123dok Formulasi+dan+Evaluasi+Sediaan+Obat+Kumur+Ekstrak+Etanol+Daun+Afrika+ (Vernonia+amygdalina+Delile) +s PDF

Lampiran 1.
Hasil identifikasi tumbuhan
54
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Bagan kerja penelitian
1. Pembuatan serbuk simplisia dan karakterisasi simplisia
Daun Afrika
Dicuci dari pengotor sampai bersih
Ditiriskan lalu ditimbang berat basah
Dirajang dan dikeringkan
Sortasi kering
Ditimbang berat kering
Simplisia
Dihaluskan
Serbuk simplisia
Karakteristik simplisia
- Penetapan kadar air

- Penetapan kadar sari larut air
- Penetapan kadar sari larut
etanol
- Penetapankadar abu total
- Penetapankadar abu tidak larut
asam
55
Lampiran 2. (Lanjutan)
2. Pembuatan ekstrak etanol daun Afrika
500 g serbuk simplisia daun Afrika
Dimasukkan ke dalam sebuah wadah

Ditambahkan etanol 80% hingga serbuk
terendam
Ditutup bagian atas wadah
Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari
cahaya sambil sering diaduk
Disaring
Maserat I Ampas
Diremaserasi menggunakan
etanol 80%
Dibiarkan selama 2 hari
terlindung dari cahaya
Dienaptuangkan atau disaring
Maserat II
Ditambahkan maserat I dan

maserat II
Dipekatkan dengan rotary
evaporator
Ekstrak kental (57,3 g)
Skrining Fitokimia
Senyawa golongan:
- Alkaloid
- Glikosida
- Saponin
- Tanin
- Flavonoid
- Steroid/ Triterpenoid
56
Lampiran 2. (Lanjutan)
3. Bagan uji aktivitas antibakteri
Biakan murni
Diambil 1 ose
dengan jarum ose steril
Ditanam pada media nutrient agar miring
Diinkubasi pada suhu 37OC selama 18-24 jam
Stok kultur
Diambil 1 ose
Disuspensikan ke dalam 10 ml nutrient broth
Diinkubasi selama 3 jam di dalam inkubator
Dibandingkan kekeruhan larutan dengan
suspensi standar Mc. Farland
Suspensi bakteri
Dipipet 0,1 ml biakan bakteri dan dimasukkan

ke dalam tabung reaksi yang berisi 9,9 ml
nutrient broth
Dipipet 0,1 ml dari tabung reaksi ke dalam
cawan petri
Dituang 15 ml media nutrient agar
Dihomogenkan, biarkan hingga memadat
Media padat
Diletakkan pencadang kertas yang telah ditetesi

larutan uji dengan berbagai konsentrasi
Diinkubasi pada suhu 37OC selama 18-24 jam
Diukur diameter daerah hambat di sekitar
pencadang kertas dengan menggunakan jangka
sorong
Hasil
57
Lampiran 3. Gambar tumbuhan dan bagian makroskopik tumbuhan dari daun
Afrika (Vernonia amygdalina Delile.)
Tumbuhan daun Afrika
Daun Afrika (Vernonia amygdalina Delile.)
58
Lampiran 4. Gambarsimplisia dan serbuk simplisia daun Afrika
Simplisia daun Afrika
Serbuk simplisia daun Afrika
59
Lampiran 5. Perhitungan penetapan kadar air serbuk simplisia daun Afrika
Volumeakhir −volumeawal
Kadar air simplisia = x 100 %
Beratsampel
No Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml)

1 5,0933 1,4 1,8
2 5,0758 1,8 2,2
3 5,0821 2,2 2,6
a. Berat simplisia = 5,0903 g
Volume air = 1,8 – 1,4 = 0,4 ml
0,4 ml
Kadar air = x 100 % = 7,85 %
5, 0933 g
b. Berat simplisia = 5,0780 g

Volume air = 2,2 – 1,8 = 0,4 ml
0,4 ml
Kadar air = x 100 % = 7,88 %
5, 0758 g
c. Berat simplisia = 5,0821 g

Volume air = 2,6 – 2,2 = 0,4 ml
0,4 ml
Kadar air = x 100 % = 7,87 %
5, 0821 g
7,85 % + 7,88 % + 7,87%

Kadar air rata-rata = = 7,87 %
3
60
Lampiran 6. Perhitungan penetapan kadar sari larut air serbuk simplisia daun
Afrika
Berat cawansari −beratcawankosong 100

Kadar sari = x x 100%
beratsampel 20
No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g)
1 5,0094 39,3980 39,6474
2 5,0504 36,9109 37,1645
3 5,0108 38,2524 38,5026

Berat sari = 39,6474 – 39,3980 = 0,2494 g
0,2494 g 100
Kadar sari = x x 100 % = 24,89 %
5, 0094 g 20

Berat sari = 37,1645 – 36,9109 = 0,2536 g
0,2536 g 100
Kadar sari = x x 100 % = 25,10 %
5, 0504 g 20

Berat sari = 38,5026 – 38,2524 = 0,2502 g
0,2502 g 100
Kadar sari = x x 100 % = 24,97 %
5, 0108 g 20
24,89% + 25,10% + 24,97%

Kadar sari rata-rata = = 24,99%
3
61
Lampiran 7. Perhitungan penetapan kadar sari larut etanol serbuk simplisia daun
Afrika
Beratcawansari −beratcawankosong 100

Kadar sari = x x 100%
beratsampel 20
No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g)
1 5,0120 43,4473 43,6133
2 5,0446 45,2480 45,4082
3 5,0080 44,5926 44,7551

Berat sari = 43,6133 – 43,4473 = 0,1660 g
0,1660 g 100
Kadar sari = x x 100 % = 16,56 %
5, 0120 g 20

Berat sari = 45,4082 – 45,2480 = 0,1602 g
0,1602 g 100
Kadar sari = x x 100 %= 15,87 %
5,0446 g 20

Berat sari = 447551 – 45,5926 = 0,1625 g
0,1625 g 100
Kadar sari = x x 100 %= 16,22 %
5,0080 g 20
16,56 % + 15,87 % + 16,22%

Kadar sari rata-rata = = 16,22 %
3
62
Lampiran 8. Perhitungan penetapan kadar abu total serbuk simplisia daun Afrika
Beratabu
Kadar abu total = x 100%
Beratsampel
No Berat sampel (g) Berat abu (g)

1 2,0060 0,1896
2 2,0677 0,2085
3 2,0396 0,2005

Berat abu = 0,1896 g
0,1896
Kadar abu = x 100 % = 9,45 %
2,0060

0,2085
Kadar abu = x 100 % = 10,08 %
2,0677

0,2005
Kadar abu = x 100 % = 9,83 %
2,0396
9,45 % + 10,08 % + 9,83%

Kadar abu total rata-rata = = 9,79 %
3
63
Lampiran 9. Perhitungan penetapan kadar abu total tidak larut asam serbuk
simplisia daun Afrika
Beratabu
Kadar abu tidak larut asam = x 100%
Beratsampel
No Berat sampel (g) Berat abu (g)

1 2,0060 0,0112
2 2,0677 0,0157
3 2,0396 0,0124

0,0112
Kadar abu = x 100 % = 0,56 %
2,0060

0,0157
Kadar abu = x 100 % = 0,76 %
2,0677

0,0124
Kadar abu = x 100% = 0,61 %
2,0396
0,56 % + 0,76 % + 0,61 %

Kadar abu total tidak larut asam rata-rata = = 0,64 %
3
64
Lampiran 10. Hasil identifikasi bakteri Staphylococcus aureus dengan
pengecatan Gram
Bakteri Staphylococcus aureus
Lampiran 11. Hasil identifikasi bakteri Streptococcus mutans dengan

pengecatan Gram
Bakteri Streptococcus mutans
65
Lampiran 12. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak terhadap bakteri
Staphylococcus aureus
500mg/ml 100mg/ml
400mg/ml 70mg/ml
200mg/ml 90mg/ml
300mg/ml 80mg/ml
60mg/ml
Blanko
50mg/ml
30mg/ml
20mg/ml 10mg/ml
40mg/ml
66
Lampiran 13. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak terhadap bakteri
Streptococcus mutans
100mg/ml
500mg/ml
90mg/ml
200mg/ml 70mg/ml
400mg/ml
80mg/ml
300mg/ml
60mg/ml
Blanko
50mg/ml 30mg/ml
10mg/ml 20mg/ml
40mg/ml
67
Lampiran 14. Hasil pengukuran diameter daerah hambatan oleh ekstrak etanol
daun Afrika
Diameter daerah hambatan (mm)

Konsentrasi
Staphylococcus aureus Streptococcus mutans
(mg/ml)
D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*
500 14,8 14,9 14,4 14,70 14,4 14,6 14,2 14,40
400 13,3 13,8 13,3 13,46 13,3 13,0 13,1 13,13
300 13,0 12,6 12,6 12,73 12,1 11,8 11,6 11,83
200 11,6 11,5 11,2 11,43 11,0 10,8 10,5 10,76
100 10,4 10,0 10,4 10,26 10,4 10,0 10,1 10,16
90 8,8 8,6 8,2 8,53 8,7 8,3 8,3 8,43
80 7,8 7,6 7,7 7,70 7,6 7,6 7,5 7,56
70 7,5 7,4 7,0 7,30 7,4 7,1 7,0 7,16
60 6,9 6,8 6,7 6,80 6,8 6,6 6,6 6,67
50 6,7 6,6 6,6 6,63 6,5 6,5 6,4 6,47
40 6,6 6,5 6,5 6,53 6,4 6,3 6,3 6,33
30 6,3 6,2 6,3 6,26 6,3 6,3 6,1 6,20
20 - - - - - - - -
10 - - - - - - - -
Blanko - - - - - - - -
(DMSO)
Keterangan :
D = Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri
1,2,3 = Perlakuan
* = Rata- rata daerah hambatan pertumbuhan bakteri
- = Tidak terdapat daerah hambatan pertumbuhan bakteri
Lampiran 15. Gambar sediaan obat kumur ekstrak etanol daun Afrika
68
9%
5% 7%
4%
2%
1% 3%
0%
Sediaan obat kumur untuk pemeriksaan stabilitas sediaan
0% 1% 5%
2% 3% 4% 7% 9%
Sediaan obat kumur untuk pemeriksaan pH sediaan
Lampiran 16. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri obat kumur terhadap
bakteri Staphylococcus aureus minggu ke-0
69
0%
1% 3%
2%
4%
5%
9%
7%
bakteri Streptococcus mutans minggu ke-0
70
0%
1%
3%
2%
4%
5% 9%
7%
bakteri Staphylococcus aureus minggu ke-12
71
0%
1%
3%
2%
4%
9%
5%
7%
bakteri Streptococcus mutans minggu ke-12
72
0%
1%
3%
2%
4%
5%
9%
7%
Lampiran 20. Hasil pengukuran diameter daerah hambatan oleh obat kumur
ekstrak etanol daun Afrika minggu ke-0
Konsentrasi Diameter daerah hambatan (mm)

(%) Staphylococcus aureus Streptococcus mutans
73
D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*
1 - - - - - - - -
2 - - - - - - - -
3 6,20 6,30 6,30 6,26 6,20 6,20 6,30 6,23
4 6,50 6,50 6,60 6,53 6,40 6,30 6,50 6,40
5 6,70 6,80 6,80 6,76 6,60 6,50 6,60 6,56
7 7,20 7,40 7,50 7,36 7,30 7,20 7,20 7,23
9 8,40 8,50 8,20 8,36 8,30 8,20 8,40 8,30
Blanko
(Tanpa - - - - - - - -
ekstrak)
Keterangan :
1,2,3 = Perlakuan
Lampiran 21. Hasil pengukuran diameter daerah hambatan oleh obat kumur
ekstrak etanol daun Afrika minggu ke-12
Diameter daerah hambatan (mm)

Konsentrasi
(%)
D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*
74
1 - - - - - - - -
2 - - - - - - - -
3 6,20 6,30 6,20 6,23 6,10 6,30 6,20 6,20
4 6,50 6,50 6,50 6,50 6,40 6,30 6,30 6,33
5 6,60 6,60 6,70 6,63 6,50 6,50 6,40 6,46
7 7,10 7,40 7,30 7,26 7,20 7,20 7,10 7,16
9 8,30 8,40 8,20 8,30 8,20 8,20 8,10 8,16
Blanko
(Tanpa - - - - - - - -
ekstrak)
Keterangan :
1,2,3 = Perlakuan
Lampiran 22. Perbandingan hasil pengukuran diameter daerah hambatan

ekstrak etanol daun Afrika dengan sediaan obat kumur ekstrak
etanol daun afrika
Diameter daerah hambatan (mm)*

Konsentrasi
Obat Kumur Obat Kumur
Ekstrak Ekstrak
Minggu Minggu Minggu Minggu
75
Ke-0 Ke-12 Ke-0 Ke-12
1% - - - - - -
2% - - - - - -
3% 6,26 6,26 6,23 6,20 6,23 6,20
4% 6,53 6,53 6,50 6,33 6,40 6,33
5% 6,63 6,76 6,63 6,47 6,56 6,46
7% 7,30 7,36 7,26 7,16 7,23 7,16
9% 8,53 8,36 8,30 8,43 8,30 8,16
Blanko - - - - - -
Keterangan: * = Hasil rata-rata tiga kali pengukuran

- = Tidak ada hambatan
76
DAFTAR PUSTAKA
Anonim. (2010). The Alternative Cancer Treatment. Diakses Tanggal: 10 Mei

