Informe Final de Micro

FACULTAD DE INGENIERIA
CARRERA:
INGENIERIA AMBIENTAL
TEMA:
“Determinación del índice de bacterias presentes en las diferentes
muestras de leche de los establos (Las Chabelas y San Jorge) mediante
el método de recuento de placas utilizando los medios EC, MacConkey y
Caldo Verde Brilla Trujillo, La Libertad.
DOCENTE:
Eleodora Del Pilar Orejuela Guerrero
ESTUDIANTES:
 Cruz Angulo, Dessiré

 Delgado Alfaro, Alex Fernandito
 Diaz Castillo, Zulmy
 Salinas Príncipe, Jarumy
 Sarrin Luna, Jorge
TRUJILLO – LA LIBERTAD
Determinación del índice de bacterias presentes en las diferentes muestras
de leche de los establos (Las Chabelas y San Jorge) mediante el método
de recuento de placas utilizando los medios EC, MacConkey y Caldo Verde
Brilla Trujillo, La Libertad.
DEDICATORIA
Agradecer a Dios, por acompañarnos y

ayudarnos durante todo este ciclo y
permitirnos concluir satisfactoriamente los
cursos asignados durante este periodo y a
todas esas personas que de una u otra forma
nos orientaron y apoyaron a lo largo del
camino.
A nuestra familia por estar compartiendo

nuestro entusiasmo en nuestros logros,
brindarnos su soporte y colaboración en los
momentos difíciles. Nuestros padres son
nuestra mayor inspiración y mis pilares
incondicionales.
A nuestros queridos hermanos, que han

estado en los momentos más difíciles y nos
han servido de apoyo incondicional,
brindándonos todo su aprecio y
consideración.
BERTHITA CRUZ, ALEX DELGADO, ZULMY

DIAZ, JARUMY SALINAS, JORGE SARRIN.
MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
INDICE
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................................................ 7
1.1 Formulación del Problema .................................................................................................................................. 9
1.2 Justificación .................................................................................................................................................. 9
1.3. Objetivos …………………………………………………………………………………………………………………………………………...9
1.3.1. Objetivo general……………………………………………………………………………………………………………………………...9
1.3.2. Objetivos específicos…………………………………………………………………………………………………………9
II.MARCO TEÓRICO ...................................................................................................................................................... 10

2.1 ANTECEDENTES ................................................................................................................................................. 10
2.1.1 Nivel internacional .................................................................................................................................... 10
2.1.2 Nivel Nacional………………………………………………………………………………………………………………………………….10
2.1.3 Nivel Local……………………………………………………………………………………………………………………………………….11
2.2 Bases Teóricas………………………………………………………………………………………………………………………………………………12
2.2.1 Bacterias Termotolerantes …………………………………………………………………………………………………………….12
2.2.2 Medio EC……………………………………………………………………………………………………………………………………….12
2.2.3 Medio Caldo Verde Brilla………………………………………………………………………………………………………………..13
2.2.4 Medio MacConkey………………………………………………………………………………………………………………………. 14
2.2.5 Calidad de Leche…………………………………………………………………………………………………………………………….. 14
III. Hipótesis …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….16
IV. Materiales y Equipos……………………………………………………………………………………………………………………………………. 17
V. Resultados……………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 18
VI. Conclusiones……………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 20
VII. Discusiones…………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 22
VIII. Recomendaciones…………………………………………………………………………………………………………………………………………. 22
IX. Referencias Bibliógraficas …………………………………………………………………………………………………………………………….. 24
X. Anexos ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 25
TABLA DE ILUSTRACIONES
Ilustración 1 Los diferentes medios de cultivos .......................................................................... 33

Ilustración 2 Pesaje del medio EC ............................................................................................... 33
Ilustración 3 Pesaje del medio Caldo Verde Brilla....................................................................... 34
Ilustración 4 Pesaje del medio de cultivo MacConkey ............................................................... 34
Ilustración 5 Preparación del medio Caldo Verde Brilla ............................................................. 35
Ilustración 6 Preparación del medio EC ...................................................................................... 35
Ilustración 7 Preparación del medio MacConkey ....................................................................... 36
Ilustración 8 Medio de cultivos en los tubos para las diluciones ................................................ 36
Ilustración 9 Materiales de Trabajo para el proyecto ................................................................. 37
Ilustración 10 Pipetear hasta 9 ml del medio EC para diluciones ............................................... 37
Ilustración 11 Preparación de las placas Petri para ser esterilizadas.......................................... 38
Ilustración 12 1 ml de la muestras de leche para las diluciones ................................................. 38
Ilustración 13 Los distintos tubos con muestras de cultivo EC y caldo verde brilla .................... 39
Ilustración 14 Diluciones de las diferentes muestras de leche ................................................... 39
Ilustración 15 Muestras ya preparadas para la siembra ............................................................. 40
Ilustración 16 Equipo donde se esterilizó las placas ................................................................... 40
Ilustración 17 Calentamiento del MacConkey para pasar de sólido a líquido ............................ 41
Ilustración 18 Preparados para la siembra ................................................................................. 41
Ilustración 19 El MacConkey listo para la siembra...................................................................... 42
Ilustración 20 Muestra preparada para el contador de colonias ................................................ 43
Ilustración 21 Equipo contador de colonias ................................................................................ 43
RESUMEN
Se determinó la presencia de bacterias termo tolerantes en muestras de leche de vaca

