LAPORAN PRAKTIKUM KIMIA SEPARASI

EKSTRAKSI PIGMEN

Disusun oleh :

1.Erwinda Kristianti/652018023

2. Isyefi Lamrita/652018010

3. Cinthya Injilina Ga/652018038

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS SAINS DAN MATEMATIKA
UNIVERSITAS KRISTEN SATYA WACANA
2019
Dasar Teori
Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan substansi zat cair dari campurannya dengan
menggunakan pelarut yang sesuai. Prinsip metode ini didasarkan pada distribusi zat terlarut
dengan perbandingan tertentu antara dua pelarut yang tidak saling bercampur. Ekstraksi
merupakan metode yang paling baik dan paling banyak digunakan karena metode ini dapat
dilakukan baik dalam tingkat makro maupun mikro. Pemisahan tidak memerlukan alat khusus
atau canggih melainkan hanya memerlukan corong pisah (Syukri,1999).

Pemisahan adalah proses pemisahan dua zat atau lebih yang saling bercampur serta untuk
mendapatkan zat murni dari suatu zat yang telah tercampur. Campuran adalah setiap contoh yang
tidak murni, yaitu bukan unsur atau senyawa. Susunan campuran tidak sama dengan sebuah
zat,dapat bervariasi,dan campuran dapat berupa homogen dan heterogen (Petrucci,1996).

Klorofil adalah pigmen pemberi warna hijau yang terdapat pada kloroplas sel tanaman.
Klorofil merupakan pigmen hijau tumbuhan dan merupakan pigmen yang penting dalam proses
fotosintesis (Markus,2013).

Penyerapan cahaya oleh klorofil ini disebabkan adanya peranan utama dari struktur
porrin yang mengikat ion magnesium (Mg2+), yang merupakan struktur utama
klorofil (Akhirudin et al,2015).

Tumbuhan tingkat tinggi mengandung dua macam klorofil yaitu klorofil a dan klorofil b.
klorofil a adalah suatu senyawa kompleks antara magnesium dengan porfirin yang mengandung
cincin siklopentanon (cincin V). Keempat atom nitrogennya dihubungkan secara ikatan.
Koordinasi dengan ion Mg2+ membentuk senyawa kompleks planar yang mantap. Rantai
sampingnya yang bersifat hidrofob adalah suatu terpenoid alkohol dan fitol yang dihubungkan
secara ikatan ester denan gugus propionate dari cincin IV. Klorofil b adalah klorofil kedua yang
terdapat pada tumbuhan hijau. Klorofil b juga terikat pada protein didalam sel. Klorofil a dan
klorofil b paling kuat menyerap cahaya bagian merah dan ungu spektrum, cahaya hijau yang
paling sedikit diserap maka apabila cahaya putih menyinari struktur-struktur yang mengandung
klorofil seperti misalnya daun maka sinar hijau akan dikirimkan dan dipantulkan sehingga
strukturnya tampak berwarna hijau. Karoten termasuk kedalam kromopkas yaitu plastid yang
berwarna dan mengandung pigmen selain klorofil (Khopkar,1990).
 Pada awalnya kromatografi dianggap semata-mata sebagai bentuk partisi cairan-cairan.
Serat selulosa yang hidrofilik dari kertas tersebut dapat mengikat air, setelah disingkapkan ke
udara yang lembap, kertas saring yang tampak kering itu sebenarnya dapat mengandung air
dengan persentase tinggi yaitu 20%. Jadi kertas itu sebenarnya dapat mengandung air dengan
persentase tinggi dan kertas itu dipandang sebagai analog dengan sebatang kolom yang berisi
stasioner berair. Zat-zat terlarut itu padahal fase geraknya dapat dicampur dengan air dan dalam
beberapa kasus, malahan fase geraknya adalah larutan itu sendiri. Dalam kromatografi
komponen-komponen terdistribusi dalam dua fase yaitu fase gerak dan fase diam. Transfer masa
antara fase gerak dan fase diam terjadi bila molekul-molekul campuran serap pada permukaan
partikel-partikel atau terserap (Day & Underwood, 1980).