2016.http://naturindonesia.com/diabetes-militus/daun-Afrika-
selatan/1214.html
Aflatuni, A. (2005). The yield and essential oil content of mint (Mentha sp.) in
Northern Ostrobothnia. Finland: University of Oulu. Halaman 5.
Agoes, G. (2006), Pengembangan Sediaan Farmasi. Bandung: Penerbit ITB.
Halaman 207-217.
Attwood, D., dan Florence, A.T. (1988). Dasar-dasar Fisikokimia Farmasi.
London: Chapman and Hall, Inc. Halaman 103.
Backer, A.K. (1990). Handbook of Nonpresciption Drugs. Edisi ke-9.
Washington: American Pharmaceutical. Halaman 435-437.
Barile, E., Bonanomi, G., Antignani, V., Zolfaghari, B., Sajjadi, S.E., Scala, F.,
dan Lanzotti, V. (2006). Saponins from Allium minutiflorum with
Antifungal Activity. Journal Phytochemistry. 6(1): 596-603.
Brooks, Geo, F., Janet, S., Butel, L.N., dan Ornston. (1996). Mikrobiologi
Kedokteran. Alih bahasa : Edit Nugroho, dan RF. Maulany. Jakarta:
Penerbit Kedokteran EGC. Halaman 87.
Cappuccino, J.G., dan Sherman, N. (2011). Microbiology: A Laboratory Manual.
Edisi IX. San Fransisco: Pearson Education, Inc. Halaman 85.
Depkes RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 155, 297-326, 333-340.
Depkes RI. (2004). Sistem Kesehatan Nasional, Jakarta: Departemen Kesehatan
Republik Indonesia. Halaman 96.
Ditjen POM RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 653, 744, 748.
Ditjen POM RI. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 896-898, 1192.
Ditjen POM RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.
Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 1, 10-11.
Dzulkarnain, B., Sundari, D., dan Chozin, A. (1996). Tanaman Obat
Bersifat Antibakteri di Indonesia. Jakarta: Cermin Dunia Kedokteran.
Halaman 110.
Erasto, P., Grierson, D., dan Afolayan, A. (2006). Bioactive sesquiterpene
lactones from the leaves of Vernonia amygdalina. Journal
Ethnopharmacol. 6(1):117-120.
50
Farnsworth, N.R. (1966). Biologycal and Phytochemical Screening of Plants.
Journal of Pharmaceutical Science. 5(3): 225-276.
Fathi, L.N. (2010). Efektivitas ekstrak daun jambu biji daging buah putih
(Psidium guajava Linn) pada konsentrasi 5%, 10%, dan 15% terhadap
zona radikal bakteri Staphylococcus aureus. KTI Strata satu. Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Yogyakarta.
2(3): 4
Flora, E. (2008). Tanaman Obat Indonesia Untuk Pengobatan. Diakses Tanggal:
10 Mei 2016. http://indonesian-herbal.blogspot.com/2008/11/tanaman
obat-indonesia-untuk-pengobatan.html.
Giday, M., Asfaw, Z., Elmqvist, T., dan Woldu, Z. (2003). An ethnobotanical
study of medicinal plants used by the Zay people in Ethiopia. Journal of
Ethnopharmacology. 4(1): 43–52.
Greenwood. (1995). Antibiotics Susceptibility (Sensitivity) Test, Antimicrobial
and Chemoterapy. Addison Westley Longman Inc. San Fransisco. USA:
8(1): 6.
Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia. Edisi II. Penerjemah: Kosasih
Padmawinata dan Iwang Soediro. Bandung: Penerbit ITB. Halaman
6, 49.
Ibrahim, G., Abdurahman, E.M., dan Katayal, U.A. (2004). Pharmacognostic
Studies On The Leaves Of Vernonia amygdalina Delile. (Asteraceae).
Nigeria Journal of Natural Products And Medicine. 8(1): 8-10.
Ijeh, I.I., dan Ejike, E.C. (2010). Current Perspectives on the Medical Potentials of
Vernonia amygdalina Delile. Journal of Medical Plants Research. 57:
1051-1061.
Jas, A. (2007). Perihal Obat Dengan Berbagai Jenis dan Bentuk Sediaannya.
Medan: USU Press. Halaman 47.
Jawetz, Melnick, dan Adenbergs. (2001). Mikrobiologi Kedokteran. Edisi I.
Jakarta: Salemba Medika. Halaman 196-198.
Kumar, S., Babu, R., Reddy, J., dan Uttam. (2011). Povidone iodine–revisited.
India Journal of Dental Advancements. 3(3): 617-619.
Lucida, H. (2006). Determination of the ionization constants and the stability of
catechin from gambir (Uncaria gambir (Hunter) Roxb). Padang ASOPMS
12 International Conference. 4(1): 4.
Melani, S. (1988). Sintesis glukan oleh Glukosiltransferase Streptococcus mutans.
Mekanisme Pembentukan Plak Gigi. Jurnal FKG Universitas Trisakti
Jakarta. 5(2): 9, 14
Mitsui, T. (1997). New Cosmetic Science. Singapore: Elsevier Science. Halaman
483-487.
51
Njan, A.A, Adza, B., Agaba, A.G., Byamgaba, D., Diaz, S., dan Bansberg,
D.R. (2008). The Analgesic and Antiplasmodial Activities and
Toxicology of Vernonia amygdalina. Journal Medicine and Food. 11(5):
81.
Nuria, C., Faizatun, A., dan Sumantri. (2009). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Etanol Daun Jarak Pagar (Jatropha Curcas L) Terhadap Bakteri
Staphylococcus aureus Atcc 25923, Escherichia coli Atcc 25922, dan
Salmonella typhi Atcc 1408. Jurnal Ilmu – ilmu Pertanian. 5(2): 26 – 37.
Parmar, G., Kaur, J., Varghesw, C., dan Rajan, K. (2007). Management of Dental
Caries in Selected Rural Areas of Gujarat Through Atraumatic Restorative
Technique (ART). Report. Gol-WHO Collaboration Program (2006-07).
Government Dental Collage and Hospital, Ahmedabad India.2(2): 10.
Peterson, D. (2011). Family Gentle Dental Care. Article. Diakses Tanggal: 2 Mei
2016. http:// www.dentalgentlecare.com/periguard.html
Pratiwi, S.T. (2008). Mikrobiologi Farmasi. Jogjakarta: Erlangga. Halaman 17-
18,106-108.
Primalia, D.R., Yuliati, A., dan Soebagio. (2009). Perlekatan Streptococcus
mutans pada semen hibrid ionomer setelah direndam dalam larutan
antiseptik. Surabaya Material Dental Journal. 1(1): 1.
Rawlins, E.A. (2003). Bentleys of Pharmaceutics. Edisi XVIII. London: Baillierre
Tindall. Halaman 22, 35.
Robinson, T. (1995). The Organic Constituents of Hight Plant. Edisi IV. New
York: University of Massachusetts. Terjemahan: Kosasih Padmawinata.
Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Edisi keempat. Bandung: ITB.
Halaman 191-193.
Roeslan, B.O. (2002). Imunologi karies. In: Imunologi oral kelainan di dalam
rongga mulut. Jakarta: Balai Penerbit FK UI. Halaman 139-141.
Rowe, R.C., Sheskey, P.J., dan Quinn M.E. (2009). Handbook of
Pharmaceutical Excipients. Lexi-Comp: American Pharmaceutical
Association, Inc. Halaman 418, 458, 685.
Setiawan, A. (2012). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Afrika
(Vernonia amygdalina Del.) Terhadap Tikus Jantan Galur Wistar.
Skripsi. Medan: Falkutas Farmasi USU. Halaman 12.
Sagarin, E., dan Gerson, M.M.R. (1972). Cosmetics Science and Technology.
United States: Informa Health Care USA Inc. Halaman 679-684
Shahani, M.N., dan Reddy, V.V.S. (2011). Comparison of Antimicrobial
Substantivity of Root Canal Irrigants in Instrumented Root Canals up to 72
Hours: An Invitro Study. India Journal of Indian Soc. Pedod. Prev. Dent.
5(2): 29.
52
Sharma, M.C., dan Smita, S. (2010). Pharmacognostic and Phytochemical
Screening of Vernonia amygdalina Linn Against Selected Bacterial
Strains. Middle East Journal of Scientific Research. 6(5): 440-444.
SNI 12-3524-1995. Obat Kumur. Jakarta: Dewan Standarisasi Nasional. Halaman
10.
Stanier, R.Y., Adelberg, E.A., dan Ingraham, J.L. (1982). Dunia Mikroba I.
Penerjemah: Agustin Wydia. Jakarta: Penerbit Bhratara Karya Aksara.
Halaman 23-25.
Sumono, A., dan Wulan, A. (2009). Kemampuan air rebusan daun salam
(Eugenia polyantha W) dalam menurunkan jumlah koloni bakteri
Streptococcus sp. Majalah Farmasi Indonesia. 20(3): 112-113.
Talaro, Kathleen P., dan Arthur, T. (1999). Foundations in microbiology: basic
principles. Edisi Ketiga. Boston: WCB/McGraw-Hill. Halaman 237-238.
Tortora, G.J., Funke, B.R., Case, C.L. (2004). Microbiology an Introduction.
Edisi XVIII. San Fransisco: Pearson Education Inc. Halaman 743.
Trease, E. (1983). Pharmacognosy. Edisi XII. London: Aldon Press. Halaman
135-136.
Vadas, E.B. (2000). Stability of Pharmaceutical products, in: Gennero, A.R., Ed.,
Remington The Science and Practice of Pharmacy. Edisi XX.,
Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins. Halaman 52.
Victor, B.C., Indrawati R., Sidarningsih. (2013). Perbedaan daya hambat obat
kumur ekstrak teh hijau (Camellia sinensis) dan metil salisilat terhadap
pertumbuhan bakteri rongga mulut. Oral Biology Dental Journal.
Surabaya: Perpustakaan Universitas Airlangga. 3(2): 1.
Volk, W.A., dan Wheeler, M.F. (1993). Mikrobiologi Dasar. Jilid I. Alih Bahasa:
Markam. Jakarta: Erlangga. Halaman 33-40, 218-219, 266.
Wilbraham, A.C., dan Matta, M.S. (1992). Pengantar Kimia Organik dan Hayati.
Penerjemah: Suminar Achmadi. Bandung: ITB. Halaman 100-105.
World Health Organization. (1992). QualityControl Methods For Medicinal Plant
Material. Switherland: WHO. Halaman 19-25.
Yeap, K., Hoyong, W., Beh, K., Liang, S., Ky, H., Yousr, N., dan
Alitheen, B. (2010). Vernonia amygdalina, an Ethnoveterinary and
Etnomedical Used Green Vegetable with Multiple Bioactivity.
Journal of Medicinal Plants Research. 4(25): 87-112.
Zhang, B., Takatsu, F., Geng, S., Zhengxiang, Hong, J. (2005). Ornidazole
gargarisma and preparation method. Journal of Pharmaceutical Analysis.
5(2): 3.
53
BAB III
METODE PENELITIAN
Metode penelitian ini dilakukan secara eksperimental. Penelitian ini
dilakukan untuk melihat pengaruh ekstrak etanol daun Afrika dalam bentuk
sediaan obat kumur terhadap aktivitas antibakteri dari bakteri Staphylococcus
aureus dan Streptococcus mutans. Ekstrak etanol daun Afrika dengan berbagai
konsentrasi ditentukan nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM), kemudian
setelah didapat KHM dari ekstrak tersebut diformulasikan ke dalam bentuk
sediaan obat kumur dengan konsentrasi sebesar 0, 1, 2, 3, 4, 5, 7, dan 9%, dan
dilakukan pemeriksaan terhadapsediaan meliputi uji stabilitas sediaan,uji pH
selama 12 minggu pada penyimpanan suhu kamar, dan uji aktivitas antibakteri
dari sediaan obat kumur tersebut. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium
Farmakognosi, Laboratorium Mikrobiologi, dan Laboratorium Kosmetologi
Universitas Sumatera Utara.
3.1 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas, alat
maserasi, alat pemutar uap (Haake D), alat penetapan kadar air, aluminium foil,
otoklaf (Fison), botol kaca, benang wol, blender, lampu bunsen, cawan penguap
yang berdasar rata, cawan petri, inkubator (Memmert), jangka sorong, jarum ose,
kapas steril, kasa steril, kertas perkamen, laminar airflow cabinet (Astec HLF
1200 L), lemari pendingin (Toshiba), lemari pengering, mikroskop, mikro pipet
(Eppendorf), neraca kasar (Ohanus), neraca analitik (Mettler AE 200), oven
(Gallenkamp), penangas air, pencadang kertas, pH meter (Eco Testr), pinset,
pipet tetes,spatula, tisu, dan vial.
20
3.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah akuades, daun Afrika,
etanol 96% (Merck), nutrient agar (Merck), nutrient broth (Merck), bakteri
Staphylococcus aureus KCCM 11764, bakteri Steptococcus mutans ATCC 25175,
dimetil sulfoksida (DMSO), larutan BaCl2 1,175%, larutan H2SO4 1%, gentian
violet, lugol, minyak emersi, safranin, sakarin, tween 80, peppermint oil, larutan
dapar asam pH 4,01 (Hanna), larutan dapar standar netral pH 7,01 (Hanna), bahan
kimia yang digunakan berkualitas pro analisa (berasal dari Merck), kecuali
dinyatakan lain: alfa naftol, asam klorida pekat, asam asetat anhidrida, asam nitrat
pekat, asam sulfat pekat, besi (III) klorida, bismut (III) nitrat pekat, n-heksan,
iodium, isopropanol, kalium iodida, kloroform, metanol, kristal natrium
hidroksida, raksa (II) klorida, serbuk magnesium, timbal (II) asetat, amil alkohol,
dan toluen.
3.3 Penyiapan Sampel
Penyiapan sampel meliputi pengambilan bahan, identifikasi tumbuhan,
dan pembuatan simplisia daun Afrika.
3.3.1 Pengambilan bahan
Metode pengambilan bahan dilakukan secara purposif tanpa
membandingkan dengan bahan yang sama dari daerah lain. Daun Afrika diambil
di daerah Galang, Deli Serdang, Sumatera Utara.
3.3.2 Identifikasi tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Medanense, Laboratorium
Herbarium Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam (MIPA) Universitas
Sumatera Utara.
21
3.3.3 Pembuatan simplisia
Bahan baku daun Afrika tua yang masih segar dikumpulkan, dicuci bersih
di bawah air mengalir, ditiriskan, dan ditimbang berat basahnya. Daun Afrika
selanjutnya dikeringkan di lemari pengering hingga kering, kemudian diblender
sampai diperoleh serbuk simplisia, ditimbang berat keringnya dan disimpan dalam
wadah plastik yang tertutup rapat.
3.4 Pembuatan Pereaksi
3.4.1 Pereaksi asam klorida 2 N
Sebanyak 17 ml asam klorida pekat dilarutkan dalam akuades hingga
volume 100 ml (Ditjen POM RI, 1979).
3.4.2 Pereaksi asam sulfat 2 N
Sebanyak 5,4 ml asam sulfat pekat kemudian diencerkan dengan akuades
hingga 100 ml (Ditjen POM RI, 1979).
3.4.3 Pereaksi besi (III) klorida 1%
Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam akuades hingga 100 ml
(Ditjen POM RI, 1995).
3.4.4 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam
akuades, ditambahkan iodium sebanyak 2 g dan dicukupkan dengan akuades
3.4.5 Pereaksi Dragendorff
Campur 20 ml larutan bismut nitrat P 40% dalam asam nitrat P dengan 50
ml larutan kalium iodida P 54,4% hingga memisah sempurna, ambil larutan
jernih, encerkan dengan akuades hingga 100 ml (Ditjen POM RI, 1995).
22
3.4.6 Pereaksi Liebermann-Burchard
Sebanyak 5 ml asam sulfat pekat dicampurkan dengan 50 ml etanol 96%.
Kemudian tambahkan 5 ml asetat anhidrida, dinginkan (Ditjen POM RI,1995).
3.4.7 Pereaksi Mayer
Sebanyak 1,35 g raksa (II) klorida dilarutkan dalam 60 ml akuades. Pada
wadah lain sebanyak 5 g kalium iodida dilarutkan dalam 10 ml akuades, keduanya
dicampurkan, dan ditambahkan akuades hingga 100 ml (Ditjen POM RI, 1995).
3.4.8 Pereaksi Molish
Sebanyak 3 g alfa-naftol ditimbang, kemudian dilarutkan dalam asam
nitrat 0,5 N hingga volume 100 ml (Ditjen POM RI, 1995).
3.4.9 Pereaksi natrium hidroksida 2 N
Sebanyak 8,002 g kristal natrium hidroksida dilarutkan dalam akuades
3.4.10 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M
Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat dilarutkan dalam akuades bebas
karbondioksida hingga 100 ml (Ditjen POM RI, 1995).
3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik,
penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut
etanol, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak larut asam
(Ditjen POM RI, 1995; WHO, 1992).
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk luar,
ukuran, bau, rasa serta warna dari simplisia.
23
3.5.2 Penetapan kadar air
a. Penjenuhan toluen
Toluen sebanyak 200 ml dimasukkan ke dalam labu alas bulat, lalu
ditambahkan 2 ml akuades, kemudian alat dipasang dan dilakukan destilasi
selama 2 jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama ± 30 menit,
kemudian volume air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml.
b. Penetapan kadar air simplisia
Labu berisi toluen tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah
ditimbang seksama, dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen
mendidih, kecepatan toluen diatur 2 tetes per detik sampai sebagian besar air
terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi dinaikkan sampai 4 tetes per detik.
Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen.
Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, tabung penerima dibiarkan mendingin pada
suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan
ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kadar air
yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen
(WHO, 1992).
3.5.3 Penetapan kadar sari larut dalam air
Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan dimaserasi selama 24 jam
dalam 100 ml akuades-kloroform (2,5 ml kloroform dalam akuades sampai 1 L)
dalam labu bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, dibiarkan
selama 18 jam, lalu disaring. 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai kering di
dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara sampai
bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam air dihitung terhadap bahan
yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI, 1995).
24
3.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam etanol
Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan di udara, dimaserasi selama
24 jam dalam 100 ml etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali
selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring
cepat untuk menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan
sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan
dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 1050C sampai bobot tetap. Kadar dalam
persen sari yang larut dalam etanol 96% dihitung terhadap bahan yang telah
dikeringkan di udara (Depkes RI, 1995).
3.5.5 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama
dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian
diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pemijaran dilakukan
pada suhu 600oC selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai
diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan
di udara (Depkes RI, 1995).
3.5.6 Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam
Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25
ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam
dikumpulkan, disaring melalui kertas saring dipijarkan sampai bobot tetap,
kemudian didinginkan, dan ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam
dihitung terhadap bahan yang dikeringkan di udara (Depkes RI, 1995).
25
3.6 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Afrika
Sebanyak 500 g simplisia yang telah diserbukkan dimasukkan ke dalam
wadah tertutup, lalu dimaserasi dengan 3750 ml pelarut etanol 80% selama 5 hari
terlindung dari cahaya matahari sambil sering diaduk, lalu diserkai, diperas
dengan kain flanel. Lalu ampas ditambahkan cairan penyari secukupnya sehingga
diperoleh seluruh sari sebanyak 5000 ml, kemudian didiamkan selama 2 hari dan
dienap tuang. Maserat diuapkan dengan bantuan alat pemutar uap pada temperatur
tidak lebih 40°C dan diperoleh ekstrak kental (Ditjen POM RI, 1979).
3.7 Skrining Fitokimia Ekstrak
Skrining fitokimia ekstrak etanol daun Afrika meliputi pemeriksaan
senyawa alkaloid, glikosida, saponin, flavonoid, tanin dan steroid/triterpenoid
(Depkes RI, 1995; Farnsworth, 1966).
3.7.1 Pemeriksaan alkaloid