de dos diferentes establos (La Chabela y San Jorge) provenientes de la ciudad de
Trujillo, La libertad, este proyecto trato de buscar y encontrar el índice de bacterias
presentes en la leche el cual se realizó mediante los diferentes procesos explicados en
clase que son los medios de cultivo EC, Caldo verde Brilla y MacConkey, el cual tiene
diferentes formas de preparado, el cual tiene también diferentes funciones al encontrar
las bacterias mencionadas, este trabajo se realizó en el laboratorio de microbiología en
cual usamos los diferentes materiales y equipos para poder analizar las diferentes
muestras a encontrar, al terminar el trabajo encontramos los resultados del cultivo
MacConkey del Caldo Verde Brilla y MacConkey del Caldo Verde Brilla. El índice de
bacterias termo tolerantes presentes en la leche del establo 1 La Chabela en la
disolución 10-5: es de 2990 10-6 es de 2600 UFC y para la disolución de 10-7 es de
2340𝑈𝐹𝐶 -- 10-6 es de 2730 UFC y para la disolución de 10-7 es de 2275𝑈𝐹𝐶
respectivamente. También encontramos resultados del cultivo MacConkey del Caldo
Verde Brilla y MacConkey del Caldo Verde Brilla El índice de bacterias termo tolerantes
presentes en la leche del establo 2 San Jorge en la disolución 10-5: es de 1755 10-6 es
de 1430 UFC y para la disolución de 10-7 es de 1365 𝑈𝐹𝐶 -- 10-6 es de 1430 UFC y
para la disolución de 10-7 es de 2340 𝑈𝐹𝐶 respectivamente.
Palabras claves: Ec, MacConkey, Bacterias

termo tolerantes y Caldo verde Brilla
ABSTRACT
The presence of heat-tolerant bacteria was determined in samples of cow's milk from
two different stables (La Chabela and San Jorge) from the city of Trujillo, La Libertad,
this project tried to find and find the index of bacteria present in the milk which was carried
out through the different processes explained in class, which are the EC culture media,
Brillo green Broth and MacConkey, which has different forms of preparation, which also
has different functions when finding the mentioned bacteria, this work was carried out in
the microbiology laboratory in which we use the different materials and equipment to
analyze the different samples to be found, at the end of the work we find the results of
the MacConkey cultivation of the Brilla Verde Brilla and MacConkey of the Brilla Verde
Broth. The index of thermos tolerant bacteria present in the milk of the stable 1 La
Chabela in the solution 10-5: is 2990 10-6 is 2600 CFU and for the dissolution of 10-7 is
2340UFC - 10-6 is 2730 CFU and for the dissolution of 10-7 is 2275UFC respectively.
We also find results of the MacConkey cultivation of Brilla Green Broth and MacConkey
of the Broth Green Brilla The index of thermore tolerant bacteria present in the milk of
the stable 2 San Jorge in the solution 10-5: it is 1755 10-6 is 1430 CFU and for the 10-7
solution is 1365 CFU-10-6 is 1430 CFU and for the 10-7 solution it is 2340 CFU
respectively.
Keywords: Ec, MacConkey, heat tolerant

bacteria and green broth Brilla
I. INTRODUCCION:
Hace trescientos años Antonie van Leeuwenhoek observó por primera vez en un
microscopio primitivo unos “pequeños animales” que ahora se conocen como
microorganismos. Los microorganismos son los seres más primitivos y numerosos
que existen en la Tierra, colonizan todo ambiente: suelo, agua y aire, participan de
forma vital en todos los ecosistemas y están en interacción continua con las plantas,
los animales y el hombre. Los microorganismos son clave para el funcionamiento
de los sistemas biológicos y el mantenimiento de la vida sobre el planeta, pues
participan en procesos metabólicos, ecológicos y biotecnológicos de los cuales
dependemos para sobrevivir y enfrentar los retos del futuro. (Arias, 2012)
Los microorganismos participan en procesos ecológicos que permiten el

funcionamiento de los ecosistemas, y biotecnológicos que son esenciales para la
industria farmacéutica, alimenticia y médica. Ellos son los principales responsables
de la descomposición de la materia orgánica y del ciclaje de los nutrientes (carbono,
nitrógeno, fósforo, azufre, etc.). Así, en la fijación y ciclaje del nitrógeno están
implicadas bacterias simbióticas como Rhizobium y Frankia, y bacterias de vida libre
como Azotobacter, Azospirillum, Burkholderia, Thiobacillus, incluidas las
cianobacterias: Anabaena y Nostoc.
La contaminación de los cuerpos naturales de agua es una problemática que se

presenta en la actualidad, principalmente en los países en vías de desarrollo, debido
a que los desechos domésticos e industriales se vierten a estos ecosistemas
acuáticos sin tratamiento previo o pobremente tratados y por lo que constituyen una
fuente constante de deterioro del medio ambiente. Para determinar la calidad
microbiológica de los ecosistemas acuáticos, se utilizan las bacterias indicadoras
de contaminación fecal. (CENIC, 2012)
Entre las más utilizadas se encuentran los coliformes totales y termotolerantes,

aunque la abundancia de Escherichia coli se ha asociado más al riesgo sanitario en
comparación con el resto de los coliformes. El empleo de estas bacterias para la
evaluación de la calidad del agua ha sido aceptado ampliamente en países de clima
templado. (CENIC, 2012)
En la actualidad, existen numerosos medios de cultivo para aislamiento, cultivo e

identificación de Enterobacteriaceae y determinados organismos no fermentadores.
Uno de los primeros fue desarrollado por MacConkey y publicado en 1900 y

