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MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS Y DIFERENCIALES

INTRODUCCIÓN

El objetivo principal al preparar un medio de cultivo para un microorganismo es


proporcionar una mezcla equilibrada de los nutrientes requeridos que permitan un
buen crecimiento. En este caso, el medio de cultivo que se empleó fue de tipo
selectivo, el cual permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e
inhibiendo el de otros, este proceso se logra alterando las condiciones físicas del
medio de cultivo o agregando inhibidores como cambiar el pH, altas
concentraciones osmóticas, agregar colorantes como el verde brillante o agregar
antibióticos, y el medio diferencial, el cual permite demostrar las características
metabólicas de un grupo de microorganismos y así también poder diferenciarlos.

El agar BHI (infusión de cerebro y corazón) tiene los siguientes componentes:

Infusión de cerebro y corazón Este tipo de agar obtiene los nutrientes de


8.0 g
Digerido péptico de tejido animal la infusión cerebro-corazón, la peptona y
5.0 g
Digerido pancreático de caseína 16.0 g
la glucosa. Las peptonas y la infusión son
Cloruro de sodio 5.0 g
fuentes de nitrógeno orgánico, carbono,
Glucosa 2.0 g
Fosfato disódico de hidrogeno azufre, vitaminas y sustancias de troza.
2.5 g
agar La glucosa es la fuente de carbohidratos
13.5 g
que los microorganismos utilizan
mediante fermentación, se utiliza fosfato disódico como tampón en el medio.

El agar BCP (agar lactosado con púrpura de bromocresol) tiene los siguientes
componentes:

Lactosa 10.0 g Este tipo de agar contiene un medio no inhibidor


Bromocresol purpura 0.025 g utilizado para la detección y el aislamiento de
Mezcla de peptona 5.0 g coliformes y en estudios diferenciales basados en la
Agar bacteriológico 10.0 g fermentación de la lactosa la cual proporciona
Extracto de carne 3.0 g carbono y energía.

El agar VRB (agar bilis y rojo violeta) tiene los siguientes componentes:

Digerido enzimático de gelatina Este medio es utilizado en uno de los


7.0 g
Extracto de levadura 3.0 g
procedimientos para llevar a cabo la
Dextrosa 10.0 g
detección, enumeración e identificación
Sales biliares 1.5 g
presuntiva de microorganismos coliformes.
Cloruro de sodio 5.0 g
Rojo neutro En este medio las colonias coliformes
0.03 g
Cristal violeta presentan una morfología típica que
0.002 g
agar 13.5 g
permite su identificación presuntiva y que
debe ser confirmada mediante reacciones bioquímicas. Los coliformes resisten la
presencia de bilis en el medio de cultivo; cuando se desarrollan en este medio, el
ácido producido por la fermentación de la lactosa, ocasiona el vire del indicador
rojo neutro y la precipitación de las sales biliares por lo que las colonias son color
rojo oscuro y generalmente están rodeadas de un halo de sales biliares
precipitadas, de color rojo claro o rosa y la posibilidad de contar las colonias se
fundamenta en su dispersión y separación. La peptona provee la fuente de
carbono y nitrógeno necesaria para el desarrollo de los microorganismos. El
extracto de levadura provee vitaminas del complejo B para estimular el crecimiento
bacteriano. Las sales biliares y el cristal violeta actúan como inhibidores de
microorganismos Gram-positivos. La lactosa es la fuente de carbohidratos y el rojo
neutro actúa como indicador para evidenciar el cambio de pH como consecuencia
de la fermentación de la lactosa. El agar actúa como agente solidificante.

La bacteria Staphylococcus aureus es una bacteria anaerobia facultativa, Gram-


positiva, productora de coagulasa, catalasa, inmóvil y no esporulada que se
encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo, estimándose que una de
cada tres personas se hallan colonizadas, aunque no infectadas, por ella

El Agar sal manitol tiene los siguientes componentes:

Extracto de carne bovina 1.0 g El agar sal manitol en una fórmula


Digerido pancreático de caseína 5.0 g diseñada por Chapman para la
Digerido péptico de tejido animal 5.0 g diferenciación de estafilococos positivos
Cloruro de sodio 7.5 go negativos a la coagulasa. Este agar se
D-manitol 10.0 g
utiliza para el aislamiento de
Rojo fenol 0.025 g
agar 15.0 gestafilococos a partir de muestras
clínicas, de cosméticos y de pruebas de
límite microbiano. El agar sal manitol contiene peptonas y extractos de carne
bovina, que suministran los nutrientes esenciales. Una concentración de cloruro
sódico de 7,5% tiene como resultado una inhibición parcial o completa de los
organismos bacterianos diferentes de los estafilococos. La fermentación de
manitol, indicada por el cambio del indicador de rojo fenol, facilita la diferenciación
de la especie de estafilococos. Los estafilococos positivos a la coagulasa (por
ejemplo, Staphylococcus aureus la cual es aerobia) producen colonias de color
amarillo y un medio circundante de color amarillo, mientras que los estafilococos
negativos a la coagulasa producen colonias de color rojo y no producen cambio de
color en el indicador de rojo fenol.

.
RESULTADOS

Figura N.1 agar BHI CEPA 02041802 Figura N.2 agar BCP CEPA 02041802

Figura N.3 agar VRB CEPA 02041802 Figura N.4 agar sal manitol CEPA 02041801
Nombre del Código de la Color Agar Color del Color de la Color de la
Agar Cepa inicial Agar final cepa inicial cepa final
Agar BHI 02041802 Amarillo Amarillo claro Beige Beige y gris
Agar BCP 02041802 Purpura o Amarillo Beige Beige
morado verdoso
Agar VRB 02041802 Fucsia o Amarilla Beige Centro rosado
rosa con borde
Café
Agar Sal 02041801 Naranja Amarillo Beige Amarillo claro
Manitol

Características macroscópicas del Agar BHI

Característica Características en el Agar BHI


Pigmento Blanca
Elevación Convexa
Borde o margen Irregular lobulado
Aspecto Brillante
Consistencia Blanda
Olor Pútrido

ANALISIS DE RESULTADOS:

Posibles bacterias Características de las Tipo de Cumple la


en Agar BHI posibles bacterias crecimiento característica

Aspergillus níger Colonias algodonosas Excelente


discretas color amarillas.
Candida albicans Colonias redondas bien Excelente
desarrolladas.
Bacillus subtilis Colonias expandidas Excelente
discretas
Staphylococcus Colonias redondas Excelente
aureus discretas color blanco.
Pseudomonas Colonias grandes Excelente X
aeruginosa lenticulares, color gris.
Escherichia coli Colonias grandes Excelente X
lenticulares color gris.
Enterococcus Colonias color verde o gris. Excelente X
Faecalis
Posibles bacterias en Características de las Tipo de Cumple la
Agar B.C.P posibles bacterias crecimiento característi
ca
Escherichia coli Cultivo se vuelve amarillo Bueno X
klebsiella pneumoniae Cultivo se vuelve amarillo Bueno X
Salmonella typhimurium Cultivo se vuelve azul Bueno
Shigella sonnei Cultivo se vuelve azul bueno

Posibles bacterias en Características de las posibles Tipo de Cumple la


Agar VRB bacterias crecimiento característi
cas
Enterobacter aerogenes Colonias rosadas con Bueno X
precipitado rojo
Escherichia coli Colonias rosadas con Bueno X
precipitado rojo
Pseudomonas Colonias incoloras a color gris Bueno
aeruginosa
Salmonella typhimurium Colonias rosadas con Bueno X
precipitado rojo
Staphylococcus aureus No aplica Malo

Posibles bacterias en Características de las posibles Tipo de Cumple las


Agar Sal Manitol bacterias crecimiento característi
cas
Staphylococcus aureus Colonias amarillas de tamaño Bueno X
mediana, medio color amarillo
Staphylococcus Colonias blancas de tamaño Bueno
epidermis pequeño, medio color rojo
Proteus mirabilis Inhibición parcial, colonias Malo
incoloras, agrupación activa
inhibida
Escherichia coli Inhibición completa Malo
Sin inocular rojo Malo

Se puede deducir que la posible bacteria que se cultivó en los Agares BHI, BCP, VRB, es
la bacteria Escherichia coli(anaerobia), ya que al comparar las tres tabulaciones, se
observa que es la única que persiste con sus posibles características, indicando así que
esta bacteria es la que está presente en los tres cultivos de agar. Esta bacteria crece en
un medio donde se le proporcione glúcidos como en el agar BHI y como la lactosa en el
caso del agar BCP y VRB. Y la posible bacteria que se cultivó en el agar sal manitol es la
bacteria Staphylococcus aureus(aerobia) ya que esta es la única que acierta con las
características descritas en la tabla y por ende se puede realizar esta deducción.

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