Informe de Práctica de Laboratorio I

FACULTAD LABORATORIO DE ANÁLISIS

INSTRUMENTAL

DE

CIENCIAS EXACTAS Y
NATURALES
Determinación de hierro en alimentos por espectroscopía de Ultravioleta - Visible
Moreno Gordon Luisa Fernanda, Valencia Ortiz Luisa Fernanda.

Fecha de presentación 30/03/2016

____________________________________________________________________________________________________________________________

Resumen
La espectrometría UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinación cuantitativa de soluciones de iones metálicos de transición y compuestos
orgánicos muy conjugados. La ley de Lambert - Beer establece que la absorbancia de una solución es directamente proporcional a la concentración
de la solución. Por tanto, la espectrometría UV/Vis puede usarse para determinar la concentración de una solución. El objetivo de esta práctica fue
determinar por espectroscopía de Ultravioleta - Visible la concentración de hierro en cereal tipo All Bran. La concentración de hierro en el cereal tipo
All Bran mediante la ecuación de mínimos cuadrados fue de 273,8 ppm y gráficamente mediante la curva de calibración fue de 274 ppm.

Palabras Clave: Espectrometría UV/Vis; Cereal All Bran; Hierro; Curva de calibración; Patrones; Concentración
____________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________
Para determinar el hierro en una matriz alimenticia es
importante conocer que el hierro es un elemento metálico, que
1. Introducción
La espectrometría ultravioleta-visible o espectrofotometría UV-
Vis implica la espectroscopia de fotones en la región de se puede encontrar en la naturaleza presente en dos estados de
radiación ultravioleta-visible. La espectrometría UV/Vis se oxidación que son: 2+ (ferroso) y 3+ (férrico).
utiliza habitualmente en la determinación cuantitativa de
soluciones de iones metálicos de transición y compuestos
orgánicos muy conjugados (Ref-[1]).

El que una sustancia tenga color significa que transmite luz de

ciertas longitudes de onda en la región visible del espectro,
mientras que absorben luz de otras longitudes de onda en dicha
región (Ref-[2]). A la fracción de luz absorbida por una
solución medida a un largo de onda dado se le conoce como por
absorbancia. La absorbancia está dada por la Ley de Beer:
El hierro (II) forma un complejo de color rojo con 1,10-
fenantrolina según la reacción:
A = εbc
Dónde:
Para asegurarse de que todo el hierro presente en la muestra se
A = absorbancia encuentra en forma de Fe2+ se añade, antes de la formación del
ε= absortividad molar en unidades de L/(mol x cm) complejo, un agente reductor como es el clorhidrato de
(Es una propiedad inherente de la sustancia y depende de la hidroxilamina, el cual reduce el Fe3+ a Fe2+ según la reacción:
longitud de onda al cual se mide la absorbancia.)
b = la longitud del paso de luz (Equivale al ancho de la celda) 4Fe 3+ + 2 NH2OH 4 Fe 2+ + N2 O + 4 H3O + + H2 O
c = concentración molar del analíto
La formación del complejo hierro (II) con fenantrolina se da
en un intervalo de pH comprendido entre 2 y 9, aunque éste es
La ley de Lambert - Beer establece que la absorbancia de una
suficientemente amplio, para asegurar la formación
solución es directamente proporcional a la concentración de la
cuantitativa del complejo se adiciona al medio acetato sódico
solución. Por tanto, la espectrometría UV/VIS puede usarse que neutraliza el ácido formado durante la reducción del hierro
para determinar la concentración de una solución. Es necesario (III) y ajusta el pH a un valor al que se puede efectuar la
saber con qué rapidez cambia la absorbancia con la formación del complejo (Ref-[4]).
concentración (Ref-[3]).
Este método puede aplicarse a matrices alimentarias y permite
determinar el contenido total de hierro (Fe2+ + Fe3+).
1
 pequeños grumos, se pasó cuantitativamente el líquido a un
En las siguientes secciones se expondrá el procedimiento y los matraz de 25 mL y para finalizar se aforó.
resultados para determinar por espectroscopía de Ultravioleta -
Visible la concentración de hierro en cereal tipo All Bran. Cuantificación del hierro: Se tomaron tres alícuotas de 0,2
mL (Figura No. 2) de la solución obtenida de las cenizas y se
llevaron a tubos de ensayo, se añadieron los siguientes
reactivos, en este orden para que se desarrollara de color
anaranjado por la reacción entre el hierro (II) y el 1,10
2. Materiales y Métodos fenantrolina: 0,1 ml de solución de clorhidrato de
hidroxilamina, 0,8 ml de acetato de sodio, 1ml de 1,10-
Materiales fenantrolina. Luego se agitó y se dejó en reposo durante 15
 Balón volumétrico de 5 ml y 25 ml minutos (Ref-[5]).
 Beaker
II. PREPARACION DE LA CURVA DE
 Celdas Espectrofotométricas de plástico
CALIBRACION
 Crisol
 Espectrofotómetro a. Preparación de los estándares de calibración
 Embudo en V
 Gradilla Se prepararon 5mL de un conjunto de 5 estándares diferentes
 Mechero de concentración. Para elegir el intervalo de concentración en
el cual se prepararon los patrones se investigó el contenido de
 Mufla
hierro en el cereal All Bran y con base en este dato se
 Pipetas y micro pipetas realizaron los cálculos para obtener la curva de calibración.
 Tubo de ensayo
 Papel filtro b. Construcción de la curva de calibración