19051,2. Esta fórmula fue diseñada sabiendo que las sales biliares precipitan por
acción de ácidos y determinados microorganismos entéricos fermentan la lactosa,
mientras que otros no presentan dicha capacidad. Posteriormente, este medio fue
modificado varias veces. El agar MacConkey es sólo ligeramente selectivo, dado
que la concentración de sales biliares, que inhiben los microorganismos gram
positivos, es baja en comparación con otros medios en placa entéricos. (Lopez,
2014)
El Medio EC fue desarrollado por Hajna y Perry en un esfuerzo por mejorar los
métodos para la detección de bacterias del grupo de coliformes y de E. coli. Este
medio consiste de un caldo tamponado de lactosa con la adición de un 0,15% de
una Mezcla de Sales Biliares. El crecimiento de las bacterias formadoras de esporas
y estreptococos fecales es inhibido por las sales biliares, mientras que el
crecimiento de E. coli es intensificado por su presencia. Este medio puede ser
utilizado a 37°C para la detección de organismos coliformes o a una temperatura
de 44,5°C o 45,5°C para el aislamiento de E. coli.
El Medio EC es utilizado en pruebas a elevadas temperaturas para la diferenciación

de organismos del grupo de coliformes que pertenecen también al grupo de
coliformes fecales. La prueba para coliformes fecales, utilizando el Medio EC es
aplicable para investigaciones en agua potable, contaminación de arroyos, fuentes
de agua bruta, sistemas de tratamiento de aguas residuales, aguas de baño, aguas
del mar y monitoreo general de la calidad del agua. (Perez, 2013)
Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo lactosado bilis
verde brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de aquellos
microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante.
La determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales
se realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta
en la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando
son incubados a una temperatura de 44.5 ± 0.1°C por un periodo de 24 a 48 h. La
búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo EC,
los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales (Agar
Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las pruebas
bioquímicas básicas (IMViC) a las colonias típicas
1.1. Formulación del problema.

¿Se logrará determinar el índice de bacterias presentes en las
diferentes muestras de leche de los establos (Las Chabelas y San
Jorge) mediante el método de recuento de placas, utilizando los
medios EC, MacConkey y Caldo Verde Brilla?
1.2. Justificación.
El presente trabajo de investigación tiene como finalidad de
identificar las bacterias presentes en las diferentes muestras de
leche que es comercializada en los diferentes establos de la ciudad
de Trujillo, Perú.
Por consiguiente, este proyecto tiene como principal objetivo
determinar y calcular el índice de bacterias presentes en las
diferentes establos de leche y su calidad, ya que la leche es
consumida por la mayor cantidad de niños y adultos peruanos.
1.3. Objetivos.
1.3.1. Objetivo General.
 Determinar el índice de bacterias presentes en las
diferentes muestras de leche de los establos (Las
chabelas y San Jorge) mediante el método de recuento
de placas, utilizando los medios EC, MacConkey y Caldo
Verde Brilla.
1.3.2. Objetivos específicos.
 Determinación del índice de bacterias presentes en la
leche del establo La Chabela.
 Determinación del índice de bacterias presentes en la
leche del establo San Jorge.
II. MARCO TEORICO.

2.1. Antecedentes.
2.1.1. Nivel Internacional:
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE LECHE DE ORIGEN ORGÁNICO:
ATRIBUTOS DESEABLES PARA SU TRANSFORMACIÓN
El objetivo de este estudio fue analizar el proceso de producción de leche
de vaca de un sistema familiar con manejo orgánico que sirve de materia
prima para lácteos, con la finalidad de mejorar la eficiencia de su producción
a través de un análisis de inocuidad y calidad con un estudio de trazabilidad
microbiológico. Se evaluó la calidad e inocuidad de la leche cruda,
pasteurizada y sus derivados, identificando los riesgos microbiológicos de
la misma desde su obtención hasta su transformación, implementando un
sistema de trazabilidad. La metodología consistió en recolectar muestras
de leche de vacas Jersey (Bos taurus) en dos etapas: en la primera, en el
máximo nivel de producción; en la segunda, los animales se encontraban
próximos al secado. Se realizó un conteo de bacterias mesofílicas y
coliformes en leche y lácteos, donde se obtuvieron cantidades por encima
del límite permitido por la NOM-243-SSA1-2010. En el análisis
bacteriológico general de leche se identificó a Staphylococcus aureus y
Escherichia coli. Es necesario encaminar al personal que labora en unidad
de lácteos en las buenas prácticas de higiene y de manufactura para
disminuir las cargas microbiológicas, cumplir con las normas establecidas
y asegurar la salud del consumidor. (Saurez, 2015)
2.1.2. Nivel Nacional

“PRESENCIA DE RESIDUOS DE ANTIBIÓTICOS Y SU RELACIÓN CON
LAS PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LA LECHE FRESCA DE LOS
COMITÉS DEL PROGRAMA DEL VASO DE LECHE DE LOS DISTRITOS DE
SAN JERÓNIMO Y ANDAHUAYLAS.”
El objetivo del presente trabajo de investigación fue evaluar la presencia de

residuos de antibióticos y su relación con los indicadores de la leche fresca de
los comités del programa vaso de leche de los distritos de San Jerónimo y
Andahuaylas. Para ello se analizaron muestras de leche fresca provenientes de
37 y 32 comités de los distritos de San Jerónimo y Andahuaylas respectivamente,
cuyas variables de estudio fueron: densidad, acidez, pH, solidos totales así como
la prueba de alcohol, las cuales se correlacionaron a través del coeficiente de

correlación de Pearson con los compuestos de antibióticos β-lactamicos y
Tetraciclinas; la presencia de antibióticos se determinó a través del kit
colorimétrico el cual cumple con los límites de sensibilidad establecidos por la
FDA, asimismo se realizó un análisis de componentes principales – PCA. Se
encontró que el 10.8% de los comités del distrito de San Jerónimo reportó
positivo para tetraciclina, en tanto que el 9.4% y 3.1% de los comités de
Andahuaylas reportaron positivo para tetraciclinas y βlactamicos
respectivamente, asimismo la densidad, acidez, pH y solidos totales no muestra
correlación (p-value > 0.05) con los antibióticos β-lactamicos y tetraciclinas,
mientras que las muestras de leche que reportaron positivo para la prueba de
alcohol muestran una débil correlación (rs= 0.38) con la presencia de
antibióticos. Por otra parte, el análisis PCA indica que la acidez y densidad son
las principales variables que determinarían la presencia de antibióticos.
(Obregón, 2017)
2.1.3. Nivel Local
“DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE ANTIMICROBIANOS EN

