MAKALAH BAKTERIOLOGI III

PEMERIKSAAN MPN Coli

Disusun oleh :

Nabela eva sawitri

1713453017

PROGRAM STUDI D III ANALIS KESEHATAN FAKULTAS

KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS ABDURRAB
PEKANBARU

2019
 KATA PENGANTAR

Dengan menyebut nama Allah SWT yang Maha Pengasih lagi Maha Panyayang,
Kami hanturkan puji dan syukur atas kehadirat-Nya, yang telah melimpahkan rahmat,
hidayah, daninayah-Nya kepada kami, sehingga kami dapat menyelesaikan makalah
Trematoda Hati ini dengan baik.

Makalah Trematoda Hati ini telah kami susun dengan maksimal dan mendapatkan
bantuan dari berbagai pihak sehingga dapat memperlancar pembuatan makalah ini. Untuk itu
kami menyampaikan banyak terimakasih kepada semua pihak yang telah berkontribusi dalam
pembuatan makalah ini.

Terlepas dari semua itu, kami menyadari sepenuhnya bahwa masih ada kekurangan
baik dari segi susunan kalimat maupun tata bahasanya. Oleh karena itu dengan terbuka kami
menerima segala saran dan kritik dari pembaca agar kami dapat memperbaiki makalah ini.
Kami juga berharap semoga makalah ini bermanfaat bagi pembaca.

Pekanbaru, 25 juni 2019

Penyusun

2
 BAB I

PENDAHULUAN

a. Latar Belakang

Air merupakan suatu sarana utama untuk meningkatkan derajat kesehatan masyarakat
karena air merupakan salah satu media dari berbagai macam penularan penyakit. Air bersih
adalah air yang jernih, tidak berwarna, tawar dan tidak berbau. Sumber daya alam yaitu air,
dapat diperoleh dari air permukaan meliputi air sungai, danau, waduk, rawa dan genangan air
lainya.
Air merupakan kebutuhan yang paling dibutuhkan di dalam kehidupan manusia. Air yang
ada di alam bukanlah didapat sebagai air murni, melainkan sebagai air yang mengandung
bermacam-macam zat, baik yang terlarut ataupun tersuspensi. Jenis dan jumlah zat tersebut
tergantung dari kondisi lingkungan sekitar sumbernya.
Air merupakan materi esensial bagi kehidupan makhluk hidup, karena makhluk hidup
memerlukan air untuk mempertahankan kelangsungan hidupnya. Secara umum fungsi air
dalam tubuh setiap mikroorganisme adalah untuk melarutkan senyawa organik, menstabilkan
suhu tubuh dan melangsungkan berbagai reaksi kimia tingkat seluler.
Pemeriksaan air secara mikrobiologi sangat penting dilakukan karena air merupakan
substansi yang sangat penting dalam menunjang kehidupan mikroorganisme yang meliputi
pemeriksaan secara mikrobiologi baik secara kualitatif maupun kuantitatif dapat dipakai
sebagai pengukuran derajat pencemaran.
Uji kualitatif Coliform secara lengkap terdiri dari tiga tahap yaitu uji dugaan
(presumptive test), uji penetapan (confirmed test), dan uji pelengkap (completed test). Metode
pengujian yang digunakan adalah metode Most Probable Number(MPN) atau Jumlah
Perkiraan Terbatas (JPT).
Analisis kuantitatif mikrobiologi pada air minum penting dilakukan untuk mengetahui
mutu air minum tersebut. Ada beberapa cara yang dapat digunakan untuk menghitung atau
mengukur jumlah jasad renik dalam suatu suspensi, salah satunya adalah pemeriksaan adanya
bakteri Coliform pada minuman dengan metode MPN (Most Probable Number).
4
Pemeriksaan derajat pencemaran air secara mikrobiologi umumnya ditunjukkan dengan
kehadiran bakteri indikator seperti Coliform dan Fecal coli.Bakteri Coliform sebagai suatu

3
kelompok dicirikan sebagai bakteri berbentuk batang gram negatif, tidak membentuk
spora, aerobik, dan anaerobik fakultatif yang memfermentasi laktosa dengan menghasilkan
asam dan gas dalam waktu 48 jam pada suhu 35° C. Berdasarkan hal inilah yang melatar
belakangi dilaksanakannya praktikum ini untuk mengetahui teknik pengujian kualitas air
dengan menggunakan metode MPN sehingga dapat mengetahui air yang baik untuk
dikonsumsi.

