CÓDIGO: FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

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PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE QUIMICA
UNIDAD ACADEMICA: Medicina, Veterinaria y Zootecnia
CURSO: Bioquímica I

PRACTICA Nº 9 : CARACTERIZACIÓN QUÍMICA DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

1. OBJETIVOS
 Comprobar la solubilidad de la proteína albúmina, en diferentes solventes.
 Desnaturalizar la albúmina mediante diferentes agentes.
 Analizar el comportamiento de aminoácidos y proteínas en diferentes reacciones químicas
2. CONSULTA PREVIA
Consultar: la diferencia entre hidrólisis de una proteína y la desnaturalización de una proteína, así como
también la composición de los aminoácidos presentes en la albúmina de la clara de huevo.
Tratamiento de residuos tóxicos como los metales pesados.
3. FUNDAMENTO TEORICO
Aminoácidos: son compuestos orgánicos que contienen grupos amino y carboxílicos en la misma molécula,
por lo tanto, poseen propiedades ácidas y básicas. De los 22 o más aminoácidos encontrados en una proteína
casi todos son alfa-aminoácidos.
Desnaturalización: Es el cambio del ordenamiento de la estructura tridimensional ordenada de la molécula
nativa a otro de una configuración más desordenada.
Durante la desnaturalización se rompe los puentes de hidrogeno y hay un incremento en el grado de desorden
de la molécula con pérdida de la actividad biológica. En la mayoría de los casos no es posible restituir las
proteínas su estado nativo luego de haber sido desnaturalizada.
Agentes desnaturalizantes: Estos pueden ser de varias clases, entre ellas se encuentran:
a. Físicos: Calor, luz, presión, congelamiento, rayos X, rayo ultravioleta, ultrasonido y agitación mecánica.
b. Químicos: Solventes orgánicos: alcohol, éter, acetona, etc.
c. Bases orgánicas: Amidas y urea.
d. Detergentes.
e. Valores de pH altos o muy bajos.
f. Sales de metales pesados (Hg y Pb).
g. Ácidos fuertes: Tricloroacético, perclórico, sulfúrico, clorhídrico.
h. Bases fuertes.
i. Biológicos: Enzimas proteolíticas.
j. Las proteínas desnaturalizadas tienen a formar agregados moleculares y se precipitan. Esto se conoce
con el nombre de coagulación.
Reacciones químicas: Los aminoácidos como unidades constitutivas de las proteínas, contienen una gran
cantidad de grupos químicamente activos, lo que hace que una proteína tenga una amplía reactividad frente a
compuestos orgánicos. Esta es la base de las siguientes reacciones:

ELABORADO POR: Cesar Turriago CARGO: Docente Unillanos FECHA: Junio 12 de 2017
Hernández y Santiago Valbuena pensionado.
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Reacción con la Ninhidrina: Los aminoácidos dan compuestos de color violeta o purpura con este reactivo.
Reacción Biuret: El sulfato de cobre alcalino reacciona con compuestos que contienen dos o más enlaces
peptídicos dando un complejo de coloración violeta. La intensidad del color es una medida del número de
enlaces peptídicos que contienen proteína a analizar.
Reacción Xantoproteíca: Los aminoácidos que contienen un núcleo aromático, forman nitro-derivados de color
amarillo cuando se calienta con ácido nítrico concentrado y por álcali pasan a un color anaranjado oscuro.
Ensayo de Azufre: Si una solución de proteína se hierve con KOH o NaOH concentrado y luego con acetato de
plomo se forma un precipitado negro, esto si en la proteína están presentes los aminoácidos cistina, cisteína y/o
metionina.
Reacción de Millón: El reactivo consta de una solución de nitrato mercúrico en HNO 3. Los compuestos que
componen un grupo de hidroxibenceno reaccionan con este reactivo formando compuestos de color rojo. Los
aminoácidos que pueden dar positiva esta prueba son la tirosina y sus derivados.
Reacción del Ácido Glioxílico: El grupo indólico del triptófano reacciona con el ácido glioxílico en presencia
del ácido sulfúrico concentrado dando color purpura. El ácido acético glacial que ha sido expuesto a la luz
contiene ácido glioxílico.
4. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Equipo Materiales Reactivos y/o sustancias

Campana de extracción Tubos de ensayo (8) Reactivo de Biuret

Gradilla para tubos de ensayo (1) Reactivo de Ninhidrina

Mechero (1) Reactivo Millón
Vaso precipitado de 50 ml (2) Etanol 95%
Ácido Nítrico concentrado
Hidróxido de Sodio 10%
Acetato de Plomo.