Sebanyak 1 g ekstrak etanol daun Afrika ditambahkan 1 ml asam klorida 2
N dan 9 ml akuades, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan
dan disaring. Filtrat dipakai untuk tes alkaloid.
Diambil 3 tabung reaksi, lalu ke dalam masing-masing tabung reaksi
dimasukkan 0,5 ml filtrat. Pada tabung:
a. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat
b. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff
c. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Meyer
Alkaloid disebut positif jika terjadi endapan atau kekeruhan paling sedikit
pada 2 tabung reaksi dari percobaan di atas (Depkes RI, 1995).
26
3.7.2 Pemeriksaan glikosida
Sebanyak 1 g ekstrak etanol daun Afrika disari dengan 30 ml campuran 7
bagian volume etanol 96% dan 3 bagian volume akuades ditambah dengan 10 ml
asam klorida 2 N. Direfluks selama 30 menit, didinginkan, dan disaring. Diambil
20 ml filtrat ditambahkan 25 ml akuades dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M,
dikocok selama 5 menit, dan disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran 3
bagian kloroform dan 2 isopropanol diulang sebanyak tiga kali, lalu diuapkan
pada temperatur tidak lebih dari 500C. Sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol.
Larutan sisa digunakan untuk percobaan berikut, yaitu 0,1 ml larutan sisa
dimasukkan ke dalam tabung reaksi, diuapkan di penangas air. Sisa dilarutkan
dalam 2 ml akuades dan 5 tetes pereaksi Molish, dan ditambahkan 2 ml asam
sulfat pekat. Glikosida positif jika terbentuk cincin ungu (Depkes RI, 1995).
3.7.3 Pemeriksaaan saponin
Sebanyak 0,5 g ekstrak etanol daun Afrika dimasukkan ke dalam tabung
reaksi dan ditambahkan10 ml akuades panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-
kuat selama 10 detik, timbul busa yang mantap tidak kurang dari 10 menit
setinggi 1-10 cm. Ditambahkan 1 tetes larutan asam klorida 2 N, bila buih tidak
hilang menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1995).
3.7.4 Pemeriksaan flavonoid
Sebanyak 0,5 g ekstrak etanol daun Afrika ditambahkan 100 ml air panas,
dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, filtrat yang
diperoleh kemudian diambil 5 ml lalu ditambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 1 ml
asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok, dan dibiarkan memisah.
Flavonoid positif jika terjadi warna merah, kuning, jingga pada lapisan amil
alkohol (Farnsworth, 1966).
27
3.7.5 Pemeriksaan tanin
Sebanyak 1 g ekstrak etanol daun Afrika disari dengan 10 ml akuades,
disaring lalu filtratnya diencerkan dengan akuades sampai tidak berwarna.
Diambil 2 ml larutan lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi besi (III) klorida.
Terjadi warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Ditjen POM
RI, 1979).
3.7.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid
Sebanyak 1 g ekstrak etanol daun Afrika dimaserasi dengan n-heksan
selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa
ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat. Timbul
warna biru atau hijau menunjukkan adanya steroid dan timbul warna merah, pink
atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid (Farnsworth, 1966).
3.8 Sterilisasi Alat dan Bahan
Sterilisasi alat-alat non gelas dan media menggunakan metode sterilisasi
panas basah dengan otoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit dan sterilisasi alat-
alat gelas menggunakan metode sterilisasi panas kering dengan oven pada suhu
170°C selama 2 jam. Jarum ose dipijarkan dengan api bunsen (Pratiwi, 2008).
3.9 Pembuatan Media Untuk Bakteri Uji
3.9.1 Pembuatan media nutrient agar
Komposisi: Peptone 5g
Meat extract 2 g
Agar-agar 12 g
Akuades ad 1L
28
Cara pembuatan : Sebanyak 20 g serbuk NA dilarutkan dalam air suling
hingga 1 liter dengan bantuan pemanasan sampai semua bahan larut sempurna.
Kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
3.9.2 Pembuatan media nutrient broth
Komposisi : Peptone 5g
Meat extract 3 g
Akuades ad 1L
Cara pembuatan : Sebanyak 8 g serbuk NB dilarutkan dalam air suling
hingga 1 liter dengan bantuan pemanasan sampai semua bahan larut sempurna.
Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
3.9.3 Pembuatan agar miring
Ke dalam tabung reaksi yang steril dimasukkan 3 ml media nutrient agar
steril, didiamkan pada temperatur kamar sampai sediaan membeku padaposisi
miring membentuk sudut 45o. Kemudian disimpan dalam lemaripendingin.
3.10 Penyiapan Inokulum
3.10.1 Identifikasi bakteri dengan pengecatan gram
Objek gelas dicuci dengan alkohol lalu difiksasi. Teteskan satu tetes
akuades pada objek gelas lalu satu ose biakan koloni dihomogenkan atau
disuspensikan, ratakan dan keringkan dengan fiksasi. Kemudian tambahkan satu
tetes gentian violet lalu tambahkan satu tetes larutan lugol, ratakan lalu keringkan
dengan cara fiksasi. Dicuci objek gelas dengan alkohol 70% sampai tetesan
terakhir tidak berwarna, keringkan. Kemudian tetesi satu tetes safranin, biarkan
15-30 detik, cuci larutan safranin dengan akuades steril, keringkan. Tetesi minyak
emersi (imersi oil). Lihat pada mikroskop dengan perbesaran 100 kali. Lihat
29
warna dan bentuk dari bakteri (Pratiwi, 2008). Identifikasi ini dilakukan dengan
menggunakan bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans.
3.10.2 Pembuatan stok kultur bakteri uji
Cara kerja: Biakan bakteri Staphylococcus aureus dari strain utama
diambil dengan jarum ose steril lalu diinokulasikan pada permukaan media
nutrient agar miring, kemudian diinkubasikan pada suhu 35 ± 2oC selama 18 jam
dan dengan cara yang sama dibuat stok kultur bakteri Streptococcus mutans.
3.10.3 Pembuatan suspensi standar Mc. Farland
Suspensi standar yang menunjukkan konsentrasi kekeruhan suspensi
bakteri sama dengan 1,5 x 108 CFU/ml.
Komposisi: Larutan BaCl2 1,175% 0,50 ml
Larutan H2SO4 1% 99,5 ml
Cara pembuatan: Dicampurkan kedua larutan ke dalam tabung reaksi, dikocok
sampai homogen dan ditutup. Apabila kekeruhan hasil suspensi bakteri sama
dengan kekeruhan suspensi standar berarti konsentrasi bakteri 1,5 x 108 CFU/ml.
3.10.4 Pembuatan inokulum bakteri uji
Cara kerja: Biakan bakteri Staphylococcus aureus diambil dari stok kultur
diambil menggunakan jarum ose steril kemudian disuspensikan ke dalam 10 ml
larutan nutrient broth steril lalu diinkubasikan pada suhu 35 ± 2oC hingga
diperoleh kekeruhan larutan dengan suspensi standar Mc. Farland yang berarti
konsentrasi suspensi bakteri adalah 1,5 x 108 CFU/ml, lalu dilakukan pengenceran
dengan memipet 0,1 ml biakan bakteri (1,5 x 108 CFU/ml), dimasukkan ke dalam
tabung reaksi steril yang berisi 9,9 ml larutan nutrient broth lalu kocok homogen,
maka diperoleh suspensi bakteri dengan konsentrasi 1,5 x 106 CFU/ml, dan
dengan cara yang sama dibuat inokulum bakteri Streptococcus mutans.
30
3.11 Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol Daun Afrika
Ekstrak etanol daun Afrika ditimbang 4 g, dilarutkan dengan dimetil
sulfoksida (DMSO) hingga 8 ml, sehingga diperoleh konsentrasi ekstrak 500
mg/ml, kemudian dibuat pengenceran selanjutnya sampai diperoleh ekstrak
dengan konsentrasi 400 mg/ml; 300 mg/ml; 200 mg/ml; 100 mg/ml; 90 mg/ml; 80
mg/ml; 70 mg/ml; 60 mg/ml; 50 mg/ml; 40 mg/ml; 30 mg/ml; 20 mg/ml; dan 10
mg/ml.
3.12 Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan terhadap bakteri Staphylococcus
aureus dan Streptococcus mutans dengan menggunakan berbagai konsentrasi
dariekstrak etanol daun Afrika. Pengujian ini dilakukan dengan metode difusi
agar.
3.12.1 Bakteri Staphylococcus aureus
Sebanyak 0,1 ml inokulum bakteri Staphylococcus aureus dimasukkan ke
dalam cawan petri steril, setelah itu dituang media nutrient agar sebanyak 15 ml
dengan suhu 45 – 50oC. Selanjutnya cawan digoyang di atas permukaan meja
laminar airflow cabinet, agar media dan suspensi bakteri tercampur rata.
Selanjutnya pencadang kertas ditetesi dengan larutan uji ekstrak etanol daun
Afrika sebanyak 0,1 ml diletakkan pada permukaan media yang telah padat,
kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 35 ± 2oC selama 18 jam, setelah
itu diukur diameter daerah hambatan (zona jernih) pertumbuhan di sekitar
pencadang dengan menggunakan jangka sorong (Ditjen POM RI, 1995),
kemudian ditentukan konsentrasi terkecil yang mampu menghambat bakteri yang
31
iinokulasikan dengan terbentuknya zona bening di sekitar pencadang kertas yang
disebut dengan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM).
3.12.2 Bakteri Steptococcus mutans
Sebanyak 0,1 ml inokulum bakteri Streptococcus mutans dimasukkan ke
dalam cawan petri steril, setelah itu dituang media nutrient agar sebanyak 15 ml
dengan suhu 45–50oC. Selanjutnya cawan digoyang di atas permukaan meja
laminar airflow cabinet, agar media dan suspensi bakteri tercampur rata.
Selanjutnya pencadang kertas ditetesi dengan larutan uji ekstrak etanol daun
Afrika sebanyak 0,1 ml diletakkan pada permukaan media yang telah padat,
pencadang dengan menggunakan jangka sorong (Ditjen POM RI, 1995),
kemudian ditentukan konsentrasi terkecil yang mampu menghambat bakteri yang
diinokulasikan dengan terbentuknya zona bening di sekitar pencadang kertas yang
3.13 Pembuatan Formula Sediaan
Formula sediaan obat kumur-kumur menurut Zhang, dkk., (2005) terdiri
dari Ornidazole 0,5% (bahan aktif), Tween 80 0,2% (surfaktan), mentol 0.02%
(koringen odoris), dan akuades (pelarut).
Tabel 3.1 Komposisi formula sediaan obat kumur
Bahan Blanko F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7
Ekstrak etanol daun 0% 1% 2% 3% 4% 5% 7% 9%
Afrika
Sakarin 0,1% 0,1% 0,1% 0,1% 0,1% 0,1% 0,1% 0,1%
Tween 80 0,5% 0,5% 0,5% 0,5% 0,5% 0,5% 0,5% 0,5%
Peppermint Oil 1% 1% 1% 1% 1% 1% 1% 1%
Akuades ad (ml) 50 50 50 50 50 50 50 50
32
Keterangan: F = Formula
3.14 Cara Pembuatan Sediaan
Dikalibrasi wadah. Ekstrak etanol daun Afrika dilarutkan terlebih dahulu
dengan akuades. Kemudian disuspensikan ke dalam bentuk suspensi dengan
penabahan tween 80. Lalu ditambahkan peppermint oil dan sakarin, diaduk
hingga homogen, dan diaduk hingga larut lalu ditambahkan akuades sampai
volume sediaan 50 ml.
3.15 Evaluasi Sediaan
Meliputi evaluasi fisik dan biologi. Evaluasi fisik meliputi pemeriksaan
stabilitas sediaan dan penentuan pH. Evaluasi biologi meliputi penentuan aktivitas
antibakteri dari sediaan obat kumur ekstrak etanol daun Afrika terhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans (bakteri isolasi dari specimen)
dengan metode difusi agar.
3.15.1 Pemeriksaan stabilitas sediaan
Meliputi bentuk, warna dan bau yang diamati secara visual (Ditjen POM
RI, 1995). Sediaan dinyatakan stabil apabila warna, bau, dan penampilan tidak
berubah secara visual selama penyimpanan. Pengamatan dilakukan pada suhu
kamar pada minggu ke 0, 1, 2, 3, 4, 8, dan minggu ke 12.
3.15.2 Pemeriksaan pH sediaan
Pemeriksaan pH sediaan dilakukan dengan menggunakan pH meter.
Cara: Alat terlebih dahulu dikalibrasi dengan menggunakan larutan dapar
standar pH netral (pH 7,0) dan larutan dapar pH asam (pH 4,0) hingga alat
menunjukkan harga pH tersebut. Kemudian elektroda dicuci dengan akuades, lalu
dikeringkan dengan kertas tisu. Elektroda dicelupkan dalam larutan obat kumur
33
tersebut. Dibiarkan alat menunjukkan harga pH konstan. Angka yang ditunjukkan
pH meter merupakan harga pH sediaan (Rawlins, 2003). Pengamatan dilakukan
pada suhu kamar pada minggu ke 0, 1, 2, 3, 4, 8, dan minggu ke 12.
3.15.3 Uji mikrobiologi sediaan
Uji ini digunakan untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari sediaan obat
kumur ekstrak etanol daun Afrika dengan metode difusi agar, dengan cara
mengukur diameter hambatan pertumbuhan bakteri terhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans (bakteri isolasi dari specimen).
Pengamatan dilakukan pada minggu ke 0, 4, 8, dan minggu ke 12.
3.15.3.1 Bakteri Staphylococcus aureus
Cawan petri dimasukkan 0,1 ml inokulum bakteri Staphylococcus
aureus, kemudian ditambahkan 15 ml media nutrient agar steril yang telah
dicairkan dan ditunggu hingga suhu mencapai 45oC, dihomogenkan dan dibiarkan
sampai media memadat. Selanjutnya pencadang kertas ditetesi dengan larutan
sediaan obat kumur sebanyak 0,1 ml diletakkan pada permukaan media yang telah
padat, kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 35 ± 2oC selama 18 jam,
setelah itu diukur diameter daerah hambatan (zona jernih) pertumbuhan di sekitar
pencadang dengan menggunakan jangka sorong. Pengujian dilakukan sebanyak 3
kali. Dilakukan pengujian terhadap blanko (Ditjen POM RI, 1995), kemudian
ditentukan konsentrasi terkecil yang mampu menghambat bakteri yang
3.15.3.2 Bakteri Streptococcus mutans
34
Cawan petri dimasukkan 0,1 ml inokulum bakteri Streptococcus mutans,
kemudian ditambahkan 15 ml media nutrient agar steril yang telah dicairkan dan
ditunggu hingga suhu mencapai 45oC, dihomogenkan dan dibiarkan sampai media
memadat. Selanjutnya pencadang kertas ditetesi dengan larutan sediaan obat
kumur sebanyak 0,1 ml diletakkan pada permukaan media yang telah padat,
pencadang dengan menggunakan jangka sorong. Pengujian dilakukan sebanyak 3
kali. Dilakukan pengujian terhadap blanko (Ditjen POM RI, 1995), kemudian
ditentukan konsentrasi terkecil yang mampu menghambat bakteri yang
35
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakukan di Herbarium Medanense,
Laboratorium Herbarium Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
(MIPA) Universitas Sumatera Utara menunjukkan bahwa tumbuhan yang
digunakan dalam penelitian ini adalah tumbuhan daun Afrika
(Vernoniaamygdalina Delile) suku Asteraceae dapat dilihat pada Lampiran 1,
halaman 54.
4.2 Hasil Karakterisasi Daun Afrika
4.2.1 Hasil pemeriksaan makroskopik
Hasil pemeriksaan makroskopik dari daun Afrika segar yaitu bentuk daun
oval-elips, ujung dan pangkal daun meruncing, susunan tulang daun menyirip,
tepi daun bergerigi dan kasar, permukaan berambut sangat halus, panjang 15 cm -
19 cm, lebar 5 cm - 8 cm, berwarna hijau muda dan rasanya pahit, dan diikuti rasa
manis. Gambar selengkapnya dapat dilihat pada Lampiran 3, halaman 58.
Simplisia daun Afrika dicirikan dengan daun berwarna hijau kecoklatan, panjang
12 cm - 16 cm, lebar 3,5 cm - 5 cm, rasa pahit, dan berbau khas. Serbuk simplisia
berwarna hijau kecoklatan dan berbau khas. Gambar selengkapnya dapat dilihat
pada Lampiran 4, halaman 59.
4.2.2 Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia
36
Pemeriksaan ini meliputi pemeriksaan kadar air, kadar sari larut air, kadar
sari larut etanol, kadar abu total, dan kadar abu yang tidak larut asam pada serbuk
simplisia daun Afrika dapat dilihat pada Tabel 4.1.
Tabel 4.1 Data karakterisasi simplisia daun Afrika
No Parameter Simplisia
1 Kadar air (%) 7,87
2 Kadar sari yang larut dalam air (%) 24,99
3 Kadar sari yang larut dalam etanol (%) 16,22
4 Kadar abu total (%) 9,79
5 Kadar abu yang tidak larut dalam asam (%) 0,64
Hasil karakterisasi simplisia daun Afrika menunjukkan hasil penetapan
kadar air diperoleh lebih kecil dari 10% yaitu 7,87%. Persyaratan kadar air
simplisia daun Afrika tidak ditetapkan Materia Medika Indonesia. Namun, kadar
air yang melebihi 10% dapat menjadi media yang baik untuk pertumbuhan
mikroba, keberadaan jamur atau serangga, serta mendorong kerusakan karena
terjadi proses hidrolisis (Trease, 1983; WHO, 1992).
Penetapan kadar sari dilakukan menggunakan dua pelarut, yaitu air dan etanol.
Penetapan kadar sari larut air adalah untuk mengetahui kadar senyawa kimia
bersifat polar yang terkandung di dalam simplisia, sedangkan kadar sari larut
dalam etanol dilakukan untuk mengetahui kadar senyawa larut dalam etanol, baik
senyawa polar maupun non polar.
Hasil karakterisasi simplisia daun Afrika menunjukkan kadar sari yang
larut dalam air sebesar 24,99%; sedangkan kadar sari yang larut dalam etanol
sebesar 16,22%. Kadar sari yang larut dalam air lebih besar dari kadar sari yang
larut dalam etanol karena senyawa bersifat polar lebih banyak larut di dalam
pelarut air dari etanol, dan senyawa yang tidak larut dalam pelarut air akan larut di
dalam pelarut etanol. Air dapat melarutkan zat lain yang tidak diperlukan seperti
37
gom, pati, protein, lemak, lendir dan lain-lain, hal ini yang menyebabkan
tingginya kadar sari yang larut dalam air dari tanaman yang dilarutkan (Depkes
RI, 1995).
Penetapan kadar abu dimaksudkan untuk mengetahui kandungan mineral
internal (abu fisiologis) yang berasal dari jaringan tanaman itu sendiri, dan
eksternal (abu non-fisiologis) yang merupakan residu dari luar seperti pasir dan
tanah yang terdapat di dalam sampel (Ditjen POM RI, 2000; WHO, 1992). Kadar
abu tidak larut asam untuk menunjukkan jumlah silikat, khususnya pasir yang ada
pada simplisia dengan cara melarutkan abu total dalam asam klorida (WHO,
1992).
Penetapan kadar abu pada simplisia daun Afrika menunjukkan kadar abu
total sebesar 9,79% dan kadar abu tidak larut dalam asam sebesar 0,64%. Kadar
abu total pada umumnya untuk masing-masing simplisia tidak sama. Umumnya
syarat kadar abu tidak larut dalam asam < 1%, dan memenuhi persyaratan.
Monografi simplisia daun Afrika tidak terdaftar di buku Materia Medika
Indonesia (MMI), sehingga perlu dilakukan pembakuan secara nasional mengenai
parameter karakterisasi simplisia daun Afrika. Hasil perhitungan pemeriksaan
karakteristik serbuk simplisia daun Afrika dapat terlihat pada Lampiran 5-9,
halaman 60-64.
4.3 Hasil Ekstraksi Serbuk Simplisia Daun Afrika
Hasil ekstraksi 500 g serbuk simplisia daun Afrika dengan metode
maserasi menggunakan pelarut etanol 80 % dipekatkan dengan menggunakan alat
pemutar uapdiperoleh ekstrak kental 57,3 g (rendemen 11,46%).
38
4.4 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Afrika
Penentuan golongan senyawa kimia dari ekstrak etanol daun Afrika
dilakukan untuk mendapatkan informasi golongan senyawa metabolit sekunder
yang terdapat di dalamnya. Adapun pemeriksaan yang dilakukan terhadap ekstrak
etanol daun Afrika adalah pemeriksaan golongan senyawa alkaloid, glikosida,
saponin, tanin, flavonoid, dan steroid/triterpenoid. Hasil skrining dapat dilihat
pada Tabel 4.2 berikut ini.
Tabel 4.2 Data hasil skrining fitokimia ekstrak etanol daun Afrika
No Pemeriksaan Hasil Skrining Ekstrak

