Química Biológica 2010

Química Biológica
TP 6 ÁCIDOS NUCLEICOS .
.

Introducción

Los ácidos nucleicos son polímeros de alto peso molecular cuyas unidades monoméricas son los
nucleótidos unidos por enlaces fosfodiester. Los nucleótidos presentan una pentosa, un grupo
fosfato y una base nitrogenada cuya naturaleza es responsable del código genético. Existe dos
tipos de acidos nucleicos: el acido ribunucleico (RNA) y el acido desoxirribonucleico (DNA) La
principal diferencia entre ambos es la pentosa puede ser ribosa en el caso del RNA o
desoxirribosa en DNA.

La pentosa no es la única diferencia

estructural que presentan ambos ácidos
nucleicos. El DNA se caracteriza por la
presencia de la base nitrogenada Timina y
en su forma más difundida se presenta
como una doble hélice en las que las bases
nitrogenadas complementarias se disponen
en el interior de la cadena. Las cadenas
complementarias presentan una dirección
inversa y determinan un hélice que da una
vuelta completa cada 10 bases (3,4 nm)
El RNA presenta Uracilo en lugar de
Timina y esta formado por una cadena
simple de nucleotidos.

Molécula de DNA
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La función biológica de los ácidos nucleicos es fundamental: el DNA es el material genético de

las células no solo responsable de la herencia, sino que esta activamente involucrado en la vida
celular, pudiendo encontrarse como una sola cadena en algunos microorganismos o formando
parte de núcleo-proteínas de carácter básico en los cromosomas en organismos superiores.
Almacena información genética y sirve de molde para la síntesis de proteínas. Se encuentra
mayoritariamente en el núcleo y en muy poca cantidad en mitocondria y cloroplastos. El RNA
participa en la síntesis de proteínas, puede presentar función enzimática y se distribuye en toda
la célula, mayormente en citoplasma en forma soluble o formando parte de los ribosomas.
El dogma central de la genética es el siguiente:

Parte experimental

Objetivos

- Extraer e identificar DNA en material biológico

- Observar micronúcleos en muestras de mejillón.

Actividades

Extracción de DNA

Pelar y rallar una cebolla mediana con rallador o procesador hasta picarla finamente.
Pesar 15 g de cebolla rallada
Adicionar 25 ml de solución de lisis (0,1 % de SDS en 25 mM EDTA pH 8) y esperar 20 min.
Filtrar en gasa y recoger en probeta.
Transferir 4 ml de filtrado a un tubo de ensayo.
Adicionar 8 ml de etanol 95% procurando no mezclar las dos soluciones.
En la interfase observar la formación de una fina hebra.
Retirar la interfase con pipeta Pasteur y separarla en un tubo.
Resuspender en 2 ml de agua destilada y calentar suavemente.
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Caracterización de DNA

Una hidrólisis ácida remueve todas las bases púricas (hidrólisis de uniones N-glicosídicas entre
pentosa y las bases púricas) sin afectar las uniones fosfodiester del esqueleto nucleotídico, por lo
tanto obtenemos como producto ácidos nucleicos sin bases púricas.
Las desoxipentosas debido a la hidrólisis ácida sufren deshidratación dando aldehídos δ-hidroxi-
levulínicos. Estos reaccionan con difenilamina dando un producto de color azul. Así, la reacción
de difenilamina servirá para caracterizar, indirectamente, la presencia de DNA en células de
cebolla.

Actividades

Preparar los siguientes tubos

Dejar reposar 5 minutos
Observar e interpretar los resultados

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Agua destilada 1 ml -
Ribosa 1 ml
Extracto - 1 ml
Rvo difenilamina 2 ml 2 ml
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Identificación de la pentosa

La pentosa del DNA y RNA puede evidenciarse por la reacción con orcinol, en este caso la
desoxirribosa. El ácido sulfúrico hidroliza las uniones fosfodiester y N-glicosídicas, liberando
ribosa, bases púricas, pirimidínicas y ácido fosfórico.
La ribosa en medio ácido se deshidrata originando furfural que reacciona con el orcinol dando
un producto verde que demuestra la presencia de RNA.

Pentosas del RNA –HCl cc y calor------- furfural + orcinol ----Cl3Fe---- color VERDE

Test de micronúcleos

Los micronúcleos son pequeños cuerpos de DNA que aparecen cerca del núcleo
principal durante la interfase como resultado de una división celular defectuosa, la que
es el resultado de daños cromosómicos estructurales y numéricos inducidos por agentes
contaminantes químicos y orgánicos. Los micronúcleos se forman durante la transición
metafase-anafase de la mitosis por daños en el huso mitótico, generando fragmentos de
cromosomas retrasados durante la migración y durante la interfase pueden observarse
como pequeñas masas citoplasmáticas de cromatina.

Actividades

Tomar los mejillones y abrirlos realizando un corte en el músculo abductor. Extraer las
branquias y realizar un frotis de la misma. Dejar secar y luego fijar con con Carnoy
(etanol – acético 3:1) y se deja secar nuevamente. Teñir los preparados con Giemsa 4 % y contar
500 células registrando el número de anormalidades.

Actividades complementarias
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1. Dibuja la estructura de las bases púricas.

2. ¿Como se llaman las proteínas asociadas al DNA en eucariota?
3. ¿Cuales son las principales características del cromosoma bacteriano?
4. ¿Qué función tienen las diferencias químicas entre DNA y RNA?