Juknis Mikroskopis TB PDF
Juknis Mikroskopis TB PDF
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS
TUBERKULOSIS
Diterbitkan oleh:
Direktorat Jenderal Pengendalian Penyakit & Penyehatan Lingkungan
supported by Global Fund
Acknowledgment
“Buku Pedoman Pemeriksaan Mikroskopis Tuberkulosis”
Pengarang:
Richard Lumb, Ivan Bastian, Gunawan Yamin
Diterbitkan oleh:
Institute of Medical & Veterinary Science
From Road
Adelaide, South Australia 5000
www.imvs.sa.gov.au
Tahun 2004
Ilustrasi oleh:
Kerry Raid
Terima Kasih
Buku Panduan ini diterbitkan atas bantuan dan masukan serta dukungan:
• Ivan Bastian, Richard Lumb, Gunawan Yamin selaku pengarang dan Kerry Raid
selaku ilustrator dan artist pada Buku Pedoman “Diagnosis Tuberkulosis secara
Laboratorium dengan Pemeriksaan Mikroskopis Dahak” IMVS, Adelaide, South
Tim Penyusun
POKJA LAB TBC
Daftar Isi
Terima Kasih.................................................................................................................................................................................i
Tim Penyusun.............................................................................................................................................................................ii
Daftar Isi ..................................................................................................................................................................................iii
Kata Pengantar..........................................................................................................................................................................iv
Sambutan ...................................................................................................................................................................................v
Bab 1 Pendahuluan........................................................................................................................................................1
Bab 2 Pengumpulan Dahak.........................................................................................................................................2
Waktu Pengumpulan Dahak...........................................................................................................................2
Tempat Pengumpulan Dahak.........................................................................................................................2
Pengumpulan Dahak.........................................................................................................................................3
Cara Pengumpulan Dahak...............................................................................................................................4
Kualitas Spesimen...............................................................................................................................................5
Registrasi Spesimen...........................................................................................................................................6
Bab 3 Pembuatan Sediaan Apus................................................................................................................................8
Alat-alat yang dibutuhkan...............................................................................................................................8
Cara Membuat Sediaan Apus.........................................................................................................................9
Bagaimana Membuat Sediaan Apus yang Baik.................................................................................... 10
Bab 4 Alat dan Bahan Pewarnaan.......................................................................................................................... 12
Bab 5 Pewarnaan Metoda Ziehl-Neelsen............................................................................................................. 13
Bab 6 Pembacaan Sediaan Apus............................................................................................................................ 16
Bab 7 Pelaporan............................................................................................................................................................ 21
Bab 8 Penyimpanan..................................................................................................................................................... 23
Bab 9 Keamanan Kerja................................................................................................................................................ 24
Bab 10 Pemantapan Mutu........................................................................................................................................... 26
Bab 11 Lampiran............................................................................................................................................................. 27
Pot Dahak yang Ideal...................................................................................................................................... 27
Formulir Permohonan Laboratorium TB (TB 05)................................................................................... 28
Formulir Register Laboratorium TB (TB 04)............................................................................................. 29
Daftar Tilik Pemantapan Mutu Internal.................................................................................................... 30
Mikroskop........................................................................................................................................................... 31
Cara Pengiriman Sediaan Apus................................................................................................................... 40
Informasi Untuk Pasien.................................................................................................................................. 41
DEPARTEMEN KESEHATAN RI 2006 i
PANDUAN BAGI PETUGAS LABORATORIUM
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS TUBERKULOSIS
Kata Pengantar
Sebagai negara yang sedang berkembang, penyakit
infeksi masih merupakan salah satu penyebab kematian
di Indonesia dan penyakit TB masih merupakan penyakit
infeksi yang utama penyebab kematian tersebut.
Sambutan
Saat ini Tuberkulosis merupakan masalah kesehatan masyarakat di Indonesia. Jum-
lah Pasien TB di Indonesia menempati urutan ketiga terbanyak di dunia. Kerugian
yang diakibatkannya sangat besar, baik dari aspek kesehatan maupun dari aspek
sosial dan ekonomi.