1 Alkaloida -
2 Glikosida +
3 Saponin +
4 Tanin +
5 Flavonoida +
6 Steroida/ Triterpenoida +
Keterangan: + = mengandung senyawa yang diperiksa

- = tidak mengandung senyawa yang diperiksa
Pada Tabel 4.2 menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Afrika memiliki
kandungan senyawa kimia yaitu glikosida, saponin, tanin, flavonoid, dan
steroid/triterpenoid. Senyawa-senyawa tersebut tertarik disebabkan oleh sifat
etanol yang memiliki gugus hidroksil polar dan gugus alkil yang bersifat nonpolar
(Wilbraham dan Matta, 1992). Menurut Robinson (1995), senyawa flavonoida,
saponin dan steroida/triterpenoid merupakan senyawa kimia yang memiliki
potensi sebagai antibakteri dan antivirus.
Senyawa fenol dan turunannya (flavonoid) merupakan salah satu
antibakteri yang bekerja dengan mengganggu fungsi membran sitoplasma. Pada
konsentrasi rendah dapat merusak membran sitoplasma yang menyebabkan
bocornya metabolit penting yang menginaktifkan sistem enzim bakteri, sedangkan
39
pada konsentrasi tinggi mampu merusak membran sitoplasma dan mengendapkan
protein sel (Volk dan Wheller, 1993).
Senyawa saponin yang bersifat detergen bekerja dengan membentuk suatu
kompleks dengan sterol yang terdapat pada membran, sehingga menyebabkan
kerusakan membran (Barile, et al., 2006). Rusaknya membran sel bakteri
mengakibatkan membran plasma pecah, sel kehilangan sitoplasma, transport zat
terganggu, dan metabolisme terhambat sehingga bakteri mengalami hambatan
pertumbuhan bahkan kematian sehingga menyebabkan sel bakteri lisis (Tortora,
dkk., 2004). Kandungan tanin mampu mengurangi perlekatan bakteri pada
permukaan gigi dengan menghambat enzim glukosiltransferase (GTF) yang
diproduksi oleh Streptococcus mutans (Nuria, dkk., 2009).
4.5 Hasil Identifikasi Bakteri Dengan Menggunakan Pengecatan Gram
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif terlihat bentuk
kokus ukurannya 0,8-1,0 µm dengan diameter 0,7-0,9 mikron. Bakteri ini tumbuh
secara anaerobik fakultatif dengan membentuk kumpulan sel-sel yang bentuknya
seperti buah anggur tidak bergerak ditemukan satu-satu, berpasangan berantai
pendek atau bergerombol menyerupai buah anggur. Gambar selengkapnya dapat
dilihat pada Lampiran 10, halaman 65.
Streptococcus mutans merupakan bakteri Gram positif (+), bersifat non
motil (tidak bergerak), berdiameter 1-2 μm, bakteri anaerob fakultatif. Memiliki
bentuk bulat atau bulat telur, tersusun seperti rantai dan tidak membentuk spora.
Gambar selengkapnya dapat dilihat pada Lampiran 11, halaman 65.
Bakteri yang tetap berwarna ungu digolongkan ke dalam Gram positif,
sedangkan bakteri yang berwarna merah digolongkan ke dalam Gram negatif.
40
Perbedaan warna antara bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif disebabkan
oleh adanya perbedaan struktur pada dinding selnya. Dinding bakteri Gram positif
banyak mengandung peptidoglikan, sedangkan dinding bakteri Gram negatif
banyak mengandung lipoposakarida (Pratiwi, 2008).
4.6 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Afrika
Hasil pengukuran diameter daerah hambat ekstrak etanol daun Afrika dapat dilihat
pada Tabel 4.3 berikut ini.
Tabel 4.3 Data hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan

bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans oleh ekstrak etanol daun
Afrika
Konsentrasi Diameter daerah hambatan (mm)*

Ekstrak Etanol Staphylococcus aureus Streptococcus mutans
(mg/ml)
500 14,70 14,40
400 13,46 13,13
300 12,73 11,83
200 11,43 10,76
100 10,26 10,16
90 8,53 8,43
80 7,70 7,56
70 7,30 7,16
60 6,80 6,67
50 6,63 6,47
40 6,53 6,33
30 6,26 6,20
20 - -
10 - -
Blanko - -
Keterangan: * = hasil rata-rata tiga kali pengukuran

- = tidak ada hambatan
Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun
Afrika dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan
Streptococcus mutans. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak akan menghasilkan
diameter daerah hambat yang semakin besar. Metode yang digunakan pada
penelitian ini adalah metode difusi agaryaitu mengukur diameter zona hambat
41
pertumbuhan bakteri di sekitarpencadang kertas. Diameter zona hambat akan
meningkat seiring denganpeningkatan konsentrasi ekstrak. Aktivitas antibakteri
dapat disebabkan adanyakandungan senyawa kimia yaitu flavonoid, tanin, saponin
dansteroid/triterpenoid.
Ekstrak etanol daun Afrika dengan konsentrasi 500 mg/ml tidak
dimungkinkan untuk dijadikan dosis atau konsentrasi terapi dalam pencegahan
karies gigi karena ekstrak etanol daun Afrka dengan konsentrasi 500 mg/ml
bersifat sangat iritatif yang dikhawatirkan saat pengaplikasian akan mengiritasi
bagian mulut lainnya misalnya gusi, bibir dan lidah, maka dilakukan penurunan
konsentrasi ekstrak untuk meminimalkan iritasi. Selain itu, penurunan konsentrasi
ekstrak bertujuan untuk efisiensi bahan ekstrak saat pengolahan. Pemeriksaan
dilakukan pada uji aktivitas bakteri pada konsentrasi 500, 400, 300, 200, 100, 90,
80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 mg/ml.
Pada konsentrasi 500, 400, 300, 200, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, dan 30
mg/ml ekstrak etanol daun Afrika memiliki daya antibakteri dengan adanya zona
jernih di sekitar pencadang kertas. Diperoleh data bahwa konsentrasi 30 mg/ml
merupakan konsentrasi terkecil yang masih dapat membentuk zona hambat
pertumbuhan bakteri. Menurut Greenwood (1995), mengemukakan bahwa
ketentuan kekuatan antibakteri adalah daerah hambatan 20 mm atau lebih berarti
sangat kuat, daerah hambatan 10-20 mm berarti kuat, 5-10 mm berarti sedang dan
daerah hambatan 5 mm atau kurang berarti lemah. Hal ini dapat disimpulkan
bahwa diameter hambat yang didapat dari hasil penelitian ini ekstrak etanol daun
Afrika termasuk dalam kategori kuat dan sedang. Penentuan daya antibakteri
suatu tumbuhan dilakukan dengan menentukan konsentrasi hambat minimumnya
42
(Dzulkarnain, dkk., 1996). Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun
Afrika dapat dilihat Lampiran 12-14, halaman 66-68.
4.7 Hasil Pembuatan Formula Sediaan
Ekstrak etanol daun Afrika dijadikan sebagai bahan aktif dalam formulasi
sediaan obat kumur sebab kemampuan dari ekstrak tersebut yang dapat
menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans. Bentuk
sediaan yang dihasilkan berbentuk suspensi yaitu sediaan cair yang mengandung
partikel padat tidak larut yang terdispersi dalam fase cair dikarenakan ekstrak
etanol daun Afrika tidak larut sempurna dalam akuades. Formula sediaan
menggunakan surfaktan tween 80 0,5% sebagai solubilizing agent yaitu
melarutkan kedua fase yaitu fase minyak dan fase air. Uji orientasi yang
digunakan pada formula sediaan obat kumur ekstrak etanol daun Afrika dengan
konsentrasi antara 0,1-1%. Pada hasil uji orientasi, konsentrasi 0,5% dari tween
80 merupakan konsentrasi yang terbaik karena pada sediaan tersebut diperoleh
suspensi yang tersebut dan tidak terjadi pemisahan antara fase air dan fase minyak
selama penyimpanan. Penambahan sakarin sebagai koringensia saporis digunakan
untuk menutupi rasa pahit dari ekstrak etanol daun Afrika. Dan penambahan
peppermint oil ke dalam sediaan digunakan sebagai koringensia odoris yaitu
pemberi aroma yang digunakan untuk memberikan aroma mint pada sediaan.
Konsentrasi 1% yang digunakan pada peppermint oil merupakan konsentrasi
terbaik yang dapat memberikan aroma yang menyegarkan dan melegakan
tenggorokan.
43
4.8 Hasil Evaluasi Sediaan
4.8.1 Hasil pemeriksaan stabilitas sediaan
Hasil pemeriksaan stabilitas sediaan meliputi pengamatan perubahan bentuk,
warna, dan bau sediaan dapat dilihat pada Tabel 4.4 berikut ini.
Tabel 4.4 Data hasil pemeriksaan stabilitas sediaan
Lama Pengamatan (minggu)

Pengamatan Sediaan
0 1 2 3 4 8 12
F1 b b b b b b b
F2 b b b b b b b
F3 b b b b b b b
F4 b b b b b b b
Bentuk
F5 b b b b b b b
F6 b b b b b b b
F7 b b b b b b b
Blanko b b b b b b b
F1 hl hl hl hl hl hl hl
F2 hcm hcm hcm hcm hcm hcm hcm
F3 hct hct hct hct hct hct hct
Warna
F7 hk hk hk hk hk hk hk
Blanko p p p p p p p
F1 bp bp bp bp bp bp bp
Bau
Blanko bp bp bp bp bp bp bp
Keterangan: F1 : sediaan obat kumur dengan ekstrak etanol daun Afrika 1%

F2 : sediaan obat kumur dengan ekstrak etanol daun Afrika 2%
Blanko : sediaan obat kumur tanpa ekstrak etanol daun Afrika
b : baik
hl : hijau lumut
hcm : hijau coklat muda
hct : hijau coklat tua
hk : hijau kehitaman
44
p : putih
bp : bau peppermint oil
Hasil uji stabilitas sediaan obat kumur menunjukkan bahwa seluruh
sediaan yang dibuat tetap stabil dalam penyimpanan pada suhu kamar selama 12
minggu meliputi perubahan bentuk, warna, dan bau sediaan. Dari hasil
pengamatan, didapatkan hasil bahwa seluruh sediaan obat kumur yang didapat
memiliki bentuk dan konsistensi yang baik. Warna obat kumur yang dihasilkan
akan semakin pekat dengan kenaikan konsentrasi. Obat kumur dengan konsentrasi
ekstrak etanol daun Afrika 1% memberikan warna hijau lumut, konsentrasi 2%
memberikan warna hijau coklat muda, konsentrasi 3%, 4%, 5%, 7% memberikan
warna hijau coklat tua, sedangkan konsentrasi 9% memberikan warna hijau
kehitaman. Bau yang dihasilkan dari seluruh sediaan obat kumur adalah bau khas
dari bahan tambahan yang digunakan yaitu bau peppermint oil. Bau sediaan tetap
stabil dalam penyimpanan selama 12 minggu pada suhu kamar. Hasil pemeriksaan
stabilitas sediaan dapat dilihat pada Lampiran 15, halaman 69.
4.8.2 Hasil pemeriksaan pH sediaan
Hasil pemeriksaan pH sediaan dengan lama pengamatan selama 12
minggu dapat dilihat pada Tabel 4.5 berikut ini.
Tabel 4.5 Data hasil pemeriksaan pH sediaan
Lama Pengamatan (Minggu)

