8
Metode Penelitian ukuran nanopartikel yang terbentuk akibat
Pembuatan Nanopartikel Kitosan
(Ambarsari et al. 2009)
Kitosan dilarutkan dalam asam asetat 2%
sehingga diperoleh konsentrasi kitosan 2%.
Campuran diaduk dengan magnetic stirrer
untuk mempercepat pelarutan. Larutan kitosan
kemudian dibagi dalam 4 Erlenmeyer dengan
volume masing-masing 100 mL. Erlenmeyer 1
dan 2 ditambahkan dengan masing-masing 50
mL TPP 0,5% sedangkan Erlenmeyer 3 dan 4
tidak ditambahkan dengan TPP. Larutan
kemudian disonikasi dengan ultrasonikator.
Erlenmeyer 1 dan 3 disonikasi selama 30
menit dengan pulsa hidup 5 detik dan pulsa
mati 1 detik. Erlenmeyer 2 dan 4 disonikasi
selama 60 menit dengan pulsa hidup 5 detik
dan pulsa mati 1 detik. Keempat larutan
kitosan yang telah disonikasi dikeringkan.
Pengeringan dilakukan dengan dua metode
yaitu pengeringan beku dan pengeringan
semprot untuk mengetahui bentuk kitosan
kering yang dapat dikarakterisasi.
Pembuatan Nanopartikel Ekstrak
Temulawak Tersalut Kitosan (Modifikasi
Kim et al. 2006)
Kitosan dilarutkan dalam asam asetat 2%
sehingga diperoleh konsentrasi kitosan 2%.
Campuran diaduk dengan magnetic stirrer
untuk mempercepat pelarutan. Disiapkan 2
labu Erlenmeyer yang diisi dengan 100 mL
larutan kitosan 2%. Tiap Erlenmeyer
ditambahkan 50 mL TPP 0.5%. Erlenmeyer 1
ditambahkan dengan 1 mL ekstrak temulawak
5% larut dalam etanol 70% sedangkan
Erlenmeyer 2 tidak ditambahkan dengan
ekstrak temulawak. Kedua sampel kemudian
disonikasi selama 30 menit. Kedua larutan
kitosan yang telah disonikasi dikeringkan
dengan pengering semprot sehingga diperoleh
sampel dalam bentuk serbuk.
Serbuk kitosan-TPP dilarutkan kembali
dalam 100 mL asam asetat 2% dan 50 mL
akuades. Untuk mempercepat pelarutan,
digunakan magnetic stirrer dengan
pemanasan. Sebanyak 1 mL ekstrak
temulawak 5% ditambahkan dalam larutan
kitosan-TPP. Campuran disonikasi kembali
selama 30 menit kemudian dikeringkan
dengan pengering semprot. Sampel kering
dikarakterisasi dengan SEM untuk
memperoleh ukuran partikel.
Setelah diperoleh tahapan pembuatan
nanopartikel terpilih, dilakukan variasi waktu
sonikasi selama 30 dan 60 menit untuk
mengetahui apakah masih terdapat perbedaan
penambahan waktu sonikasi.
Penentuan Ukuran dan Morfologi
Nanopartikel dengan Mikroskop Elektron
Payaran (SEM) (Modifikasi Desai & Park
2005)
Serbuk nanopartikel kitosan diletakkan
pada potongan kuningan (stub) berdiameter 1
cm dengan menggunakan selotip dua sisi.
Selanjutnya serbuk tersebut dibuat menjadi
konduktif secara elektrik dengan seberkas
sinar platina lapis tipis dari coater selama 30
detik pada tekanan dibawah 2 Pa dan kuat
arus 30 mA. Foto diambil pada tegangan
elektron 10 kV dengan perbesaran yang
diinginkan.
Karakterisasi Gugus Fungsi Nanopartikel
dengan Fourier Transform Infra Red
(FTIR) (Kencana 2009)
Sebanyak 2 mg sampel nanopartikel
dicampur dengan 100 mg KBr untuk dibuat
pelet dengan pencetak vakum. Pelet yang
terbentuk dikenai sinar infra merah pada
jangkauan bilangan gelombang 4000 – 400
cm-1. Latar belakang penyerapan dihilangkan
dengan cara pelet KBr dijadikan satu pada
setiap pengukuran.
Karakterisasi Derajat Kristalinitas
Nanopartikel dengan Difraksi Sinar X
(XRD) (Kencana 2009)
Sebanyak 200 mg sampel dicetak langsung
pada cetakan aluminium berukuran 2 x 2,5 cm
dengan bantuan perekat. Derajat kristalinitas
ditentukan menggunakan XRD dengan
sumber sinar dari tembaga pada panjang
gelombang 1,5406 Ǻ.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Nanopartikel Kitosan
Optimalisasi pembuatan nanopartikel
kitosan menggunakan tiga variasi yaitu
penambahan TPP, waktu ultrasonikasi, dan
seleksi metode pengeringan. Penambahan TPP
bertujuan untuk membentuk ikatan silang
ionik antar melekul kitosan sehingga dapat
digunakan sebagai bahan penjerap (Mi et al.
1999). Ultrasonikasi digunakan untuk
memecah molekul polimer menjadi berukuran
lebih kecil dengan energi ultrasonik. Semakin
lama waktu ultrasonikasi, proses pemecahan
molekul polimer kitosan akan terus berjalan.
Menurut Kencana (2009), bobot molekul
kitosan mengalami penurunan signifikan
antara waktu ultrasonikasi 8 menit dan 60