Harga Rf mengukur kecepatan bergeraknya zona relatif terhadap garis depan

pengembang. Kromatogram yang dihasilkan diuraikan dan zona-zona dicirikan oleh nilai-nilai
Rf. Nilai Rf di definisikan oleh hubungan :

Jarak yang ditempuh komponen

Rf =
Jarak yang ditempuh pelarut
Pengukuran itu dilakukan dengan mengukur jarak dari titik pemberangkatan (pusat zona
campuran awal) ke garis depan pengembang dan pusat rapatan tiap zona. Nilai Rf harus sama
baik pada descending maupun ascending. Nilai Rf akan menunjukkan identitas suatu zat yang
dicari, contohnya asam amino dan intensitas zona itu dapat digunakan sebagai ukuran
konsentrasi dengan pembanding dengan noda-noda standar (Khopkar, 1990)

Kroatografi bergantung pada pembagian ulang molekul-molekul campuran antara dua

fase atau lebih. Tipe-tipe kromatografi absorbs, kromatigrafi partisi cairan dan pertukaran ion.
Sistem utama yang digunakan dalam kromatografi partisi adalah partisi gas, partisi cairan yang
menggunakan alas tak bergerak (misalnya kromatografi kolom), kromatografi kertas, dan
kromatografi lapis tipis (Svehla,1979)

Tujuan
1. Menentukan % rendemen ekstrak yang diperoleh secara maserasi/sonikasi.
2. Menentukan kandungan klorofil a dan klorofil b dari ekstrak yang
diperoleh secara spektrofotometri.
3. Menentukan fase gerak yang tepat untuk pemisahan komponen klorofil
secara kromatografi lapis tipis.
4. Menentukan nilai Rf dari masing-masing komponen senyawa.
5. Menentukan pola pemisahan yang terjadi pada KLT Preparatif
kromatografi kolom.
 6. Menentukan jenis komponen penyusun klorofil yang terpisahkan dan
membandingkannya dengan KLT.

Alat, Bahan, dan Metode

Alat dan Bahan

Ekstraksi

Alat :

1. Neraca analitis
2. Alumunium foil
3. Gelas beaker
4. Magnetic stirrer
5. Ultrasonikator
6. Kertas saring
7. Corong
8. Corong pisah
9. Gelas ukur
10. Spektrofotometer
11. Rotary evaporator

Bahan :

1. Sampel (daun singkong)

2. Aseton
3. Metanol
4. Dietil eter
5. Saturasi garam dapur
6. Natrium sulfat

Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Alat :

1. Plat KLT
2. Pipa kapiler
3. Chamber
4. Kertas saring
5. Pinset
 6. Pensil
7. Penggaris
8. Pipet ukur

Bahan :

1. Ekstrak pigmen
2. Aseton
3. Heksan

KLT Preparatif

Alat :

1. Plat kaca KLT Preparatif

2. Pengaduk
3. Gelas beaker
4. Pipa kapiler
5. Chamber
6. Kertas saring
7. Pinset
8. Pensil
9. Penggaris
10. Pipet ukur

Bahan :

1. Ekstrak pigmen
2. Aseton
3. Heksan
4. Silika gel 60
5. Akuades

Kromatografi Kolom

Alat :

1. Kolom
2. Statif
3. Klem
4. Pipet tetes
 5. Kapas
6. Pengaduk
7. Gelas beaker
8. Plat KLT
9. Pipa kapiler
10. Chamber
11. Kertas saring
12. Pinset
13. Pensil
14. Penggaris
15. Pipet ukur
16. Spektrofotometer

Bahan :