Pengamatan Sediaan
0 1 2 3 4 8 12
F1 5,2 5,4 5,6 6,1 6,6 6,9 7,0
F2 5,0 5,3 5,4 6,3 6,5 6,8 6,9
F3 5,2 5,4 5,8 5,8 6,0 6,3 6,3
F4 4,9 5,4 5,8 5,8 5,8 6,0 6,1
pH
F5 5,1 5,3 5,8 6,3 6,3 6,4 6,5
F6 4,9 5,3 6,4 6,6 6,6 6,7 6,8
F7 4,8 5,3 5,9 6,6 6,7 6,7 6,9
Blanko 6,6 6,1 6,1 6,0 6,0 5,7 5,9
45
Hasil pemeriksaan pH sediaan menunjukkan bahwa sediaan blanko tanpa
ekstrak etanol daun Afrika adalah 5,7-6,6 sedangkan sediaan yang dibuat dengan
menggunakan ekstrak etanol daun Afrika dengan beragam konsentrasi
menunjukkan pH yang cukup beragam mulai dari 4,8-7,0. Nilai pH sediaan untuk
mulut umumnya antara 4,5 hingga sekitar 9 atau 10 dan lebih baik sekitar 6,5
hingga 7,5 atau 8; sedangkan pH dari saliva bervariasi dimana pH normal antara
5,6 dan 7,6 dengan pH rata-rata 6,75 (Lucida, 2006).
Perubahan pH yang terjadi pada sediaan obat kumur menyebabkan pH
sediaan meningkat pada penyimpanan selama 12 minggu. Senyawa yang terdapat
di dalam sediaan terurai dan menyebabkan pH sediaan menjadi meningkat.
Sediaan yang disimpan dalam jangka waktu yang lama dapat mengalami
penguraian dan mengakibatkan hasil urai dari zat yang terdapat dalam ekstrak.
Peningkatan pH yang tidak signifikan terjadi setiap minggunya namun masih
berada dalam rentang pH yang sesuai persyaratan pH sediaan obat kumur pada
SNI 12-3524-1995 yaitu 4,5-10,5.
Stabilitas produk obat dibagi menjadi stabilitas secara kimia dan stabilitas
secara fisika. Faktor-faktor fisika seperti panas, cahaya, dan kelembaban, mungkin
akan menyebabkan atau mempercepat reaksi kimia, maka setiap menentukan
stabilitas kimia, stabilitas fisika juga harus ditentukan (Vadas, 2000).
Pengumpulan dan pengolahan data merupakan langkah menentukan baik
buruknya sediaan yang dihasilkan, meskipun tidak menutup kemungkinan adanya
parameter lain yang harus diperhatikan. Data yang harus dikumpulkan untuk jenis
sediaan yang berbeda tidak sama, begitu juga untuk jenis sediaan sama tetapi cara
pemberiannya lain. Jadi sangat bervariasi tergantung pada jenis sediaan, cara
pemberian, stabilitas zat aktif, dan lain-lain (Attwood dan Florence, 1988).
46
4.8.3 Hasil uji mikrobiologi sediaan
Uji mikrobiologi sediaan obat kumur ekstrak etanol daun Afrika dilakukan
pada semua formula dengan metode difusi agarterhadap bakteri Staphylococcus
aureus dan Streptococcus mutans. Hasil dapat dilihat pada Tabel 4.6 berikut ini.
Tabel 4.6 Data hasil uji aktivitas antibakteri obat kumur ekstrak etanol daun
Afrika terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus
mutans
Diameter daerah hambatan (mm)*

Sediaan
Minggu ke- Minggu ke- Minggu ke- Minggu ke-
0 12 0 12
F1 - - - -
F2 - - - -
F3 6,26 6,23 6,23 6,20
F4 6,53 6,50 6,40 6,33
F5 6,76 6,63 6,56 6,46
F6 7,36 7,26 7,23 7,16
F7 8,36 8,30 8,30 8,16
Blanko - - - -
Keterangan: * : hasil rata-rata tiga kali pengukuran

- : tidak ada hambatan
Pengujian sediaan obat kumur dari ekstrak etanol daun Afrika pada F1, F2,
F3, F4, F5, F6, dan F7 memberikan hasil diameter zona hambatan yang sama
dengan zona hambat pada pengukuran diameter hambatan pertumbuhan
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans oleh ekstrak etanol daun Afrika.
Hal ini berarti setelah diformulasikan dengan menggunakan KHM sediaan obat
kumur dari ekstrak etanol daun Afrika masih memiliki aktivitas daya antibakteri.
Perbedaan zona hambat pada pengukuran diameter hambatan pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus dengan bakteri Streptococcus mutans yang cukup kecil
disebabkan karena bakteri Streptococcus mutans mepunyai dua enzim
ekstraseluler yang disebut glukosiltransferase dan fruktosiltransferase yang dapat
47
ditemukan di permukaan dinding sel bakteri yang menyebabkan bakteri ini lebih
susah untuk dihambat pertumbuhannya.
Menurut Greenwood (1995), mengemukakan bahwa ketentuan kekuatan
antibakteri adalah daerah hambatan 20 mm atau lebih berarti sangat kuat, daerah
hambatan 10-20 mm berarti kuat, 5-10 mm berarti sedang dan daerah hambatan 5
mm atau kurang berarti lemah. Dari ketentuan tesebut, didapatlah bahwa sediaan
obat kumur dari ekstrak etanol daun Afrika memiliki kekuatan antibakteri yang
sedang. Konsentrasi hambat minimum merupakan konsentrasi terendah dari
senyawa antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan mikrobia uji
(Cappuccino dan Sherman, 2011).
Data lengkap hasil uji aktivitas antibakteri obat kumur ekstrak etanol daun
Afrika dapat dilihat pada Lampiran 16-21, halaman 70-75 dan perbandingan
daerah hambatan ekstrak etanol daun Afrika dan obat kumur ekstrak etanol daun
Afrika dapat dilihat pada Lampiran 22, halaman 76.
48
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Hasil penelitian yang dilakukan terhadap ekstrak dan sediaan obat kumur
ekstrak etanol daun Afrika (Vernonia amygdalina Delile.) diperoleh kesimpulan:
a. Ekstrak etanol daun Afrika dapat diformulasi menjadi sediaan obat kumur.
b. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun Afrika yang diformulasikan
menjadi sediaan obat kumur dengan nilai KHM sebagai parameter uji pada
minggu ke-12 selama penyimpanan menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans pada konsentrasi 3%
dengan diameter berturut-turut 6,23 mm dan 6,20 mm.
c. Ekstrak etanol daun Afrika dan sediaan obat kumur dari ekstrak etanol daun
Afrika mempunyai aktivitas antibakteri yang sama yang tergolong kategori
sedang dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan
Streptococcus mutans.
5.2 Saran
Disarankan kepada peneliti selanjutnya dapat membandingkan aktivitas
antibakteri sediaan obat kumur dari ekstrak etanol daun Afrika dengan obat kumur
yang ada di pasaran yang umum digunakan.
49
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tumbuhan Daun Afrika
2.1.1 Morfologi tumbuhan
Vernonia amygdalina Delile. atau Daun Afrika termasuk ke dalam suku
Asteraceae dan biasanya disebut sebagai bitter leaf (daun pahit). Daun Afrika
banyak tumbuh di benua Afrika bagian barat terutama di Nigeria dan negara yang
beriklim tropis salah satunya adalah Indonesia (Ibrahim, dkk., 2004).Tumbuhan
ini dapat ditemukan di halaman rumah, sepanjang sungai dan danau, di tepi hutan,
dan di padang rumput (Yeap, dkk., 2010).Daun Afrika mempunyai ciri-ciri
morfologi sebagai berikut: Batang tegak, tinggi 1-3 m, bulat, berkayu, berwarna
coklat, daun majemuk, anak daun berhadapan, panjang 15-25 cm, lebar 5-8 cm,
tebal 7-10 mm, daun berbentuk seperti ujung tombak, tepi bergerigi, ujung
runcing, pangkal membulat, pertulangan menyirip, berwarna hijau tua, rasanya
yang pahit, dan akar tunggang yang berwarna coklat kotor dengan bau yang khas
(Ibrahim, dkk., 2004; Ijeh, 2010).
2.1.2 Nama daerah
Daun Afrika memiliki nama lain di negara-negara lain seperti bitter leaf
(daun pahit) di Nigeria, Shiwaka di Nigeria bagian Utara, Grawa di Amharic,
Etidot di Ibibio, Ewuro di Yoruba, Onugbu di Igbo, Oriwo di Edo, Chusar-doki di
Hausa Shiwaka (Ijeh, 2010), Nan Fei Shu di Cina, dan daun Kupu-kupu di
Malaysia (Anonim, 2010). Daun Afrika juga memiliki nama daerah tersendiri di
negara Indonesia seperti daun pahit di pulau Jawa dan daun insulin di kota Padang
(Anonim, 2010).
7
2.1.3 Sistematika tumbuhan
Berikut adalah sistematika tumbuhan (Ibrahim, dkk., 2004):
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledoneae
Bangsa : Asterales
Suku : Asteraceae
Marga : Vernonia
Spesies : Vernonia amygdalina Delile.
2.1.4 Kandungan Tumbuhan
Hasil penelitian (Ijeh, 2010) menunjukkan bahwa tanaman daun Afrika
banyak mengandung nutrisi dan senyawa kimia, antara lain adalah sebagai
berikut: protein 9,7%, serat 16,8%, karbohidrat 68,4%, lemak 4,7%, asam
askorbat 166,5 mg/100 g, karotenoid 30 mg/100 g, kalsium 0,97 g/ 100 g, besi 7,5
mg/100 g, fosfor, kalium, sulfur, natrium, mangan, tembaga, zink, magnesium,
dan selenium. Senyawa kimia yang terkandung dalam daun Afrika antara lain:
saponin (vernoniosida dan steroid saponin), seskuiterpen lakton (vernolida,
vernodalol, vernolepin, vernodalin, dan vernomygdin), flavonoid, koumarin, asam
fenolat, lignan, xanton, terpen, peptida, dan luteolin.
2.1.5 Khasiat tumbuhan
Ekstrak daun Afrika memiliki aktivitas antibakteri yang mampu
membunuh bakteri Gram positif dan Gram negatif. Penelitian terhadap aktivitas
antibakteri ekstrak daun Afrika yang dilakukan oleh Sharma dan Smita (2010)
menunjukkan hasil yang positif terhadap bakteri Staphylococcus aureus,
8
Streptococcus mutans, dan Lactobacillus acidophilus. Daun Afrika telah banyak
digunakan untuk obat-obatan dan telah banyak penelitian yang telah dilakukan
untuk tumbuhan tersebut seperti antijamur (Erasto, dkk., 2006) antikanker,
antidiabetes, antioksidan (Setiawan, 2012), antimalaria, analgetik (Njan, dkk.,
2008), dan pengobatan luka (Giday, dkk., 2003).
2.2 Ekstraksi
Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan kandungan senyawa kimia dari
jaringan tumbuhan maupun hewan dengan pelarut yang sesuai. Sebelum ekstraksi
dilakukan biasanya bahan dikeringkan terlebih dahulu kemudian dihaluskan pada
derajat kehalusan tertentu (Harborne, 1987).
Hasil ekstraksi disebut ekstrak, yaitu sediaan kental atau cair yang
diperoleh dengan cara mengekstraksi zat aktif dengan pelarut yang sesuai
kemudian menguapkan semua atau hampir semua pelarut yang digunakan pada
ekstraksi (Depkes RI, 1995).
Tujuan utama dari ekstraksi adalah untuk mendapatkan atau memisahkan
sebanyak mungkin zat-zat yang memiliki khasiat pengobatan. Zat aktif yang
terdapat dalam simplisia tersebut dapat digolongkan ke dalam golongan minyak
atsiri, alkaloid, flavonoid dan lain-lain (Ditjen POM RI, 2000).
Menurut Ditjen POM RI (2000), ada beberapa metode ekstraksi yang
sering digunakan antara lain yaitu:
a. Cara dingin
1. Maserasi
Maserasi adalah penyarian simplisia dengan cara perendaman menggunakan
pelarut disertai sesekali pengadukan pada temperatur kamar. Maserasi yang
9
dilakukan pengadukan secara terus menerus disebut maserasi kinetik sedangkan
yang dilakukan penambahan ulang pelarut setelah dilakukan penyaringan terhadap
maserat pertama dan seterusnya disebut remaserasi.
2. Perkolasi
Perkolasi adalah proses penyarian simplisia menggunakan alat perkolator
dengan pelarut yang selalu baru sampai terjadi penyarian sempurna yang
umumnya dilakukan pada temperatur kamar. Proses perkolasi terdiri dari tahap
pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya
(penetesan/penampungan ekstrak) terus menerus sampai diperoleh perkolat.
b. Cara panas
1. Refluks
Refluks adalah proses penyarian simplisia pada temperatur titik didihnya
menggunakan alat dengan pendingin balik dalam waktu tertentu dimana pelarut
akan terkondensasi menuju pendingin dan kembali ke labu.
2. Digesti
Digesti adalah proses penyarian dengan pengadukan kontinu pada temperatur
lebih tinggi dari temperatur kamar, yaitu secara umum dilakukan pada temperatur
40-50°C.
3. Sokletasi
Sokletasi adalah proses penyarian menggunakan pelarut yang selalu baru,
dilakukan dengan menggunakan alat khusus (soklet) dimana pelarut akan
terkondensasi dari labu menuju pendingin, kemudian jatuh membasahi sampel.
4. Infundasi
Infundasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada
temperatur 90°C selama 15 menit.
10
5. Dekoktasi
Dekoktasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada
temperatur 90°C selama 30 menit.
2.3 Karies Gigi
Karies gigi adalah suatu penyakit yang disebabkan oleh adanya interaksi
antara bakteri plak, gigi dan lingkungan. Plak gigi merupakan suatu lapisan tipis
dan padat yang menutupi permukaan email gigi yang mengandung bebagai
macam kuman. Plak gigi berperan dalam etiologi kelainan utama di dalam rongga
mulut yaitu karies gigi. Bakteri yang mendominasi pada plak adalah
Streptococcus mutans yang merupakan bakteri yang kariogenik karena mampu
segera membentuk asam dari karbohidrat yang dapat diragikan. Bakteri ini dapat
tumbuh subur dalam suasana asam dan dapat menempel pada permukaan gigi
karena kemampuannya membuat polisakarida ekstra sel. Polisakarida ekstra sel
ini terutama terdiri dari polimer glukosa yang menyebabkan matriks plak
mempunyai konsistensi seperti gelatin, akibatnya bakteri terbantu untuk melekat
satu sama lain. Plak makin lama makin tebal, sehingga terbentuk karies gigi.
Beberapa faktor yang dianggap faktor resiko adalah keturunan, ras, jenis kelamin,
umur, makanan, unsur kimia (Melani, 1988).
2.4 Obat Kumur
Produk pembersih mulut dapat secara luas dibagi menjadi pasta gigi yang
menggunakan sikat gigi sewaktu digunakan dan obat kumur yang tidak
menggunakan sikat gigi sewaktu digunakan. Mouthwash juga disebut sebagai obat
kumur. Meskipun mirip dalam bentuk larutan cair pasta gigi, tetapi mouthwash
tidak digunakan dengan sikat gigi. Sejumlah mouthwash yang tepat diletakkan di
11
dalam mulut untuk dikumur dan kemudian setelah itu dibuang. Obat kumur
terbagi menjadi 3 jenis yaitu: yang langsung digunakan, jenis terkonsentrasi, dan
jenis bubuk/kering meskipun jenis langsung digunakan adalah yang paling banyak
digunakan saat ini. Fungsi obat kumur dapat membersihkan bagian dalam mulut,
mencegah bau nafas yang tidak sedap, dan menyegarkan mulut. Obat kumur
mengandung zat antibakteri yang mencegah karies gigi dan penyakit periodontal
(Mitsui, 1997).
Menurut Farmakope Indonesia edisi III (1979), obat kumur
(gargarisma/gargle) adalah sediaan berupa larutan, umumnya pekat yang harus
diencerkan dahulu sebelum digunakan sebagai pencegahan atau pengobatan
infeksi tenggorokan.
Menurut Sagarin dan Gerson (1972), secara garis besar, obat kumur dalam
penggunaanya dibedakan menjadi 3 yaitu:
1. Sebagai kosmetik, hanya membersihkan, menyegarkan, dan/atau
menghilangkan bau mulut.
2. Sebagai terapeutik, untuk perawatan penyakit pada mukosa atau ginggiva,
pencegahan karies gigi atau pengobatan infeksi saluran pernafasan.
3. Sebagai kosmetik dan terapeutik
Berdasarkan komposisinya, Saragin dan Gershon (1972) menggolongkan
obat kumur dalam berbagai jenis, yaitu;
1. Obat kumur untuk kosmetik terdiri atas air (dan biasanya alkohol), flavor, dan
zat pewarna, mengandung surfaktan dengan tujuan meningkatkan kelarutan.
2. Obat kumur yang mempunyai tujuan utama untuk menghilangkan bakteri yang
biasanya terdapat dalam jumlah besar di saluran nafas.
12
3. Obat kumur yang bersifat sebagai astringent, dengan maksud memberi efek
langsung pada mukosa mulut, juga mengurangi flokulasi dan presipitasi protein
ludah sehingga dapat dihilangkan secara mekanis.
4. Obat kumur yang pekat yang penggunaannya perlu diencerkan terlebih dahulu.
5. Obat kumur untuk terapeutik, diformulasikan untuk meringankan infeksi,
mencegah karies gigi dan untuk meringankan kondisi patologis pada mulut,
gigi atau tenggorokan.
Tabel 2.1 Jenis-jenis obat kumur (Mitsui, 1997):
Jenis Pemakaian Kelebihan

