UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE CHOTA

Creada por la (ley N° 29531)

TRABAJO
EVALUACIÓN DE LAS CARACTERÍSTICAS FISIOLÓGICAS DE LA ALFALFA COMO
INDICADOR EN LA RECUPERACIÓN DE SUELOS CONTAMINADOS CON PETRÓLEO
FACULTAD:
CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA:
ING. FORESTAL Y AMBIENTAL
ASIGNATURA:
TÉCNICAS BIOLÓGICAS DE DESCONTAMINACIÓN
INTEGRANTE:
ROJAS CORONEL RONAL
TORRES CORONEL JOEL
DOCENTE:
ING: EVER NÚÑEZ BUSTAMANTE

CHOTA, julio del 2019

I. INTRODUCCIÓN.
La fitorremediación (phyto = planta y remediación = mal por corregir), es un proceso que
utiliza plantas para remover, transferir, estabilizar, concentrar y/o destruir contaminantes
(orgánicos e inorgánicos) en suelos, lodos y sedimentos. Los mecanismos de
fitorremediación incluyen la rizodegradación, la fitoextracción, la fitodegradación y la
fitoestabilización y fitovolatilización. El petróleo es un hidrocarburo muy utilizado para
los vehículos, industrias, etc.
Sin embargo, es potencial mente toxico y los problemas se dan cuando se encuentra en el
suelo y agua. El petróleo genera grandes problemas ya que contiene una mescla de
productos químicos, los cuales causan una gran contaminación en la flora y la fauna y así
llega hasta las personas mediante la cadena trófica. Durante mucho tiempo, se ha
desarrollado una gama amplia de tecnologías de limpieza para eliminar los metales
tóxicos del agua y del suelo. Entré estas cabe destacar la biorremediación como una
posible solución futura a muchos problemas de contaminación, debido a que son
consideradas en todo el mundo una tecnología innovadora para el tratamiento de residuos
tóxicos, dentro de sus variantes, se encuentra la fitorremediación, que se basa en el empleo
de plantas para limpiar ambientes contaminados, siendo la fitoextracción y la
fitoestabilización las técnicas más aplicadas. Además, se han utilizado reguladores del
crecimiento en la fitorremediación con plantas, tales como auxinas y citoquininas para
disminuir su contaminación por metales pesados; pues estos reguladores potencialmente
incrementan la velocidad de crecimiento y la biomasa en plantas hiperacumuladoras, así
como agentes quelatantes como el EDTA y ácidos húmicos y fúlvicos (LOPEZ, 2011).
II. OBJETIVO GENERAL
Determinar la recuperación de un suelo contaminado con hidrocarburos, empleando como
planta indicadora a la alfalfa.
2.1. Objetivos específicos.
 Evaluar el crecimiento y las características fisiológicas de la alfalfa (hojas,
tamaño, etc.).
 evaluar el efecto remediador del cultivo de la alfalfa Medicago sativa en un suelo
contaminado con tres niveles de petróleo.
III. MARCO TEÓRICO:
3.1. Fitorremediacion.
Las medidas fitocorrectivas consisten en el uso de plantas y árboles para depurar aguas y
suelos contaminados. Es una técnica pasiva y estéticamente agradable que utiliza la
energía solar y se puede usar junto con otras técnicas de limpieza mecánicas. Las plantas
actúan como filtros y pueden descomponer o degradar contaminantes orgánicos o
estabilizar contaminantes metálicos.
Son muy útiles en lugares donde la contaminación es poco profunda y no es muy grande.
3.2. Suelos contaminados.
Son suelos cuyas características han sido alteradas negativamente por la presencia de
compuestos químicos de carácter peligroso de origen antropogénico, en concentraciones
que superan los Niveles Genéricos de Referencia y que conllevan a un riesgo inaceptable
para la salud humana o el medio ambiente, de acuerdo con los criterios y estándares
definidos por dicho decreto y que ha sido declarado como tal por la Administración
competente mediante resolución explícita.
Se entienden como Niveles Genéricos de Referencia la concentración de una sustancia
contaminante en el suelo que no conlleva un riesgo superior al máximo aceptable para la
salud humana o los ecosistemas y calculada de acuerdo con los criterios recogidos en el
ANEJO VII del Real Decreto 9/2005 (PEÑA, 2011).
3.3. Contaminación de suelos por hidrocarburos.
Los hidrocarburos son compuestos de gran abundancia en la naturaleza integrados por
átomos de carbono e hidrógeno. Éstos se clasifican según la estructura de los enlaces
existentes entre los átomos de carbono que componen la molécula (Web Griem W. &