1. Ekstrak pigmen
2. Aseton
3. Heksan
4. Silika gel 60
5. Akuades

Metode

Ekstraksi

1. Ditimbang 2 gram sampel yang telah dipotong kecil-kecil.

2. Sampel diekstrak dengan pelarut aseton : metanol (7 : 3, v/v) selama 30 menit
menggunakan magnetic stirrer atau ultrasonikator. Ekstraksi dilakukan dalam
gelap (tertutup alumunium foil).
3. Ekstrak disaring dengan kertas saring kemudian ditentukan volumnya dengan
gelas ukur.
4. Ekstrak dituang ke dalam corong pisah dan ditambahkan dietil eter dengan
perbandingan 1 : 1 (v/v) terhadap ekstrak. Jika fraksinasi bertingkat, maka
dietil eter ditambahkan sebanyak dua kali (setelah langkah no 6) dengan total
volume tetap 1 : 1 (v/v) terhadap ekstrak.
 Hasil dari proses fraksinasi pada corong pisah
5. Dikocok perlahan dan diamati proses pemisahan pada corong pisah.
6. Ditambahkan saturasi garam dapur secara bertahap sampai terjadi pemisahan.
7. Dikeluarkan lapisan atas kemudian ditambahkan natrium sulfat.
8. Disaring dan digenapkan dengan dietil eter menjadi 50 atau 100 mL (jika
ekstrak yang diperoleh mendekati 50 mL maka digenapkan menjadi 50 mL,
jika lebih maka digenapkan menjadi 100 mL) pada labu ukur.
9. Diukur serapan pigmen pada panjang gelombang 470; 642,2; dan 660,6 nm
menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Dietil eter digunakan sebagai
blanko.
10. Dihitung kandungan klorofil a, klorofil b, dan karotenoid total dengan rumus
di bawah ini.

Klorofil a = 10.05A 660.6 – 0.97A 642.2

Klorofil b = 16.36A 642.2 – 2.43A 660.6

(1000A470 - 1,43 Klorofil a - 35,87 Klorofil b)

Karotenoid total =
205

11. Ekstrak selanjutnya dikeringkan dengan rotary evaporator dan gas N2.
12. Ditimbang berat pigmen yang diperoleh.
13. Pigmen yang diperoleh disimpan dalam botol sampel yang tertutup
alumunium foil untuk digunakan analisis selanjutnya.

Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

1. Dibuat garis melintang pada KLT selebar 1 cm sebagai batas bawah dan batas
atas.
2. Dibuat spot pada plat KLT menggunakan pipa kapiler.
3. Disiapkan chamber berisi campuran pelarut aseton : heksan dengan
perbandingan tertentu (ketinggian pelarut ≤ 0,5 cm)
4. Diletakkan plat KLT pada chamber yang telah dijenuhkan dan chamber
 ditutup rapat.
5. Diamati pergerakan pigmen yang terjadi dan disudahi pemisahan setelah
pelarut mencapai batas atas.
6. Dikeluarkan plat dari chamber dan ditandai jarak dan warna spot yang
muncul selama pemisahan.
7. Diukur nilai Rf dari masing-masing spot yang terbentuk.
8. Diulang langkah-langkah diatas sampai diperoleh pemisahan yang baik
dengan variasi perbandingan pelarut. Campuran pelarut yang menghasilkan
pemisahan terbaik, digunakan sebagai pelarut untuk analisis-analisis
selanjutnya.

Hasil KLT pada Berbagai Variasi Fase Gerak

KLT Preparatif

1. Dibuat KLT preparat (dilakukan 1 minggu sebelum praktikum dimulai)

dengan cara:
a. Dibersihkan kaca preparat dan dibilas menggunakan aseton.
b. Dibuat bubur silika dengan perbandingan 6 : 10 (b/v) dengan akuades.
c. Dituang silika ke atas permukaan kaca dan digoyangkan agar diperoleh plat silika
yang rata.
d. Dikeringkan KLT preparat dengan memasukkan ke dalam oven 100°C selama 1
jam.
2. Disiapkan chamber yang diisi dengan fase gerak sesuai dengan KLT dan
sudah diberi kertas saring pada salah satu sisi dindingnya.
3. Sampel (ekstrak pigmen) ditotolkan membentuk garis horizontal pada
 permukaan KLT preparat yang sudah diberi tanda garis setinggi 1 cm dari
permukaan bawah kaca.
4. KLT preparat dielusikan dalam chamber sesuai ukuran.
5. Elusi dihentikan ketika fase gerak telah mencapai batas atas (± 1 cm dari
permukaan kaca bagian atas).