menit. Penurunan bobot molekul ini
menunjukkan polimer kitosan mengalami
pemecahan molekul selama proses
ultrasonikasi. Variasi waktu ultrasonikasi
yang digunakan adalah 30 dan 60 menit untuk
melihat pengaruh waktu ultrasonikasi
terhadap ukuran partikel. Seleksi metode
pengeringan dilakukan untuk memperoleh
bentuk kering sampel nanopartikel sehingga
dapat dikarakterisasi. Metode pengeringan
yang diseleksi adalah pengeringan beku dan
pengeringan semprot. Karakterisasi ukuran
dan morfologi partikel dilakukan dengan
SEM. Karakterisasi gugus fungsi dengan
FTIR dan karakterisasi derajat kristalinitas
dengan XRD dilakukan apabila telah
diperoleh sediaan nanopartikel ekstrak
temulawak.
Kitosan yang digunakan dalam penelitian
ini adalah kitosan larut asam. Larutan kitosan
2% tersebut diberi dua perlakuan yaitu
penambahan TPP 0,5% dan tanpa
penambahan TPP. Selain itu, dilakukan variasi
waktu sonikasi 30 dan 60 menit untuk masing-
masing sampel. Perlakuan ini bertujuan
membandingkan ukuran dan kestabilan
partikel setelah proses sonikasi dan
pengeringan. Hasil sonikasi menunjukkan
sampel dengan penambahan TPP berbusa
sedangkan sampel tanpa penambahan TPP
tidak berbusa (Gambar 4). Tripolifosfat
merupakan senyawa pengkelat yang dijadikan
bahan baku pembuatan deterjen. Fosfat
memiliki fungsi antara lain meningkatkan
emulsifikasi serta mengurangi penggunaan
surfaktan (Madsen et al. 2001).
Sampel hasil ultrasonikasi dikeringkan
dengan dua cara yaitu pengeringan beku dan
pengeringan semprot. Kedua cara pengeringan
tersebut menghasilkan bentuk sampel kering
yang berbeda. Pengeringan beku
menghasilkan sampel kering berbentuk
lembaran kuning seperti plastik sedangkan
hasil pengeringan semprot berbentuk serbuk
putih. Pengeringan beku menggunakan prinsip
sublimasi air dalam bentuk beku. Sampel
amorf cenderung membentuk gel apabila
dikeringkan dengan pengering beku sehingga
kitosan kering yang diperoleh berbentuk
lembaran seperti plastik (Jennings 1999).
Kitosan hasil pengeringan semprot berbentuk
serbuk putih. Pengeringan semprot
menggunakan panas untuk menghilangkan air
pada kitosan. Penguapan dilakukan pada saat
larutan sampel disemprotkan (Patel et al.
2009). Pada tahap selanjutnya, pengeringan
sampel beku tidak digunakan karena tidak
diperoleh gambaran partikel oleh SEM.
9
a b
c d
Gambar 4 Hasil ultrasonikasi dengan
penambahan TPP selama 30 menit
(a), 60 menit (b) serta tanpa
penambahan TPP selama 30 menit
(c) dan selama 60 menit (d).
Sampel yang telah dikeringkan dengan
pengering semprot kemudian dihitung
rendemennya. Rendemen dari 150 mL sampel
larutan nanopartikel kitosan ditunjukkan pada
Tabel 2. Secara umum, rendemen yang
diperoleh setelah pengeringan baik untuk
sampel nanopartikel kitosan maupun
nanopartikel kitosan-TPP di bawah 50%.
Rendahnya rendemen yang diperoleh
disebabkan beberapa sampel menempel pada
tabung pengering semprot. Hal ini disebabkan
alat tidak mampu mempertahankan suhu
pengeringan semprot secara stabil. Suhu pada
awal penyemprotan sebesar 140 ºC (inlet) dan
suhu saat sampel keluar dari tabung penguap
sebesar 80 ºC (outlet). Suhu inlet di bawah
140 ºC menyebabkan sampel tidak bisa kering
secara sempurna sehingga menempel pada
dinding tabung pengering semprot (Zuidam &
Nedovic 2010).
Pengeringan semprot banyak digunakan
untuk sampel yang mengandung partikel yang
larut dalam air, memiliki sifat kristalinitas dan
mudah berdifusi. Selain itu, sampel yang
dikeringkan dengan pengering semprot harus
tahan terhadap panas (Patel et al. 2009).
Tabel 2 Rendemen nanopartikel kitosan hasil
pengeringan semprot pada tiap waktu
sonikasi
Rendemen
Sampel 30 menit 60 menit
gram % gram %
Kitosan 0,652 32,58 0,804 40,21
Kitosan 0,833 37,02 0,614 27,31
+ TPP

