I.

INTRODUCCIÓN:

En la presente experiencia de práctica investigaremos la inhibición de la actividad enzimática por

productos químicos específicos, los llamados Inhibidores. El inhibidor específico usado será bisulfato
de sodio y el malonato. Se conoce que el bisulfito se combina con la ureasa inhibiendo la actividad
enzimática de modo reversible. Una molécula inhibidora afecta la actividad enzimática de dos
modos: por Inhibición competitiva e inhibición no competitiva. La inhibición competitiva tiene lugar
cuando una molécula que es estructuralmente similar al sustrato para una reacción particular,
compite por una posición en el sitio activo de la enzima. Esto hace que la enzima no esté disponible
al sustrato. La inhibición competitiva puede invertirse si se eleva la concentración del sustrato a
niveles suficientemente altos mientras la concentración del inhibidor se mantiene constante. En la
inhibición no competitiva, el inhibidor se une a la enzima en un sitio que no es el sitio activo. Siendo
así, cambia la naturaleza de la enzima para que pierda sus propiedades catalizadoras. Esto sucede
de dos maneras. El inhibidor no competitivo bloquea físicamente el acceso al sitio activo, o causa
un cambio conformacional en la proteína, inactivándola. Porque las moléculas del sustrato no
pueden invertir la posición de un inhibidor no competitivo y aumentar la concentración del sustrato
no invertirá la inhibición.

II. OBJETIVO:

El objetivo de la presente experiencia es demostrar el efecto inhibidor de algunas sustancias sobre

la velocidad de reacción enzimática, utilizando para ello bisulfito de sodio y malonato, como
inhibidores de la ureasa y succionato deshidrogenasa, respectivamente.

III. MATERIALES:
 Gradillas.
 Baño María a 37°C.
 Tubos de ensayo 15x 125 mm.
 Tubos de ensayo 13 x 100 mm.
 Juego de pipetas 10, 5, 2 y 1 ml.
 Espectrofotómetro.
 Fotocolorímetro.
 Buffer fosfato de sodio0.1M pH 7.
 2.6 diclorofenolindofenol0.02%.
 Succinato 0.1M.
 Malonato 0.1M.
 Homogenizado hepático
 Buffer Tris 0.05M pH 7.
 Úrea 0.1M en buffer Tris0.05 pH 7.
 Bisulfito de Sodio 0.1M.
 Ureasa 0.1%.
 Reactivo de Nessler
 Bicloruro de mercurio al 1%
 IV. PROCEDIMIENTO:
 INHIBICIÓN DE SUCCINATO DESHIDROGENASA.

SISTEMAS DE INCUBACIÓN Y EVALUACIÓN DEL EFECTO INHIBIDOR DELMALONATO.

COMPONENTES TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO 5

Buffer Fosfato de Sodio
1.5 1.2 1.0 0.8 0.3
0.1M pH 7.4
2,6 diclorofenolindolfenol
1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
0.02
----
Succinato 0.1M 0.2 ---- 0.2 0.2
0.7
Succinato 0.5M ---- ---- ---- ----
Malonato 0.1M ---- ---- ---- 0.2 0.2
Homogenizado hepático
---- 0.5 0.5 0.5 0.5
20%

Mezclar y dejar en reposo a temperatura ambiente. Observar y anotar losresultados según el

color de cada uno de los tubos.

V. CONCLUSION:

Se llega a concluir que la demostración del efecto inhibitorio del malonato sobre la enzima
succinato deshidrogenasa; como siendo el malonato un inhibidor competitivo.

VI. ANEXOS:
MILAN PONES AQUÍ LAS IMÁGENES

VII. BIBLIOGRAFIA:
 Morales, D. (2013) Inhibición de la actividad de la ureasa(E.C.3.5.1.5.) y del Succinato
Deshidrogenasa(E.C.1.3.99.1.). Recuperado el 10 de mayo de 2018 de
https://es.scribd.com/doc/177564133/Bioquimica-Final