Griem-Klee S). Los hidrocarburos estipulan una actividad económica de primera
importancia a nivel mundial ya que son los principales combustibles fósiles, además
sirven de materia prima para todo tipo de plásticos, ceras y lubricantes. Pero son estas
formas de elevado valor económico (petróleo y derivados) las responsables de graves
problemas de contaminación en el medio natural.
3.3.1. fuentes de contaminación por hidrocarburos.
La contaminación por hidrocarburos se produce de forma frecuente y los
principales orígenes de aparición de hidrocarburos en el suelo-subsuelo son por
orden de importancia (Web Gencat):
1. Fuga de depósitos.
2. Vertidos accidentales.
3. Enterramiento de residuos que contienen hidrocarburos.
4. Lavado de aglutinantes de caminos asfaltados.
5. Riegos de caminos de tierra con aceites residuales para evitar el polvo.
Las principales actividades consideradas como fuentes de contaminación de
hidrocarburos son:
 Saneamiento in situ (nitratos, microorganismos fecales, trazas de
hidrocarburos sintéticos).
 Gasolineras y talleres automotrices (benceno, otros hidrocarburos
aromáticos, fenoles e hidrocarburos halogenados).
 Depósito final de residuos sólidos (amonio, salinidad, hidrocarburos
halogenados y metales pesados).
 industrias metalúrgicas (tricloroetileno, tetracloroetileno, otros
hidrocarburos halogenados, metales pesados, fenoles y cianuro).
 Talleres de pinturas y esmaltes (tetracloroetileno, alcalobenceno y otros
hidrocarburos halogenados).
 Industria de la madera (pentaclorofenol y algunos hidrocarburos
aromáticos)
 Tintorerías tricloroetileno y tetracloroetileno).
 Manufactura de pesticidas (fenoles, hidrocarburos halogenados, arsénico
y metales pesados).
 Depósito final de lodos residuales (nitratos, hidrocarburos halogenados,
plomo y cinc).
 Curtidurías (cromo, salinidad, hidrocarburos halogenados y fenoles).
 Explotación y extracción de salinidad (hidrocarburos aromáticos).
 3.3.2. Comportamiento del hidrocarburo en el ambiente y su movimiento en el
subsuelo.
Un derrame de hidrocarburo, de forma generalizada, lleva consigo una serie de
cambios progresivos de sus propiedades físico-químicas. Estos cambios se
atribuyen al proceso de intemperización o meteorización el cual se inicia una vez
ocurre el derrame y continúa indefinidamente e incluye: evaporación, disolución,
dispersión, oxidación, emulsión, sedimentación y biodegración (Web Gestión-
Calidad Consulting). La tasa de intemperización varía en función de las
características del producto derramado y de las condiciones climáticas existentes
en el lugar del derrame. Generalmente va referida a vertidos al aire libre no en el
subsuelo, pero en algunos casos el derrame se produce a ras de suelo y de ahí
percola hasta los acuíferos, de modo que parte del hidrocarburo percolado puede
haber sufrido o sufrir, durante su movilización (BARROSOS, 2013).
3.4. El petróleo.
Es una mezcla de hidrocarburos de diferente peso molecular en la cual existe una
fracción pequeña de compuestos de azufre y nitrógeno. El color y las propiedades del
petróleo varían de acuerdo al tipo hidrocarburo que éste contenga. Cada uno de estos
constituyentes posee un punto de ebullición diferente y es gracias a esta distinción de
propiedades que se da la separación física del petróleo en el proceso de refinación. En
dicho proceso, el petróleo crudo es procesado (o bien refinado) para obtener los
diferentes derivados que son consumidos día a día en la sociedad.
Hoy sabemos que la formación del petróleo deriva de los procesos de descomposición
de organismos de origen animal y vegetal, en tiempos remotos los árabes y los hebreos
recurrieron al petróleo con fines medicinales, los habitantes de mesoamericana
utilizaban el petróleo como impermeabilizante para sus embarcaciones incluso le
pusieron el nombre de "chapopote" las explotaciones petroleras se comenzaron a
realizar hace más de 150 años en ese entonces algunos yacimientos se encontraban a 25
metros de la superficie, actualmente el petróleo se encuentra a grandes profundidades
del mar en la actualidad se utilizan satélites para encontrar yacimientos de petróleo
(ESPER, 2006).
El petróleo se encuentra distribuido de manera uniforme en el subsuelo y existen 4