Sangat nyaman untuk
Penggunaan secara
Langsung dapat digunakan digunakan; jenis yang
langsung
paling banyak digunakan
Bentuknya kompak dan
Dasar larutan diencerkan
ringan: mulut dapat dicuci
Jenis Terkonsentrasi dengan sejumlah air saat
berkali-kali dengan isi
digunakan
satu botol
Bubuk dapat dilarutkan
Mudah dibawa kemana-
Bentuk Bubuk/ Kering dengan sejumlah air saat
mana
digunakan
2.5 Uraian Bahan
2.5.1 Tween 80
Tween 80 adalah ester asam lemak polioksietilen sorbitan, dengan nama
kimia polioksietilen 20 sorbitan monooleat. Rumus molekulnya adalah C64H124O26
merupakan cairan seperti minyak, jernih berwarna kuning muda hingga coklat
muda, bau khas lemah, rasa pahit, dan hangat (Rowe, dkk., 2009). Tween
merupakan surfaktan yang luas digunakan dalam farmasi, karena relatif aman,
tidak toksik dan tidak mengiritasi. Dalam formulasi, tween digunakan sebagai zat
pembasah, pelarut, dan pensuspensi dengan konsentrasi 0,01-12% (Agoes, 2006).
13
2.5.2 Sakarin
Sakarin merupakan serbuk atau hablur putih, tidak berbau atau berbau
aromatik lemah. Dalam bentuk larutan encer rasanya sangat manis (Ditjen POM,
1995). Sakarin merupakan salah satu bahan pemanis yang digunakan dalam
produk makanan dan minuman, produk kesehatan seperti obat kumur dan pasta
gigi. Bahan ini digunakan untuk melapisi berbagai karakteristik rasa yang kurang
menyenangkan atau meningkatkan sistem aroma. Sakarin berbentuk kristal putih
tidak berbau atau bubuk kristal putih Dalam formulasi oral, sakarin digunakan
pada konsentrasi 0,02-0,5%. Daya pemanisnya mencapai 300-600 kali sukrosa
(Rowe, dkk., 2009).
2.5.3 Peppermint oil
Peppermint oil adalah salah satu minyak yang paling popular dan banyak
digunakan karena sebagian besar dari komponen utamanya adalah mentol dan
digunakan untuk pemberi bau yang khas dalam sediaan oral di bidang farmasi
seperti dalam obat batuk, permen karet, permen, dan minuman beralkohol. Dan
juga digunakan dalam pembuatan sediaan pasta gigi dan obat kumur. Rasa dari
peppermint oil menyenangkan sehingga merupakan stimulan lambung yang
sangat baik (Aflatuni, 2005).
2.5.4 Akuades
Akuades digunakan sebagai bahan baku dan pelarut dalam pengolahan,
formulasi dan pembuatan produk farmasi, bahan farmasi aktif dan reagen analitis.
Akuades digunakan sebagai pelarut produk obat dan sediaan farmaseutikal; tidak
cocok untuk digunakan dalam pembuatan produk parenteral (Rowe, dkk., 2009).
14
2.6 Uraian Bakteri
Bakteri adalah mikroorganisme bersel satu, berbentuk bola, batang atau
spiral berdiameter sekitar 0,5-1,0 µm dan panjangnya 1,5-2,5 µm. Berkembang
biak dengan cara membelah diri, serta demikian kecilnya hanya dapat dilihat
dengan menggunakan mikroskop. Walaupun bentuknya sederhana sekali, namun
bakteri terdiri dari ribuan spesies yang berbeda (Pratiwi, 2008).
2.6.1 Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif, berbentuk bola
atau kokus, berkelompok tidak teratur, diameter 0,8-1,0 µm, tidak membentuk
spora dan tidak bergerak (Jawetz, dkk., 2001). Bakteri ini menghasilkan pigmen
berwarna kuning, bersifat anaerob fakultatif, tidak menghasilkan spora, dan
umumnya tumbuh berpasangan maupun berkelompok, tumbuh dengan baik pada
suhu 37OC, tetapi membentuk pigmen paling baik pada suhu kamar (20-25OC)
(Brooks, dkk., 1996).
Setiap jaringan ataupun alat tubuh dapat diinfeksi oleh bakteri
Staphylococcus aureus dan menyebabkan timbulnya penyakit dengan tanda-
tanda yang khas, yaitu peradangan. Staphylococcus aureus merupakan
bakteri kedua terbesar penyebab peradangan pada rongga mulut setelah
bakteri Streptococcus mutans.Staphylococcus aureus menyebabkan berbagai
jenis peradangan pada rongga mulut, seperti pembengkakan kelenjar ludah,
peradangan pada sudut mulut, dan peradangan pada gusi (Fathi, 2010).
2.6.2 Streptococcus mutans
Streptococcus mutans merupakan bakteri Gram positif, bersifat nonmotil,
berdiameter 1-2 µm berbentuk bulat atau bulat telur, tersusun dalam bentuk rantai,
tidak membentuk spora, tumbuh optimal pada suhu 18-40OC, biasanya ditemukan
15
pada rongga mulut manusia dan menjadi yang paling kondusif menyebabkan bau
mulut dan karies untuk email gigi (Pratiwi, 2008).
Streptococcus mutans bersifat asidogenik, yaitu menghasilkan asam dan
mampu tinggal pada lingkungan asam. Bakteri ini mampu menempel pada
permukaan gigi dan menghidrolisis sisa makanan menjadi komponen glukosa dan
fruktosa kemudian oleh enzim glukosiltransferase dan fruktosiltransperase akan
diubah menjadi dekstran dan fruktan. Oleh karena kemampuan ini, Streptococcus
mutans dapat menyebabkan melekatnya bakteri dan sisa-sisa makanan pada email
gigi. Pada akhirnya terjadilah akumulasi bakteri, dekstran dan fruktan pada
permukaan email gigi sehingga membentuk plak sebagai pencetus karies gigi dan
menimbulkan bau yang kurang sedap (Brooks, et al., 1996).
2.7 Penentuan Aktivitas Antibakteri
Penentuan aktivitas antibakteri dapat dilakukan dengan dua metode, yaitu
metode difusi dan metode dilusi. Pada metode difusi termasuk didalamnya metode
disk duffusion (tes Kirby & Baeur), E-test, ditch-plate technique, dan cup-plate
technique. Sedangkan pada metode dilusi termasuk didalamnya metode dilusi cair
dan dilusi padat (Pratiwi, 2008).
a. Metode difusi diantaranya:
1. Metode disk diffusion (tes Kirby & Baeur) menggunakan piringan yang berisi
agen antibakteri, kemudian diletakkan pada media agar yang sebelumnya telah
ditanami bakteri sehingga agen antibakteri dapat berdifusi pada media agar
tersebut. Metode ini cukup sederhana dan menggunakan media selektif. Area
jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan bakteri oleh agen
antibakteri pada permukaan media agar.
16
2. Metode E-test digunakan untuk mengestimasi Konsentrasi Hambat Minimum
(KHM), yaitu konsentrasi minimal suatu agen antibakteri untuk dapat
menghambat pertumbuhan bakteri. Pada metode ini digunakan strip plastik yang
mengandung agen antibakteri dari kadar terendah sampai tertinggi dan diletakkan
pada permukaan media agar yang telah ditanami bakteri sebelumnya. Pengamatan
dilakukan pada area jernih yang ditimbulkannya yang menunjukkan kadar agen
antibakteri yang menghambat pertumbuhan bakteri pada media agar.
3. Ditch-plate technique. Pada metode ini sampel uji berupa agen antibakteri yang
diletakkan pada parit yang dibuat dengan cara memotong media agar dalam cawan
petri pada bagian tengah secara membujur dan bakteri uji (maksimum 6 macam)
digoreskan ke arah parit yang berisi agen antibakteri tersebut.
4. Cup-plate technique. Metode ini serupa dengan disk diffusion dimana dibuat
sumur pada media agar yang telah ditanami dengan bakteri dan pada sumur
tersebut diberi agen antibakteri yang akan diuji.
b. Metode dilusi diantaranya:
1. Metode dilusi cair/broth dilution test (serial dilution). Metode ini digunakan
untuk mengukur Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh
Minimum (KBM). Cara yang dilakukan adalah dengan membuat seri pengenceran
agen antibakteri pada medium cair yang ditambahkan dengan bakteri uji. Larutan
uji agen antibakteri pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya
pertumbuhan bakteri uji ditetapkan sebagai KHM. Larutan yang ditetapkan
sebagai KHM tersebut selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa
penambahan bakteri uji ataupun agen antibakteri, dan diinkubasi selama 18-24
jam. Media cair yang tetap terlihat jernih setelah diinkubasi ditetapkan sebagai
KBM.
17
2. Metode dilusi padat (solid dilution test). Metode ini serupa dengan metode
dilusi cair namun menggunakan media padat (solid). Keuntungan metode ini
adalah salah satu konsentrasi agen antibakteri yang diuji dapat digunakan untuk
menguji beberapa bakteri uji.
2.8 Metode Isolasi Biakan Bakeri
Metode isolasi biakan bakteri dibagi atas 3 cara (Stanier, dkk., 1982),
yaitu:
1. Cara gores
Ose yang telah steril dicelupkan ke dalam suspensi mikroorganisme yang
diencerkan, kemudian dibuat serangkaian goresan sejajar yang tidak saling
menutupi di atas permukaan agar-agar yang telah padat.
2. Cara sebar
Suspensi mikroorganisme yang telah diencerkan diinokulasikan secara merata
dengan menggunakan hockey stick pada permukaan media padat.
3. Cara tuang
Pengenceran inokulum yang berturut-turut diletakkan pada cawan petri steril dan
dicampurkan dengan medium agar-agar cair, kemudian dibiarkan memadat.
Koloni yang berkembang akan tertanam di dalam media.
2.9 Fase Pertumbuhan Bakteri
Pertumbuhan bakteri meliputi empat fase, yaitu:
1. Fase lag.
Fase lag merupakan fase adaptasi, yaitu fase penyesuaian mikroorganisme pada
suatu lingkungan baru. Ciri fase ini adalah tidak adanya peningkatan jumlah sel,
yang ada hanyalah peningkatan ukuran sel. Lama fase lag tergantung pada kondisi
dan jumlah awal mikroorganisme dan media pertumbuhan (Pratiwi, 2008).
18
2. Fase eksponensial (fase log).
Fase ini merupakan fase dimana mikroorganisme tumbuh dan membelah pada
kecepatan maksimum, tergantung pada genetika bakteri, sifat media, dan kondisi
pertumbuhan. Sel baru terbentuk dengan laju konstan dan massa yang bertambah
secara eksponensial (Pratiwi, 2008).
3. Fase stasioner.
Pertumbuhan bakteri berhenti pada fase ini dan terjadi keseimbangan antara
jumlah sel yang membelah dengan jumlah sel yang mati. Karena pada fase ini
terjadi akumulasi produk buangan yang toksik (Pratiwi, 2008).
4. Fase kematian.
Pada fase ini terjadi penurunan nutrisi yang diperlukan oleh bakteri sehingga
bakteri memasuki fase kematian. Laju kematian melampaui dari laju
pertumbuhan, dan pada akhirnya pertumbuhan bakteri terhenti (Volk dan
Wheeler, 1993).
19
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Daun Afrika (Vernonia amygdalina Delile.) suku Asteraceae banyak
tumbuh di benua Afrika bagian barat terutama di Nigeria (Ibrahim, et al., 2004).
Di Cina daun Afrika telah dikenal sejak dahulu oleh masyarakat sebagai tanaman
obat yang sangat mujarab yang digunakan di lingkungan kekaisaran sebagai obat
untuk berbagai penyakit. Di Jawa tanaman ini dikenal dengan nama daun pahit
dan di Padang dikenal dengan nama daun insulin. Tanaman ini mudah tumbuh
pada daerah yang mempunyai curah hujan cukup tinggi (Anonim, 2010).
Daun Afrika (Vernonia amygdalina Delile.) mengandung saponin,
flavonoid, tanin, dan steroid/triterpenoid yang berperan sebagai antibakteri.
Ekstrak daun Afrika memiliki aktivitas antibakteri yang mampu membunuh
bakteri Gram positif dan Gram negatif. Penelitian terhadap aktivitas antibakteri
ekstrak daun Afrika yang dilakukan oleh Sharma dan Smita (2010) menunjukkan
hasil yang positif terhadap bakteri Staphylococcus aureus,Streptococcus mutans,
dan Lactobacillus acidophilus.
Karies gigi atau dikenal dengan gigi berlubang adalah salah satu penyakit
pada jaringan keras gigi yang sudah dikenal umum oleh masyarakat, paling
banyak ditemui di dalam rongga mulut, dapat mengenai semua populasi tanpa
memandang umur, jenis kelamin, ras, ataupun keadaan sosial ekonomi, dan
merupakan penyebab utama hilangnya gigi (Parmar, dkk., 2007). Karies
merupakan keadaan akibat dari larutnya mineral-mineral pembangun struktur gigi
oleh paparan asam organik hasil fermentasi karbohidrat yang dilakukan oleh
1
bakteri patogen dalam rongga mulut. Salah satu bakteri yang mampu
memfermentasi gula menjadi asam laktat adalah Streptococcus mutans dan pH
mulut menjadi asam. Penurunan pH mulut di bawah 5,5 akan menyebabkan
terjadinya demineralisasi email (Roeslan, 2002).
Ada banyak cara untuk mencegah karies gigi, salah satunya penggunaan
obat kumur antiseptik. Tujuan berkumur dengan antiseptik yaitu menurunkan
jumlah koloni bakteri patogen dalam rongga mulut, mengurangi terjadinya plak,
dan karies gigi (Sumono dan Wulan, 2009). Berbagai jenis obat kumur telah
beredar di masyarakat, salah satu yang banyak digunakan yaitu obat kumur
dengan kandungan Povidone-Iodine 1% (Primalia, dkk., 2009). Dilaporkan bahwa
tingkat absorpsi yodium dari Povidone-Iodine 1% tidak baik untuk penggunaan
jangka panjang dalam rongga mulut, karena dapat menyebabkan masalah
sensitivitas yodium (Kumar, dkk., 2011).
Upaya preventif lainnya yang dilakukan secara mekanis misalnya dengan
menyikat gigi pada waktu yang tepat dengan cara yang benar, sedangkan cara
kimiawi dapat dilakukan dengan aplikasi larutan fluor, penggunaan bahan
antiseptik misalnya chlorhexidine atau dapat juga menggunakan ekstrak tumbuh-
tumbuhan sebagai obat kumur yang mengandung antiseptik (Shahani dan Reddy,
2011). Namun mempunyai beberpa efek samping yang merugikan yaitu
menimbulkan pewarnaan (staining) pada gigi, pada lidah juga dapat menganggu
rasa kecap setelah pemakaian meskipun tidak bersifat permanen (Peterson, 2011).
Obat kumur adalah larutan yang biasanya mengandung bahan penyegar
nafas, astringen, demulsen, antibakteri untuk menyegarkan dan membersihkan
saluran pernafasan, yang pemakaiannya dengan berkumur (Backer, 1990).
Formulasi obat kumur selain bahan aktif yang umum digunakan sebagai
2
antibakteri juga digunakan bahan tambahan lain seperti surfaktan dan korigensia
(Mitsui, 1997; Jas, 2007). Berbagai efek samping yang ditimbulkan dari
pemakaian bahan kimia dalam obat kumur cukup banyak dan signifikan, sehingga
diperlukan alternatif lain sebagai bahan baku pembuatan obat kumur dengan efek
samping seminimal mungkin, ekonomis, dan berkhasiat. Alternatif yang
memenuhi syarat tersebut adalah tanaman obat atau tanaman yang berasal dari
alam yang berkhasiat sebagai obat dalam penyembuhan dan pencegahan suatu
penyakit (Flora, 2008; Victor, dkk., 2013).
Penggunaan tanaman obat yang digunakan pada penelitian ini adalah daun
Afrika yang akan ditentukan daya antibakteri dari ekstrak etanol daun Afrika
berdasarkan nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) yaitu konsentrasi
terkecil yang mampu menghambat bakteri yang diinokulasikan dengan
terbentuknya zona bening di sekitar pencadang kertas, kemudian dijadikan bentuk
sediaan obat kumur dan ditentukan kembali daya antibakterinya terhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans. Penggunaan bakteri
Staphylococcus aureus dikarenakan bakteri tersebut menyebabkan berbagai jenis
peradangan pada rongga mulut, seperti pembengkakan kelenjar liur disertai nyeri,
infeksi bakteri pada jaringan di sekitar amandel, dan infeksi jaringan periodontal
(Fathi, 2010). Sedangkan bakteri Streptococcus mutans, merupakan flora normal
yang ada pada rongga mulut seperti gusi, lidah dan saliva yang sering
menimbulkan plak dan karies gigi, dan juga terdapat pada saluran nasofaring,
saluran genitalia wanita dan kulit (Talaro dan Arthur, 1999; Tortora, dkk., 2004).
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan uraian pada latar belakang, maka permasalahan dalam
penelitian ini dapat dirumuskan sebagai berikut:
3
a. Apakah ekstrak etanol daun Afrika dapat diformulasikan menjadi sediaan
obat kumur?
b. Apakah sediaan obat kumur dari ekstrak etanol daun Afrika mempunyai
nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) terhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans?
c. Apakah ekstrak etanol daun Afrika dan sediaan obat kumur ekstrak etanol
daun Afrika mempunyai aktivitas antibakteri yang sama?
1.3 Hipotesis Penelitian
Berdasarkan rumusan masalah penelitian di atas, maka hipotesis penelitian
adalah sebagai berikut:
a. Ekstrak etanol daun Afrika dapat diformulasikan menjadi sediaan obat
kumur.
b. Sediaan obat kumur dari ekstrak etanol daun Afrika mempunyai nilai
Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) terhadap bakteri Staphylococcus
aureus dan Streptococcus mutans.
c. Ekstrak etanol daun Afrika dan sediaan obat kumur ekstrak etanol daun
Afrika mempunyai aktivitas antibakteri yang sama.
1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan Penelitian ini adalah untuk:
a. Meneliti ekstrak etanol daun Afrika yang diformulasikan menjadi sediaan
obat kumur.
4
b. Meneliti nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) sediaan obat kumur
dari ekstrak etanol daun Afrika terhadap bakteri Staphylococcus aureus
dan Streptococcus mutans.
c. Meneliti aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol daun Afrika dan sediaan
obat kumur ekstrak etanol daun Afrika.
1.5 Manfaat Penelitian
Dari hasil penelitian ini, diharapkan mampu memberi informasi yang
berguna bagi pengembangan tanaman obat yang berkhasiat sebagai antibakteri
dan menambah ilmu pengetahuan mengenai pengembangan dan pemanfaatan obat
tradisional di masyarakat, khususnya daun Afrika dan dapat mengetahui kegunaan
daun Afrika yang dapat dikembangkan menjadi sediaan obat kumur dalam
penggunaannya untuk mencegah karies gigi yang disebabkan oleh bakteri
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans.
5
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Secara skematis kerangka pikir penelitian ditunjukkan pada Gambar 1.1.
Latar Belakang Penyelesaian Variabel bebas Variabel terikat Parameter

