UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO LABORATORIO DE TOXICOLOGIA-EPIDEMILOGIA

E.A.P INGENIERÍA AMBIENTAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

INFORME DE LABORATORIO

PRÁCTICA N° 2: Determinación de organofosforados en alimentos

por cromatografía en Capa Fina.

AUTOR:

LOBATO SLACEDO, FRANCO

CURSO:

TOXICOLOGIA - EPIDEMIOLOGIA

DOCENTE:

Mg. CRUZADO RAZCO, JOSE LIZARDO

TRUJILLO - PERÚ

2019

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Índice
I. INTRODUCCIÓN ........................................................................................................................... 3
II. MATERIALES ................................................................................................................................ 4
III. PROCEDIMEINTO ..................................................................................................................... 5
3.1 DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ORGANOFOSFORADOS POR CROMATOGRAFÍA EN
CAPA FINA (CCF). ............................................................................................................................. 5
3.1.1 METODOLOGIA............................................................................................................ 5
3.1.2 MÉTODO OPERATORIO ............................................................................................... 5
IV. RESULTADOS ........................................................................................................................... 6
V. DISCUSIÓN ................................................................................................................................... 7
VI. CONCLUSIONES ....................................................................................................................... 7
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................................... 7

Figure 1: RESULTADOS DEL ANÁLISIS CUALITATIVO, IDENTIFICACIÓN DE ORGANOFOSFORADOS

POR CROMATOGRÁFIA EN CAPA FINA (CCF). ..................................................................................... 6
Figure 2: Muestra de papa triturada con el cuchillo de cocina. .......................................................... 8
Figure 3: Peso del alimento 0.1kg haciendo uso de la balanza. ......................................................... 8
Figure 4: Frascos ambar tapa rosca de 10 ml, uno conteniendo la muestra a analizar y el otro con el
patrón (Methamidophos).................................................................................................................... 8
Figure 5: Agitación de la muestra en el Matraz de tapa esmerilada, previamente adicionado
cloroformo........................................................................................................................................... 8
Figure 6: Adecuación de la placa silicagel para la siembra tanto de la muestra y el patrón. ............ 8
Figure 7: Revelación de los organofosforados en la cámara extractora de gases. ............................. 8
Figure 8: Siembra de la muestra con la ayuda de un capilar de vidrio. .............................................. 8
Figure 9: Muestra despues de reveler en la cámara extractor de gases ........................................... 8
Figure 10: Fase móvil (placa de silicagel con 1-hexacon: 3 acetato)................................................... 8
Figure 11: Reveladores ( Cloruro de paladio y Ácido clorhídrico diluido) ........................................... 8

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I. INTRODUCCIÓN

Actualmente, existe un interés creciente en los llamados cultivos y cría de alimentos orgánicos
sin intervención química (pesticidas fertilizantes). Aunque esta tendencia es consistente con la
llamada "ciencia verde", es difícil imaginar la producción animal y vegetal sin químicos
sintéticos, teniendo en cuenta el estado actual de la tecnología (Madej et al., 2018). Es sabido
que los plaguicidas utilizados en las plantaciones provocan una larga lista de problemas a la
salud, tanto crónicos como agudos, y que algunos son perjudiciales para los organismos del
suelo y el agua, que contaminan el medio ambiente (Campo & Palacios, 2010).

Debido a la menor persistencia de los pesticidas organofosforados y su mayor potencia contra