Reactivos 1. Se tomaron alícuotas de 0,2 ml de cada una de las

 Cereal tipo All bran
 Acetato de Sodio (C2H5COONa)10%
 Clorhidrato de hidroxilamina (NH2OH*HCl)10%
 Ácido Clorhídrico (HCl)
 1,10-Fenantrolina 0,1%
 Sulfato de hierro amoniacal (NH4Fe(SO4)2*12H2O)
3. Procedimiento Experimental
I. PREPARACION DE LA MUESTRA
1.1 Obtención de cenizas totales
Se pesó 6,003g de la muestra de cereal All Bran en un crisol,
previamente se calcinó la muestra (Figura No. 1) hasta
conseguir unas cenizas blancas o ligeramente grises, y
homogéneas. Se llevaron al desecador para previo enfriamiento
y posteriormente se pesaron.
soluciones de los estándares preparados (Figura No. 2) y
se llevaron a diferentes tubos de ensayo, para posterior
mente adicionar los siguientes reactivos en el siguiente
orden: 0,1 mL de solución de clorhidrato de
hidroxilamina, 0,8 mL de acetato de sodio, 1mL de 1,10-
fenantrolina, se dejó en reposo durante 15 minutos para
que se diera la reacción necesaria y apareciera el color
deseado.
2. Se procedió a registrar un barrido espectral entre 400 y
600 nm, del complejo hierro-(1,10-fenantrolina),
utilizando como blanco de referencia agua tratada de la
misma manera que los estándares. Se registró la longitud
de onda donde se dio el pico de mayor absorbancia y esta
se utilizó en la lectura de la muestra problema.
3. Se realizó la curva de calibración de absorbancia frente a
concentración a longitud de onda seleccionada.
4. Se obtuvo la absorbancia de la muestra problema, para
posteriormente interpolarla con la curva de calibración y
así obtener la concentración de la muestra problema.

1.2 Determinación de hierro en las cenizas 4. Resultados y Análisis de resultados

Dilución de las cenizas: En la campana de extracción, se le I. BARRIDO ESPECTRAL

añadió al crisol frío 8 mL de HCl concentrado hasta que se
disolvieron las cenizas. Se adicionaron 10 mL de agua
destilada, agitando con un agitador de vidrio hasta que se
disolvieron las cenizas en su totalidad. Se filtró para eliminar
Para la realización del barrido espectral se leyó uno de los
patrones que contenía hierro, teniendo en cuenta el intervalo
de longitud de onda entre 400 y 600 nm, obteniendo como
longitud de onda del hierro 515 nm.

2
 II. CURVA DE CALIBRACIÓN DE LOS
PATRONES

De acuerdo a la Tabla No. 1 el cereal tipo All Bran contiene 20

mg de hierro. Se determinó la concentración del cereal de la
siguiente manera:

20 mg 1000g
× = 200 𝑝𝑝𝑚 (Fórmula No. 1)
100g 1kg

Para determinar el intervalo de concentración de los patrones se Patrón Concentración (ppm) Absorbancia
eligieron dos concentraciones por encima (125 ppm y 150 ppm) 1 125 0,203
de la concentración del cereal (200 ppm) y dos por debajo de
este (225 ppm y 250 ppm), obteniendo de la suma de las
2 150
Tabla No. 1 0,552
Algunos alimentos ricos en hierro.
concentraciones un total de 950 ppm. La muestras madre 3 200 0,923
presentes en el laboratorio tenían concentraciones de 200 ppm, 4 225 1,186
250 ppm y 1250 ppm respectivamente.
5 250 1,538
Se eligió la concentración para la muestra madre de 1250 ppm
puesto que esta fue la más cercana al total de 950 ppm.