LECHE CRUDA OFERTADA AL PUBLICO EN EL DISTRITO DE
TRUJILLO – LA LIBERTAD”
Se determinó la presencia de antimicrobianos en muestras de leche cruda

provenientes de diferentes puntos de venta fija en los mercados más
importantes en el Distrito de Trujillo, se utilizó la prueba Copan Milk Test
(CMT) en tubos pre-sembrados con esporas de Bacilos
Stearothermophilus, variedad: calidolactis, incubados a 64 °C, la lectura de
los resultados se determinó por el cambio de color del medio agar (púrpura
para positivos y amarillo negativos). El análisis reportó 87,5% de muestras
positivas a la presencia de antimicrobianos contraponiéndose a la Norma
Técnica Peruana (NTP 202.001.2010) de Leche. Concluimos que la leche
ofertada directamente al público en el distrito de Trujillo no es apta para su
consumo directo. (DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE
ANTIMICROBIANOS, 2017)
2.2. Bases Teóricas:

2.2.1. Bacterias termo tolerantes:
Dentro de los microorganismos patógenos se encuentran el grupo de

bacterias coliformes el cual está conformado por dos subgrupos: los
coliformes totales y los termo tolerantes. A estos últimos antes se los
denominaba coliformes fecales. • El cambio de nombre se debe a que se
demostró que en el grupo de coliformes que se detectaban en siembras
incubadas a temperaturas de 44,5 °C y en medios de cultivo específicos,
sólo una parte del grupo eran bacterias de origen fecal; el resto eran
bacterias ambientales. (Gonzales, 2018)
2.2.2. Medio EC
El caldo EC o caldo Escherichia coli es un medio de cultivo líquido
selectivo. Este medio es recomendado por la Standard Methods para el
recuento de coliformes totales y fecales, por la técnica del número más
probable (NMP) en muestras de agua y alimentos, donde el principal agente
involucrado es la Escherichia coli.
El caldo EC está compuesto por tripteína, lactosa, sales biliares, fosfato

dipotásico, fosfato monopotásico, cloruro de sodio y agua. Su fórmula está
estratégicamente diseñada para favorecer el crecimiento de coliformes
totales y fecales e impedir el desarrollo de otros microorganismos
acompañantes. (Aguirre, 2010)
2.2.3. Medio Caldo verde Brilla:

Medio selectivo recomendado para la prueba confirmatoria en la detección
del grupo coliforme en aguas, leche, derivados lácteos y otros productos de
importancia sanitaria, mediante la determinación del NMP.
La bilis y el verde brillante inhiben el desarrollo indeseable de la flora
acompañante de los coliformes e incluso suprimen el crecimiento de los
anaerobios fermentadores de la lactosa como es el caso de
Clostridium perfringens.
La presencia de gas después de incubar 24 – 48 h a 35ºC se considera

como prueba positiva para la presencia del grupo Coli – Enterobacter.
Transferir individualmente de cada tubo de Caldo Lactosado positivo

(prueba presuntiva con desarrollo bacteriano y presencia de gas en
cualquier cantidad) de 2 a 3 asadas a un tubo de Caldo Verde Brillante Bilis
al 2%. Incubar 48 h a35ºC. La formación de gas en cualquier cantidad
dentro de la campana de Durham, hace positiva la prueba. Determinar el
NMP de organismos coliformes en la muestra de acuerdo a la Tabla
establecida. (Pelaez, 2013)
2.2.4. Medio MacConkey:
El agar MacConkey es un medio de cultivo selectivo y diferencial para

bacterias diseñado para aislar selectivamente bacilos Gram negativos y
entéricos (encontrados normalmente en el tracto intestinal) y diferenciarlos
sobre la base de la fermentación de la lactosa.1 El cristal violeta y las sales
biliares inhiben el crecimiento de organismos grampositivos, lo que permite
la selección y el aislamiento de bacterias gramnegativas. Las bacterias
entéricas que tienen la habilidad de fermentar lactosa pueden ser
detectadas utilizando el carbohidrato lactosa y el indicador de pH rojo
neutro.
Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram
negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-
).
Lac+: Al utilizar la lactosa en el medio, las bacterias Lac+ como lo son

Escherichia coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual hace
que baje el pH de 7,1 ± 0,2 lo que tiene como consecuencia la aparición de
colonias de color rosadas o rojas. Algunas bacterias en cambio fermentan
la lactosa de manera lenta, estas siguen siendo Lac+ por ejemplo: Serratia
y Citrobacter.
Lac-: Bacterias que no fermenten la lactosa como lo son Salmonella,

Proteus y Shigella utilizaran peptona en su lugar, formando amoníaco, lo
cual incrementa el pH del agar, formando colonias blancas o incoloras.
(Melendez, 2014)
2.2.5. Bacteria E. Coli:

Por lo general, las bacterias Escherichia coli (E. coli) viven en los intestinos
de las personas y de los animales sanos. La mayoría de las variedades de
Escherichia coli son inofensivas o causan diarrea breve en términos
relativos. Sin embargo, algunas cepas particularmente peligrosas, como la
Escherichia coli O157:H7, pueden causar cólicos abdominales intensos,
diarrea con sangre y vómitos.
Puedes estar expuesto a la Escherichia coli proveniente del agua o de los

alimentos contaminados, sobre todo de los vegetales crudos y de la carne
de res molida poco cocida. Los adultos sanos se recuperan de la infección
por la Escherichia coli O157:H7 en una semana, pero los niños pequeños y
otros adultos corren un riesgo más elevado de manifestar una forma de
insuficiencia renal que puede poner en riesgo la vida, denominada
«síndrome urémico hemolítico. (Escobar, 2016)
2.2.6. Calidad de la leche:
La calidad de un producto se define como el conjunto de las propiedades y