condiciones básicas para que se acumule:
 Debe existir una roca permeable para que de esta forma el petróleo pueda
moverse por los poros microscópicos de la roca.
  La presencia de una roca impermeable que evite la fuga de los
hidrocarburos hacia la superficie.
 El yacimiento debe comportarse como una trampa ya que las rocas
impermeables deben encontrarse dispuestas de tal forma que no existan
movimientos laterales de fuga de hidrocarburos.
 Debe existir material orgánico suficiente para convertirse en petróleo por
el efecto de la presión y temperatura que existe en el yacimiento.
3.4.1. Los principales derivados del petróleo son:
a) Gas Licuado de Petróleo GLP: Consiste en una mezcla de hidrocarburos
livianos que se obtienen de la destilación del petróleo y/o tratamiento del
gas natural. Estos pueden ser de tres tipos:
Hidrocarburos del grupo C3 (Propano, Propeno, Propileno).
Hidrocarburos del grupo C4 (Butano, Buteno, Butileno).
Mezcla de C3 y C4 en cualquier proporción.
b) Gasolina de motor: (MoGas) E una mezcla compleja de hidrocarburos
relativamente volátiles que con sin aditivos se usa en el funcionamiento de
motores de combustión interna.
c) Nafta: Es una fracción ligera de petróleo que se obtiene mediante
destilación directa entre los 35 y 175 º C se utiliza principalmente como
insumo en la fabricación de gasolinas para mejorar el octanaje y cómo
solvente la industria.
d) Kerosén: Es un combustible líquido constituido por la fracción del
petróleo que se destila entre los 150 y 300 º C. Se usa como combustible
para la cocción de alimentos, iluminación, equipos de refrigeración,
motores y cómo solvente para betunes e insecticidas de uso doméstico.
e) Turbo combustible o Jet Fuel: Es un kerosén con un grado especial de
refinación que posee un punto de congelación más bajo que el kerosén
común. Se utiliza en motores de reacción y turbo hélice.
f) Diésel: Combustible líquido que se obtienen de la destilación atmosférica
del petróleo entre los 200 y 380 º C, son más pesados que el kerosén y es
utilizado en máquinas diésel y otras máquinas de compresión – ignición.
g) Fuel Oil: Es el residuo de la refinación del petróleo y comprende todos
los productos pesados generalmente es utilizado en calderas, plantas
eléctricas y navegación.
 3.4.2. Composición química.
El petróleo es una mezcla de hidrocarburos que contiene en menor proporción
otros elementos como O, S, N e incluso metales como Ni, Fe y V el número de
átomos de carbono y la forma que están colocados dentro de las moléculas de
los diferentes compuestos, proporcionan al petróleo diferentes propiedades físicas
y químicas.
La composición química del petróleo es:
Parafinas: cadenas lineales asociadas con hidrógenos.
Isoparafinas: cadenas ramificadas de carbono asociadas con hidrógeno.
Olefinas: cadenas que contienen doble enlace entre los átomos de carbono.
Naftenos: moléculas en las que se forman ciclos de carbonos.
Aromáticos: ciclos presentan dobles uniones alternas.
3.5. La alfalfa.
Se le conoce como alfalfa, mielga, alfaz, mielcas y alfalce, y su nombre científico es
Medicago sativa. Es una especie de planta herbácea, de la familia de las fabáceas o
leguminosaes, muy rica en vitaminas, minerales y proteínas, provechosos para el
organismo.
3.5.1. Origen de la alfalfa.
Aunque actualmente la alfalfa se puede encontrar en casi todo el mundo,
es originaria del Imperio Persa, abarcando países como Turquía, Siria, Irán,
Irak, Afganistán parte de Pakistán y Cachemira. Los persas la cultivaban para
dar de comer a los caballos.
Existen escritos romanos que relatan con abundante detalle, la importancia,
cultivo y forma de explotación de la alfalfa, pues era un complemento de gran
relevancia para el mantenimiento de los animales. No obstante, al caer el
Imperio Romano, la siembra desapareció de Europa.
Fueron los árabes quienes de nuevo la transportaron de Persia a España, donde
se ha comercializado durante muchísimo tiempo.
A través del Pacífico llegó, en 1519, al continente americano, primero a México
y luego a Perú y Chile. A partir de allí, y por vía terrestre, se trasladó a
Argentina y a los Estados Unidos, en el año 1860.
3.5.2. Descripción de la alfalfa, sus características.
 La alfalfa es una planta perennifolia, vivaz y de porte erecto, que puede crecer