5 PROCEDIMIENTO

Extraiga la clara de un huevo de gallina. Divida en dos porciones aproximadamente iguales. A una de ellas
adiciónele un volumen igual de agua destilada, agite para homogenizar. Se tendrá así dos porciones de clara o
de albúmina; sin diluir (sin agua) y otra diluida (con agua).
Solubilidad de una proteína a diferentes valores de pH.
Prepara cuatro tubos de ensayo cada uno con tres ml de clara de huevo diluida y agregar en cada tubo 3 ml de
las siguientes sustancias: agua destilada, NaCO 3 al 10%, NaOH al 10% y HCl al 0.2% respectivamente. Anote
en cada caso si hay solubilidad total, parcial o precipitación. En cada caso medir el pH con un papel indicador
universal, para esto impregnar un pedazo de papel indicador en la solución a ensayar, luego leer el valor del
pH sobre la escala de colores del indicador.

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Desnaturalización de proteínas
Calor: caliente suavemente 2ml de albúmina sin diluir hasta que observe el primer cambio. Compare con la
albúmina no calentada y anote la diferencia.
Alcohol: A 2ml de albúmina sin diluir agregue 2 ml de etanol al 90%. Anote el resultado.
Metales Pesados: Tome dos tubos cada uno de 2 ml de albúmina diluida. A uno de ellos agregue 5 gotas de
AgNO3 al 5% y al otro 5 gotas de HgCL2 al 5%. Reporte los resultados. No arrojar los residuos al desaguadero,
pregunte al auxiliar donde se debe depositar.
Ácidos Orgánicos Fuertes: Tome un tubo de dos ml de albúmina diluida agregue 1 ml de ácido Tricloroacético
al 5%. Anote el resultado.
Reacciones Químicas
Ninhidrina: A un ml de albúmina diluida agréguele un ml de solución Ninhidrina. Caliente el tubo hasta que
observe el primer cambio. Reporte el resultado.
Biuret: A dos ml de albúmina diluida agréguele dos ml del reactivo de Biuret. Observe y reporte sus
observaciones.
Xantoproteíca: A tres ml de albúmina sin diluir, añada cinco gotas de NaOH al 40%, hierva con cuidado hasta
que observe el primer cambio. Informe sus observaciones.
Ensayo de Azufre: tome dos ml de albúmina sin diluir, añada 5 gotas de NaOH al 40% hierva durante dos
minutos. Agregue 10 gotas de solución de acetato de plomo. Anote el resultado. No arrojar los residuos al
desaguadero, pregunte al auxiliar en donde se debe depositar.
Millón: A dos ml de albúmina sin diluir añada cinco gotas del reactivo de millón + 3 gotas de NaNO2%. Observe
y reporte el resultado.
Ácido Glioxílico: A dos ml de albúmina sin diluir, añada dos ml de ácido acético glacial, luego deje caer
lentamente por las paredes del tubo dos ml de ácido sulfúrico concentrado (precaución, tenga cuidado), hasta
que se formen dos capas. Observe y reporte los resultados. No arroje los residuos al desaguadero, pregunte al
auxiliar en donde se deben depositar.

6. RESULTADOS

Mostrar los resultados para cada ensayo y en cada uno dar una explicación teórica de lo sucedido. En el caso
de las reacciones químicas, empezar con la reacción correspondiente y hacer la correlación de lo observado en
el laboratorio. Escribir la biografía consultada.

7. BIBLIOGRAFIA

Bioquímica de Harper, Murray, manual moderno, 16 ed, 2004, México

Libro multimedia de Bioquímica. Santiago Valbuena, Ed universidad de los Llanos, 2010.
http:/avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias básicas/organicas/guía 9 aminoácidos. Pdf
http://cdigital.dgb.uanl.mx/la1020111502/1020111502.PDF
http:aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/resource/view.php?id=43046

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