PRACTICA #3

DIAGNOSTICO DE VIRUS HUMANOS.

OBJETIVO DE LA PRACTICA
Que el alumno conozca teóricamente los principales métodos de diagnóstico de
virus humanos.

INTRODUCCION.
Los virus son organismos tan pequeños, que su tamaño les permite pasar a través
de los filtros que retienen bacterias. Las características básicas para identificar a
un virus son: la composición del ácido nucleico, la disposición de la cápside, la
presencia o ausencia de una envoltura, el tamaño del virus y el huésped.

MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO:

Las muestras deben tomarse precozmente en la fase aguda de la infección. Deben
transladarse al laboratorio a la mayor brevedad posible, en medio de transporte.
Las muestras más comunes son:

- Torundas nasofaríngeas:
adecuados para el diagnóstico de enterovirus, adenovirus, y herpes simplex. Las
nasofaringeas se prefieren para el virus respiratorio sincicial y la mayoria de los
otros respiratorios. Las nasales son las mejores para los rinovirus.

- Aspirados faríngeos:
son mejores que los hisopos (torundas) nasofaringeos, pero estos últimos son mas
prácticos.

- Torundas rectales y muestras de heces:

Aquí se muestran virus no cultivables como rotavirus, o adenovirus, que se
detectan por microscopía electrónica o con
técnicas de detección de antígenos.

- Secreciones, Sangre o Líquido cefalorraquídeo.

- En algunas virosis excepcionalmente el diagnóstico solo puede efectuarse en

Biopsia de cerebro, como en la encefalitis por herpes simplex; en Huéspedes
inmunodeprimidos y con citomegalovirus, el virus solo puede identificarse en el
órgano afectado.

DIAGNOSTICO VIRAL
1. Métodos para detectar virus.

1.1. Observación del efecto citopático, en cultivo de tejidos inoculados con ciertos
virus.
La etiología de un determinado síndrome viral puede demostrarse recuperando el
agente causal en tejidos celulares de diversos tipos (por ej: riñón de mono, pulmón
humano fetal, amnios humano o células tumorales humanas). Los huevos
embrionados actualmente solo se utilizan para cultivar el virus cuando se desea
preparar vacunas. El empleo de animales de experimentación es excepcional en el
diagnóstico.

- Las células primarias de riñón de mono son excelentes para cultivar mixovirus,
paramixovirus y muchos enterovirus; también para algunos adenovirus.
- Las células diploides fetales humanas son células fibroblásticas en las que
crece un amplio espectro de virus, como el de herpes simple, varicela zoster,
adenovirus, picornavirus, y sólo en éstas pueden cultivarse los citomegalovirus.
- Las células HEP-2 son epiteliales provenientes de un cancer humano, útiles
para recuperar el virus respiratorio sincitial, adenovirus, y herpes simple.
- Células mononucleares normales normales humanas de sangre periférica, que no
suelen estar disponibles, permiten el cultivo del virus ( SIDA ) de la
inmunodeficiencia, el coxsackie A y los togavirus.

El crecimiento de un virus se detecta mediante la observación de cambios en la

monocapa del cultivo celular, denominado efecto citopático (ECP). Cuando
aparecen cambios en la morfología celular, lisis celular, vacuolización, formación
de cincicios y existen cuerpos de inclusión, se produce un efecto citopático
característico. Los cuerpos de inclusión son cambios histológicos que se producen
en las células por los componentes virales o por variaciones en las estructuras
celulares.

Un técnico experto puede distinguir los efectos citopáticos característicos de las

principales familias de virus. Según el cultivo celular en el que aparece el ECP y el
tipo de crecimiento viral, se puede realizar un diagnóstico de presunción de un
gran número de virus de importancia clínica.

Algunos virus no producen rápidamente ECP en las líneas celulares que se suelen
utilizar en los laboratorios de virología clínica. No obstante se pueden determinar
por otras técnicas, como la interferencia en la replicación de otros virus (por ej los
picornavirus no pueden replicarse en células previamente infectados con el virus
de la rubeola, lo que se denomina interferencia heteróloga).