Dengan memprioritaskan pada penemuan pasien TB dengan BTA positif, maka labo-
ratorium merupakan kunci utama dalam mendiagnosa pasien TB. Hal ini ditegaskan
pada komponen kedua strategi DOTS, yaitu penegakan diagnosis menggunakan
pemeriksaan mikroskopis.
Walaupun strategi DOTS telah diadopsi sejak tahun 1995, di lapangan tetap masih
dijumpai kendala-kendala terutama dalam hal kualitas pemeriksaan laboratorium.
Berdasarkan hal tersebut, maka dirasakan perlu adanya suatu standar pemeriksaan
mikroskopis TB di seluruh laboratorium.
Tak lupa kami sampaikan terima kasih atas dukungan dan kerjasama Direktorat Bina
Pelayanan Penunjang Medik, Direktorat Jenderal Pelayanan Medik, serta kepada
semua pihak yang tidak dapat kami sebutkan satu persatu, yang telah menyum-
bangkan tenaga dan pikiran demi tersusunnya buku ini.
1 PENDAHULUAN
Tujuan dari panduan ini adalah untuk penggunaan praktis petugas teknis laborato-
rium dalam melakukan pemeriksaan mikroskopis dahak langsung untuk menemukan
kuman Basil Tahan Asam (BTA) dalam upaya menegakkan diagnosis TB, serta sistem
pencatatan dan pelaporan yang dibutuhkan.
Dalam program pengendalian TB, diagnosis ditegakkan melalui pemeriksaan dahak
secara mikroskopis langsung yang diambil 3 kali berturut-turut : Sewaktu-Pagi-
Sewaktu (SPS).
PENGUMPULAN DAHAK 2
Waktu pengUMPUlan spesimen
Pengumpulan dahak dilakukan di ruang terbuka dan mendapat sinar matahari lang-
sung atau di ruangan dengan ventilasi yang baik, untuk mengurangi kemungkinan
penularan akibat percikan dahak yang infeksius.
Jangan mengambil dahak di ruangan tertutup dengan ventilasi yang buruk, mis-
alnya:
Kamar kecil / toilet
Ruang kerja (ruang pendaftaran, ruang pengumpulan sampel, laboratorium,
dsb)
2 PENGUMPULAN DAHAK
PENGUMPULAN DAHAK
Formulir Permohonan
Petunjuk sebelum pengumpulanLaboratorium
dahak TB untuk pemeriksaan dahak (TB 05)
PENGUMPULAN DAHAK 2
Cara pengumpulan dahak
Bila perlu hal di atas dapat diulang sampai mendapatkan dahak yang berkualitas
baik dan volume yang cukup (3-5 ml)
Bila tidak ada spesimen dahak yang dapat dikeluarkan, pot dahak harus dibuang,
tidak dapat digunakan untuk pasien lain.
2 PENGUMPULAN DAHAK
Kualitas spesimen
√ √
√ X
Dahak tercampur darah seperti air, atau sebagian besar terdiri dari
gelembung-gelembung)
PENGUMPULAN DAHAK 2
Spesimen dikumpulkan bukan dalam pot dahak
Registrasi spesimen
4 02/05/757 A
2 PENGUMPULAN DAHAK
diproses.
Keterangan bagan :
1. Periksa data pasien di pot dahak dan cocokkan dengan yang ada di formulir
permohonan laboratorium TB (Formulir TB 05)
2. Pindahkan data pasien dari formulir permohon laboratorium TB (TB 05) ke register
laboratorium TB (Formulir TB 04)
3. Tulis nomor register laboratorium pada formulir TB 04.
4. Tulis nomor register laboratorium pada formulir permohonan laboratorium TB
(TB 05)
5. Berilah tanda pada kolom yang sesuai di register laboratorium alasan pemeriksaan
dahak sesuai formulir permohonan laboratorium TB.
Untuk setiap pasien, gunakan nomor identitas sediaan yang sama dan beri huruf
A,B,C untuk identifikasi spesimen :
Sewaktu (A)
Pagi (B)
Sewaktu (C)
Wadah pem-
buangan
berisi disinfek-
tan (misalnya
lisol 5%) Wadah pem-
buangan
untuk aplika-
tor
Meja kerja harus kokoh, kedap air, mudah dibersihkan dengan disinfektan.
Cara
Kodemembuat
Kabupaten/sediaan apus
Kode UPK
Nomor sediaan
B
Waktu pengumpulan
A
Pilih dan
ambil
Tulis nomor identitas pasien pada bagian dari
bagian ujung kaca. Bila menggu- dahak yang
nakan kaca frosted tulis dengan purulen
meng-gunakan pensil 2B pada meng-
bagian yang buram/frosted. Bila gunakan
menggunakan kaca biasa, tulis ose atau
dengan spidol permanen pada lidi yang
stiker yang dilekatkan di balik
3 cm
2 cm
Pola 2 cm x 3 cm
Sulut api
Methylene blue Carbol fuchsin Asam alkohol
0,3% 0,3% (3% HCl dalam etanol)
1 2
Bilas sediaan dengan hati-hati dengan Jangan ada percikan ke sediaan lain
6 7
10 11
Sediaan apus harus diperiksa secara sistematis untuk memastikan bahwa hasil
yang dilaporkan telah mewakili seluruh bagian sediaan. Jangan memeriksa sediaan
sebelum kering.
Langkah-langkah pembacaan sediaan apus :
1 2
3 4
Sebelum melakukan pembacaan, lakukan penilaian sediaan apus yang telah di-
A. Kualitas dahak
A Kualitas dahak yang baik
dinilai dengan melihat di
bawah mikroskop, yaitu
terlihat lebih dari 25 leko-
sit (sel radang) per lapang
pandang pada pembe-
saran 100 x (10 x pem-
besaran lensa objektif /
10 x pem-besaran lensa
okuler), juga dapat dilihat
sel debu (dust cells) atau
}
C. Kerataan sediaan apus
Dahak tersebar merata, tidak
ter-lihat daerah yang kosong
pada kaca objek.
+ 150
lapang D. Ketebalan sediaan apus
pan- Diperiksa dengan cara me-
megang sediaan apus 4 - 5 cm
di atas surat kabar atau tulisan
cetakan. Ketebalan sediaan
apus dianggap baik bila huruf-
huruf tulisannya masih dapat
Beri pen-
yangga pada
Kaki meng-
kaki agar
gantung
punggung
menjadi
lurus
A B
Sediaan apus dahak dengan pewarnaan Sediaan apus air liur dengan pewarnaan
Zielh-Neelsen (banyak sel radang) Zielh-Neelsen (banyak sel epitel)
Lakukan pembacaan sediaan apus secara sistematis untuk memastikan hasil yang
dilaporkan mewakili seluruh bagian sediaan.
Pembacaan dimulai dari ujung kiri ke ujung kanan dan dilakukan pada sediaan
yang sel-selnya terlihat, bila sediaan tampak kosong, geser pada lapang pandang
Setelah selesai pembacaan, bersihkan minyak dari sediaan apus dengan meng-
gunakan pelarut organik.
Setelah kering, tempatkan sediaan apus tersebut dengan hati-hati dalam kotak
penyimpanan guna pengontrolan kualitas oleh laboratorium rujukan/cross-check
. Ini harus dikerjakan berdasarkan petunjuk yang ditetapkan oleh Program TB Na-
7 PELAPORAN
BTA yang ditemukan menegakkan diagnosis TB dan jumlah BTA yang ditemukan
menunjukkan beratnya penyakit. Oleh karena itu sangat penting untuk mencatat
dengan benar apa yang terlihat. Skema pelaporan ini mengacu pada skala Interna-
tional Union Against Tuberculosis and Lung Diseases (IUATLD).
PELAPORAN 7
Formulir Permohonan Laboratorium TB
4 Catat Hasil 2
3
Beri tanggal dan tandatan-
5
Kembalikan ke dokter atau
8 PENYIMPANAN
KEAMANAN KERJA 9
Penularan TB terjadi karena percikan dahak infeksius di udara terhirup orang lain.
Pemeriksaan dahak yang dilakukan sesuai prosedur standar oleh petugas labora-
torium menjamin tidak akan berisiko penularan TB.
Pengelolaan limbah :
1. Buang aplikator bambu, lidi lancip bekas pakai, dan kaca sediaan yang sudah
tidak dipakai ke dalam ember yang telah dilapisi kantung plastik dan diisi disin-
fektan
2. Buka tutup pot dahak bekas, isi dengan desinfektan sama banyak dengan sisa
dahak, tutup kembali lalu masukkan ke dalam ember yang telah dilapisi kantung
plastik yang telah diisi disinfektan untuk dibuang
3. Untuk limbah cair (bekas pewarnaan) ditampung dulu dalam wadah yang diberi
disinfektan sebelum dibuang.
4. Semua bahan bekas pakai direndam dalam disinfektan selama minimal 12 jam,
9 KEAMANAN KERJA
PEMANTAPAN MUTU
LAMPIRAN
POT DAHAK YANG IDEAL
Syarat :
Sekali pakai.
Bahan kuat, tidak bocor dan tidak
mudah pecah.
Tutup berulir, dapat menutup
rapat.
Plastik jernih/ tembus pandang.
Mulut lebar, diameter 6 cm.
Dapat ditulisi dengan pena per-
X √ X
X
X
LAMPIRAN
FORMULIR PERMOHONAN LABORATORIUM TB (TB 05)
LAMPIRAN
FORMULIR REGISTER LABORATORIUM TB (TB 04)
LAMPIRAN
DAFTAR TILIK PEMANTAPAN MUTU INTERNAL
* Beri tanda
( ) pada kolom yang sesuai
LAMPIRAN
MIKROSKOP
BAGIAN-BAGIAN MIKROSKOP
Bagian penting dari mikroskop adalah lensa okuler, lensa objektif, tabung mikroskop,
makrometer/pengatur fokus kasar, mikrometer/pengatur fokus halus, revolver/lem-
peng objektif, lengan, meja sediaan, penjepit sediaan, skala, kondensor, pengatur
iris/diafragma, penggeser sediaan dan pengatur lampu.
a. Bagian mekanik
1) Kaki, bentuknya bermacam-macam tergantung pabrik pembuatnya, ada
yang berbentuk V, bulat, segi empat.
2) Lengan menghubungkan kaki dan tabung mikroskop (untuk dipegang
pada waktu mengangkat mikroskop).
3) Tabung mikroskop, menghubungkan antara lensa okuler dan lensa ob-
jektif, merupakan jalan cahaya. Pada mikroskop berprisma antara tabung
mikroskop dan lempeng objektif terdapat lensa prisma.
4) Makrometer (Pengatur fokus kasar).
Untuk menggerakkan meja sediaan ke atas dan ke bawah secara makro.
5) Mikrometer (Pengatur halus).
Untuk menggerakkan meja sediaan ke atas dan ke bawah secara mikro
sehingga objek dapat terlihat dengan lebih jelas.
6) Pengatur kondensor, untuk menggerakkan kondensor ke atas dan ke
bawah.
7) Pengatur iris/diafragma, untuk mengatur kekuatan cahaya.
8) Meja sediaan, untuk meletakkan kaca sediaan.
9) Penjepit sediaan untuk menjepit kaca sediaan.
10) Penggeser sediaan, berfungsi menggeser kaca sediaan ke depan dan ke
belakang atau ke kiri dan ke kanan untuk mendapatkan lapangan pandang
yang baik.
LAMPIRAN
MIKROSKOP
11) Skala, terletak pada meja sediaan berguna untuk menandai letak objek
yang terlihat.
12) Lempeng objektif dengan 3 atau 4 lubang tempat lensa objektif melekat,
dan dapat diputar.
b. Bagian optik
1) Lensa okuler
Lensa yang berhadapan dengan mata, terletak di ujung tabung mikroskop,
dapat diangkat dengan menariknya ke atas. Ukuran pembesaran 5 x dan 10
x. Untuk pemeriksaan dahak BTA, digunakan yang 10 x. Fungsi dari lensa
okuler memberikan perbesaran kedua kalinya pada benda/objek.
2) Lensa objektif
Lensa objektif berada tepat di bawah tabung mikroskop, melekat pada
lempeng objektif. Lensa ini berfungsi memberi pembesaran pertama pada
benda. Terdapat objektif dengan perbesaran 10 x (pembesaran kecil), 40 x
/45 x (pembesaran sedang) dan 100 x (pembesaran besar). Ukuran lensa
dapat diatur dengan memutar lempeng objektif, bila kedudukan lensa
sudah tepat akan terdengar bunyi “klik”. Untuk pembesaran 100 x sediaan
harus ditetesi minyak emersi.