características de un producto o servicio que le confieren la aptitud de
satisfacer las necesidades expresas o implícitas del cliente (Ho, 1999).
En nuestro país la Norma que establece los estándares de residuos de

antibiótico en leche es la Norma Técnica Peruana (NTP 202.001.2010), la
cual indica que la leche no debe contener antibióticos ni tampoco residuos
de antiparasitarios y/o contaminantes (INDECOPI, 2010).
III. HIPÓTESIS
3.1. FORMULACIÓN DE LA HIPÓTESIS.
3.2. OPERALIZACION DE VARIABLES
- Variable independiente:
A: La leche de establo
- Variable dependiente:
A: Índice de bacterias termo tolerantes
DEFINICIÓN
VARIABLE DEFINICIÓN CONCEPTUAL DIMENSIONES INDICADORES
OPERACIONAL
“Variable que utilizamos

VI para clasificar la calidad del Indicador de la variación
La leche de producto.”Fuente de los porcentajes de Media Calidad
establo especificada no válida. bacterias.
Media Calidad
VD
“La cantidad de metales que Dependiendo del
Índice de
contiene un lápiz labial.” porcentaje se puede
bacterias Porcentaje %
Fuente especificada no determinar la calidad de
termo
válida. la leche de los establos
tolerantes
IV. MATERIALES Y METODOS.

4.1. Tipo de diseño de investigación.
4.1.1. Según el propósito: Aplicada
Se debe considerar una sustancia líquida. Posteriormente ser sembrada

en los tubos de ensayo con el EC y el Caldo Brilla.
4.1.2. Según el diseño de investigación: Experimental
Fue experimental, por el motivo que se aplica la variable independiente

(la leche de los establos) y estos darán diferentes resultados.
4.1.3. Según el tipo de investigación experimental: Experimental pura
Fue experimental pura ya que reunió un requisito:
 Control: Se formaron grupos de comparación (en uno de ellos se

manipuló la variable).
En este diseño se llegó a evaluar dos variables la independiente y la

dependiente.
4.2. Material de estudio.

Las pruebas de esta investigación se enfocan principalmente en la
obtención del índice de bacterias de los establos “Las Chabelas” y
“San Jorge”. Dichas muestras fueron preparadas en laboratorio.
4.2.1. Población.
La población estuvo constituida por dos tipos de leche de
diferentes establos.
4.2.2. Muestra.
La muestra estuvo formada por un 1 ml de leche de 2 establos
“Las Chabelas” y “San Jorge”.
4.3. Técnicas, procedimientos e instrumentos.

Preparación de medios de cultivos.
Preparación del médium EC: se pesa 9.9 gramos de EC, y se agregan a un

frasco de vidrio con tapa rosca con 270 ml de agua destilada, y se disuelve
hasta que los grumos se hayan disuelto por completo, luego se coloca en el
microondas para que el médium se disuelva por completo, una vez que este
no presente grumos está listo para hacer el cultivo.
Preparación del MacConkey: se agrega 270ml de agua destilada a un frasco
de vidrio con tapa rosca y se pesa 13.5 gr gramos de MacConkey, y se agrega
al frasco con agua, se tapa y agita el frasco ligeramente luego se lleva al
microondas y se coloca por 30 segundos, después se retira el frasco y se
vuelve agitar, se vuelve a colocar el frasco en el microondas y repetir el mismo

procedimiento hasta de los gránulos del MacConkey se hayan disuelto por
completo.
4.3.1 Preparación de la muestra.
para llevar acabo el cultivo se recolectó 1L de leche de diferentes establos de

La ciudad de Trujillo, estas muestras están muy concentradas que se tuvo
que hacer diluciones seriadas para usarla en el médium EC.
Se agrega 9 ml de agua destilada a los tubos de ensayo que se va usar para

hacer las diluciones, después se obtiene 1ml de la muestra de Leche y se
agrega al primer tubo y se mueve para lograr homogenizar la mezcla, esto
viene a ser nuestra primera dilución seriada de 10-1, de esta dilución
agarramos 1 ml con la micropipeta y agregamos a otro tubo que contiene 9ml
de agua destila convirtiéndose en nuestra segunda dilución de 10-2, de esta se
agarra nuevamente 1 ml y se agrega a otro tubo de ensayo que ya contiene
9ml de agua destilada convirtiendo así en nuestra dilución 10-3 y se sigue
haciendo el mismo procedimiento hasta obtener diluciones de 10-5, 10-6, 10-7
que son las muestras con las que se realizará el cultivo en el medio de EC.
No olvidar agitar el tubo en cada dilución para que se homogenice la mezcla.
4.3.2 Siembra en el EC:
Después de obtener las diluciones se agrega de 5 ml de EC previamente

preparado a 15 tubos de ensayo y se coloca una campana de Burnham en
cada tubo para ver la presencia de CO2 y se somete a la esterilización en la
autoclave para eliminar cualquier microrganismo. Después a 5 tubos con EC
ya esterilizados se le agrega 1 ml de la dilución de 10-5 se rotula y coloca en
las gradillas, a otros 5 tubos se le agrega 1 ml a cada uno de la dilución de
10-6, el mismo procedimiento se realiza para la dilución de 10-7.
4.3.3 Incubación del EC:

Después de preparar y rotular 5 muestras de cada dilución (10-5, 10-6,
10-7. Se coloca en las gradillas y se procede hacer la incubación colocando
los tubos en la estufa a 45°C por 24 a 48 horas. Después se procede a realizar
la lectura de los tubos para sabes si hay o no presencia de coliformes termo
tolerantes.
4.3.4 Lectura de los tubos con el medio de cultivo EC:

Si los tubos tienen presencia de una burbuja en la campana de Burnham,
quiere decir que los resultados son positivos y están indicando la presencia
de coliformes termo tolerantes.
4.3.5 Siembra en el MacConkey:

Para realizar la siembra en el MacConkey se realiza el servido a la placa de
Petri del medio de cultivo previamente preparado, hasta que cubra la
superficie de la placa luego se deja enfriar y que coagule un poco el Mac
Conkey, después se usa las diluciones de los tubos con el medio EC que se
realizó el cultivo de la leche de dos diferentes establos que en este caso todos
nos dieron positivos, se selecciona uno un tubo al azar de cada dilución uno
de 10-5, otro de 10-6 y 10-7. y con una aza bacteriológica desinfectada con el
mechero se coloca en el tubo de la muestra a usar y se aplica a la placa
servida, se va extendiendo en forma curveada la muestra. Se realizó 3 placas
con la muestra de la dilución 10-5, 2 placas para la dilución 10-6 y 2 placas para
la 10-7 y no olvidar tapar inmediatamente las placas para que no infieran en
los resultados otros microrganismos.
4.3.6 Incubación del MacConkey:

Una vez que se hace la siembra de las muestras en las placas, se rotulan y
se colocan en la estufa a 35°C por 24 horas, después de las 24 horas se hace
el recuento de placas y según los resultados reemplazada en las fórmulas los
datos obtenidos.
4.4. Materiales y Equipos:

4.4.1. Materiales.
 Probeta.
 Tubos de ensayo (para el cultivo).
 Placa Petri.
 Micro pipeta.
 Frasco de vidrio con tapa rosca.
 Gradilla.
 Papel Kraft.
 Agua destilada.
 Mechero.
 Encendedor.
4.4.2 Equipos.
 Una balanza Digital
 Microondas
 Autoclave
 Incubadora
 Contador de colonias
4.4.3 Medios de cultivos.

 Caldo BRILLA.
 Medio EC.
 MacConkey
Materiales:
NOMBRES Función DIBUJO
Pinza para tubo de ensayo Sirven para sujetar los

tubos de ensayo mientras
se calientan o manipulan.
Gradillas herramienta que forma

parte del material de
laboratorio, es utilizada
para sostener y almacenar
gran cantidad de tubos de
ensayo
Vaso de precipitación Recipiente cilíndrico de
vidrio borosilicatado fino
que se utiliza muy
comúnmente en el
laboratorio
Tubo de ensayo Se utiliza en los
laboratorios para contener
pequeñas muestras
líquidas. Aunque pueden
tener otras fases.
Probetas Consiste en un cilindro
graduado de vidrio, que
permite contener líquidos y
sirve para medir volúmenes
de forma exacta.
Placa Petri Se utiliza en los
laboratorios principalmente
para cultivar bacterias y
otros microorganismos
Equipos:
Nombre Función Dibujo

Baño maría Implica el calentamiento
indirecto, por convección
térmica del medio (agua
del baño) y de la
sustancia. (Garcia, 2011)
Horno microondas Está permitiendo redefinir
multitud de reacciones en
las que el factor térmico
juega un papel esencial.
La principal ventaja del
uso de esta tecnología es
el ahorro en tiempo.
(Galvez, 2002)
Balanza digital Son instrumentos de
pesaje de funcionamiento
no automático que utilizan
la acción de la gravedad
para determinación de la
masa. (Infantes, 2007)
Estufa incubadora Sirve para mantener y
hacer crecer cultivos
microbiológicos o cultivos
celulares. (Robles, 2014)
Centrifuga digital La centrífuga es un

equipo de laboratorio
que genera movimientos
de rotación, tiene el
objetivo de separar los
componentes que
constituyen una
sustancia.
Contador de colonias Este aparato sirve para

contar colonias de
bacterias y
microorganismos que por
lo general crecen en una
placa de agar. (Bardales,
2012)
Microscopio Es un instrumento de
laboratorio basado en
lentes ópticas que se utiliza
para observar objetos
que no son visibles para
el ojo humano. (Torres,
2018)
Estufa esterilizadora La estufa de laboratorio es
un instrumento que se usa
para esterilizar y secar los
envases de vidrio o de
metal que se utilizan en el
trabajo de laboratorio. Con
su uso, es posible eliminar
toda la humedad de los
envases. (Paredes, 2011)
V. RESULTADOS:
COLIFORMES TERMOTOLERANTES EN LA LECHE DE DOS ESTABLOS
ESTABLOS DILUCIONES POSITIVOS NEGATIVOS
𝟏𝟎−𝟓 5 0
LAS CHABELAS
𝟏𝟎−𝟔 5 0
𝟏𝟎−𝟕 5 0
𝟏𝟎−𝟓 5 0
SAN JORGE
𝟏𝟎−𝟔 5 0
𝟏𝟎−𝟕 5 0
Los resultados de la leche con el EC.
 Coliformes Termotolerantes:
 Primer Establo “Las Chabelas”
 Dilución de 10-5 5 (+) y 0 (-) su número más probable es de
6.1 con un límite de confianza al 95% inferior a 2.5 y superior
a 15.
a 15.
a 15.
 Primer Establo “San Jorge”
a 15.
a 15.

a 15.
COLIFORMES TOTALES EN LA LECHE DE DOS ESTABLOS
ESTABLOS DILUCIONES POSITIVOS NEGATIVOS
𝟏𝟎−𝟔 5 0
LAS CHABELAS
𝟏𝟎−𝟕 5 0
𝟏𝟎−𝟔 5 0
SAN JORGE
𝟏𝟎−𝟕 5 0
Los resultados de la leche con el Caldo Verde Brilla.
 Coliformes Totales:
 Primer Establo “Las Chabelas”
a 15.
a 15.
 Primer Establo “San Jorge”
a 15.
a 15.
Resultados de los cultivos MacConkey
Resultado del cultivo MacConkey del EC
COLIFORMES TERMOTOLERANTES EN LA LECHE DE DOS ESTABLOS