BAB II
4
 TINJAUAN PUSTAKA

A.air
Standar Air Minum, menurut standar WHO semua sampel tidak boleh mengandung E.
coli dan sebaiknya juga bebas dari bakteri coliform. Standar WHO dalam setiap tahun, 95%
dari sampel-sampel tidak boleh mengandung coliform dalam 100 ml, tidak ada sampel yang
mengandung E. coli dalam 100 ml, Tidak ada sampel yang mengandung coliform lebih dari
10 dalam 100 ml, tidak boleh ada coliform dalam 100 ml dan dua sampel yang berurutan
(AOAC,2000).
Bakteri coliform adalah golongan bakteri intestinal, yaitu hidup dalam saluran pencernaan
manusia. Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih
tepatnya, sebenarnya, bakteri coliform fekal adalah bakteri indikator adanya pencemaran
bakteri patogen. Penentuan coliform fekal menjadi indikator pencemaran dikarenakan jumlah
koloninya pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi
Coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri patogenik lain
(Dad,2000).
Contoh bakteri coliform adalah, Esherichia coli dan Entereobacter aerogenes. Jadi,
coliform adalah indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas air
semakin baik. Berdasarakan latar belakang itulah maka praktikum ini penting untuk
dilaksanakan.
Hasil pemeriksaan MPN Coliform metode tabung ganda dinyatakan dengan jumlah
perkiraan terdekat kuman golongan coli yang terdapat dalam 100 ml contoh air atau 100 gr
contoh makanan (MPN).Untuk contoh air yang bukan air minum, biasanya pemeriksaan rutin
laboratorium, hanya bertujuan untuk mengetahui derajat kontaminasi dari bekteri atau untuk
menentukan sumber polusi.Pemeriksaan MPN Coliform metode tabung ganda didasarkan
bahwa bakteri golongan coli dapat meragikan laktosa, membentuk asam atau gas.
Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan (presumtive test), uji konfirmasi
(confirmed test), dan uji kelengkapan (completed test). Dalam uji tahap pertama, keberadaan
coliform masih dalam tingkat probabilitas rendah; masih dalam dugaan. Uji ini mendeteksi
sifat fermentatif coliform dalam sampel. Karena beberapa jenis bakteri selain coliform juga
memiliki sifat fermentatif, diperlukan uji konfirmasi untuk mengetes kembali kebenaran
adanya coliform dengan bantuan medium selektif diferensial. Uji kelengkapan kembali
meyakinkan hasil tes uji konfirmasi dengan mendeteksi sifat fermentatif dan pengamatan
mikroskop terhadap ciri-ciri coliform: berbentuk batang, Gram negatif, tidak-berspora.
5
(Fardiaz,1989).
Output metode MPN adalah nilai MPN. Nilai MPN adalah perkiraan jumlah unit tumbuh
(growth unit) atau unit pembentuk-koloni (colony-forming unit) dalam sampel. Namun, pada
umumnya, nilai MPN juga diartikan sebagai perkiraan jumlah individu bakteri. Satuan yang
digunakan, umumnya per 100 mL atau per gram. Jadi misalnya terdapat nilai MPN 10/g
dalam sebuah sampel air, artinya dalam sampel air tersebut diperkirakan setidaknya
mengandung 10 coliform pada setiap gramnya. Makin kecil nilai MPN, maka air tersebut
makin tinggi kualitasnya, dan makin layak minum. Metode MPN memiliki limit kepercayaan
95 persen sehingga pada setiap nilai MPN, terdapat jangkauan nilai MPN terendah dan nilai
MPN tertinggi.(FDA, 1989).