entre 30 y 60 cm de altura. Su color es verde grisáceo. Sus “rasgos” son bien
definidos, y pueden describirse de la siguiente manera:
 Raíz. Su raíz principal es pivotante, robusta, larga y profunda, con
numerosas raíces secundarias, que le permiten captar los minerales
alejados de la superficie.
 Tallos. Son delgados y erectos. Soportan muy bien el peso de las hojas y
de las inflorescencias, y son muy estables, lo que hace que la planta sea
muy propicia para la siembra.
 Hojas. Sus hojas son ovaladas, trifoliadas, aunque las primeras hojas
verdaderas son unifoliadas. Las orillas son lisas y con los bordes superiores
levemente dentados.
 Flores. Son pequeñas y crecen en racimos que nacen en las axilas de
las hojas. Son de un hermoso color violeta pálido (lavanda), aunque
ocasionalmente se muestran con tonalidades rojas o blancas.
 Fruto. Es una legumbre que no se abre espontáneamente al llegar a la
adultez, para liberar las semillas. No posee espinas y contiene entre 2 y 6
semillas amarillentas, arriñonadas y con una longitud de 1.5 a 2.5 mm.
3.5.3. Ciclo de vida.
La alfalfa tiene un ciclo de vida de cinco a doce años, aunque puede llegar a vivir
dos décadas, dependiendo de las condiciones climatológicas.
Es una especie autotóxica, una condición que dificulta la reproducción de su
semilla en plantaciones existentes. Es por ello, que se recomienda rotar los
cultivos con variedades como maíz o trigo, antes de sembrar.
Calificada por algunos como soberana de las leguminosas, la alfalfa demanda
climas secos y altas temperaturas en verano, por eso Argentina y España son dos
de los lugares donde mejor se produce.
3.5.4. USOS Y PROPIEDADES DE LA ALFALFA.
La alfalfa se cultiva masivamente y es empleada sobre todo como forraje, siendo
uno de los mejores alimentos para animales como caballo y vacas.
Su utilización en la nutrición humana no está muy divulgada, a pesar de ser un
producto rico en proteínas, fibras, vitaminas y minerales, que actúa en nuestro
cuerpo brindando muchos beneficios para la salud.
 La alfalfa es rica en vitaminas básicas como A, D, E, K, e inclusive la familia
completa de vitaminas del complejo B. La vitamina D regulariza la entrada de
calcio a los huesos, previniendo el raquitismo. La vitamina A contribuye a la
formación de células epiteliales, al desarrollo del sistema óseo y el resguardo de
la piel. La vitamina E, por su parte, es un fuerte antioxidante y un elemento
esencial de la hemoglobina.
Es sabido que hace siglos atrás, la alfalfa se usó con fines medicinales, por su
potente acción para la sanación de problemas renales, el fortalecimiento del
sistema inmunológico, y la reducción de los síntomas asociados con artritis,
tosferina, y fiebre.
3.5.5. Importancia.
El cultivo se centra en su relevancia como fuente natural de proteínas, fibra,
vitaminas y minerales, su contribución ornamental, y sus aportes en la
conservación de la fauna.
Así mismo es una fuente reductora de energía por la fijación simbiótica del
nitrógeno en el propio cultivo y de otros de los que pueda formar parte. También
su cultivo aporta ingredientes de utilidad que sirven para limitar y reducir la
erosión, así como ciertas plagas y enfermedades de los cultivos (REMY).
IV. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA.
4.1. Materiales, métodos y procedimiento.
Materiales.
 Pipeta.
 Suelo.
 Petróleo.
 Alfalfa.
 Macetas.
 Balanza.
Métodos.
4.1.1. Tratamientos y diseño experimental.
Se consideró tres niveles de petróleo, los cuales fueron 20ml de petróleo/kg de
suelo para el tratamiento 1, 30ml de petróleo/kg de suelo para el tratamiento 2 y
40ml de petróleo/kg de suelo para el tratamiento 3, a la vez se consideró un testigo
control el cual no se adiciono petróleo al suelo. La especie vegetal utilizada
Medicago sativa “alfalfa”, la cual ha demostrado en trabajos previos buena
 capacidad de ser una planta utilizada para la fitorremediación. Se utilizó un diseño
de bloques completamente al azar (DBCA).
Tabla: Descripción de los niveles de petróleo utilizados en cada tratamiento.
TRATAMIENTO ESPECIE VEGETAL PETRÓLEO(ML/KG DE SUELO)
T1 Alfalfa 20ml/kg de suelo
T2 Alfalfa 30ml/kg de suelo
T3 Alfalfa 40ml/kg de suelo
Testigo(T0) Alfalfa Sin petróleo