Setelah diperoleh nanopartikel kering,
sampel dikarakterisasi secara fisik.
Karakterisasi fisik partikel dilakukan dengan
mikroskop elektron payaran (scanning
electron microscopy/ SEM). Mikroskop
elektron payaran digunakan untuk mengamati
morfologi dan menentukan ukuran
nanopartikel. Metode ini merupakan cara
yang efisien dalam memperolah gambar
permukaan spesimen. Cara kerja mikroskop
ini adalah dengan memancarkan elektron ke
permukaan spesimen. Informasi tentang
permukaan partikel dapat diperoleh dengan
pengenalan probe dalam lintasan pancaran
elektron yang mengenai permukaan partikel.
Informasi juga dapat dibawa oleh probe yang
menangkap elektron pada terowongan antara
permukaan partikel spesimen dengan tip
probe atau sebuah probe yang menangkap
gaya dorong antara permukaan dengan tip
probe (Poole & Owens 2003). Data yang
diperoleh dari SEM berupa foto dua dimensi
yang menampilkan permukaan spesimen.
Menurut Kencana (2009), penentuan
ukuran partikel ditentukan oleh bentuk
partikel kitosan. Foto SEM pada sampel
pengeringan semprot menunjukkan bahwa
nanopartikel memiliki bentuk menyerupai
bola. Oleh karena itu, ukuran partikel
ditentukan dengan mengukur diameter
nanopartikel kitosan.
Sampel pengeringan beku dan pengeringan
semprot menghasilkan foto SEM yang
berbeda. Nanopartikel kitosan hasil
pengeringan beku tidak dapat diambil gambar
partikelnya oleh SEM. Bentuk kering
nanopartikel berupa membran pada sampel
pengeringan beku menyebabkan sampel
kurang konduktif walaupun telah diberi
pelapis platina. Menurut Poole & Owens
(2003), kondisi ini menyebabkan elektron
yang dipancarkan pada permukaan partikel
tidak dapat terdeteksi. Karena sampel
pengeringan beku tidak dapat diambil foto
SEM, maka metode pengeringan ini tidak
digunakan pada tahap selanjutnya.
Sampel nanopartikel kitosan hasil
pengeringan semprot terlihat oleh SEM
berupa partikel aglomerat putih (Gambar 5).
Penggumpalan ini disebabkan larutan kitosan
tidak diberi surfaktan (Kencana 2009). Selain
itu, jarak waktu antara sonikasi dengan
pengeringan semprot yang terlalu lama dapat
mengakibatkan terjadinya penggumpalan.
Penggumpalan lebih banyak terjadi pada
larutan kitosan yang diberi TPP dibanding
tanpa penambahan TPP. Penambahan TPP
mengakibatkan molekul-molekul kitosan
10
berikatan silang sehingga peluang terjadi
penggumpalan semakin besar (Desai & Park
2005). Penggumpalan dapat dikurangi dengan
mempersingkat jarak waktu antara sonikasi
dengan pengeringan semprot.
Morfologi partikel kitosan berdasarkan
foto SEM memiliki bentuk bulat dengan
permukaan kasar dan berkerut. Nanopartikel
kitosan dan nanopartikel kitosan-TPP
memiliki bentuk permukaan partikel yang
sama. Menurut Desai & Park (2005),
penambahan TPP pada kitosan tidak akan
mempengaruhi morfologi permukaan
nanopartikel yang dihasilkan karena TPP
hanya membentuk ikatan ionik antar molekul
kitosan. Perubahan morfologi nanopartikel
kitosan akan berubah apabila ada bahan
pengisi dalam kitosan.
Rentang ukuran partikel dari keempat
perlakuan sulit ditentukan karena banyaknya
partikel yang menggumpal dan beragamnya
ukuran partikel yang diperoleh (Gambar 5).
Berdasarkan data foto SEM, ukuran partikel
sampel kitosan dengan perlakuan penambahan
TPP dan ultrasonikasi 60 menit tidak bisa
ditentukan karena terjadi penggumpalan yang
sangat banyak. Rentang ukuran nanopartikel
yang dapat diamati disajikan dalam Tabel 3.
Beragamnya ukuran partikel disebabkan tidak
semua molekul kitosan terpecah pada saat
ultrasonikasi. Pada bagian terluar larutan
kitosan dalam Erlenmeyer tidak memperoleh
energi yang cukup dari ultrasonikator untuk
memecah molekul kitosan. Derajat deasetilasi
kitosan juga berpengaruh terhadap pemecahan
molekul. Semakin rendah derajat deasetilasi
maka gugus asetil pada molekul kitosan
semakin banyak sehingga bobot molekulnya
semakin besar. Besarnya molekul kitosan
memerlukan energi ultrasonikasi yang lebih
tinggi untuk memecah molekul (Kencana
2009).
Berdasarkan hasil yang diperoleh,
nanopartikel kitosan dengan ukuran terkecil
dihasilkan melalui perlakuan penambahan
TPP dengan ultrasonikasi selama 30 menit
dan pengeringan sampel dengan pengering
semprot. Perlakuan ini digunakan untuk tahap
pembuatan nanopartikel ekstrak temulawak
tersalut kitosan.
Tabel 3 Rentang diameter nanopartikel
kitosan hasil pengeringan semprot
Perlakuan waktu sonikasi
Perlakuan 30 menit 60 menit
(nm) (nm)
Kitosan 384 – 6900 577 – 4800
Kitosan + TPP 267 - 3000 -
 11