Hasil Pemisahan KLT Preparatif

6. Diamati hasil KLT preparatif dan dibandingkan dengan hasil KLT.

Kromatografi Kolom

1. Ditimbang 4 gram silika gel 60 dan dilarutkan dalam pelarut (fase gerak)
sesuai hasil percobaan KLT.
2. Disiapkan kolom lengkap dengan kapas penyangga seperti pada gambar di
bawah ini.
 Rangkaian Alat Kromatografi Kolom

3. Dibasahi permukaan kolom dengan pelarut KLT.

4. Diisi kolom dengan silika melalui dinding kolom.
5. Dibiarkan kolom memadat dan terekuilibrasi.
6. Disisakan pelarut setinggi 1-2 mm dari permukaan kolom silika dan
diaplikasikan ekstrak pigmen sebanyak 1-2 pipet. Dibiarkan lapisan pigmen
masuk ke dalam gel.
7. Ditambahkan pelarut melalui dinding kolom (2 cm).
8. Diamati proses pemisahan yang berlangsung dan dijaga agar kolom tidak
kering.
9. Digambar skematik pemisahan pigmen dalam kolom, warna pigmen, dan
posisinya.

Hasil Pemisahan Kromatografi Kolom

Hasil
Ekstraksi
Metode Ekstraksi : Maserasi dengan fraksinasi bertingkat

Variabel Pengamatan Hasil

Massa Sampel (g) 2
Massa Ekstrak Pigmen (g) 0,2823
% Ekstrak 14,115
Absorbansi pada λ 470 nm 0,567
Absorbansi pada λ 642,2 nm 0,229
Absorbansi pada λ 660,6 nm 0,689
Kandungan (mg/L)
- Klorofil a 6,70232
- Klorofil b 2,07217
- Karotenoid Total 2,35652

Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Variabel Pengamatan Hasil

Fase Gerak yang Tepat 1 : 3 (Aseton : Heksan)
Jumlah Komponen yang Terpisahkan 4, terdiri dari
- Hijau ++
- Hijau +
- Kuning
- Hijau
Nilai Rf
- Spot 1 0,303
- Spot 2 0,606
- Spot 3 0,909
- Spot 4 1,212

Hasil KLT (Aseton : Heksan)

KLT Preparatif
Kromatografi Kolom

Variabel Pengamatan Hasil

Pola Pemisahan

Jumlah Fraksi yang 4

Diperoleh

Pembahasan
Untuk memisahkan suatu cairan larut dalam cairan lainnya, dapat dilakukan dengan
menggunakan metode pemisahan campuran melalui proses ekstraksi. Ekstraksi adalah
pengambilan atau pemisahan suatu campuran dengan memberi pelarut yang sesuai sehingga zat
lain tidak ikut larut (Syukri,1999).

Dalam suatu pemisahan yang ideal oleh ekstraksi pelarut, seluruh zat yang diinginkan
akan berakhir dalam suatu pelarut dan semua zat-zat pengganggu dalam pelarut yang lain
(Oxtoby,2001)

Ekstraksi pelarut menyangkut distribusi suatu zat terlarut diantara dua fase cair yang
tidak saling bercampur. Cukup diketahui bahwa zat-zat tertentu lebih mudah larut dalam pelarut-
pelarut tertentu dibandingkan dengan pelarut yang lain (Setiono,1985).

