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Omar Estrada
Venezuelan Institute for Scientific Research
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RESUMEN
Las plumas son un subproducto de la industria avícola, ricas en proteína (principalmente queratina), que se generan
en grandes cantidades como resultado del procesamiento de las aves de corral. Por muchos años las plumas han sido
objeto de estudios alimenticios para utilizarlas como suplemento proteico en la nutrición animal. Así, la industria
avícola se ha beneficiado de su uso a la vez que contribuye a disminuir el impacto ambiental producto de su
acumulación. Industrialmente las plumas se procesan a alta presión y temperatura para producir la harina de plumas.
Sin embargo, este producto tiene dos limitaciones importantes: desequilibrio aminoacídico y baja digestibilidad. A
pesar de ello la harina es utilizada en la nutrición de aves de corral (5%), trucha arco iris (15%), camarones (33%) y
salmones (40%), pero requiere ser suplementada con aminoácidos, especialmente L-lisina. Su valor nutricional
puede ser mejorado mediante acción microbiana por la modificación de la estructura de la queratina e incremento del
contenido aminoacídico. De allí el creciente interés en desarrollar métodos alternativos para el tratamiento de las
plumas con el fin de mejorar su calidad nutricional e incluso desarrollar nuevos productos de mayor valor agregado.
El presente trabajo se realizó con una cepa bacteriana de Kocuria rosea, aislada del suelo, para determinar su
potencial productor de harina de plumas fermentadas, enzimas y pigmentos carotenoides en fermentación sumergida
de plumas. Bajo estas condiciones: 1) K. rosea excreta al menos dos actividades proteolíticas, capaces de degradar
queratina, colágeno y elastina. 2) la harina de plumas enriquecida con las células de K. rosea contiene principalmente
proteína (67%), cuya digestibilidad in vitro (88%) es similar a la reportada para la harina de plumas convencional. La
biomasa bacteriana mejora el contenido de los aminoácidos esenciales lisina, histidina y metionina en la harina
fermentada. Además, por datos espectrométricos se detectó que la bacteria sintetiza astaxantina, un pigmento rosa-
naranja, de utilidad en la agroindustria para mejorar la pigmentación de ciertos alimentos y en la acuicultura de
salmónidos.
Palabras claves: plumas, Kocuria rosea, proteasas, fermentación, harina de plumas, carotenoides, astaxantina.
The feathers as agro-industrial waste: their biotechnological utilization to develop new added value products
Feathers are a poultry by-product rich in protein (mainly keratin), generated in very large amounts as a waste product
from the poultry-processing industry. For many years, feathers have been subject to nutritional studies in order to
incorporate them as protein supplement in animal feedstock. This allows poultry industry to take advantage of their
usefulness and eliminates the environmental problem of their accumulation. Industrially, a great part of the feather
waste is cooked under high pressure and temperature, producing a feather meal. However, this product has two
important nutritional limitations: an amino acid imbalance and poor digestibility. In despite of this the meal is used in
nutrition of chicken poultry (5%), rainbow trout (15%), shrimp (33%) and salmon (40%) but need amino acids
supplementation, especially feed-grade L-lysine. Their nutritional value might be improved by microbial action by
modification of the structure of keratin and increasing the amino acid content. Thus, there is a growing interest in
alternative methods for the treatment of feathers to improve the nutritional quality of the feather meal and to develop
new added value products (enzymes, pigments, etc).
This research has been conducted on bacterial strain of Kocuria rosea isolated from soil, to determine their potential
use to produce fermented feather meal, enzymes and carotenoid pigments in feathers submerged fermentation. Under
these conditions: 1) K. rosea excretes at least two proteolytic activities, able to degrade keratin, collagen and elastin.
2) The feather meal enriched with cells of K. rosea mainly contains protein (67%), with an in vitro digestibility
(88%) similar to the value of the commercial non fermented feather meal. The bacterial cells incorporated into the
final product improve the content of essential amino acids lysine, histidine and methionine. Additionally, by
spectrometric data it was detected that this bacterium synthesizes an orange-pink carotenoid pigment astaxanthin,
that may useful in alimentary industry for increase colour of some foods and salmonids feed in aquaculture
operations.
Keywords: poultry feathers, Kocuria rosea, proteases, fermentation, feather meal, carotenoids, astaxanthin
La cepa LPB-3 se cultivó en un fermentador Bioflow III (b) Las actividades colagenolítica y elastinolítica fueron
(New Brunswick Scientific, NJ, USA) de 5 L de determinadas siguiendo el método de Bressollier et al.,
(1999), el cual utiliza como sustratos colágeno tipo I de de proteínas (Beckman, SYSTEM 300), su composición
bovino y elastina (SIGMA®) respectivamente. La (materia seca, cenizas, extracto etéreo, proteína cruda,
mezcla de reacción (1 ml) contiene: 0,5% (p/v) de cada fibra y carbohidratos) y digestibilidad in vitro de
sustrato en buffer Tris-HCl 50 mM (pH 8,5) y un acuerdo a las metodologías descritas por la A. O. A. C.
volumen de caldo de fermentación equivalente a 0.01 µg (1990). Muestras de plumas sin tratar fueron analizadas
de proteína. La reacción se llevó a cabo a 50 oC por un en su composición y digestibilidad in vitro siguiendo la
periodo de 120 min con agitación constante (900 rpm) y metodología descrita, para su comparación con la harina
se detiene por adición de 10 µl de ácido acético 10 M. de plumas fermentadas.
Posteriormente, la mezcla de reacción es centrifugada
(10.000 g, 10 min, 4º C) y el sobrenadante recuperado Extracción y caracterización de los pigmentos
para la determinación de los grupos amino libres a carotenoides de K. rosea.
DO578 nm utilizando ninhidrina (SIGMA®). Una unidad
de actividad colagenolítica o elastinolítica es definida El sedimento celular producto de la centrifugación del
como la cantidad de enzima requerida para liberar caldo de fermentación fue utilizado para la extracción de
1µmol de glicina en 1 h. El contenido de proteínas se los pigmentos microbianos. Para tal fin, las células
determinó utilizando como estándar albúmina bovina y fueron lavadas (5.000 g por 10 min a 10o C) una vez con
el reactivo Bio-Rad (Munich, Germany) de acuerdo al agua destilada y repetidamente con metanol hasta quedar
método de Bradford, (1976). Todos los ensayos incoloras. Para el análisis de los pigmentos de K. rosea
enzimáticos fueron realizados por triplicado. todos los sobrenadantes metanólicos se unieron y
posteriormente se llevó a sequedad a presión reducida en
Zymogramas un rota-vapor. Al residuo resultante (2,3 g) se le realizó
una partición en una mezcla de hexano-agua-metanol
Este tipo de geles permiten visualizar las actividades (5:1:5) para obtener dos fases: hexano-metanol y
proteolíticas presentes en los caldos de fermentación metanol/agua (método modificado de Lorquin. et al.,
como bandas claras sobre un fondo azul. Para tal fin se 1997). Ambas fases fueron evaporadas a presión
utilizó un gel PAGE-SDS (7,5 %) co-polimerizado con reducida y analizadas por su comportamiento en
gelatina (10 mg/m) bajo las condiciones descritas por cromatografía de capa fina (CCF). El residuo de la fase
Laemmli (1970). Después de la electroforesis, el gel fue hexano/metanol (1,5 g), debido a la coloración
lavado con Triton X-100 2,5 % (v/v) por 30 min a característica de los pigmentos carotenoides, fue disuelto
temperatura ambiente e incubado por 1 h a 40 o C en en acetona y la fase soluble resultante fue llevada a
buffer carbonato 50mM (pH 10) para el desarrollo de la sequedad (200 mg) y aplicada a una columna de fase
reacción enzimática. Posteriormente, el gel fue teñido reversa RP-18 (columna LoBar de Merck), eluida con
con Coomassie brilliant blue R-250 (SIGMA®) y una mezcla de acetonitrilo y metanol (9:1), para la
decolorado con ácido acético glacial-agua-metanol separación de la mezcla de pigmentos. De esta
(1:4,5:4,5) para revelar las bandas claras de actividad cromatografía se obtuvieron 5 fracciones: A (4 mg), B
proteolíticas. Los siguientes estándares de peso (7 mg), C (12 mg), D (20 mg) y E (25 mg), las cuales
molecular (Bio-Rad, USA) fueron corridos bajo las fueron analizadas por cromatografía de gas acoplada con
mismas condiciones electroforéticas: miosina 209 kDa, espectrometría de masas (Varian Saturn 2000), equipada
ß-galactosidasa 124 kDa, ovolbúmina 49,8 kDa y con las librerías Nist y Willey, resonancia magnética
anhidrasa carbónica 34,8 kDa. nuclear de protones y carbono 13 (Jeol Eclipse 270).
Tabla 1. Actividades enzimáticas del caldo de Materia seca 93 ± 1,88 93,79 ± 0,07
fermentación de K rosea con diferentes sustratos
Proteína cruda 83 ± 1,71 67 ± 0,26
La versatilidad de actividad de estas enzimas puede ser
una ventaja a nivel aplicado, ya que podrían ser
incorporadas en procesos de industrias tan diversas Grasa 2,01± 5,10-3 4,60 ± 0,19
como la alimenticia, cosmética y peletera. Las
colagenasas y elastasas han sido incluidas con éxito en Cenizas 0,91 ± 0,11 15,60 ± 0,12
la industria alimenticia para el ablandamiento de la
carne y en el tratamiento de úlceras dérmicas y Fibra Cruda 0,60± 0,045 0,39 ± 0,035
quemaduras en el área biomédica (Ward, 1985). Con
respecto a la industria cosmética, es poca la información
que las empresas suministran acerca de la formulación Carbohidratos 6,48± 2 6,2 ± 0,07
de sus productos ricos en queratina. Sin embargo,
resaltan las bondades de los hidrolizados de queratina de Digestibilidad
peso molecular determinado, en conjunto con ceramidas 26±4,04 88± 0,64
"in vitro"
y vitaminas, para el tratamiento y restauración del
cabello. Adicionalmente, la inclusión de queratinasas
para facilitar la remoción del vello capilar y lograr un Tabla 2. Composición de las plumas y harina de plumas
proceso de depilado menos agresivo podría ser fermentadas (HPF).
En cuanto al contenido aminoacídico, las plumas se energética (grasa). No obstante, se requieren ensayos
caracterizan por presentar deficiencias en aminoácidos adicionales de digestibilidad in vivo y pruebas
esenciales (Wang y Parsons, 1997). La Figura 2 muestra zootécnicas, que indiquen el valor nutricional y su efecto
que la harina de plumas resultante del proceso sobre el crecimiento y desarrollo de animales de cría
fermentativo presentó, respecto a las plumas, mayor (aves de corral, truchas entre otros), a fin de conocer el
proporción de ciertos aminoácidos esenciales (lisina, uso potencial de este hidrolizado como suplemento
metionina, histidina, isoleucina, leucina, fenilalanina, proteico. En este sentido, los resultados del presente
valina), producto del aporte aminoacídico de la biomasa estudio, aunque preliminares, constituyen una evidencia
de K. rosea al producto obtenido por fermentación. del mejoramiento del valor nutricional de este
subproducto de la agroindustria, por vía biotecnológica,
La literatura reporta que la calidad nutricional de las para ser usado como una fuente proteica alternativa.
harinas obtenidas por fermentación resultan enriquecidas
en su contenido de aminoácidos esenciales cuando se Caracterización de los pigmentos carotenoides de K.
incorpora al producto final, la biomasa microbiana rosea.
derivada del proceso fermentativo, lo cual incrementa su
valor agregado (Elmayergi y Smith, 1971; Williams et De la cromatografía en columna las fracciones A y B, no
al. 1991). A este respecto, cabe mencionar el carácter no revelaron señales que pudieran ser atribuibles al ion
patógeno de la cepa LPB-3, por lo que se podría molecular de algún carotenoide. La fracción C la cual es
considerar su uso en la alimentación animal. un sólido amorfo de color amarillo, arrojó el ion
molecular M-2 de m/z 578 el cual es consistente en la
Dada la composición del producto obtenido por literatura con el compuesto adorinubina (Stradi et al.,
fermentación, su uso en la formulación de alimentos 1995a). Las fracciones D y E son sólidos amorfos de
para animales podría disminuir los costos de producción color rojo.
al reducir la necesidad de incorporar aditivos, tales como
aminoácidos, vitaminas-minerales o alguna fuente
9
7
Contenido del aminoácido (%)
0
lys met his val ile phe leu cys thr arg
Aminoácidos
Figura 2. Comparación del contenido de aminoácidos esenciales entre las plumas sin tratar (■) y la harina de plumas
fermentada, HPF (□).
O
H3C R´
H3C CH3 CH3 CH3
H3C CH3
CH3 CH3
R CH3 R=R´=H cantaxantina
O R=R´=OH astaxantina
R=OH,R´=H adorinubina