a b

c d

Gambar 5 Foto SEM kitosan tanpa TPP sonikasi 30 menit (a), 60 menit (b) serta dengan TPP
sonikasi 30 menit (c), dan 60 menit (d) pada perbesaran 3000 kali dengan skala 2,7 cm :
5000 nm. Partikel terbesar dalam lingkaran kuning dan terkecil lingkaran merah (inset).

Nanopartikel Ekstrak Temulawak Tersalut kurkumin dan xantorizol memiliki bobot

Kitosan molekul lebih kecil. Kurkumin memiliki
Nanopartikel ekstrak temulawak dibuat bobot molekul 368 Da sedangkan xantorizol
dengan menggunakan perlakuan terpilih pada memiliki bobot molekul 218 Da (Sidik et al.
tahap pembuatan nanopartikel kitosan yaitu 1995). Senyawa-senyawa aktif tersebut
penambahan TPP dan ultrasonikasi 30 menit diharapkan dapat terjerap dalam kitosan.
dengan pengeringan semprot. Pembuatan Kedua sampel yang telah dikeringkan
sediaan nanopartikel ekstrak temulawak dengan pengering semprot kemudian dihitung
tersalut kitosan dilakukan dengan rendemennya. Sebanyak 151 mL larutan
membandingkan dua perlakuan penambahan nanopartikel kitosan-ekstrak temulawak sekali
ekstrak temulawak sebelum ultrasonikasi 30 ultrasonikasi diperoleh 0,862 gram
menit dan setelah pengeringan (dua kali nanopartikel kering sedangkan larutan
ultrasonikasi). Perlakuan ini bertujuan nanopartikel kitosan-ekstrak temulawak dua
mengamati pengaruh tahap penambahan kali ultrasonikasi dengan volume yang sama
ekstrak temulawak terhadap bentuk dan diperoleh 0,126 gram nanopartikel kering.
ukuran optimal nanopartikel. Perlakuan Persentase rendemen yang diperoleh dari
pertama adalah penyediaan nanopartikel kedua perlakuan masih di bawah 50% (Tabel
kitosan sekaligus penambahan ekstrak 4).
temulawak dengan sekali ultrasonikasi
kemudian dikeringkan. Perlakuan kedua Tabel 4 Rendemen nanopartikel ekstrak
adalah penyediaan nanopartikel kitosan temulawak hasil sekali dan dua kali
terlebih dahulu dalam bentuk serbuk ultrasonikasi
kemudian dilarutkan kembali dengan Rendemen
Sampel
penambahan ekstrak temulawak diikuti oleh gram %
ultrasonikasi kedua dan dikeringkan. Kitosan+TPP+ekstrak 0,862 37,48
Kitosan yang digunakan dalam penelitian temulawak (sekali
ini memiliki bobot molekul 800 kDa ultrasonikasi)
sedangkan ekstrak temulawak yang digunakan
merupakan ekstrak kasar dengan bobot Nanokitosan+ekstrak
0,126 5,47
molekul cukup besar. Akan tetapi, komponen temulawak (dua kali
senyawa aktif ekstrak temulawak seperti ultrasonikasi)