3) Kondensor
Fungsi kondensor adalah memfokuskan cahaya agar menjadi kuat sehingga
jatuh sebagai titik cahaya di atas sediaan. Kondensor dapat dinaik turunkan
dengan memutar-mutar pengatur kondensor. Bila tidak memerlukan
cahaya yang terlalu kuat maka kondensor diturunkan. Pada pemeriksaan
dahak kondensor dinaikkan sampai maksimal. Pada kondensor terdapat
juga tempat filter yang bersifat menyaring cahaya, tetapi pada pemeriksaan
mikroskopik dahak, filter ini tidak digunakan.
4) Iris/Diafragma
Terletak pada kondensor, berfungsi mengatur banyak sedikitnya cahaya
LAMPIRAN
MIKROSKOP
LAMPIRAN
MIKROSKOP
yang masuk ke dalam mikroskop. Untuk pemeriksaan BTA diafragma harus
dibuka maksimal.
5) Sumber cahaya
Di bawah kondensor terdapat sumber cahaya yang dapat berupa cermin
atau lampu. Untuk cahaya yang jauh, digunakan cermin datar, sedangkan
untuk cahaya dekat (misalnya menggunakan lampu meja) digunakan
cermin cekung.
Untuk dapat melihat benda atau objek dengan mikroskop maka perlu diketahui
prinsip kerja mikroskop dan cara penggunaannya.
LAMPIRAN
MIKROSKOP
lensa
7) Sesuaikan jarak antar pupil sampai gambar kiri dan gambar kanan menyatu
dengan cara menggeser-geser kedua lensa okuler karena setiap orang
mempunyai jarak antar pupil yang berbeda-beda).
8) Fokuskan gambar dengan mata kanan dengan cara melihat ke dalam
okuler kanan dan sesuaikan dengan tombol pengatur focus halus.
9) Fokuskan gambar dengan mata kiri dengan cara melihat ke dalam okuler
kiri dan putar. cincin penyesuai diopter sampai didapatkan gambar yang
paling jelas, baik untuk mata kiri maupun mata kanan.
10) Buka iris/diafragma sampai 70 – 80%, hingga lapangan pandang terang
dengan merata.
11) Teteskan minyak imersi di atas sediaan (aplikator jangan menyentuh sedi-
aan) dan putar lensa objektif 100 x ke tempatnya sampai berbunyi “klik”.
12) Fokuskan dengan menggunakan tombol pengatur fokus halus (jangan
menggunakan tombol pengatur fokus kasar sebab dapat menyebabkan
pecahnya lensa objektif maupun kaca sediaan) sampai didapatkan gambar
yang paling jelas.
13) Gunakan pengatur tegangan lampu untuk mendapatkan cahaya yang
tepat.
LAMPIRAN
MIKROSKOP
14) Begitu sediaan selesai dibaca, putar objektif 100 x menjauhi kaca sediaan,
tempatkan objektif 10 x di atas sediaan, lalu sediaan diambil.
15) Bila telah selesai, atur kembali pengatur tegangan lampu ke minimum dan
matikan mikroskop dengan menekan tombol OFF.
16) Setiap selesai menggunakan mikroskop, bersihkan dengan hati-hati minyak
emersi dari lensa objektif 100 x dengan menggunakan kertas lensa/kain
halus, masukkan dalam kotak mikroskop yang telah dikontrol kelembaban-
nya dengan menempatkan lampu 5 watt yang menyala.
Perawatan mikroskop
Jangan sekali-kali membongkar bagian dalam mikroskop.
Membersihkan lensa
Untuk membersihkan lensa sebaiknya gunakan Ethyl ether atau pembersih
lensa yang sesuai anjuran pabrik. Beberapa bahan pembersih dapat merusak
permukaan lensa atau melarutkan perekat lensa setelah digunakan beberapa
waktu.
LAMPIRAN
MIKROSKOP
Sumber cahaya
• Jangan sekali-sekali menyentuh permukaan bola lampu dengan tangan telan-
jang, karena lemak kulit yang tertinggal akan mengurangi terangnya sinar.
• Gunakan kertas tissue/ kertas lensa/ pembungkus lampu untuk memegang bola
lampu saat memasangnya ke mikroskop.
• Sebaiknya selalu tersedia cadangan lampu dan sekering. Pastikan voltase yang
digunakan sesuai, 110V atau 220V, dan bilamana perlu gunakan stabilisator
voltase.
• Harus ada ventilasi yang cukup agar panas yang dihasilkan lampu dapat diatasi.
Sebelum menyalakan lampu, putarlah regulator voltase ke minimum. Setelah
Jangan menyentuh
bola lampu saat mema-
Penghembus udara sang, gunakan tissue
LAMPIRAN
MIKROSKOP
Okuler harus tetap pada tempatnya, jamur atau debu dapat masuk melalui
lubang kosong tempat objektif bila lensa tidak terpasang. Bila lensa ada yang
hilang, tutup rapat dengan penutup yang tersedia.
Bila gambar terlihat buram atau ada bintik hitam, periksa adanya debu atau
kotoran pada lensa objektif, okuler, kondensor, dan kaca sumber cahaya.
Bintik hitam bergerak bila okuler diputar, berarti debu pada okuler. Bintik
hitam bila sediaan digerakkan, berarti debu pada kaca sediaan.
Debu pada lensa dapat dihilangkan dengan menggunakan sikat halus atau
dengan meniupkan udara dengan penghembus udara di atas permukaan
lensa.
Sulit digerakkan
Hal ini terjadi karena akumulasi debu atau karena saluran penggeser/ rakJamur
dan/roda
Jamur
gigi telah menjadi kasar. Atasi dengan cara membersihkan kotoran dan meminyak-
tumbuh
tumbuh
inya dengan minyak gemuk/ silicone grease. Debu dibersihkan dengan penghembus
di bagian
di
udara atau kuas, dapat pula dibersihkan dengan pelarut, misalnya bensin.dalam
bagian
Gangguan ini dapat pula terjadi akibat ada bagian yang melengkung. kepala
dalam
tabung
Longgar
Hal ini sering terjadi karena ulir kondensor telah aus. Laporkan pada teknisi alat.
Pertumbuhan jamur
• Jamur yang tumbuh di lensa, tabung okuler dan prisma menyebabkan gambar
LAMPIRAN
MIKROSKOP
Kotak penghangat untuk menyimpan mikroskop
LAMPIRAN
CARA PENGIRIMAN SEDIAAN APUS
1. Periksa masing-masing pot dahak
dengan menuliskan:
- Nama Pasien
- Tanggal
- .............
2. Tutup masing-masing pot dalam
Kantong bio-hazard secara bersa-
maan
3. Periksa ulang spesimen dengan
formulir pemeriksaan
4. Letakkan kantong bio-hazard yang
sudah disegel ke dalam kotak pen-
giriman
5. Letakkan formulir dan daftar asli ke
dalam kantong segel
6. Aturlah pengiriman agar tidak
bergerak
7. Kemudian masukkan kantong
LAMPIRAN
INFORMASI UNTUK PASIEN
1. Dokter/perawat mengirim anda ke laboratorium karena mereka menduga bahwa
mungkin anda mempunyai gejala TB.
2. Untuk mendiagnosa TB dibutuhkan 3 spesimen dahak yang akan dikumpul-
kan:
- Pemeriksaan pertama
- Esok paginya sebelum sarapan
- Ketika kembali ke laboratorium keesokan harinya
3. Contoh kualitas dahak yang baik adalah dari paru-paru, bukan dari air liur atau
lendir hidung.
4. Berkumur dengan air jika anda baru saja makan, atau jika anda memakai gigi
palsu (cabut terlebih dahulu).
5. Untuk menghasilkan contoh dahak yang baik:
- Tarik nafas dalam-dalam 2 sampai 3 kali, hembuskan dengan kuat setiap kali
membuang nafas.
- Batukkan yang dalam melalui dada.
- Letakkan pot dalam keadaan terbuka dan tutupkan pada mulut untuk me-
nampung spesimen dahak.
- Tutup dengan rapat bila telah selesai.
6. Anda mungkin diminta untuk mengulang pengumpulan dahak untuk mempe-