CINÉTICA DEL CRECIMIENTO MICROBIANA DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE EN

FERMENTACIÓN BATCH SUMERGIDA

Maria Cecilia Padilla1, Estela Oviedo 2, Guillermo Pérez 3 , Felipe Vega 4 , José Rojas 5, Heiner
Montalvo 6 , Ivan Padilla 7 , Carlos Barrios 8 , Verónica Camargo9 Carlos Godin11 , Ena
Hernandez 12 , Alexander Sanchez12

1
Estudiantes de Ingeniería de Alimentos, Universidad de Córdoba, Berástegui, Colombia.

Orientador: PhD. Deivis Lujan Rhenals

RESUMEN

El proceso de fermentación batch sumergida aerobia de la Saccharomyces cerevisiae, se estudió para

evaluar experimentalmente los parámetros cinéticos de la ecuación de monod. inicialmente se adaptó la
cepa microbiana a las condiciones y nutrientes del medio a utilizar para evitar la fase lag; Desde el comienzo
de la fermentación, se utilizó 28°C como temperatura para el crecimiento de estas levaduras, se pudo
obtener parámetros cinéticos, tales como la velocidad específica de crecimiento (0,0072), la constante de
saturación de Monod (11,745 g/l) y el rendimientos sustrato – biomasa (3,9409 g biomasa/g sustrato),
utilizando el modelo de Eadie-Hofstee con un R2 de 0,9993 permitiendo entender el crecimiento de la
Saccharomyces cerevisiae en el proceso de fermentación aerobia.

Palabras Claves: Proceso, fermentación, Batch , monod , crecimiento.

ABSTRACT

The aerobic submerged batch fermentation process of Saccharomyces cerevisiae was studied to
experimentally evaluate the kinetic parameters of the monod equation. initially the microbial strain was
adapted to the conditions and nutrients of the medium to be used to avoid the lag phase; From the beginning
of the fermentation, 28 ° C was used as temperature for the growth of these yeasts, it was possible to obtain
kinetic parameters, such as the specific growth rate (0.0072), the saturation constant of Monod (11.745 g /
l) and the substrate - biomass yield (3.9409 g biomass / g substrate), using the Eadie-Hofstee model with
an R2 of 0.9993, allowing us to understand the growth of Saccharomyces cerevisiae in the aerobic
fermentation process.
Key Words: Process, fermentation, batch, monod, growth.

1. INTRODUCCIÓN
El cultivo discontinuo o cultivo batch es el método de cultivo más simple, consiste en un recipiente cerrado
en el que no existe aporte de nutrientes ni egreso de productos. Cuando se siembran microorganismos en
un medio de cultivo adecuado, la concentración de biomasa (X g cel.secas/L) aumenta, empleando los
nutrientes que le aporta el medio de cultivo para producir nuevas células. Este proceso continúa hasta que
algún nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante), se produce la acumulación de alguna
sustancia inhibidora formada por los propios microorganismos, etc. el crecimiento se detiene y finaliza el
batch. La evolución del cultivo con el tiempo sigue una curva típica denominada “curva de crecimiento
microbiano”.

Fase lag o fase de latencia: El crecimiento del microorganismo no comienza inmediatamente después de la
inoculación del medio de cultivo, necesita un período de adaptación a las condiciones de cultivo,
denominado fase lag o fase de latencia.

Fase de crecimiento exponencial: Finalizada la fase lag, la concentración de biomasa (x) comienza a
aumentar en forma lenta y luego más rápidamente, hasta llegar a una etapa en la cual las células crecen a
una velocidad específica máxima y constante (m).

Fase estacionaria: Luego de la fase exponencial hay un rápido período de desaceleración causada por el
agotamiento de algún nutriente (el sustrato limitante) o por acumulación de inhibidores y por lo tanto 
tiende a 0, se entra en la llamada fase estacionaria.

Fase de declinación o muerte: En esta última etapa, la concentración celular disminuye como resultado de
la escasez de reservas de energía o por autolisis (Martos and Zubreski, 2013).