B.bakteri Coliform

Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih
tepatnya, sebenarnya, bakteri coliform fekal adalah bakteri indikator adanya pencemaran
bakteri patogen. Penentuan coliform fekal menjadi indikator pencemaran dikarenakan jumlah
koloninya pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi
Coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri patogenik lain.
Contoh bakteri coliform adalah, Esherichia coli dan Entereobacter aerogenes. Jadi, coliform
adalah indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas air semakin
baik.(FRIEDHEIM, 2001).
Banyaknya kontaminan dalam air memerlukan standar tertentu untuk menjamin
kebersihannya. Air yang terkontaminasi oleh bakteri patogen saluran cerna sangat berbahaya
untuk diminum. Hal ini dapat dipastikan dengan penemuan organisme yang ada dalam tinja
manusia atau hewan dan yang tidak pernah terdapat bebas di alam. Ada beberapa organisme
yang termasuk kategori ini, yaitu bakteri coliform (E. coli), Enterococcus faecalis,
Clostridium sp. Di Indonesia, bakteri indikator air terkontaminasi adalah E. coli.
Terdapatnya bakteri coliform dalam air minum dapat menjadi indikasi kemungkinan
besar adanya organisme patogen lainnya. Bakteri coliform dibedakan menjadi 2 tipe, yaitu
faecal coliform dan non-faecal coliform. E. coli adalah bagian dari faecal coliform.
Keberadaan E. coli dalam air dapat menjadi indikator adanya pencemaran air oleh tinja. E.
coli digunakan sebagai indikator pemeriksaan kualitas bakteriologis secara universal dalam
analisis dengan alasan :
6
 a) E. coli secara normal hanya ditemukan di saluran pencernaan manusia (sebagai flora
normal) atau hewan mamalia, atau bahan yang telah terkontaminasi dengan tinja
manusia atau hewan; jarang sekali ditemukan dalam air dengan kualitas kebersihan
yang tinggi,
b) E. coli mudah diperiksa di laboratorium dan sensitivitasnya tinggi jika pemeriksaan
dilakukan dengan benar,
c) Bila dalam air tersebut ditemukan E. coli, maka air tersebut dianggap berbahaya bagi
penggunaan domestik,
d) Ada kemungkinan bakteri enterik patogen yang lain dapat ditemukan bersama-sama
dengan E. coli dalam air tersebut

Bakteri pembusuk ini dimasukkan ke dalam golongan bakteri Coliform, salah satu yang
termasuk didalamnya adalah Escherichia coli. Bakteri coliform ini menghasilkan zat
ethionine yang pada penelitian menyebabkan kanker. Bakteri-bakteri pembusuk ini juga
memproduksi bermacam-macam racun seperti Indole, skatole yang dapat menimbulkan
penyakit bila berlebih didalam tubuh.(GAUSE, G. F. 1946).
Bakteri coliform merupakan parameter mikrobiologis terpenting kualitas air minum.
Kelompok bakteri coliform terdiri atas Eschericia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter
fruendii, dan bakteri lainnya. Meskipun jenis bakteri ini tidak menimbulkan penyakit tertentu
secara langsung, keberadaannya di dalam air minum menunjukkan tingkat sanitasi rendah.
Oleh karena itu, air minum harus bebas dari semua jenis coliform. Semakin tinggi tingkat
kontaminasi bakteri coliform, semakin tinggi pula risiko kehadiran bakteri-bakteri patogen
lain yang biasa hidup dalam kotoran manusia dan hewan. Salah satu contoh bakteri patogen-
yang kemungkinan terdapat dalam air terkontaminasi kotoran manusia atau hewan berdarah
panas-adalah Shigella, yaitu mikroba penyebab gejala diare, deman, kram perut, dan muntah-
muntah.(Official Chemical Method, 1979).
Jenis bakteri coliform tertentu, misalnya E coli O:157:H7, bersifat patogen dan juga
dapat menyebabkan diare atau diare berdarah, kram perut, mual, dan rasa tidak enak badan
(Dad,2000).

BAB III

PROSEDUR KERJA

7
 I. Prinsip Kerja
Prinsipnya adalah mengencerkan sampel sampai tingkat tertentu sehingga didapatkan
konsentrasi mikroorganisme yang pas/sesuai dan jika ditanam dalam tabung menghasilkaan
frekensi pertumbuhan tabung positif “kadang-kadang tetapi tidak selalu”. Semakin besar
jumlah sampel yang dimasukkan (semakin rendah pengenceran yang dilakukan) maka
semakin “sering” tabung positif yang muncul. Semakin kecil jumlah sampel yang
dimasukkan (semakin tinggi pengenceran yang dilakukan) maka semakin “jarang” tabung
positif yang muncul. Jumlah sampel/pengenceran yang baik adalah yang menghasilkan
tabung positif “kadang-kadang tetapi tidak selalu”. Semua tabung positif yang dihasilkan
sangat tergantung dengan probabilitas sel yang terambil oleh pipet saat memasukkannya ke
dalam media. Oleh karena itu homogenisasi sangat mempengaruhi metode ini. Frekuensi
positif (ya) atau negatif (tidak) ini menggambarkan konsentrasi mikroorganisme pada sampel
sebelum diencerkan.