Establos Diluciones Placas C.1 UFC C.2 UFC C.3 UFC C.4 UFC Prom./Placa
Las 10-5 1 50 45 54 38 46
Chabelas 10-6 1 41 32 50 37 40
10-7 1 29 36 20 60 36
10-5 1 26 28 24 30 27
San Jorge 10-6 1 24 20 18 26 22
-7
10 1 32 18 14 22 21
 Recuento de placas Establo 01

la.media.de.colonias .contadas
UFC / ml 
volumen.de.muestra
 Hallando la media de las colonias contadas de las placas 10-5:
𝑀𝐶𝐶 = 46
𝑈𝐹𝐶 46𝑥1𝑐𝑚 𝑥 65
= = 2990𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙

𝑀𝐶𝐶 = 40
𝑈𝐹𝐶 40𝑥1𝑐𝑚 𝑥65

= = 2600𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙

𝑀𝐶𝐶 = 36

= = 2340𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙

UFC / ml 
volumen.de.muestra
𝑀𝐶𝐶 = 27
𝑈𝐹𝐶 27𝑥1𝑐𝑚 𝑥 65
= = 1755𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙

𝑀𝐶𝐶 = 22

= = 1430𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙

𝑀𝐶𝐶 = 21

= = 1365𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙
1. Resultado del cultivo MacConkey del Caldo Verde Brilla
COLIFORMES TOTALES EN LA LECHE DE DOS ESTABLOS

Establos Diluciones Placas C.1 UFC C.2 UFC C.3 UFC C.4 UFC Prom./Placa
-6
Las 10 1 46 31 42 52 42
Chabelas 10-7 1 40 38 39 45 35
10-6 1 30 24 16 20 22
San Jorge 10-7 1 28 36 18 24 26

UFC / ml 
volumen.de.muestra
𝑀𝐶𝐶 = 42

= = 2730𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙

𝑀𝐶𝐶 = 35

= = 2275𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙

UFC / ml 
volumen.de.muestra
𝑀𝐶𝐶 = 22

= = 1430𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙

𝑀𝐶𝐶 = 26

= = 2340𝑈𝐹𝐶
𝑚𝑙 1𝑚𝑙
COLIFORMES TERMOTOLERANTES EN LA LECHE

DE DOS ESTABLOS
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
ESTABLO LAS CHABELAS ESTABLO SAN JORGE
5-oct 6-oct 7-oct2
COLIFORMES TOTALES EN LA LECHE DE DOS

ESTABLOS
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
ESTABLO LAS CHABELAS ESTABLO SAN JORGE
6-oct 7-oct
 Según la tabla del número más probable se obtienen los siguientes datos
para la dilución 10-5 ,10-6 ,10-7 al tener 5 muestras de cada uno y del cual el
primer tubo nos dio todos positivos su número más probable es de 6.9 con
un límite de confianza al 95%. Esto indica la presencia de coliformes termo
tolerantes en la muestra obtenida de la sequía de las afueras de UPN.
VI. CONCLUSIONES:
Se logro determinar el índice de bacterias termo tolerantes presentes en las

diferentes muestras de leche de los establos (Las chabelas y San Jorge)
mediante el método de recuento de placas, utilizando los medios EC,
MacConkey y Caldo Verde Brilla.
Resultado del cultivo MacConkey del Caldo Verde Brilla y MacConkey del
Caldo Verde Brilla El índice de bacterias termo tolerantes presentes en la
leche del establo 1 La Chabela en la disolución 10-5: es de 2990 10-6 es de
2600 UFC y para la disolución de 10-7 es de 2340𝑈𝐹𝐶 -- 10-6 es de 2730
UFC y para la disolución de 10-7 es de 2275𝑈𝐹𝐶 respectivamente.
Resultado del cultivo MacConkey del Caldo Verde Brilla y MacConkey del
Caldo Verde Brilla El índice de bacterias termo tolerantes presentes en la
leche del establo 2 San Jorge en la disolución 10-5: es de 1755 10-6 es de
1430 UFC y para la disolución de 10-7 es de 1365 𝑈𝐹𝐶 -- 10-6 es de 1430
UFC y para la disolución de 10-7 es de 2340 𝑈𝐹𝐶 respectivamente.
VII. DISCUSIÓN:
 En el presente estudio se ha encontrado siguientes Esto indica la presencia

de coliformes termo tolerantes en la muestra obtenida de las dos diferentes
muestras de leches de los establos de Las chabelas y San Jorge lo cual el
limite inferior es a 2.6 y el superior a 15. Todo esto se realizó para encontrar
bacterias y saber si estas leches cumplen con los LMP , sin son aptos para
el consumo y si no atentan contra la salud de las personas.
VIII. RECOMENDACIONES:
El Servicio Nacional de Sanidad Agraria debe controlar los establos ya que

estos venden la leche a las diferentes personas de la ciudad y nosotros
tenemos que estar seguros que son aptas para el consumo humano.
Recomendar la utilización de pruebas control para el reconocimiento de
agentes contaminantes de la leche antes de ser vendidas.
Hacer de conocimiento de las autoridades los resultados obtenidos en la
presente investigación.
Las industrias Lácteas y el Estado Peruano deben implementar y mejorar los
servicios de capacitación en: Buenas Prácticas de Manufactura (BPM),
Buenas Prácticas Agrícolas (BPA) y Buenas Prácticas Veterinarias (BPV), ya
que de estas dependen la calidad e inocuidad de la Leche.
IX. Bibliografía
Aguirre, J. (07 de 09 de 2010). Medio EC. Obtenido de https://www.lifeder.com/caldo-

ec/
Arias, N. M. (23 de 05 de 2012). Los microorganismos. Obtenido de

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Bardales, J. (22 de 08 de 2012). Simplifique el conteo de colonias bacterianas y