El conocimiento de la cinética del cultivo permite predecir el desarrollo de la fermentación y evaluar

rendimientos y productividades, datos importantes en el diseño de estrategias de producción y optimización
de procesos. Las células consumen los nutrientes requeridos para crecimiento y los convierten en nuevas
células y productos metabólicos. La velocidad de estos procesos varía con el desarrollo del cultivo. A
medida que las células crecen se acumulan en el medio los productos finales del metabolismo celular.
Frecuentemente, estos componentes alteran el pH y la reología del medio; factores decisivos sobre la
actividad celular y los mecanismos de transporte. Objetivo de este estudio se determinó experimentalmente
los parámetros cinéticos de la ecuación de Monod (YX/S, µ y µmax) en la fermentación batch sumergida
aeróbica de la Saccharomyces cerevisiae.

2. MATERIALES Y METODOLOGÍA

1) Preparación del pre-inoculo:

El pre-inoculó estaba previamente preparado a la realización del experimento con el fin de evitar la fase
de latencia de los microorganismos.

FIGURA 1. FERMENTADOR BATCH SUMERGIDO AEROBIO

2) PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CRECIMIENTO

El medio de crecimiento estaba previamente preparado, con los nutrientes requeridos por el
microorganismo su composición fue glucosa 30g/L, peptona 12 g/L, extracto de Levadura 12 g/L, de agua
destilada y 20mL del pre-inoculo adicionada en un erlenmeyer utilizado como fermentador, el cual se iba
calentando y agitando al mismo tiempo debidamente tapado.

 Finalmente cada hora se iba tomando muestra de: densidad óptica celular (X) y Concentración de
Glucosa (S), Recuento en placa.

3. RESULTADOS
Luego de 7 horas del experimento en el fermentador se obtuvieron los siguientes resultados de sustrato
medido mediante DNS para azucares reductores y conteo celular por densidad óptica y conteo directo para
la biomasa

Tiempo Conteo azucares Numero

(h) celular por reductores de
densidad Absorbancia cel/mL
Optica
Absorbancia
0 0,355 0,232 288000
 1 0,363 0,221 480000
2 0,473 0,204 740000
3 0,61 0,194 960000
4 0,895 0,189 1060000
5 1,063 0,183 1760000
6 1,338 0,153 2020000
7 1,872 0,094 3220000
Tabla 1 Datos Obtenidos Experimentalmente

Datos para la Curva Patrón de Peso Seco de Biomasa

CURVA PATRÓN

#Tubo Peso tubo Peso del tubo Biomasa ml H20 ml de Biomasa Absorbancia
seco (g) +células secas (g/10 ml) levadura (g/L) (nm)
(g)

1 12,1771 12,1845 0 10 0 0 0

2 12,1119 12,1388 0,0269 8 2 2,69 0,499

3 12,1814 12,2093 0,0279 6 4 2,79 1,040

4 12,1919 12,2310 0,0391 4 6 3,91 1,321

5 12,2390 12,2869 0,0479 2 8 4,79 1,574

6 12,1124 12,1678 0,0554 0 10 5,54 1,749

Tabla 2 Datos para la construcción de la curva patrón peso seco de biomasa

Datos para la construcción de la curva patrón de sustrato absorbancia vs ppm

Tubo Concentración Absorbancia

(ppm) (575 nm)

1 0 0

2 200 0.076

3 400 0.178

4 600 0.332

5 800 0.464

6 1000 0.598

Tabla 3 resultados de concentración y absorbancia para la construcción de la curva patrón

4. CÁLCULOS

-Grafica de la curva de calibración (Concentración vs absorbancia), para encontrar las

concentraciones del sustrato a lo largo del tiempo se construyó la curva patrón absorbancia vs
concentración ppm con muestras previamente conocidas y se calculó la ecuación de la recta.