Daun Afrika
(Vernonia
amygdalina
Delile.)
mengandung
saponin,
Pemeriksaan - bentuk
flavonoid,
Pembuatan stabilitas - warna
tanin, dan
sediaan sediaan - bau
steroid/triterpe
noid yang obat kumur Konsentrasi
berperan dari ekstrak Pemerikasaan pH
sebagai ekstrak etanol daun pH sediaan sediaan
antibakteri. etanol Afrika
Ekstrak daun daun
Afrika Diameter
Afrika telah
Uji daerah
terbukti
mikrobiologi hambatan
mampu
sediaan (mm)
menghambat
bakteri
Staphylococcus
aureusdan
Streptococcus
mutans
Gambar 1.1 Kerangka pikir penelitian
6
FORMULASI DAN EVALUASI SEDIAAN OBAT KUMUR
EKSTRAK ETANOL DAUN AFRIKA (Vernonia amygdalina Delile.)
SERTA UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI
ABSTRAK
Latar Belakang: Daun Afrika (Vernonia amygdalina Delile.) mengandung

saponin, flavonoid, tanin, dan steroid/triterpenoid yang berperan sebagai
antibakteri. Ekstrak daun Afrika memiliki aktivitas antibakteri yang mampu
membunuh bakteri Gram positif dan Gram negatif. Ekstrak daun Afrika dapat
menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans.
Tujuan: Membuat sediaan obat kumur yang mengandung ekstrak etanol daun
Afrika, meneliti nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak dan sediaan
obat kumur ekstrak etanol daun Afrika terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Metode: Penelitian yang dilakukan meliputi karakterisasi simplisia daun Afrika,
pembuatan ekstrak etanol daun Afrika dengan cara maserasi menggunakan pelarut
etanol 80%, uji aktivitas antibakteri ekstrak, formulasi sediaan obat kumur,
evaluasi sediaan meliputi pemeriksaan stabilitas, pemeriksaan pH, dan uji
aktivitas antibakteri sediaan obat kumur dengan metode difusi agar. Bakteri yang
digunakan adalah Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans. Formula
sediaan obat kumur terdiri atas ekstrak etanol daun Afrika, sakarin, Tween 80,
peppermint oil, dan akuades. Obat kumur ini dibuat dengan konsentrasi ekstrak
etanol daun Afrika 1, 2, 3, 4, 5, 7, dan 9%.
Hasil: Karakteristik simplisia daun Afrika memiliki kadar air 7,87%, kadar sari
larut dalam air 24,99%, kadar sari larut dalam etanol 16,22%, kadar abu total
9,79%, dan kadar abu tidak larut asam 0,64%. Hasil evaluasi sediaan obat kumur
dengan konsentrasi 1, 2, 3, 4, 5, 7, dan 9% secara fisik stabil selama penyimpanan
12 minggu pada suhu kamar. Berdasarkan hasil uji aktivitas antibakteri dari
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans pada minggu ke-12 setelah
penyimpanan dengan nilai KHM berturut-turut adalah 6,23 dan 6,20 mm.
Kesimpulan: Berdasarkan hasil penelitian ini yaitu ekstrak etanol daun Afrika
dapat diformulasi menjadi sediaan obat kumur, hasil uji aktivitas antibakteri dari
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans dengan nilai KHM pada ekstrak
dan sediaan obat kumur ekstrak etanol daun Afrika adalah sama.
Kata Kunci: Obat kumur, ekstrak etanol daun Afrika, uji aktivitas antibakteri,
Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
vii
FORMULATION AND EVALUATION OF MOUTHWASH ETHANOL
EXTRACT OF AFRICAN LEAVES (Vernonia amygdalina Delile.) AND
EVALUATION OF ANTIBACTERIAL ACTIVITY
ABSTRACT
Background: African leaves (Vernonia amygdalina Delile.) contain saponins,

flavonoids, tannins, and steroids/triterpenoids that use as antibacterial. Extract of
African leaves has antibacterial effect that can kill Gram-positive and Gram-
negative bacteria. Extract of African leaves can inhibit the Staphylococcus aureus
and Streptococcus mutans bacteria.
Purpose: To formulate mouthwash preparation containing ethanol extract of
African leaves, to evaluate the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) values
of extract and mouthwash preparation of ethanol extract of Africa leaves against
Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans.
Methods: The study was carried out againts characterization simplicia of African
leaves, preparation extract of African leaves was macerated by using ethanol 80%,
antibacterial activities test of extract, formulation of mouthwash, and evaluation
of mouthwash includes examining stability, pH, and antibacterial activity test of
mouthwash by using diffusion agar method. The bacteria used were
Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans. The formula of mouthwash
contains extract ethanol of African leaves, saccharin, Tween 80, peppermint oil,
and aquadest. The mouthwash was made with concentration ethanol extract of
African leaves 1, 2, 3, 4, 5, 7, and 9%.
Results: The characteristicsof ethanol extract of African leaves had 7.87% water
content, 24.99% levels of soluble extract in water, 16.22% levels of soluble
extract in ethanol, 9.79% of total ash content and 0.64% acid insoluble ash
content. The evaluation of mouthwash results at concentrations of 1, 2, 3, 4, 5, 7,
and 9% were physically stable during storage for 12 weeks at room temperature.
Based on the result of antibacterial activity of Staphylococcus aureus and
Streptococcus mutans at week 12 after storage with MIC values are respectively
6.23 and 6.20 mm.
Conclusion:Based on the results of this study, ethanol extract of African leaves
can be formulated into mouthwash, the result of antibacterial activity of
Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans with MIC values from extract
and mouthwash preparation of ethanol extract of Africa leaves are the same.
Keywords: Mouthwash, ethanol extract of African leaves, evaluation of

antibacterial activity, Minimum Inhibitory Concentration (MIC)
viii
EKSTRAK ETANOL DAUN AFRIKA (Vernonia amygdalina
Delile.) SERTA UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI
SKRIPSI
OLEH:
LENI
NIM 121501083
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2016

SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
LENI
NIM 121501083
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2016

PENGESAHAN SKRIPSI

Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada Tanggal: 15 Agustus 2016 2016
OLEH:
LENI
NIM 121501083
Disetujui oleh,
Pembimbing I, Panitia Penguji,
Panitia Penguji,
Drs. Suryanto, M.Si., Apt. Dr. Anayanti

Prof. Dr.Arianto, M.Si., Apt.
Jansen Silalahi, M.App.Sc., Apt.
NIP 196106191991031001 NIP195306251986012001
NIP195006071979031001
Pembimbing II, Drs. Fathur Rahman Harun, M.Si.,Apt.

Drs. Suryanto, M.Si., Apt.
NIP 195201041980031002
NIP 196106191991031001
Dra. Tuty Roida Pardede, M.Si., Apt.

NIP 195401101980032001
Dra. Nazliniwaty, M.Si., Apt.
Popi Patilaya, S.Si., M.Sc., Apt.
NIP 197812052010121004 NIP 196005111989022001
Sri Yuliasmi, S. Farm., M. Si., Apt.

NIP 198207032008122002
Drs. Agusmal Dalimunthe, M.S., Apt.
NIP 195406081983031005
Medan, September 2016

Fakultas Farmasi
Dekan
Dr. Masfria, M.S., Apt.

NIP 195707231986012001

KATA PENGANTAR
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas kasih karunia dan
anugerah-Nya penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi
yang berjudul “Formulasi dan Evaluasi Sediaan Obat Kumur Ekstrak Etanol Daun
Afrika (Vernonia amygdalina Delile.) serta Uji Aktivitas Antibakteri”. Skripsi ini
diajukan sebagai salah satu syarat bagi penulis guna memperoleh gelar Sarjana
Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Pada kesempatan ini dengan segala kerendahan hati dan rasa hormat,
penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Drs. Suryanto M.Si., Apt., dan
Bapak Popi Patilaya S.Si., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing yang telah
memberikan bimbingan, arahan, dan bantuan kepada penulis dengan penuh
kesabaran selama penelitian dan penulisan skripsi. Kepada Ibu Dr. Masfria, M.S.,
Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara yang telah
memberikan bimbingan dan fasilitas selama penulis melaksanakan penelitian serta
selama masa pendidikan. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Ibu Dr.
Anayanti Arianto, M.Si., Apt., Ibu Dra. Nazliniwaty, M.Si., Apt., dan Bapak Drs.
Agusmal Dalimunthe, M.S., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan
arahan, kritik dan saran kepada penulis dalam menyelesaikan penyusunan skripsi
ini, serta kepada Bapak dan Ibu pengajar dan staf Fakultas Farmasi Universitas
Sumatera Utara yang telah mendidik selama masa perkuliahan dan membantu
penulis dalam menyelesaikan penelitian dan skripsi ini.
Secara khusus penulis mengucapkan rasa terima kasih serta penghargaan
yang sebesar-besarnya kepada orangtua tersayang Ayahanda Maruasas
Simatupang S.H., Ibunda Rugun Saurlina Sinaga, saudara penulis Kresensia D. M.
Simatupang, Amd., Rina Monica Simatupang, untuk kasih sayang yang tidak
iv
ternilai, dukung yang diberikan baik moral maupun materil, dan doa yang tulus.
Terimakasih kepada Lorenzo Andreas, sahabat-sahabat, kelompok tumbuh
bersama, adik-adik kelompok kecil, teman-teman koordinasi, teman-teman satu
stambuk, dan semua pihak yang telah menemani, memotivasi, dan memberikan
semangat kepada penulis.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam penulisan skripsi ini masih
jauh dari kesempurnaan. Oleh karena itu dengan segala kerendahan hati, penulis
menerima kritik dan saran demi kesempurnaan skripsi ini. Akhirnya, penulis
berharap semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi kita semua.
Medan, Agustus 2016
Leni
NIM 121501083
v
SURAT PERNYATAAN
Saya yang bertanda tangan di bawah ini,
Nama : Leni
Nomor Induk Mahasiswa : 121501083
Program Studi : S-1 Farmasi Reguler
Judul Skripsi : Formulasi Dan Evaluasi Sediaan Obat Kumur

Ekstrak Etanol Daun Afrika (Vernonia amygdalina
Delile.) Serta Uji Aktivitas Antibakteri
Dengan ini menyatakan bahwa skripsi ini ditulis berdasarkan data dari hasil
pekerjaan yang saya lakukan sendiri, dan belum pernah di ajukan oleh orang lain
untuk memperoleh gelar kesarjanaan di perguruan tinggi lain, dan bukan plagiat
karena kutipan yang ditulis telah disebutkan sumbernya di dalam daftar pustaka.
Apabila dikemudian hari ada pengaduan dari pihak lain karena di dalam skripsi ini
ditemukan plagiat karena kesalahan saya sendiri, maka saya bersedia menerima
sanksi apapun oleh Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas
Sumatera Utara, dan bukan menjadi tanggung jawab pembimbing.
Demikianlah surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya untuk dapat
digunakan jika diperlukan sebagaimana mestinya.
Medan, Agustus 2016