Con estos datos se pudieron hallar los volúmenes de los

patrones a partir de la Fórmula No. 2. Tabla No. 2
Absorbancias de los patrones a 515nm.
C1×V1=C2×V2 (Fórmula No. 2)

1,10 – fenantrolina respectivamente, se procedió a realizar la

 Despejando V1, se obtiene que:
curva de calibración en el espectrofotómetro a una longitud de
onda de 515 nm, obteniendo las absorbancias de los patrones
como se muestra en la Tabla No. 2.
𝑉1 = (C2 × V2)/C1 (Fórmula No. 3)
De acuerdo al Gráfico No. 1, la curva de calibración es lineal
125𝑝𝑝𝑚×5𝑚𝐿 demostrando de esta manera que cumple con la ley de
𝑉1,1 = 1250𝑝𝑝𝑚
= 0,5 mL Lambert – Beer ya que a mayor concentración hubo mayor
absorbancia.

150𝑝𝑝𝑚×5𝑚𝐿 III. CONCENTRACIÓN DE LA MUESTRA

𝑉1,2 = = 0,6 mL PROBLEMA
1250𝑝𝑝𝑚

Se procedió a medir por triplicado en el espectrofotómetro la

200𝑝𝑝𝑚×5𝑚𝐿 absorbancia de la muestra problema obteniendo como
𝑉1,3 = = 0,8 mL resultado las siguientes absorbancias: 0.688, 0.721, 0.714.
1250𝑝𝑝𝑚

Se sacó la medida de tendencia central la cual fue 0,714 y a

225𝑝𝑝𝑚×5𝑚𝐿 partir de la Formula No. 4 se halló la concentración de la
𝑉1,4 = 1250𝑝𝑝𝑚
= 0,9 mL
muestra problema la cual fue de 173,8 ppm.

250𝑝𝑝𝑚×5𝑚𝐿
y= mx + b (Formula No. 4)
𝑉1,5 = 1250𝑝𝑝𝑚
= 1,0 mL
 Despejando x:

Después de tomar alícuotas de 0,2 mL de las soluciones de los 𝑦−𝑏

estándares preparados y haberles agregado la cantidad 𝑥= (Formula No. 5)
apropiada de clorhidrato de hidroxilamina, acetato de sodio y 𝑚

3
 i.Influencia del equilibrio (dimerización, acido-base,
 Dónde: complejos)
ii. Influencia del disolvente
y= 0,714 b= -1.024 iii. Influencia de la temperatura
m= 0,330 iv. Impurezas de los reactivos
v. Interacción entre especies absorbentes (Ref-[6]).
0,714 − (−1,024) 2. ¿Qué es un complejo?
𝑥=
0,010
Un complejo es una ion que se compone de un átomo central
𝑥 = 173,8 𝑝𝑝𝑚 que actúa como receptor de pares electrónicos y de grupos
ligando que actúan como dadores de pares electrónicos
También se determinó la concentración de la muestra problema formando enlaces coordinados dativos. Los complejos se
gráficamente (Gráfico No. 1) obteniendo como resultado 174 forman especialmente con los elemento de transición los
ppm. cuales en su notación espectral quedan con varios orbitales
semillenos. Experimentalmente se observa que los diferentes
cambios de color que forman los complejos se dan debido al
orden de la fuerza creada por los ligandos, un orden que se
1.8 esperaría por los efectos electrostáticos y teniendo en cuenta el
1.6 desplazamiento delos iones, se forma la serie espectro-
química debido a las diferentes coloraciones observadas (Ref-
1.4
[7]).
1.2
Absorbancia

1 3. ¿Por qué se llaman complejos por transferencia de

0.8 carga?
0.6 Porque es una asociación química de dos o más moléculas, en
0.4 el que la atracción entre las moléculas se debe a una
0.2 transición electrónica hacia un estado electrónico excitado. La
atracción electrostática resultante provee una fuerza
0 estabilizadora para el complejo molecular. La molécula fuente
125 150 200 225 250 de donde la carga es transferida se denominada electrón
y = 0,330x - 1,024 Concentración donante, y la molécula receptora es denominada electrón
R² = 0,9975 receptor (Ref-[8]).

Gráfico No. 1 4. ¿Cuáles son los factores que deben tenerse en cuenta
Curva de calibración de los patrones (Absorbancia vs. para la determinación espectrofotométrica de iones
Concentración).
inorgánicos por formación de complejos?