Kedua sampel perlakuan yang telah
dikeringkan kemudian dikarakterisasi dengan
SEM. Hasil foto SEM menunjukkan
perlakuan penambahan ekstrak temulawak
setelah pengeringan (dua kali ultrasonikasi)
terlihat lebih seragam daripada perlakuan
penambahan ekstrak temulawak sebelum
ultrasonikasi. Selain itu, rentang ukuran
partikel pada perlakuan kedua lebih kecil
dengan diameter partikel 400 – 3600 nm
sedangkan rentang ukuran partikel pada
perlakuan pertama berkisar 400 – 5000 nm
(Gambar 6). Hasil ini menunjukkan bahwa
ultrasonikasi kedua masih dapat memecah
partikel kitosan-ekstrak temulawak.
Perbedaan keseragaman nanopartikel antara
kedua sampel disebabkan proses pemberian
energi ultrasonikasi untuk pemecahan partikel
pada sampel dua kali ultrasonikasi lebih
banyak dibandingkan dengan satu kali
ultrasonikasi. Akan tetapi, ukuran partikel
terkecil yang diperoleh dari kedua perlakuan
relatif sama yaitu sebesar 400 nm.
Indikasi penyalutan ekstrak temulawak
oleh kitosan dapat dilihat dari morfologi
nanopartikel yang dihasilkan dari foto SEM.
Menurut Desai & Park (2005), nanokitosan
yang telah terisi dengan senyawa obat
memiliki bentuk seperti bola dan morfologi
permukaan partikel yang lebih halus.
Nanokitosan yang tidak terisi dengan senyawa
obat cenderung memiliki bentuk tidak
beraturan dan memiliki morfologi permukaan
partikel yang cekung. Selain itu, konsentrasi
TPP yang ditambahkan akan mempengaruhi
porositas kitosan. Semakin tinggi konsentrasi
TPP menyebabkan ikatan silang dengan
kitosan semakin banyak sehingga pori-pori
kitosan-TPP semakin kecil. Ukuran pori
kitosan-TPP yang terlalu kecil dapat
menyebabkan ekstrak temulawak sulit masuk
ke dalam kitosan.
a b
Gambar 6 Foto SEM nanopartikel temulawak dengan sekali ultrasonikasi (a) dan dua kali
ultrasonikasi 30 menit (b) pada perbesaran 4000 kali dengan skala 3,1 cm : 5000 nm.
Partikel terbesar dalam lingkaran kuning sedangkan partikel terkecil dalam lingkaran
merah (inset).
12
Berdasarkan hasil yang diperoleh pada
kedua tahap penelitian, ukuran nanopartikel
kitosan kosong lebih kecil dibandingkan
nanopartikel kitosan yang terisi oleh ekstrak
temulawak dengan waktu sonikasi yang sama.
Nanopartikel kitosan kosong dengan
penambahan TPP pada awal penelitian
memiliki rentang ukuran 267 - 3000 nm
sedangkan ukuran nanopartikel kitosan-
ekstrak temulawak antara 400 - 5000 nm.
Data tersebut memperlihatkan bahwa
pengisian ekstrak temulawak ke dalam
nanopartikel kitosan mengakibatkan ukuran
partikel menjadi lebih besar.
Mekanisme penjerapan ekstrak temulawak
diduga merupakan penjerapan fisik dengan
bantuan energi ultrasonikasi. Hal ini
disebabkan senyawa aktif dalam ekstrak
temulawak dan kitosan tidak memiliki muatan
sehingga tidak ada ikatan ionik yang terjadi.
Menurut Mi et al. (1999), kitosan akan
berikatan silang dengan TPP membentuk
butiran manik-manik yang memiliki pori-pori.
Pori-pori tersebut dapat digunakan untuk
menjerap bahan seperti logam atau obat-
obatan. Berdasarkan penelitian Kencana
(2009), energi ultrasonikasi dapat memberikan
tekanan terhadap partikel ekstrak temulawak
sehingga masuk dalam kitosan melalui pori-
pori hasil ikatan silang partikel kitosan dengan
TPP. Akan tetapi, diperlukan penelitian
lanjutan mengenai mekanisme penjerapan
ekstrak temulawak oleh nanopartikel kitosan.
Hasil perbandingan kedua perlakuan
tersebut menunjukkan teknik penambahan
ekstrak temulawak setelah diperoleh
nanopartikel kitosan kering dengan
ultrasonikasi 30 menit menghasilkan rentang
ukuran lebih kecil. Selanjutnya, teknik ini
akan digunakan untuk menentukan pengaruh
waktu ultrasonikasi 60 menit terhadap ukuran
nanopartikel ekstrak temulawak.
 13