Pada praktikum ini dilakukan ekstraksi pigmen dengan menggunakan sampel daun
singkong yang telah dikeringkan dalam drying cabinet. Metode yang digunakan pada praktikum
ini yaitu ekstraksi maserasi dengan fraksinasi bertingat. Sampel diekstrak dengan pelarut aseton :
methanol dengan perbandingan 7:3 menggunakan magnetic stirrer dalam erlenmeyer yang
tertutup alumunium foil selama 30 menit. Magnetic stirrer digunakan agar larutan dengan sampel
menjadi homogen dan klorofil dapat keluar dari sampel. Kemudian sampel disaring untuk
mengambil filtrat dari larutan dan diukur volumenya. Sampel dimasukkan kedalam corong pisah
dan ditambahkan dietil eter dengan perbandingan 1:1 agar ekstrak dapat dipisahkan dari larutan
sehingga klorofil dapat bercampur dengan dietil ether supaya terpisah dari pelarut aseton
methanol. Lalu dikocok perlahan secara konstan agar gas yang terdapat dalam corong pisah
habis. Ditambahkan garam dapur sampai larutan terjadi pemisahan dan dikeluarkan pelarut dari
larutan. Setelah klorofil terpisah dari larutan, ditambahkan kembali dietil eter dengan
perbandingan 1:1 dan dikocok kembali. Hal ini dilakukan karena metode fraksinasi yang
digunakan adalah fraksinasi bertingkat. Dipisahkan pelarut dari klorofil ke dalam gelas beker.
Klorofil yang diperoleh ditambahkan dengan natrium sulfat hingga padatan tidak larut lagi.
Penambahan ini bertujuan untuk mengikat air yang masih bercampur dengan klorofil. Disaring
dan digenapkan dengan dietil eter hingga 100 mL karena hasil klorofil yang diperoleh sebanyak
65 mL. Setelah hasil ekstraksi didapat, dapat dihitung % yield :

Mp
% yield = 100%
Mt

0,2823
100%
= 2

= 14,115 %

Selanjutnya diukur pigmen dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang

470 ; 642,42 ; dan 660,6 nm untuk menghitung kandungan klorofil a, klorofil b dan karotenoid
total. Ekstrak yang didapat dikeringkan dengan rotary evaporator dan gas N2. Pigmen yang
diperoleh ditimbang dan ditambahkan dietil eter satu pipet lalu disimpan dalam botol sampel
yang sudah ditutup alumunium foil. Tujuan ditambahkan dietil eter supaya klorofil tetap dalam
fase larutan. Tujuan ditutup alumunium foil supaya klorofil tidak terdegradasi. Dari nilai
absorbansi yang didapat, maka dapat dihitung :

Klorofil a = 10.05A 660.6 – 0.97A 642.2

= 10,05 x 0,689 – 0,97 x 0,229
= 6,70232 mg/L

Klorofil b = 16.36A 642.2 – 2.43A 660.6

= 16,36 x 0,229 – 2,43 x 0,689
= 2,07217 mg/L

(1000A470 - 1,43 Klorofil a - 35,87 Klorofil b)

Karotenoid total =
205
(1000x0,6547 - 1,43 x 6,70232 - 35,87 x 2,07217)
=
205
= 2,35652

Pada praktikum selanjutnya, metode pemisahan yang dilakukan adalah kromatografi

lapis tipis (KLT). Dibuat garis melintang pada KLT selebar 1 cm sebagai batas atas dan bawah.
Dibuat spot pada batas bawah dibagian tengah menggunakan sampel dengan pipa kapiler
sebanyak 10 kali pada titik yang sama. Dibuat pelarut aseton : heksan dengan perbandingan 1 :
1, 1 : 2, 1 : 3, 1 : 4, 1 : 5, 2 : 1, 3 : 1, 4 : 1, 5 : 1 pada gelas beker. Larutan dijenuhkan
menggunakan kertas saring, kemudian KLT dimasukkan pada masing-masing pelarut dan gelas
beker ditutup rapat agar pelarut tidak menguap. Tinggi pelarut tidak melebihi garis batas bawah.
Diamati pergerakan pigmen pada KLT hingga mendekati batas atas dan dikeluarkan, maka
diperoleh hasilnya sebagai berikut.
Terlihat bahwa pergerakan pigmen terbaik terjadi pada pelarut dengan perbandingan aseton :
heksan 1 : 3. Spot warna yang terlihat dengan mata berjumlah 4, terdiri dari warna hijau ++,
hijau +, kuning dan hijau. Dari hasil spot yang diperoleh, dapat ditentukan nilai Rf :