1.2. Fijación de eritrocitos en cultivos celulares infectados con virus. En el caso de

virus que dan lugar a este fenómeno, como mixovirus o virus de la parotiditis, se
observa una hemaglutinación al adicionar eritrocitos a la monocapa de células.

1.3. Detección de antígenos virales. Cuando los virus se pueden detectar antes de
desarrollar el efecto citopático, se utilizan anticuerpos monoclonales dirigidos
contra antígenos tempranos y técnicas de inmunofluorescencia o
inmunoperoxidasa.
1.4. Inmunofluorescencia directa, utilizando células del paciente, como leucocitos,
orina o mucosa oral o genital, para buscar virus.

1.5. Detección de ácidos nucleicos virales por reacción de polimerasa en cadena,

las cuales permiten amplificar una porción pequeña de ácido nucleico en un
período de tiempo corto.

1.6. Microscopía electrónica.

Cuando algunos virus comunes no se aislan con los métodos de cultivo habituales,
ni pueden diagnosticarse por técnicas serológicas, pueden estudiarse con otras
técnicas, como la microscopía electrónica. Tal es el caso de los calcivirus, los
minirrotavirus, los astrovirus y los parvovirus del cerebro. Sin embargo, hay tres
grandes dificultades para su uso: el instrumento es caro y es difícil su
mantenimiento. Por otro lado, deben estar presentes grandes cantidades de
particulas virales en la muestra para poder detectarse. Finalmente, la morfología
no es suficientemente diferencial para un diagnóstico preciso.

2. Métodos para detectar anticuerpos específicos virales.

La mera presencia de anticuerpos específicos en contra de un determinado virus,
no permite el diagnóstico de dicha infección. Debe tomarse en cuenta el cambio en
los títulos en un lapso corto de tiempo, o ver si hay seroconversión. En muchas
virosis la presencia de IgM sugiere infección reciente.

2.1. Fijación de complemento:

Es una técnica estándar, pero de difícil ejecución. La muestra se procesa con el
antígeno o el anticuerpo y el complemento; el complemento residual se determina
mediante la lisis de eritrocitos cubiertos de anticuerpos que actúan como
indicadores. Los anticuerpos medidos por este método se suelen desarrollar
tardíamente en el desarrollo de la enfermedad. Los miembros de algunos grupos
como adenovirus, influenza A y B, poseen antígenos comunes que se detectan por
este método. Los demás grupos deben analizarse individualmente.

2.2. Neutralización:
Cuando se incuba un virus con anticuerpos homólogos específicos de tipo, el virus
no es capaz de producir la infección en un sistema de cultivos celulares
indicadores. La respuesta de anticuerpos neutralizantes es específica del tipo
devirus y se desarrolla al comienzo de los síntomas, elevándose los títulos
rápidamente durando mucho tiempo.

2.3. Inhibición de la hemaglutinación:

Se puede realizar con diversos virus que aglutinan selectivamente los eritrocitos de
varias especies animales (por ej: pollo, cobaya y humanos). La capacidad de
hemaglutinación del suero se inhibe por el suero humano específico. Los
anticuerpos inhibidores de la hemaglutinación se desarrollan tras el comienzo de
los síntomas, posteriormente se elevan y al final disminuyen. Esta prueba es útil
para detectar virus de rubeola y para determinar el estado inmunitario.
CUESTIONARIO

1. Discuta las ventajas y desventajas de cada metodo de diagnostico

2. Qué son los cuerpos de inclusión virales.

3. Haga una lista de virus que se puedan diagnosticar en heces.

4. haga una lista de virus que se puedan diagnosticar en vías respiratorias.

5. Haga una lista de virus que se pueden diagnosticar en lesiones dérmicas.

6. Haga una lista de virus que se puedan diagnosticar en sangre.

7. Haga una lista de virus que se puedan diagnosticar en L.C.R.

8. Cómo actúa el Interferón contra los virus.

9. Diga el nombre de cuatro virus que puedan mantenerse en cultivo de tejidos.