Pengaruh Ultrasonikasi 30 menit dan 60
menit
Nanopartikel ekstrak temulawak tersalut
kitosan yang memiliki keseragaman tinggi dan
ukuran terkecil diperoleh dengan perlakuan
dua kali ultrasonikasi selama 30 menit. Akan
tetapi belum diketahui apakah penambahan
waktu ultrasonikasi masih berpengaruh
terhadap ukuran nanopartikel ekstrak
temulawak dengan teknik penambahan ekstak
temulawak setelah terbentuk nanopartikel
kitosan kering. Variasi waktu sonikasi selama
30 menit dan 60 menit dilakukan untuk
mengetahui apakah ukuran nanopartikel
ekstrak temulawak masih bisa dioptimalkan
dengan penambahan waktu ultrasonikasi.
Kedua sampel nanopartikel kitosan-
ekstrak temulawak kering yang diperoleh
diamati ukuran dan morfologi partikel dengan
SEM. Hasil foto SEM yang diperoleh
menunjukkan nanopartikel ekstrak temulawak
dengan dua kali ultrasonikasi selama 30 menit
memiliki rentang ukuran 647 - 3529 nm
sedangkan sampel yang sama dengan waktu
ultrasonikasi 60 menit berukuran 470 – 3000
nm (Gambar 7). Perbedaan ukuran ini
memperlihatkan bahwa masih ada efek
pemecahan molekul kitosan yang dihasilkan
dari penambahan waktu ultrasonikasi.
Menurut Kencana (2009), semakin lama
waktu ultrasonikasi menyebabkan energi yang
dikeluarkan oleh ultrasonikator dapat diterima
oleh semua partikel dalam larutan kitosan.
Pemecahan molekul kitosan ini terjadi apabila
frekuensi gelombang yang dikeluarkan
ultrasonikator mengalami resonansi dengan
frekuensi molekul kitosan. Resonansi
merupakan peristiwa ikut bergetarnya suatu
benda akibat gelombang dari sumber (Tipler
1998).
Keragaman ukuran nanopartikel ekstrak
temulawak tersalut kitosan yang diperoleh
pada penelitian ini cukup besar. Menurut
Poulain & Nakache (1997), keragaman ini
dapat dikurangi dengan ultrafiltrasi atau
ultrasentrifugasi. Ultrafiltrasi dengan alat
mikrokonsentrator yang dilengkapi membran
ultrafiltrasi dapat memisahkan nanopartikel
dengan mikropartikel. Mikrokonsentrator ini
bahkan dapat digunakan untuk seleksi
nanopartikel yang telah terisi atau belum
terisi. Ultrasentifugasi dengan pendingin pada
kecepatan 20.000 rpm selama 45 menit dapat
memisahkan nanopartikel yang telah terisi
pada bagian pelet dan nanopartikel yang tidak
terisi pada bagian supernatan.
Letak ekstrak temulawak tidak dapat
diketahui dari foto SEM. Salah satu metode
yang dapat digunakan untuk menentukan
gugus fungsi senyawa adalah FTIR. Menurut
Bisht et al. (2007) dan Poulain & Nakache
(1997), FTIR dapat digunakan untuk
menentukan keberadaan polimer yang
dijadikan sebagai bahan pengisi.

