda. S.
aureus merupakan bakteri gram positif
yang memiliki struktur dinding sel yang
lebih sederhana yang terdiri dari lapisan
peptidoglikan dan membran plasma.
Adapun bakteri E. coli merupakan
bakteri gram negatif yeng mempunyai
sifat kurang rentan terhadap beberapa
antibiotik. Hal ini dikarenakan struktur
dinding sel yang lebih kompleks dan
berlapis tiga dimana lapisan luar berupa
lipoprotein, lapisan tengah berupa
lipopolisakarida, dan lapisan dalam
berupa peptidoglikan.
Jika dibandingkan dengan kontrol
positif, sampel uji fraksi KKG ke-1 dan
KKG ke-2 kurang efektif sebagai
antibakteri. Kontrol positf pada bakteri
uji E. coli dengan sampel uji KKG ke-1
dan KKG ke-2 berturut-turut 7,05 mm
yang dikategorikan sedang dan 4,85 mm
yang dikategorikan lemah. Sedangkan
kontrol positf pada bakteri uji S. aureus
dengan sampel uji KKG ke-1 dan KKG
ke-2 berturut-turut 25,1 mm yang
dikategorikan sangat kuat dan 7,31 mm
yang dikategorikan sedang. Kontrol
positif pada kedua bakteri ini adalah
amoxicillin. Amoxicillin merupakan
antibiotik yang digunakan dalam
pengobatan berbagai infeksi bakteri.
Amoxicillin akan menginhibisi
biosintesis dinding sel bakteri dan dapat
menembus pori-pori di membran
posfolipid pada bakteri gram negatif.
SIMPULAN
Dari hasil penelitian ini dapat
ditarik kesimpulan sebagai berikut:
1. Berdasarkan hasil uji fitokimia
terhadap hasil fraksi batang
kecombrang (Etlingera elatior
(Jack)) menunjukkan positif
terpenoid,
2. Hasil penelitian uji aktivitas
antibakteri hasil fraksi KKG ke-1
batang kecombrang (Etlingera elatior
(Jack)) terhadap bakteri
Staphylococcus aureus memiliki
potensi antibakteri yang lemah
terbukti dari diameter daya hambat <5
mm dan tidak aktif pada bakteri
Escherichia coli. Sementara itu, hasil
fraksi KKG ke-2 tidak aktif pada
bakteri Staphylococcus aureus dan
bakteri Escherichia coli.
UCAPAN TERIMA KASIH
Puji dan Syukur penulis panjatkan
kehadirat Allah SWT yang telah
memberi limpahan nikmat dan kasih
sayang. Shalawat dan salam senantiasa
tercurah limpahkan kepada Baginda
Nabi Muhammad SAW.
Pada kesempatan ini penulis
menyampaikan terima kasih khususnya
kepada orang tua yang telah memberikan
dukungan baik moril maupun materil.
Tak lupa juga penulis mengucapkan
terima kasih kepada:
1. Bapak Dr. Asep Supriadin, M.Si.
selaku pembimbing I yang telah sabar
membimbing, memberi saran dan
arahan juga motivasi kepada penulis
selama penelitian hingga
terselesaikannya skripsi ini.
2. Ibu Dr. Tety Sudiarti, M.Si. selaku
pembimbing II sekaligus ketua
Jurusan Kimia Fakultas Sains dan
Teknologi, Universitas Islam Negeri
(UIN) Sunan Gunung Djati Bandung
yang telah memberi saran dan arahan
kepada penulis dalam penyusunan
tugas akhir ini.
3. Ibu Meita Kartika S, S.Pt. dan Lidya
Agustina B, S.Si., selaku Analis di
Laboratorium Mikrobiologi
Laboratorium Sentral Universitas
Padjajaran UNPAD) yang telah
membimbing dan memberi arahan
selama penelitian.
4. Ibu Tsani Adiyanti, S.Si. dan Bapak
Yusuf Rohmatullah, S.S., selaku
Laboran Laboratorium Kimia
Fakultas Sains dan Teknologi
unversitas Islam Negeri Sunan
Gunung Djati Bandung atas bantuan
yang telah diberikan kepada penulis.
5. Seluruh Dosen Jurusan Kimia
Fakultas Sains dan Teknologi yang
telah memberikan banyak ilmu yang
sangat bermanfaat baik selama
perkuliahan maupun di luar
perkuliahan.
6. Rekan-rekan seperjuangan penelitian
organik dan teman-teman angkatan
2014 yang tidak bisa disebutkan satu
persatu yang telah berjuang bersama-
sama dalam penelitian dan
memberikan motivasi, bantuan dan
dukungannya.
7. Semua pihak yang tidak dapat
penulis sebutkan satu persatu yang
telah memberikan banyak bantuan
dalam kelancaran penyusunan dan
penulisan skripsi ini, terimakasih yang [9] Kusmiyati dan N. W. S. Agustini,
sebesar-besarnya. "Skripsi Uji Aktivitas Senyawa
Antibakteri dari Mikrolaga
REFERENSI Porphyridium cruentum", Cibinong:
Pusat Penelitian Bioteknologi,
[1] A. Syamsul, E.H. Hakim. L.D. Lembaga Ilmu Pengetahuan
Juliawati, L. Makmur, S. Kusuma Indonesia (LIPI), 2006.
dan Y.M. Syah, “Eksplorasi Kimia [10] M. Pelezar dan E. Chan, "Dasar-
Tumbuhan Hutan Tropis Indonesia: dasar Mikrobiologi Edisi Ke-2",
beberapa data mikromolekul Jakarta: Universitas Indonesia, 1988.
tumbuhan Laucaceae sebagai
komplemen etnobotani,” dalam
Prosiding Seminar Etnobotani,
Fakultas Biologi UGM,
Yogyakarta, 1995.
[2] A. Dharma, "Tanaman Obat
Tradisional Indonesia", Jakarta: P.N
Balai Pustaka, 1985.
[3] R. Naufalin, H.S. Rukmini, T. Yanto
dan Erminawati, “Formulasi dan
Produksi Pengawet Alami dari
Kecombrang (Nicolaia speciosa
Horan),” dalam Laporan Penelitian
Hibah Kompetensi, Direktorat
Jendral Pendidikan Tinggi, Bogor,
2009.
[4] N. Habsah, “Antitumor Promoting
and Cytotoxic Constituens of
Etlingera Elatior,” Malaysian
Journal of Medical Science, vol. 12,
pp. 6-12, 2005.
[5] S. Lenny, "Senyawa Terpenoid dan
Steroid", Medan: Univeritas
Sumatra Utara, 2006.
[6] R. Sunarminingsih, "Metabolit
Sekunder: Manfaat dan
Perkembangannya dalam Dunia
Farmasi", Yogyakarta, 2002.
[7] H. R. Akbar, “Isolasi dan Identifikasi
golongan Flavonoid Daun Dandan
Gendis (Clinacanthus Nutans)
Berpotensi sebagai Antioksidan,”
ITB, Bandung, 2010.
[8] Robinson, "Kandungan Organik
Tumbuhan Tinggi Edisi Keenam
Terjemahan Kosasih Padmawinata",
Bandung: ITB, 1995.