los insectos que los insecticidas organoclorados como el DDT, el Aldrin y el lindano, estos se han
usado ampliamente en el sector agrícola. Por ejemplo, pesticidas organofosforados como
Metomil se han usado en los productos almacenados, así como en cultivos de frutas y hortalizas
comercializables como pesticidas desde fines de la década de 1960. Otro plaguicida de pirimifos-
metil (O- [2- (dietilamino) - 6-metil-4-pirimidinil] O, O-dimetilfosforotatoato) es un OP de
contacto y fumigante que se aplica en una amplia variedad de cultivos, como cítricos, aceitunas,
enredaderas, hortalizas, caña, ornamentales y otras frutas para el control de trips, ácaros,
moscas blancas y pulgones. Debido a su alta eficacia, baja bioacumulación y estrecha
persistencia en el entorno, Phoxim ha sido muy utilizado en el campo de la agricultura. Algunos
de los productos de reacción formados en el proceso de transformación son mucho más
perjudiciales para la salud humana que el compuesto original y pueden tener graves
implicaciones para la salud al tiempo que ascienden en la cadena alimenticia y hacia los seres
humano. Si bien el uso de todos estos pesticidas está disminuyendo perpetuamente debido a la
toxicidad aguda que a menudo conduce a la parálisis respiratoria y la muerte posterior, todavía
representan la principal clase de pesticidas que se utilizan en los países en desarrollo. Causan
serios percances en la salud humana y en el equilibrio del ecosistema acuático, ya que
contaminan los alimentos y el agua. Las toxinas orgánicas ingresan al alimento o cuerpos de
agua, directa o indirectamente, y representan una amenaza para la existencia misma del ser
humano al mostrar una alta potencia de las enzimas en las sinapsis colinérgicas, es decir,
acetilcolinesterasas (AChE). Esta es una enzima fundamental responsable del funcionamiento
normal del sistema nervioso central en los seres humanos (Patel et al., 2019).

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Los pesticidas organofosforados funcionan por la modificación irreversible en los grupos

hidroxilo en la molécula de serina en el sitio catalítico. Esto inhibe posteriormente la enzima
AChE, restringe la descomposición de la colina del transmisor y evita aún más la transmisión
nerviosa. Como resultado, la acetilcolina comienza a acumularse en las sinapsis y sobre estimula
su receptor que finalmente resulta perjudicial para el sistema nervioso (Long et al., 2015).

Los informes de la Organización Mundial de la Salud y la autoridad local, SENASA, afirma que el
uso de plaguicidas requiere un alto nivel de precaución y pueden causar envenenamiento letal
o muy severo si se usan de manera inadecuada, pueden producir impactos ambientales
negativos significativos, para los que no existen medidas de mitigación adecuadas o proyectos
que son incompatibles con las políticas de desarrollo sostenible del país o de las entidades
internacionales de desarrollo. Según el Instituto Nacional de Estadística e Informática, INEI; solo
para el año 1999 el Perú importaba cerca de 6 736 176 Kg de insecticidas.

Por todo lo expuesto, con la realización de esta práctica de laboratorio se busca determinar el
grado de contaminación de este alimento que es la papa, comercializada en los mercados
Trujillanos (mercados mayoristas y minoristas)., que es de uso amplio en la industria alimentaria
y consumo directo por parte de la población, determinando su presencia y concentración de los
organofosforados mediante la técnica de Cromatografía en Capa Fina (CCF).

II. MATERIALES

Materiales

 Papa (muestra)
 Methamidophos (patron)
 Cuchillo de cocina.
 1 Lt de Agua destilada.
 3 frascos ambar tapa rosca de 10 ml.
 EPPs: Guantes de nitrilo, gorro, guardapolvo y respirador descartable.

Reactivos e Instrumentos

 Cloroformo (20 ml)

 Vaso de precipitación
 Cloruro de paladio (revelador)

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 Ácido clorhídrico diluido (revelador)

 Matraz de tapa esmerilada
 Balanza
 Campana extractora de gases

III. PROCEDIMEINTO

3.1 DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ORGANOFOSFORADOS POR CROMATOGRAFÍA

EN CAPA FINA (CCF).

3.1.1 METODOLOGIA

FUNDAMENTO DEL MÉTODO

Los insecticidas órganofosforados a separar de desplazan en una dirección

predeterminada por medio de un material sólido insoluble inorgánico: silicagel G 60
como fase estacionaria y como fase móvil la mezcla de n-hexano: acetona: alcohol
isopropílico los cuales van a migrar a través de la superficie de la placa.

La fase móvil va arrastrar a los insecticidas órganofosforados por un proceso de reparto

múltiple que se da en toda sustancia de mediana o baja polaridad como es el caso de
los insecticidas organofosforados. La sensibilidad del método de cromatografía de capa
fina (CCF) es de 0.5 microgramos.

3.1.2 MÉTODO OPERATORIO

 Preparación de la muestra:

Se procedió a triturar la papa previamente lavados, se pesó aproximadamente 0,1

Kg de la muestra triturada.

 Extracción:

Se llevó la muestra pesada a un matraz de tapa esmerilada de 250 mL adicionando

20 mL de cloroformo, las muestras se agitan mecánicamente durante 15 minutos y
se deja en reposo por 2 minutos. Luego se filtra directamente dentro un frasco
ámbar tapa rosca de 10 ml.