a b

c d

Gambar 7 Foto SEM nanopartikel temulawak sonikasi 30 menit (a) dan sonikasi 60 menit (b)
pada perbesaran 2000 kali serta sonikasi 30 menit (c) dan sonikasi 60 menit (d) pada
perbesaran 10000 kali dengan skala 1,7 cm : 1000 nm. Partikel terkecil ditunjukkan
dengan lingkaran merah sedangkan partikel terbesar ditunjukkan dengan lingkaran
kuning.
 14

Gugus Fungsi Spesifik Nanopartikel spesifik dari kurkumin dan kitosan

Ekstrak Temulawak
Penentuan keberadaan ekstrak temulawak
dalam kitosan sangat diperlukan untuk
mengetahui kemampuan penyalutan. Salah
satu metode yang dapat digunakan untuk
menentukan keberadaan ekstrak temulawak
adalah FTIR. Spektrum infra merah dapat
mendeteksi keberadaan gugus fungsi yang
digunakan untuk identifikasi senyawa dalam
suatu sampel polimer (Zhang et al. 2007).
FTIR yang digunakan pada penelitian ini
menggunakan bilangan gelombang tingkat
menengah yaitu antara 4000–200 cm-1.
Pembanding yang digunakan pada penelitian
ini adalah standar kurkumin. Hal ini
disebabkan belum adanya data FTIR standar
ekstrak temulawak. Kurkumin digunakan
sebagai pembanding karena merupakan salah
satu senyawa aktif yang terdapat dalam
ekstrak temulawak (Wahyudi 2006).
Prinsip kerja FTIR berdasarkan pada
serapan atau transmitan sinar infra merah oleh
molekul penyusun suatu senyawa pada
sampel. Apabila frekuensi dari suatu vibrasi
gugus fungsi sama dengan frekuensi radiasi
sinar infra merah maka molekul akan
menyerap sinar tersebut. Hal ini menyebabkan
tidak semua sinar infra merah diserap oleh
molekul, sebagian lainnya diteruskan
(Kencana 2009). Data yang diperoleh dari alat
ini berupa grafik serapan dan transmitan dari
sampel.
Menurut Wahyudi (2006), kurkumin
memiliki gugus fungsi spesifik yaitu C-H ulur,
C-H tekuk, C-C, C=C, -OH, C-O, dan C=O
sedangkan gugus fungsi khas yang terdapat
pada kitosan murni adalah gugus amida (-
NH2) dan hidroksil (-OH) (Bumkhar &
Pokharkar 2006, Firdaus et al. 2008).
Bilangan gelombang tiap gugus fungsi
ditunjukkan pada Tabel 5.
Grafik transmitan hasil FTIR nanokitosan
murni pada penelitian ini menunjukkan
adanya gugus amida pada bilangan gelombang
1575 cm-1. Gugus yang sama terlihat juga
pada sampel nanopartikel ekstrak temulawak
dengan sonikasi 30 dan 60 menit yaitu pada
bilangan gelombang 1576 cm-1 dan 1572 cm-1
(Gambar 8). Gugus fungsi hidroksil pada
sampel nanokitosan murni muncul pada
bilangan gelombang 3415 cm-1 (Tabel 5).
Menurut Bumkhar & Pokharkar (2006) dan
Firdaus et al. (2008), gugus hidroksil pada
kitosan akan muncul pada bilangan
gelombang sekitar 3450 cm-1 karena adanya
interaksi regangan vibrasi antara gugus
hidroksil dengan gugus amida pada kitosan.
Berdasarkan grafik FTIR yang diperoleh,
gugus fungsi khas yang terdapat pada
kurkumin seperti gugus fungsi C=O, C=C,
dan C-H tekuk tidak terdeteksi pada sampel
nanopartikel ekstrak temulawak dengan
ultrasonikasi 30 menit maupun 60 menit.
Akan tetapi terjadi pergeseran gugus fungsi –
OH, -NH2, C-O, dan C-H ulur pada sampel
nanopartikel ekstrak temulawak dibandingkan
dengan standar kitosan. Pergeseran panjang
gelombang tersebut disebabkan adanya
interaksi antara gugus fungsi lain selain gugus
fungsi kitosan (Colthup et al. 1975). Gugus
fungsi spesifik kurkumin yang tidak terdeteksi
pada sampel nanopartikel ekstrak temulawak
disebabkan konsentrasi ekstrak temulawak
yang digunakan dalam metode ini sangat
sedikit yaitu 5%. Keberadaan kurkumin dapat
terlihat dari warna kuning sediaan
nanopartikel ekstrak temulawak kering.
Analisis lanjutan menggunakan XRD
diperlukan untuk membuktikan adanya
senyawa pengisi dalam kitosan.

Tabel 5 Bilangan gelombang gugus fungsi spesifik standar kurkumin, standar kitosan, sampel
nanopartikel kitosan-ekstrak temulawak dengan ultrasonikasi 30 dan 60 menit
Bilangan gelombang (cm-1)
Gugus Sampel Sampel
fungsi Kurkumin Kitosan ultrasonikasi 30 ultrasonikasi 60 Literatur
menit menit
-OH 3509 3415 3398 3372 3700-3100
C-H ulur 2922 2926 2925 2924 3000-2700
C=O 1628 - - - 1900-1550
C=C 1602 - - - 1700-1550
N-H 1575 1576 1572 1660-1500
C-C 1429 1413 1413 1411 1500-1430
C-O 1281 1257 1256 1259 1300-1000
C-H tekuk 812 - - - 880-750
Sumber data literatur: Colthup et al. (1975)
 15

Transmitan

Bilangan gelombang

Gambar 8 Grafik transmitan hasil FTIR untuk standar kurkumin (ungu), standar kitosan (biru),
sampel nanopartikel ekstrak temulawak sonikasi 30 menit (hijau), dan nanopartikel
eksrak temulawak sonikasi 60 menit (jingga).

Derajat Kristalinitas Nanopartikel Ekstrak (2002), adanya molekul pengisi tersebut

Temulawak menyebabkan susunan antar partikel menjadi
Analisis XRD digunakan untuk semakin kompak. Nilai derajat kristalinitas
menentukan struktur fisik bahan. Data yang nanokitosan merupakan yang paling rendah
diperoleh dari analisis XRD berupa grafik menunjukkan nanokitosan lebih mudah
hubungan sudut difraksi sinar X pada bahan disisipi dengan ekstrak temulawak
dengan intensitas sinar yang dipantulkan oleh dibandingkan nanopartikel ekstrak temulawak
bahan. Nilai derajat kristalinitas dapat sonikasi 30 dan 60 menit. Data ini
diketahui dari grafik kristalinitas yang menunjukkan bahwa ekstrak temulawak telah
memotong bagian lembah dari grafik. mengisi kitosan.
Hasil karakterisasi sampel nanopartikel Puncak-puncak yang sangat tajam pada
dengan XRD menunjukkan sifat amorf. Sifat grafik derajat kristalinitas (Lampiran 5)
amorf ini menunjukkan bahwa partikel menunjukkan adanya pengotor logam yang
penyusun suatu molekul tersusun secara tidak bersifat kristalin. Logam yang terdeteksi
beraturan dan kurang kompak. merupakan bahan cetakan yang digunakan
Ketidakteraturan susunan partikel ini untuk meletakkan sampel. Hal ini disebabkan
menyebabkan ruang di antara partikel mudah sampel yang dianalisis terlalu sedikit sehingga
untuk disisipi partikel lain. Semakin amorf terdapat bagian cetakan yang tidak tertutup
sifat suatu molekul maka semakin mudah oleh sampel.
untuk disisipi molekul lain (Mason & Lorimer
2002) Sifat ini ditandai dengan puncak pada Tabel 6 Nilai derajat kristalinitas sampel
sudut difraksi 20º untuk sampel nanopartikel nanopartikel ekstrak temulawak hasil
kitosan-ekstrak temulawak ultrasonikasi 30 analisis XRD
menit dan 21º pada sampel nanopartikel Derajat
Sampel
kitosan-ekstrak temulawak ultrasonikasi 60 kristalinitas (%)
menit. Menurut Kencana (2009), bentuk Nanopartikel kitosan
amorf ditandai dengan puncak lemah pada 21,94
sudut difraksi 20º. Nanopartikel ekstrak
22,24
Nilai derajat kristalinitas yang diperoleh temulawak
dari ketiga sampel ditunjukkan pada Tabel 6. ultrasonikasi 30
Kenaikan derajat kristalinitas pada sampel menit
nanopartikel ekstrak temulawak dengan dua Nanopartikel ekstrak 23,58
kali ultrasonikasi selama 30 menit dan 60 temulawak
menit menunjukkan adanya molekul pengisi ultrasonikasi 60
dalam kitosan. Menurut Mason & Lorimer menit