4.2. Preparación del suelo:

El suelo que se utilizó fue un suelo franco arcilloso, proveniente del parque recreativo
santa Eulalia. Para mejorar las condiciones de estructura y textura del suelo se decidió
realizar una mescla con un poco de tierra arenosa, logrando una mezcla homogénea de
suelo.
Procedimiento.
 Para realizar dicho bioensayo primero hemos conseguido todos los
materiales necesarios para realizarlo con éxito.
 Después hemos ido a dicho laboratorio a pesar 1kg de suelo para cada
bioensayo con una balanza, también hemos utilizado una probeta para
medir la cantidad de contamínate para utilizar en cada bioensayo.
 Una vez que hemos pesado dicho suelo y medido la cantidad de
contaminante se procedió a mesclar el suelo con dicho contamínate para
cada bioensayo (cantidades diferentes del contamínate) para luego
sembrar dicha alfalfa.
 Luego de hacer estos pasos, dichos bioensayos fueron colocado en una
mesa de dicho laboratorio con sus respectivos nombres y cantidad de
contamínate para luego evaluar el comportamiento de dicha alfalfa
como como indicador de recuperación de suelos contaminados.
 4.3. evaluaciones:
4.3.1. Primera evaluación.
Después de una semana de mantener las plantas en el medio contaminado se procedió
a observar para evaluar cómo va evolucionando en su crecimiento según la cantidad
de contaminante que hemos agregado a dicho suelo.