 Concentración:

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La fase etérea colectada es sembrada 25 veces (gotas pequeñas) con la ayuda de un

capilar de vidrio en punto en la placa de silicagel G-60 Merck de 20 x 20 cm. Después
en otro punto de la placa de silicagel, es sembrado el patrón (methamidophos) 10
veces (gotas pequeñas).

 Fase estacionaria

Se emplearon placas cromatográficas de silicagel G-60 Merck de 20 x 20 cm.

 Fase móvil

1-hexano: 3 acetato

 Reveladores

Cloruro de Paladio y Ácido clorhídrico diluido. Esto se hizo en la cámara extractora

de gases.

IV. RESULTADOS

Los reactivos reveladores atomizados sobre la placa no generaron ninguna mancha en

comparación con el patrón (Methamidophos) que si se pudo evidenciar claramente.

Los resultados se expresan en términos de presencia (Positivo) o ausencia (Negativo) para

los organofosforados; se comparan las manchas de la muestra frente al patrón analizado,
dando negativo para la muestra analizada de papa. (Ver Figura N° 1)

Figure 1: RESULTADOS DEL ANÁLISIS CUALITATIVO, IDENTIFICACIÓN DE

ORGANOFOSFORADOS POR CROMATOGRÁFIA EN CAPA FINA (CCF).

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V. DISCUSIÓN

Del análisis cualitativo de CCF de la muestra analizada se observa que no hay presencia de
residuos de plaguicidas organofosforados. Por lo tanto, este trabajo constituye una
evidencia para demostrar que no hay un problema de Salud Pública con respecto a residuos
de plaguicidas, y si lo hubiera estaría en pequeñas concentraciones y no afectaría a la salud
de la población que consume este alimento.

De acurdo a los resultados, según FAO/OMS los agricultores están llevando las Buenas
Prácticas Agrícolas en el Uso de Plaguicidas (BPA) esto se entiende los usos inocuos
autorizados a nivel nacional, en las condiciones existentes, de los plaguicidas necesarios
para un control eficaz y fiable de las plagas. Comprende una gama de niveles de aplicaciones
de plaguicidas hasta la concentración de uso autorizado más elevada, de forma que quede
la concentración mínima posible del residuo.

VI. CONCLUSIONES

La muestra de la papa analizada no presenta ninguna mancha, es decir nuestro alimento

está limpio sin ninguna contaminación con organofosforados.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Madej, K., Kalenik, T. K., & Piekoszewski, W. (2018). Sample preparation and determination
of pesticides in fat-containing foods. Food Chemistry, 269, 527–541.
 Patel, H., Rawtani, D., & Agrawal, Y. K. (2019). A newly emerging trend of chitosan-based
sensing platform for the organophosphate pesticide detection using Acetylcholinesterase-a
review. Trends in Food Science & Technology.
 Long, Q., Li, H., Zhang, Y., & Yao, S. (2015). Up conversion nanoparticle-based fluorescence
resonance energy transfer assay for organophosphorus pesticides. Biosensors and
Bioelectronics, 68, 168–174.

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 Cristian Campos Chávez & Abimael Palacios Alcántara. (2010). Determinación por HPLC de
residuos de insecticida órganofosforado (Methamidophos) en tomates comercializados en
Lima-Perú. UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS, facultad de Farmacia y
Bioquímica.

VIII. ANEXOS

Figure 3: Peso del alimento 0.1kg haciendo uso de

Figure 2: Muestra de papa triturada con el la balanza.
cuchillo de cocina.

Figure 5: Agitación de la muestra en el Figure 4: Frascos ambar tapa rosca de 10 ml, uno
Matraz de tapa esmerilada, previamente conteniendo la muestra a analizar y el otro con el patrón
adicionado cloroformo. (Methamidophos).

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Figure 6: Adecuación de la placa silicagel

para la siembra tanto de la muestra y el Figure 8: Siembra de la muestra con la ayuda de un
patrón. capilar de vidrio.

Figure 7: Revelación de los organofosforados en la

Figure 10: Fase móvil (placa de silicagel con 1-
cámara extractora de gases.
hexacon: 3 acetato).

Figure 9: Muestra despues de reveler

Figure 11: Reveladores ( Cloruro de paladio y
en la cámara extractor de gases
Ácido clorhídrico diluido)