microorganismos. Obtenido de https://www.quiminet.com/articulos/simplifique-
el-conteo-de-colonias-bacterianas-y-microorganismos-2834827.htm
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causes/syc-20372058
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termotolerantes-como-contaminantes-de-agua-de-ro
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_Bachiller_2017.pdf?sequence=1&isAllowed=y
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Torres, A. (25 de 05 de 2018). Microscopio. Obtenido de

https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-quimico/materiales-e-
instrumentos-de-un-laboratorio-quimico/microscopio.html
X. Anexos
Ilustración 1 Los diferentes medios de cultivos
Ilustración 2 Pesaje del medio EC
Ilustración 3 Pesaje del medio Caldo Verde Brilla
Ilustración 4 Pesaje del medio de cultivo MacConkey
Ilustración 5 Preparación del medio Caldo Verde Brilla
Ilustración 6 Preparación del medio EC
Ilustración 7 Preparación del medio MacConkey
Ilustración 8 Medio de cultivos en los tubos

para las diluciones
Ilustración 9 Materiales de Trabajo para el proyecto
Ilustración 10 Pipetear hasta 9 ml del medio EC para

diluciones
Ilustración 11 Preparación de las placas Petri para ser esterilizadas
Ilustración 12 1 ml de la muestras de leche para las diluciones
Ilustración 13 Los distintos tubos con muestras de cultivo EC y caldo verde brilla
Ilustración 14 Diluciones de las diferentes muestras de

leche
Ilustración 15 Muestras ya preparadas para la siembra
Ilustración 16 Equipo donde se esterilizó las placas
Ilustración 17 Calentamiento del MacConkey para pasar de sólido a líquido
Ilustración 18 Preparados para la siembra
Ilustración 19 El MacConkey listo para la siembra
Ilustración 20 Momento de la siembra
Ilustración 20 Muestra preparada para el contador de colonias
Ilustración 21 Equipo contador de colonias

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FACULTAD DE INGENIERIA

Eleodora Del Pilar Orejuela Guerrero

 Cruz Angulo, Dessiré

Agradecer a Dios, por acompañarnos y

A nuestra familia por estar compartiendo

A nuestros queridos hermanos, que han

BERTHITA CRUZ, ALEX DELGADO, ZULMY

1.3.1. Objetivo general……………………………………………………………………………………………………………………………...9

1.3.2. Objetivos específicos…………………………………………………………………………………………………………9

II.MARCO TEÓRICO ...................................................................................................................................................... 10

2.1.3 Nivel Local……………………………………………………………………………………………………………………………………….11

2.2 Bases Teóricas………………………………………………………………………………………………………………………………………………12

2.2.1 Bacterias Termotolerantes …………………………………………………………………………………………………………….12

2.2.2 Medio EC……………………………………………………………………………………………………………………………………….12

2.2.3 Medio Caldo Verde Brilla………………………………………………………………………………………………………………..13

2.2.4 Medio MacConkey………………………………………………………………………………………………………………………. 14

2.2.5 Calidad de Leche…………………………………………………………………………………………………………………………….. 14

III. Hipótesis …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….16

IV. Materiales y Equipos……………………………………………………………………………………………………………………………………. 17

IX. Referencias Bibliógraficas …………………………………………………………………………………………………………………………….. 24

Ilustración 1 Los diferentes medios de cultivos .......................................................................... 33

Se determinó la presencia de bacterias termo tolerantes en muestras de leche de vaca

Palabras claves: Ec, MacConkey, Bacterias

Keywords: Ec, MacConkey, heat tolerant

Los microorganismos participan en procesos ecológicos que permiten el

La contaminación de los cuerpos naturales de agua es una problemática que se

Entre las más utilizadas se encuentran los coliformes totales y termotolerantes,

En la actualidad, existen numerosos medios de cultivo para aislamiento, cultivo e

Uno de los primeros fue desarrollado por MacConkey y publicado en 1900 y

El Medio EC es utilizado en pruebas a elevadas temperaturas para la diferenciación

1.1. Formulación del problema.

II. MARCO TEORICO.

2.1.2. Nivel Nacional

El objetivo del presente trabajo de investigación fue evaluar la presencia de

la prueba de alcohol, las cuales se correlacionaron a través del coeficiente de

2.1.3. Nivel Local

“DETERMINACIÓN DE LA PRESENCIA DE ANTIMICROBIANOS EN

Se determinó la presencia de antimicrobianos en muestras de leche cruda

2.2. Bases Teóricas:

Dentro de los microorganismos patógenos se encuentran el grupo de

El caldo EC está compuesto por tripteína, lactosa, sales biliares, fosfato

2.2.3. Medio Caldo verde Brilla:

La presencia de gas después de incubar 24 – 48 h a 35ºC se considera

Transferir individualmente de cada tubo de Caldo Lactosado positivo

2.2.4. Medio MacConkey:

El agar MacConkey es un medio de cultivo selectivo y diferencial para

Lac+: Al utilizar la lactosa en el medio, las bacterias Lac+ como lo son

Lac-: Bacterias que no fermenten la lactosa como lo son Salmonella,

2.2.5. Bacteria E. Coli:

Puedes estar expuesto a la Escherichia coli proveniente del agua o de los

2.2.6. Calidad de la leche:

La calidad de un producto se define como el conjunto de las propiedades y

En nuestro país la Norma que establece los estándares de residuos de

3.2. OPERALIZACION DE VARIABLES

A: Índice de bacterias termo tolerantes

“Variable que utilizamos

IV. MATERIALES Y METODOS.

4.1.1. Según el propósito: Aplicada

Se debe considerar una sustancia líquida. Posteriormente ser sembrada

4.1.2. Según el diseño de investigación: Experimental

Fue experimental, por el motivo que se aplica la variable independiente

4.1.3. Según el tipo de investigación experimental: Experimental pura

Fue experimental pura ya que reunió un requisito: