Engenharia Bioquímica

Aula 6: Inibição Enzimática

Profa.Caroline Casagrande Sipoli

 CINÉTICA ENZIMÁTICA COM INIBIÇÃO

Modulador (ou efetor):

Substância que se combina à enzima para alterar sua atividade
catalítica.

Inibidor:
É um modulador que diminui a atividade enzimática,
ou seja ...

...reduz a taxa de uma reação

 CINÉTICA ENZIMÁTICA COM INIBIÇÃO

Aplicações do estudo da inibição enzimática:

- Controle reacional em processos industriais;
- Informações sobre a especificidade;
- Estrutura física e química do sítio ativo;
- Informações sobre o mecanismo da reação.

Tipos mais comuns de inibição

Irreversível pelo Substrato

Reversível:
- competitiva
- não competitiva
- acompetitiva
- mista
Inibição irreversível
 Inibição irreversível - QUIZ

Vários experimentos cinéticos de uma determinada reação

enzimática foram realizados, elevando-se a concentração de um
inibidor irreversível. Qual o comportamento que se pode observar?

A. KS aumenta e VMAX decresce.

B. KS decresce e VMAX aumenta.

C. KS e VMAX permanecem os mesmos.

D. KS permanece o mesmo e VMAX

decresce.
Inibição competitiva - REVERSÍVEL

cinética competitiva
 Inibição competitiva - REVERSÍVEL - QUIZ

Para um inibidor competitivo, sua presença em uma reação enzimática,

Afetará Ksap e Vmax da enzima?

A. KS aumenta e VMAX permanecerá o mesmo.

B. KS permanecerá o mesmo e VMAX aumenta.

C. KS diminui e VMAX aumenta.

D. KS e VMAX decrescem.
 Inibição competitiva - REVERSÍVEL - QUIZ

r
Sem inibidor
r max

Com inibidor competitivo

r max/2

0.0 ap
0Ks Ks S
Inibição não competitiva - Reversível

v I não tem efeito na ligação do substrato e vice-versa

v Complexo ESI não é produtivo
v Elevar [S]: Sempre haverá um complexo ESI não produtivo
Inibição não competitiva - Reversível

Para um inibidor não competitivo, em um estudo cinético, qual o

comportamento de VMAX com a elevação da concentração de
substrato?

A. VMAX permanecerá o mesmo.

B. VMAX diminui.

C. VMAX aumenta.

D. VMAX decresce.
Inibição não competitiva - Reversível

Para um inibidor não competitivo, em um estudo cinético, qual o

comportamento de KS com a elevação da concentração de inibidor?

A. KS permanecerá o mesmo.

B. KS diminui.

C. KS aumenta.

D. KS decresce.
Inibição não competitiva - Reversível
Inibição Acompetitiva - Reversível
- I liga-se reversivelmente ao complexo ES,
- I não se liga à enzima livre

Complexo ESI improdutivo E à Enzima

S à Substrato
I à Inibidor
Inibição Acompetitiva - Reversível

Para um inibidor Acompetitivo, em um estudo cinético, qual o

comportamento de KS e VMAX com a elevação da concentração
de inibidor?

A. KS e VMAX permanecerão iguais.

B. KS diminui e VMAX aumenta.

C. KS e VMAX aumentam.

D. KS e VMAX decrescem.
Inibição Acompetitiva
r

r Sem inibidor
max

rap max

Com inibidor Acompetitivo

rmax/2

rap max/2

0.0
0ap
Ks Ks S
Inibição Mista

- Forma de inibição não competitiva

- Porém existe diferença de afinidade do inibidor I para
E e para ES

http://www.wiley.com/college/pratt/0471393878/student/animations/enzyme_inhibition/index.html
Inibição Mista
Inibição pelo substrato

Smax
 Inibição pelo Substrato – Estimativa de parâmetros

v = k 2[Eo][S]
[S]2
Ks + [S] +
KSI
A baixas concentrações de substrato, [S]2/K SI <<1, o efeito de
inibição não é observado. Assim:

k 2 [E o][S]
v= sendo k2 [E0] = Vmax
KS +[S]

Linearizando-se a equação:

1 1 Ks 1
= +
v Vmax Vmax [S]
 Inibição pelo Substrato – Estimativa de parâmetros

v = k 2[Eo][S]
[S]2
Ks + [S] +
KSI

A altas concentrações de substrato, [Ks] + [S] ≈ [S], a

inibição é dominante. Então:

k 2[E o][S] k 2[E o]

v= = sendo k2 [E0] = Vmax
[S]2 [S]
[S]+ 1+
K SI K SI

1 1 [S]
Linearizando: = +
v Vmax VmaxKSI
Inibição pelo Substrato – Estimativa de parâmetros

O gráfico de 1/v em função de [S] resulta numa reta:

inclinação: 1/KSIVmax interseção: 1/Vmax

4 1/KSIVmax
1/v

1/Vmax 2

0 10 20 30 40

[S]
Efeito do pH na cinética enzimática

Efeito da variação do na atividade de enzimas com atividade máxima em (a) pH neutro,

(b) pH ácido e (c) pH alcalino
Efeito do pH na cinética enzimática

A predição teórica do pH ótimo requer o

conhecimento das características do sítio
ativo das enzimas, o que é pode ser de difícil
obtenção

O pH ótimo para uma enzima é geralmente obtido

experimentalmente

23
 Efeito da temperatura

Ø Aumento da Temperatura: pode resultar em desnaturação

térmica, comprometendo as estruturas quaternárias,
terciárias e secundárias, com consequente redução na
concentração enzimática efetiva, o que implica no decréscimo
da taxa de reação.

Ø À medida em que T se eleva, o aumento na velocidade de

reação devido ao aumento do número de colisões entre E e S
é compensado pelo aumento da velocidade de desnaturação.
 Efeito da temperatura

Ø A relação entre a constante de velocidade de uma reação, k, e

a energia de ativação, Ea, é dada pela equação de Arrhenius:

k = A.exp( -Ea/RT)

Onde:

k = constante de taxa de reação

A = constante para Arrhenius ou fator de frequencia (específica para cada
reação)
Ea = energia de ativação
R = constante dos gases ideais
T = temperatura absoluta
 Efeito da temperatura

Diagrama esquemático mostrando o efeito da temperatura em uma reação enzimática

___ Período curto de incubação
----- período longo de incubação
 Efeito da temperatura

Gráfico típico de log v em função de 1/T para

reações enzimáticas

log v

1/T
 Resumo das ligações que mantêm o
enovelamento das proteínas
Leitura recomendada …
SHULER, M. L. E KARGI, F. - Bioprocess Engineering Basic Concepts,
Editora Prentice- Hall International Inc., Englewood Cliffs, 1992 – capítulo 3

SEGEL, I. H. - Biochemical calculations : how to solve mathematical problems

in general biochemistry - J. Wiley, New York, 1976 – capítulo 4

Endereços eletrônicos de consulta para estudo:

http://www.wiley.com/college/pratt/0471393878/student/animations/enzyme_inhibition/index.html

Fig 12 do endereço:
http://www.wiley.com/college/fob/anim/#chap3