Figura 1 Absorbancia VS Concentración

Una vez calculada la ecuación de la recta obtenida en curva de calibración, y los datos de absorbancia
para las muestras problema, tenemos:
𝑦 + 0.033
𝑥=
0.0006
Donde

𝑦 = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎

X= concentración de sustrato

Calculando por Excel y convirtiendo las ppm a g/L tenemos

(m) (b) Absorbancia [ppm] Concentración Multiplicado Concentración

en el tiempo ppm ( valor de por el factor de sustrato en
la incógnita) de dilución g/L
10 (ppm)

0,0006 - 0,232 Incógnita 441,666667 22083,3333 22,0833333

0,033
0,0006 - 0,221 Incógnita 423,333333 21166,6667 21,1666667
0,033
0,0006 - 0,204 Incógnita 395 19750 19,75
0,033
0,0006 - 0,194 Incógnita 378,333333 18916,6667 18,9166667
0,033
0,0006 - 0,189 Incógnita 370 18500 18,5
0,033
 0,0006 - 0,183 Incógnita 360 18000 18
0,033
0,0006 - 0,153 Incógnita 310 15500 15,5
0,033
0,0006 - 0,094 Incógnita 211,666667 10583,3333 10,5833333
0,033
Tabla 3 cálculo de la concentración en g/L de sustrato
Absorbancia v.s g de celulas/L para el calculo del peso la biomasa en el tiempo, con los datos de la
tabla 2 se contruyo la grafica patron de absorvancia vs g cel/L de unas muestras previamente conocidas y
se calcula la pendiente de la recta.

Figura 2 Curva patrón Absorbancia VS cel/L

Una vez obtenida la ecuación de la recta obtenida en curva, y el dato de absorbancia para la muestra
problema, tenemos:
𝑦 + 0,0547
𝑥=
0,3302
Donde

𝑦 = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎

X= células en g/L

Calculando por Excel tenemos

Pendiente Intercepto Absorbancia Biomasa

(m) (b) de las g/L de las
muestras muestras
0,3302 -0,0547 0,355 1,24076317
0,3302 -0,0547 0,363 1,26499091
0,3302 -0,0547 0,473 1,59812235
 0,3302 -0,0547 0,61 2,01302241
0,3302 -0,0547 0,895 2,87613568
0,3302 -0,0547 1,063 3,38491823
0,3302 -0,0547 1,338 4,21774682
0,3302 -0,0547 1,872 5,83494852
Tabla 4 cálculo de las células en g/L
A partir de estos datos con las unidades de medida universales construimos la tabla base para el cálculo de
los parámetros de cinética mediante el método diferencial y el método integral respectivamente:

Tiempo X (g/L) S (g/L)

(h)
0 1,24076317 22,0833333
1 1,26499091 21,1666667
2 1,59812235 19,75
3 2,01302241 18,9166667
4 2,87613568 18,5
5 3,38491823 18
6 4,21774682 15,5
7 5,83494852 10,5833333
Tabla 5 Datos experimentales en las unidades universales para el cálculo de los parámetros cinéticos
donde x es la biomasa y s el sustrato.
4.1. Grafica Logaritmo x vs tiempo

Tiempo X (g/L) log X (g/L)

(h)
0 1,24076317 0,09368889
1 1,26499091 0,1020874
2 1,59812235 0,20361003
3 2,01302241 0,30384861
4 2,87613568 0,45880937
5 3,38491823 0,52954818
6 4,21774682 0,62508051
7 5,83494852 0,76603703
Tabla 6 Logaritmo de la biomasa en el tiempo
Figura 3 logaritmo x vs tiempo

4.2. Grafica Sustrato vs tiempo

Tiempo S (g/L)
(h)
0 22,0833333
1 21,1666667
2 19,75
3 18,9166667
4 18,5
5 18
6 15,5
7 10,5833333
Figura 4 Sustrato g/L vs Tiempo (h)

4.3. Parámetros cinéticos de Monod.

Método diferencial para el cálculo de los parámetros cinéticos

Parte de ivan

Método integral para el cálculo de los parámetros cinéticos

Parte del grupo de heiner

 ANÀLISIS

CONCLUSIÓN
BIBLIOGRAFIA

Martos, M. and Zubreski, E. (2013). CINÉTICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO – CULTIVO

BATCH. [online] Aulavirtual-exactas.dyndns.org. Available at:
http://www.aulavirtualexactas.dyndns.org/claroline/backends/download.php?url=L1BSwUNUSUN
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Nov. 2018].

Curso de Microbiología General de Enrique Iáñez. CRECIMIENTO A NIVEL DE POBLACIONES.

http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/14_micro.htm actualizado el 17 de agosto de
1998. ENRIQUE IAÑEZ PAREJA.