Jarak yang ditempuh komponen

Rf =
Jarak yang ditempuh pelarut

1
 Rf Hijau ++ =
3,3
= 0,303
 Rf Hijau + = 2
3,3
= 0,606
3
 Rf Kuning =
3,3
= 0, 909
4
 Rf Hijau =
3,3
= 1,212

Pada praktikum selanjutnya metode yang digunakan adalah KLT Preparatif yang
sebelumnya dibuat dahulu dengan cara KLT preparat yang telah dilapisi bubur silica. Kemudian
dibuat pelarut aseton : heksan dengan perbandingan 1:3 dan dijenuhkan dengan kertas saring.
Pelarut yang digunakan sesuai dengan hasil fase gerak terbaik pada KLT. Sampel pigmen
ditotolkan pada KLT preparat yang telah diberi garis batas atas dan bawah. KLT preparat
dielusikan pada pelarut sampai fase gerak mencapai mendekati batas atas. Hasil yang didapat
pada KLT preparatif :
Setelah dibandingkan dengan hasil KLT, terlihat bahwa hasil spot warna yang terlihat pada KLT
preparatif sama yaitu hijau ++, hijau +, kuning, dan hijau.

Metode terakhir yang dilakukan pada praktikum kali ini yaitu kromatografi kolom untuk
memurnikan sampel pigmen yang didapat pada praktikum sebelumnya. Dibuat bubur silika yang
kemudian dimasukkan pada kolom yang ujungnya telah diisi kapas untuk menahan bubur silika
tetap berada pada kolom. Ditambahkan pelarut terus-menerus untuk menghindari bubur silika
mengering. Jika pelarut telah mencapai jarak 2 mm dari permukaan bubur silika, ditambahkan
sampel klorofil dan dibiarkan sampai lapisan pigmen masuk kedalam gel. Selama proses ini
berlangsung, pelarut terus ditambahkan. Proses pemisahan yang terjadi pada proses ini :
 Dari hasil di atas, diperoleh hasil 4 warna yang sama seperti pada metode sebelumnya.
Selanjutnya, dilakukan uji KLT kembali pada masing-masing warna untuk melihat apakah warna
yang diperoleh telah murni. Dari hasil KLT didapat :

Diantara ke empat warna yang diperoleh, warna kuninglah yang menunjukkan satu spot. Terlihat
bahwa warna kuning murni mengandung karotenoid. Jadi dapat disimpulkan bahwa daun
singkong yang telah di ekstrak, mengandung karotenoid. Karotenoid merupakan kelompok
pigmen yang berwarna kuning, oranye, merah oranye serta larut dalam minyak (lipida).
Karotenoid terdapat dalam kloroplas (0,5%) bersama-sama dengan klorofil (9,3%), terutama
pada bagian permukaan atas daun, dekat dinding sel-sel palisade. Oleh karena itu, pada dedaunan
hijau selain klorofil terdapat juga karotenoid (Winarno,2004).

Kesimpulan
1. % yield yang diperoleh pada ekstrak secara maserasi sebesar 14,115 %.
2. Kandungan pada klorofil a sebesar 6,70232 mg/L, pada klorofil b sebesar 2,07217 mg/L.
3. Fase gerak yang tepat untuk pemisahan komponen klorofil pada Kromatografi Lapis
Tipis (KLT) yaitu 1 : 3 (aseton : heksan).
4. Nilai Rf Hijau ++ : 0,303
Nilai Rf Hijau + : 0,606
Nilai Rf Kuning : 0,909
Nilai Rf Hijau : 1,212
5. Pola pemisahan yang terjadi pada KLT preparatif dan kromatografi kolom yaitu 4 spot
warna yang terdiri dari hijau ++, hijau +, kuning dan hijau.
6. Komponen penyusun klorofil yang terpisahkan pada kromatografi kolom dan KLT ada 4
warna yang terdiri dari hijau ++, hijau +, kuning dan hijau.
Jawab Pertanyaan
1. Sebutkan (minimal 3) kelebihan dan kekurangan ekstraksi secara maserasi dan
ultrasonikasi !
 Maserasi
Kelebihan
1) Unit alat yang digunakan sederhana. Hanya dibutuhkan magnetic stirrer.
2) Biaya operasionalnya relatif rendah
3) Prosesnya relatif hemat

Kelemahan

1) Proses ekstraksi tidak sempurna, karena zat aktifnya hanya mampu terekstraksi
sebesar 50 % saja.
2) Prosesnya membutuhkan waktu yang lama.
3) Banyak pelarut yang terpakai.
 Ultrasonikasi
Kelebihan
1) Memanfaatkan gelombang ultrasonik dengan frekuensi 42 kHz, yang dapat
mempercepat waktu kontak antara sampel dan pelarut meskipun pada suhu ruang.
2) Proses pemindahan masa senyawa bioaktif dari dalam sel tanaman ke pelarut
menjadi lebih cepat.
3) Adanya transmisi gelombang ultrasonik untuk membantu difusi pelarut ke dalam
dinding sel tanaman.
4) Efisien dan mempersingkat waktu ekstraksi.

Kelemahan

1) Harganya mahal.
2) Membutuhkan proses curing.

2. Sebut dan jelaskan (minimal 3) faktor-faktor yang mempengaruhi nilai Rf !

1) Derajat kejenuhan dari uap dalam bejana pengembangan yang digunakan.
2) Teknik percobaan dalam hal metode aliran penaikan.
3) Suhu, pemisahan-pemisahan sebaiknya dikerjakan pada suhu yang tetap karena
suhu berkaitan dengan perubahan pada komponen pelarut.
4) Pelarut (dan derajat kemurniannya) fase gerak.

3. Bagaimana hasil pemisahan komponen-komponen ekstrak klorofil pada KLT preparatif

dan kromatografi kolom ? Apakah sesuai dengan pemisahan pada KLT ? Jelaskan !
Hasil pemisahan komponen-komponen ekstrak pada setiap metode menunjukkan hasil
yang sama. Artinya hasil pada KLT preparatif dan kromatografi kolom sesuai dengan
 pemisahan pada KLT, yang menunjukkan 4 warna spot yaitu hijau ++, hijau +, kuning
dan hijau.

4. Sebut dan jelaskan salah satu metode analisis dan atau pemisahan klorofil (meliputi
prinsip metode dan langkah kerja) selain metode-metode yang telah digunakan pada
praktikum yaitu KLT, KLT preparatif, kromatografi kolom, dan analisis secara
spektrofotometer !
Sokletasi. Sokletasi merupakan penyarian simplisia secara berkesinambungan cairan
penyari dipanaskan hingga menguap. Uap cairan penyari terkondensasi menjadi molekul-
molekul air oleh pendingin balik dan turun.

Daftar Pustaka
Akhiruddin Maddu, Paulus P Gareso, Sugianto. 2015. Karakteristik Optik Film Hibrid
ZnO/Klorofil yang Termodifikasi Logam Seng (Zn) dan Tembaga (Cu). OMEGA Jurnal Fisika
dan Pendidikan Fisika 1 (1) : 45-48.Bogor : IPB
Day & Underwood. 1980. Analisa Kimia Kuantitatif. Edisi keempat. Jakarta : Erlangga
Khopkar, S.M. 1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : UI Press
Markus Prima Kurniawan, Widodo Farid Ma'ruf, Tri Winarni Agustini. 2013. Pengaruh
Penambahan MgCO3 dan NaHCO3 dengan Perbedaan Pencahayaan terhadap Stabilitas Pigmen
Klorofil-A Mikroalga Chlorella vulgaris. Jurnal Pengolahan dan Bioteknologi Hasil Perikanan
2 (3): 25-33. Jurusan Perikanan, Fakultas Perikanandan Ilmu Kelautan. Semarang: Universitas
Diponegoro
Oxtoby, D.W., Gillis, H,P.,Nachtrieb, N.H. 2001. Pinsip-prinsip Kimia Modern. Edisi keempat.
Jilid 1. Diterjemahkan oleh S.S, Modern Jilid 2. Jakarta : Erlangga

Petrucci. 1996. Kimia Dasar. Jilid 1. Jakarta : Erlangga

Setiono. 1985. Kimia Analisis. Jakarta : Bumi Aksara

Syukri, S. 1999. Kimia Dasar 1. Bandung : ITB

Svehla. 1979. Buku Ajar Vogel : Analisis Anorganik Kuantitatif Makro dan Semimikro. Jakarta :
PT. Kalman Media Pusaka

Winarno, F.G. 2004. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta : PT. Gramedia Pustaka Utomo

Lampiran
Laporan Sementara