I. ALAT dan BAHAN

ALAT :
 Pipet ukur steril 1 ml dan 10 ml
 Lampu spritus
 Jarum ose
 Kapas
 Inkubator
 Spidol + label
 Rak tabung reaksi
 Autoclave
 Kertas copy
 Tabung Durham

BAHAN :
 Lactosa Broth Single Strength
 Lactosa Broth Triple Strength
 Brilliant Green Lactosa Broth
 Sampel Air

8
II. CARA KERJA
Pemeriksaan air metode MPN ada 3 tahapan :
1. Tes Perkiraan (Presumtive Test)
Perbenihan yang diperlukan adalah lactose broth yang single strength (SS) dan
Double Strength (DS). LBDS dipakai untuk pengenceran yang lebih besar (10 ml) dan
LBSS dipakai untuk pengenceran yang lebih kecil ( 1 ml dan 0,1 ml). Sedangkan jumlah
tabung yang dipakai ada bermacam-macam kombinasi, seperti:

No. Jumlah Tabung Volume Air

1. 5 tabung LB DS 10 ml contoh air
5 tabung LB SS 1 ml contoh air
5 tabung LB SS 0,1 ml contoh air
2. 5 tabung LB DS 10 ml contoh air
1 tabung LB SS 1 ml contoh air
1 tabung LB SS 0,1 ml contoh air
3. 3 tabung LB DS 10 ml contoh air
3 tabung LB SS 1 ml contoh air
3 tabung LB SS 0,1 ml contoh air

Sesudah masing-masing tabung diisi dengan contoh air dengan menggunakan pipet
ukur secara aseptis, kemudian disimpan kedalam lemari pengeram (incubator) dengan suhu
35-37oC selama 1 x 24 jam. Tiap-tiap tabung yang menunjukkan peragian (keruh) dan adanya
gas, maka tabung itu diperkirakan mengandung kuman golongan Coli, atau positif. Dari
tabung ini perlu diteruskan pada tes penegaan (Confirmatory Test).

2. Tes Penegasan (Confirmatory Test)

Pembenihan yang dipakai adalah B.G.L.B. Adapun yang diperiksa adalah semua
tabung yang positif (keruh + gas) pada Lactose Broth. Pindahkan dengan jarum ose dari tiap-
tiap tabung yang positif ke B.G.L.B kemudian masukkan ke dalam incubator 35-37oC selama
1 x 24 jam. Tabung yang menunjukkan keruh dan gas dianggap positif. Hasil pemeriksaan
pada tes penegasan ini dapat dibaca dalam tabel PTD/MPN Coliform, sesuai dengan jumlah
tabung yang dipergunakan. Misalnya dalam tabel kita mendapatkan angka MPN = 5, ini
berarti bahwa dalam 100 ml contoh air terdapat 5 kuman golongan Coli.

9
 3. Tes Lengkap (Complete Test)
Pembenihan yang dipakai adalah :
 Endo agar plate atau EMB agar plate
 SIM untuk indol
 Metil red
 Voges Proskauer
 Citrat media

Tes ini ditunjukkan untuk menentukan jenis dari coliform misalnya E. Coli, A.aerogenesis, E. freundii,
dan lain-lain dengan melihat hasil peragian kuman (test biokimia) pada media :
Media E. Coli A. aerogenesis
1. Indol + -
2. Metil red + -
3. Vogas Proskauer - +
4. Citrat - +

IV.I Presumptive Test (Test Perkiraan)

Presumptive Test terdiri dari 3 ragam pengenceran yaitu :
i. Ragam I ( 5:1:1) untuk air minum
 5 tabung berisi media lactosa broth triple strength 5 ml masukkan pada
masing – masing tabung sebanyak 10 ml sampel air.
 1 tabung berisi media lactosa broth single strength 10 ml masukkan
sebanyak 1 ml sampel air.
 1 tabung berisi media lactosa broth single strength 10 ml masukkan
sebanya 0,1 ml sampel air.
 Diinkubasi pada inkubator 37°C selama 24 Jam
ii. Ragam II (5:5:1) untuk air gali/bor
 5 tabung berisi media lactosa broth triple strength 5 ml masukkan pada
masing – masing tabung sebanyak 10 ml sampel air.
 5 tabung berisi media lactosa broth single strength 10 ml masukkan
sebanyak 1 ml sampel air.
 1 tabung berisi media lactosa broth single strength 10 ml masukkan
sebanya 0,1 ml sampel air.
 Diinkubasi pada inkubator 37°C selama 24 Jam
10
 iii. Ragam III (3:3:3) untuk air bersih
 3 tabung berisi media lactosa broth triple strength 5 ml masukkan pada
masing – masing tabung sebanyak 10 ml sampel air.
 3 tabung berisi media lactosa broth single strength 10 ml masukkan
sebanyak 1 ml sampel air.
 1 tabung berisi media lactosa broth single strength 10 ml masukkan
sebanya 0,1 ml sampel air.
 Diinkubasi pada inkubator 37°C selama 24 Jam.