Figura 1: observación de las plantas de de 1 semana para el análisis.

TESTIGO T0. BIOENSAYO T1 N° 1. BIOENSAYO T2 N° 2. BIOENSAYO T3 N° 3.

Observamos que la Contaminante Contaminante Contaminante
germinación es “petróleo 20 ml” Sin “petróleo 30 ml” Sin “petróleo 40 ml” Sin
normal germinar germinar germinar

4.3.2. Segunda evaluación.

Después de dos semanas de mantener el testigo, los bioensayos este en un medio
contaminado con petróleo se procedió a observar las plantas para evaluar cómo va
evolucionando en su crecimiento según la cantidad de contaminante agregado en los
bioensayos.
Figura 2: observación de las plantas después de 2 semana para el análisis.

TESTIGO T0. la BIOENSAYO T1 N° 1. BIOENSAYO T2 N° 2. BIOENSAYO T3 N° 3.

germinación obtenida Contaminante “petróleo Contaminante Contaminante
es de 3.5cm a 5cm 20 ml” se obtiene una “petróleo 30 ml” Sin “petróleo 40 ml” Sin
germinación de 0.5 cm
germinar germinar
 4.4. Resultados
Estos son los resultados que hemos obtenido en nuestra practica realizada con respecto
a su altura.
ALTURA
MEDICION EN “cm”
Testigo(T0 ) Bioensayo(T1) Bioensayo(T2) Bioensayo(T3)
21/05/2019 3cm ----- ----- -----
28/05/2019 3.5cm a 5cm 0.5cm ----- -----
04/06/2019 5cm 1cm 0.5cm 0.2cm
11/06/2019 5.cm a 6cm 1.2cm a 1.4cm 0.5cm a 0.7cm 0.3cm
19/06/2019 Muerto muerto muerto Muerto

Estos son los resultados que hemos obtenido en nuestra practica realizada con respecto
a su cantidad de hojas

Testigo(T0 ) Bioensayo(T1) Bioensayo(T2) Bioensayo(T3

21/05/2019 4 hojas ----- ----- -----
28/05/2019 5hojas 2hojas ----- -----
04/06/2019 6hojas 2hojas 2hojas 1hoja
11/06/2019 8hojas 4 hojas 2hojas 1hoja
19/06/2019 Muerto muerto muerto Muerto

V. CONCLUSIONES
Después de 5 semanas de observar el comportamiento de la alfalfa se sabe que no puede
soportar cantidades extremas de contaminantes.
La alfalfa es una planta que no tiene gran desarrollo en suelos franco – arcilloso por
motivos que son muy húmedos.
En conclusión, la alfalfa es una planta que no tiene capacidad de fitorremediar suelos
contaminados con hidrocarburos.
VI. BIBLIOGRAFÍA
BARROSOS, J. V. (2013). Contaminacion de suelos por hidrocarburos. Obtenido de
https://www.agapea.com/libros/CONTAMINACIoN-DEL-SUELO-
ESTUDIOS-TRATAMIENTO-Y-GESTIoN-9788471148063-i.htm
ESPER, J. (2006). El petróleo. Obtenido de https://i.ytimg.com
LOPEZ, D. (2011). La fitorremediación. Obtenido de https://agriculturers.com/la-
fitorremediacion-plantas-para-tratar-la-contaminacion-ambiental/
PEÑA, E. J. (2011). Suelos contamiandos. Obtenido de
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1727-
99332014000200004
REMY, A. B. (s.f.). La alfalfa. Obtenido de https://www.webconsultas.com/belleza-y-
bienestar/plantas-medicinales/propiedades-de-la-alfalfa-y-beneficios-para-la-
salud