Los factores que se deben tener en cuenta son: velocidad de

5. Cuestionario reacción, formación de insaturaciones, tiempo, temperatura y
equilibrio químico (Ref-[9]).
1. Describir las desviaciones que pueden presentarse en la
aplicación de la Ley de Beer. 5. ¿Qué sucede si no se adiciona hidroxilamina antes de
agregar la 1, 10 fenantrolina? ¿Qué condiciones debe
a. Desviaciones reales. tener el agua que se utiliza para preparar las
i. La concentración debe ser inferior a 0,01 M soluciones en este análisis?
ii. La absorbancia debe darse en un rango de 0,15 -0,8
Para asegurarse que todo el hierro presente en la muestra esté
b. Desviaciones instrumentales. en estado de oxidación (+2), antes de la formación del
i. Radiación no monocromática complejo, se agrega un agente reductor como lo es el cloruro
ii. Radiación parásita de hidroxilamina, el cual reduce el Fe+3 a Fe+2. Por lo tanto
iii. Errores de lectura si este no se agrega no se podría presentar el complejo, puesto
que se necesita que el Fe este en estado de oxidación +2 (Ref-
c. Desviaciones químicas. [6]).

4
El agua debe ser destilada, es decir con un pH neutro, ya que se enseñanza de la Química Analítica
necesita que la solución se neutralice y esta no afecte la http://www.ugr.es/~decacien/Planes/Quimica/Plan%2
formación de complejo. 01997/temarios/671111darchivos/Practicas/Fe%20en
%20vinos.doc
6. Si la solución de su muestra problema tiene una  [4] Scribd, Valoración espectrofotométrica,
absorbancia por encima o por debajo de las http://es.scribd.com/doc/14174329/4-
absorbancias de las soluciones patrón usadas para la VALORACION-
curva de calibración; ¿qué efecto puede tener esto en el ESPECTROFOTOMETRICA#scribd
resultado del análisis y como se soluciona este  [5] Universidad de Caldas, Determinación de hierro
inconveniente? en alimentos por espectroscopía de Ultravioleta -
Visible, Guía de Practicas de Laboratorio de Análisis
El resultado que puede tener en nuestro experimento es que la Instrumental.
absorbancia de nuestra muestra problema no corte la curva de  [6] Blogger, Espectroscopia de absorción atómica,
calibración, es decir, que nuestra muestra problema no 11 de Agosto de 2009, http://absorcion-
contiene el compuesto requerido o que este en mínimas atomica.blogspot.com.co/2009/08/limitaciones-de-la-
concentraciones. Para solucionar este inconveniente se ley-de-lambert-beer.html
sugiere hacer más patrones y de esta manera ampliar el  [7] Universidad Nacional, Complejos,
intervalo permitiendo de esta manera que la muestra problema http://www.bdigital.unal.edu.co/249/12/80_-
se pueda interpolar con las concentraciones de los patrones. _11_Capi_5.pdf
 [8] Wikipedia, Complejo de transferencia de carga,
https://es.wikipedia.org/wiki/Complejo_de_transferen
6. Conclusiones cia_de_carga
 [9] Universidad Autónoma de México, Fundamentos
 Se logró determinar la concentración de hierro en una Espectroscopía,
muestra de cereal tipo All Bran a 515 nm, la cual fue de http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/lhh345a/Es
273,8 ppm. Esta se halló a partir de la reducción del pectrofotometria2.pdf
Fe+3 a Fe+2 por acción de la 1,10 fenantrolina, para
generar un complejo. Gráficamente mediante una curva
de calibración e interpolando la muestra problema se
obtuvo una concentración de 274 ppm.
 La curva de calibración aportada por la solución madre
indica que hay una relación directa entre la
concentración y la absorbancia, es decir, hay un
cumplimiento de la ley de Lambert – Beer.
 Para que la ley de Beer se cumpla, las soluciones a
utilizar deben ser homogéneas, sin impurezas o
precipitados, y la luz utilizada debe ser monocromática.
 El conocer el adecuado uso del espectrofotómetro
permitió obtener en el laboratorio resultados con alta
calidad analítica en las mediciones que son emitidas por
este.

7. Bibliografía:

Textos
 [3] Skoog, D. A, a, Química Analítica, Editorial MC
Graw-Hill, Ed.7ª, México 2004, pág. 629,630.

Internet
 [1] Guillermo Pérez., Espectrometría, ©
ESPECTROMETRIA .COM,
www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-
visible
 [2] Departamento de química analítica, Utilización de
las nuevas metodologías docentes e internet en la