PEMBACAAN HASIL :
(+) : Keruh dan ada gelembung pada tabung durham
(-) : Jernih
0 : Keruh saja

IV.2 Confirmatory Test (Test Penegasan)

 Dari masing-masing tabung yang pada test perkiraan dinyatakan positif, ditanam
masing-masing 2 ose ke dalam media BGLB sejumlah 2.
 1 tabung diinkubasi ke dalam inkubator pada suhu 37oC selama 2 x 24 jam.
 1 tabung diinkubasi ke dalam inkubator pada suhu 44°C selama 2 x 24 jam.
 Lihat reaksi yang terjadi
 Catat hasilnya dari tabung yang positif (+)

PEMBACAAN HASIL :
(+) : Keruh dan ada gelembung udara pada tabung durham
(-) : Jernih
0 : keruh saja
 Dari jumlah tabung yang (+) lihat dan tentukan jumlah E.coli pada tabel MPN, dapat
juga dilakukan dengan menggunakan fomula Thomas.

Rumus :

MPN = (A-B+C) x (√(s x n) )-1 x 100

11
 Keterangan :
A = Jumlah tabung BGLB yang (+) pada tabung yang berisi sampel 10 ml
B = Jumlah tabung BGLB yang (+) pada tabung yang berisi sampel 1 ml
C = Jumlah tabung BGLB yang (+) pada tabung yang berisi sampel 0,1 ml
S = Jumlah ml semua sampel yang ditanam
N = Jumlah semua sampel yang negatif

IV.3 Compelete Test (Tes Lengkap)

Test lengkap bertujuan untuk mencari adanya E.Coli dalam sampel yang diperiksa.
 Mengambil 1 ose cairan dari BGLB yang positif dan tanamkan pada endo agar atau
EMB agar secara zigzag atau garis lurus.
 Mengeramkan dalam incubator selama 1 x 24 jam
 Apabila tumbuh koloni berwarna merah metalik pada endo agar atau koloni berwarna
hijau metalik dengan bagian tengah berwarna hitam pada EMB agar, kemudian koloni
ini ditanam pada TSI agar, SIM Medium dan citrate agar untuk memstikan adanya E.
Coli.
 Mengeramkan dalam incubator 1 x 24 jam
 E. coli positif apabila hasil reaksi biokimia sebagai berikut :
TSIA = k/k, g(+), H2S(-)
SIM = S(-), I(-), M(+)
Citrat = (-)

III. LAMPIRAN GAMBAR

1. Cara Kerja Ragam III

12
2. Contoh hasil

3. Tabel MPN

4. Cara Kerja

13
5. Media Lactose Broth

6. Media BGLB

14
7. Tes Lengkap (Complete Test)

IV. KESIMPULAN
Dari hasil pemaparan dapat disimpulkan bahwa dari makalah ini kami dapat
melaksanakan praktikum MPN. Pada pemeriksaan kali ini ada beberapa metode, yaitu :
a) Tes Perkiraan (Presumtive Test)
b) Tes Penegasan (Confirmatory Test)
c) Tes Lengkap (Complete Test)

Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih tepatnya,
sebenarnya, bakteri coliform fekal adalah bakteri indikator adanya pencemaran bakteri
pathogen. Bakteri coliform merupakan parameter mikrobiologis terpenting kualitas air
minum.

15
 DAFTAR PUSTAKA
 Aminah,Siti, dkk. 2004. Buku Penuntun Praktikum Bakteriologi. Lampung: Poltekkes
Tanjungkarang Jurusan Analis Kesehatan.
 Soemarno. 2004 . Penuntun Bakteriologi. Jakarta
 http://analiskesehatan-pontianak.blogspot.com/2011/02/pengukuran-coliform-dengan-
mpn.html
 http://sutikno.blog.uns.ac.id/2009/06/21/cara-menghitung-nilai-mpn-uji-coliform/

16