Yang membuat pernyataan,
Leni
NIM 121501083
vi
EKSTRAK ETANOL DAUN AFRIKA (Vernonia amygdalina Delile.)
SERTA UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI
ABSTRAK
Latar Belakang: Daun Afrika (Vernonia amygdalina Delile.) mengandung

saponin, flavonoid, tanin, dan steroid/triterpenoid yang berperan sebagai
antibakteri. Ekstrak daun Afrika memiliki aktivitas antibakteri yang mampu
membunuh bakteri Gram positif dan Gram negatif. Ekstrak daun Afrika dapat
menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans.
Tujuan: Membuat sediaan obat kumur yang mengandung ekstrak etanol daun
Afrika, meneliti nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak dan sediaan
obat kumur ekstrak etanol daun Afrika terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Metode: Penelitian yang dilakukan meliputi karakterisasi simplisia daun Afrika,
pembuatan ekstrak etanol daun Afrika dengan cara maserasi menggunakan pelarut
etanol 80%, uji aktivitas antibakteri ekstrak, formulasi sediaan obat kumur,
evaluasi sediaan meliputi pemeriksaan stabilitas, pemeriksaan pH, dan uji
aktivitas antibakteri sediaan obat kumur dengan metode difusi agar. Bakteri yang
digunakan adalah Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans. Formula
sediaan obat kumur terdiri atas ekstrak etanol daun Afrika, sakarin, Tween 80,
peppermint oil, dan akuades. Obat kumur ini dibuat dengan konsentrasi ekstrak
etanol daun Afrika 1, 2, 3, 4, 5, 7, dan 9%.
Hasil: Karakteristik simplisia daun Afrika memiliki kadar air 7,87%, kadar sari
larut dalam air 24,99%, kadar sari larut dalam etanol 16,22%, kadar abu total
9,79%, dan kadar abu tidak larut asam 0,64%. Hasil evaluasi sediaan obat kumur
dengan konsentrasi 1, 2, 3, 4, 5, 7, dan 9% secara fisik stabil selama penyimpanan
12 minggu pada suhu kamar. Berdasarkan hasil uji aktivitas antibakteri dari
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans pada minggu ke-12 setelah
penyimpanan dengan nilai KHM berturut-turut adalah 6,23 dan 6,20 mm.
Kesimpulan: Berdasarkan hasil penelitian ini yaitu ekstrak etanol daun Afrika
dapat diformulasi menjadi sediaan obat kumur, hasil uji aktivitas antibakteri dari
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutans dengan nilai KHM pada ekstrak
dan sediaan obat kumur ekstrak etanol daun Afrika adalah sama.
Kata Kunci: Obat kumur, ekstrak etanol daun Afrika, uji aktivitas antibakteri,
Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
vii
FORMULATION AND EVALUATION OF MOUTHWASH ETHANOL
EXTRACT OF AFRICAN LEAVES (Vernonia amygdalina Delile.) AND
EVALUATION OF ANTIBACTERIAL ACTIVITY
ABSTRACT
Background: African leaves (Vernonia amygdalina Delile.) contain saponins,

flavonoids, tannins, and steroids/triterpenoids that use as antibacterial. Extract of
African leaves has antibacterial effect that can kill Gram-positive and Gram-
negative bacteria. Extract of African leaves can inhibit the Staphylococcus aureus
and Streptococcus mutans bacteria.
Purpose: To formulate mouthwash preparation containing ethanol extract of
African leaves, to evaluate the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) values
of extract and mouthwash preparation of ethanol extract of Africa leaves against
Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans.
Methods: The study was carried out againts characterization simplicia of African
leaves, preparation extract of African leaves was macerated by using ethanol 80%,
antibacterial activities test of extract, formulation of mouthwash, and evaluation
of mouthwash includes examining stability, pH, and antibacterial activity test of
mouthwash by using diffusion agar method. The bacteria used were
Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans. The formula of mouthwash
contains extract ethanol of African leaves, saccharin, Tween 80, peppermint oil,
and aquadest. The mouthwash was made with concentration ethanol extract of
African leaves 1, 2, 3, 4, 5, 7, and 9%.
Results: The characteristicsof ethanol extract of African leaves had 7.87% water
content, 24.99% levels of soluble extract in water, 16.22% levels of soluble
extract in ethanol, 9.79% of total ash content and 0.64% acid insoluble ash
content. The evaluation of mouthwash results at concentrations of 1, 2, 3, 4, 5, 7,
and 9% were physically stable during storage for 12 weeks at room temperature.
Based on the result of antibacterial activity of Staphylococcus aureus and
Streptococcus mutans at week 12 after storage with MIC values are respectively
6.23 and 6.20 mm.
Conclusion:Based on the results of this study, ethanol extract of African leaves
can be formulated into mouthwash, the result of antibacterial activity of
Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans with MIC values from extract
and mouthwash preparation of ethanol extract of Africa leaves are the same.
Keywords: Mouthwash, ethanol extract of African leaves, evaluation of

antibacterial activity, Minimum Inhibitory Concentration (MIC)
viii
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ................................................................................................... i
HALAMAN JUDUL .............................................................................. ii
LEMBAR PENGESAHAN ................................................................... iii
KATA PENGANTAR ........................................................................... iv
SURAT PERNYATAAN........................................................................ vi
ABSTRAK ............................................................................................. vii
ABSTRACT ........................................................................................... viii
DAFTAR ISI .......................................................................................... ix
DAFTAR TABEL .................................................................................. xiv
DAFTAR GAMBAR ............................................................................. xv
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................... xvi
BAB I PENDAHULUAN ................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ................................................................ 1
1.2 Perumusan Masalah ........................................................ 4
1.3 Hipotesis Penelitian ........................................................ 4
1.4 Tujuan Penelitian ............................................................ 5
1.5 Manfaat Penelitian .......................................................... 5
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ............................................... 6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................... 7
2.1 Tumbuhan Daun Afrika .................................................. 7
2.1.1 Morfologi Tumbuhan .......................................... 7
2.1.2 Nama Daerah ...................................................... 7
2.1.3 Sistematika Tumbuhan ....................................... 8
ix
2.1.4 Kandungan Tumbuhan ........................................ 8
2.1.5 Khasiat Tumbuhan .............................................. 8
2.2 Ekstraksi ......................................................................... 9
2.3 Karies Gigi ...................................................................... 11
2.4 Obat Kumur .................................................................... 11
2.5 Uraian Bahan .................................................................. 13
2.5.1 Tween 80 ............................................................ 13
2.5.2 Sakarin ................................................................ 14
2.5.3 Peppermint oil ..................................................... 14
2.5.4 Akuades .............................................................. 14
2.6 Uraian Bakteri ................................................................ 15
2.6.1 Staphylococcus aureus ........................................ 15
2.6.2 Streptococcus mutans ......................................... 15
2.7 Penentuan Aktivitas Antibakteri ..................................... 16
2.8 Metode Isolasi Biakan Bakteri ....................................... 18
2.9 Fase Pertumbuhan Bakteri .............................................. 18
BAB III METODE PENELITIAN ......................................................... 20
3.1 Alat ................................................................................. 20
3.2 Bahan .............................................................................. 21
3.3 Penyiapan Sampel .......................................................... 21
3.3.1 Pengambilan bahan ............................................ 21
3.3.2 Identifikasi tumbuhan ......................................... 21
3.3.3 Pembuatan simplisia ........................................... 22
3.4 Pembuatan Pereaksi ........................................................ 22
3.4.1 Pereaksi asam klorida 2 N .................................. 22
x
3.4.2 Pereaksi asam sulfat 2 N ..................................... 22
3.4.3 Pereaksi besi (III) klorida 1% ............................. 22
3.4.4 Pereaksi Bouchardat ........................................... 22
3.4.5 Pereaksi Dragendorff .......................................... 22
3.4.6 Pereaksi Liebermann-Burchard .......................... 23
3.4.7 Pereaksi Mayer ................................................... 23
3.4.8 Pereaksi Molish .................................................. 23
3.4.9 Pereaksi natrium hidroksida 2 N ......................... 23
3.4.10 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M ......................... 23
3.5 Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia ............................. 23
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik .................................. 23
3.5.2 Penetapan kadar air ............................................. 24
3.5.3 Penetapan kadar sari larut dalam air ................... 24
3.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam etanol ............. 25
3.5.5 Penetapan kadar abu total ................................... 25
3.5.6 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam 25
3.6 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Afrika ......................... 26
3.7 Skrining Fitokimia Ekstrak ............................................. 26
3.7.1 Pemeriksaan alkaloid .......................................... 26
3.7.2 Pemeriksaan glikosida ........................................ 27
3.7.3 Pemeriksaan saponin .......................................... 27
3.7.4 Pemeriksaan flavonoid ........................................ 27
3.7.5 Pemeriksaan tanin ............................................... 28
3.7.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid ........................ 28
3.8 Sterilisasi Alat dan Bahan .............................................. 28
xi
3.9 Pembuatan Media Untuk Bakteri Uji ............................. 28
3.9.1 Pembuatan media nutrient agar .......................... 28
3.9.2 Pembuatan media nutrient broth ......................... 29
3.9.3 Pembuatan agar miring ...................................... 29
3.10 Penyiapan Inokulum ....................................................... 29
3.10.1 Identifikasi bakteri dengan pengecatan gram ..... 29
3.10.2 Pembuatan stok kultur bakteri uji ....................... 30
3.10.3 Pembuatan suspensi standar Mc. Farland ........... 30
3.10.4 Pembuatan inokulum bakteri uji ......................... 30
3.11 Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol Daun Afrika ..... 31
3.12 Pengujian Aktivitas Antibakteri ..................................... 31
3.12.1 Bakteri Staphylococcus aureus ........................... 31
3.12.2 Bakteri Streptococcus mutans ............................ 32
3.13 Pembuatan Formula Sediaan .......................................... 32
3.14 Cara Pembuatan Sediaan ................................................ 33
3.15 Evaluasi Sediaan ............................................................. 33
3.15.1 Pemeriksaan stabilitas sediaan ............................ 33
3.15.2 Pemeriksaan pH sediaan ..................................... 33
3.15.3 Uji mikrobiologi sediaan .................................... 34
3.15.3.1 Bakteri Staphylococcus aureus ............. 34
3.15.3.2 Bakteri Streptococcus mutans ............... 34
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................ 36
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan .......................................... 36
4.2 Hasil Karakterisasi Daun Afrika .................................... 36
4.2.1 Hasil pemeriksaan makroskopik ......................... 36
xii
4.2.2 Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia .......... 36
4.3 Hasil Ekstraksi Serbuk Simplisia Daun Afrika .............. 38
4.4 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Afrika ... 38
4.5. Hasil Identifikasi Bakteri Dengan Menggunakan

Pengecatan Gram ............................................................ 40
4.6. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun

Afrika ............................................................................. 41
4.7 Hasil Pembuatan Formula Sediaan ................................. 43

4.8 Hasil Evaluasi Sediaan ................................................... 43
4.8.1 Hasil pemeriksaan stabilitas sediaan .................. 43
4.8.2 Hasil pemeriksaan pH sediaan ............................ 45
4.8.3 Hasil uji mikrobiologi sediaan ............................ 46
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ................................................ 49
5.1 Kesimpulan ..................................................................... 49
5.2 Saran ............................................................................. 49
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................ 50
LAMPIRAN ........................................................................................... 54
xiii
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
2.1 Jenis-jenis obat kumur ............................................................. 13
3.1 Komposisi formula sediaan obat kumur .................................. 32
4.1 Data karakterisasi simplisia daun Afrika ................................. 37
4.2 Data hasil skrining fitokimia ekstrak etanol daun Afrika ........ 39
4.3 Data hasil pengukuran diameter daerah hambatan

pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan
Streptococcus mutans oleh ekstrak etanol daun Afrika ............ 41
4.4 Data hasil pemeriksaan stabilitas sediaan ................................ 44
4.5 Data hasil pemeriksaan pH sediaan ......................................... 45
4.6 Data hasil uji aktivitas antibakteri obat kumur ekstrak etanol
daun Afrika terhadap bakteri Staphylococcus aureus
dan Streptococcus mutans ......................................................... 47
xiv
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Kerangka pikir penelitian ......................................................... 6
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Hasil identifikasi tumbuhan ................................................... 54
2 Bagan kerja penelitian ........................................................... 55
3 Gambar tumbuhan dan bagian makroskopik tumbuhan dari

daun Afrika (Vernonia amygdalina Delile.) .......................... 58
4 Gambarsimplisia dan serbuk simplisia daun Afrika ............... 59
5 Perhitungan penetapan kadar air serbuk simplisia daun

Afrika .................................................................................... 60
6 Perhitungan penetapan kadar sari larut air serbuk simplisia

daun Afrika ........................................................................... 61
7 Perhitungan penetapan kadar sari larut etanol serbuk

simplisia daun Afrika ............................................................ 62
8 Perhitungan penetapan kadar abu total serbuk simplisia

daun Afrika ............................................................................ 63
9 Perhitungan penetapan kadar abu total tidak larut asam

serbuk simplisia daun Afrika ................................................. 64
10 Hasil identifikasi bakteri Staphylococcus aureus dengan

pengecatan Gram .................................................................. 65
11 Hasil identifikasi bakteri Streptococcus mutans dengan

pengecatan Gram .................................................................. 65
12 Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak terhadap

bakteri Staphylococcus aureus .............................................. 66
13 Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak terhadap

bakteri Streptococcus mutans ................................................ 67
14 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan oleh ekstrak

etanol daun Afrika ................................................................. 68
15 Gambar sediaan obat kumur ekstrak etanol daun Afrika ...... 69
16 Gambar hasil uji aktivitas antibakteri obat kumur terhadap

bakteri Staphylococcus aureus minggu ke-0 ......................... 70
xvi
bakteri Streptococcus mutans minggu ke-0 ........................... 71

bakteri Staphylococcus aureus minggu ke-12 ....................... 72

bakteri Streptococcus mutans minggu ke-12 ......................... 73
20 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan oleh obat

kumur ekstrak etanol daun Afrika minggu ke-0 .................... 74
21 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan oleh obat

kumur ekstrak etanol daun Afrika minggu ke-12 .................. 75
22 Perbandingan hasil pengukuran diameter daerah hambatan

ekstrak etanol daun Afrika dengan sediaan obat kumur
ekstrak etanol daun Afrika .................................................... 76
xvii

123dok Formulasi+dan+Evaluasi+Sediaan+Obat+Kumur+Ekstrak+Etanol+Daun+Afrika+ (Vernonia+amygdalina+Delile) +s PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

123dok Formulasi+dan+Evaluasi+Sediaan+Obat+Kumur+Ekstrak+Etanol+Daun+Afrika+ (Vernonia+amygdalina+Delile) +s PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Lampiran 1.

Hasil identifikasi tumbuhan

1. Pembuatan serbuk simplisia dan karakterisasi simplisia

- Penetapan kadar air

2. Pembuatan ekstrak etanol daun Afrika

500 g serbuk simplisia daun Afrika

Dimasukkan ke dalam sebuah wadah

Ditambahkan maserat I dan

Ekstrak kental (57,3 g)

3. Bagan uji aktivitas antibakteri

Dipipet 0,1 ml biakan bakteri dan dimasukkan

Diletakkan pencadang kertas yang telah ditetesi

Tumbuhan daun Afrika

Daun Afrika (Vernonia amygdalina Delile.)

Simplisia daun Afrika

Serbuk simplisia daun Afrika

No Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml)

b. Berat simplisia = 5,0780 g

c. Berat simplisia = 5,0821 g

7,85 % + 7,88 % + 7,87%

Berat cawansari −beratcawankosong 100

a. Berat simplisia = 5,0094 g

b. Berat simplisia = 5,0504 g

c. Berat simplisia = 5,0108 g

24,89% + 25,10% + 24,97%

Beratcawansari −beratcawankosong 100

a. Berat simplisia = 5,0120 g

b. Berat simplisia = 5,0446 g

c. Berat simplisia = 5,0080 g

16,56 % + 15,87 % + 16,22%

No Berat sampel (g) Berat abu (g)

a. Berat simplisia = 2,0060 g

b. Berat simplisia = 2,0677 g

c. Berat simplisia = 2,0396 g

9,45 % + 10,08 % + 9,83%

No Berat sampel (g) Berat abu (g)

a. Berat simplisia = 2,0060 g

b. Berat simplisia = 2,0677 g

c. Berat simplisia = 2,0396 g

0,56 % + 0,76 % + 0,61 %

Bakteri Staphylococcus aureus

Lampiran 11. Hasil identifikasi bakteri Streptococcus mutans dengan

Bakteri Streptococcus mutans

Diameter daerah hambatan (mm)

Sediaan obat kumur untuk pemeriksaan stabilitas sediaan

Sediaan obat kumur untuk pemeriksaan pH sediaan

Konsentrasi Diameter daerah hambatan (mm)

Diameter daerah hambatan (mm)

Lampiran 22. Perbandingan hasil pengukuran diameter daerah hambatan

Diameter daerah hambatan (mm)*

Keterangan: * = Hasil rata-rata tiga kali pengukuran

Anonim. (2010). The Alternative Cancer Treatment. Diakses Tanggal: 10 Mei

Metode penelitian ini dilakukan secara eksperimental. Penelitian ini

sediaan obat kumur terhadap aktivitas antibakteri dari bakteri Staphylococcus

konsentrasi ditentukan nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM), kemudian

setelah didapat KHM dari ekstrak tersebut diformulasikan ke dalam bentuk

sediaan obat kumur dengan konsentrasi sebesar 0, 1, 2, 3, 4, 5, 7, dan 9%, dan

dilakukan pemeriksaan terhadapsediaan meliputi uji stabilitas sediaan,uji pH

dari sediaan obat kumur tersebut. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium

Farmakognosi, Laboratorium Mikrobiologi, dan Laboratorium Kosmetologi

Universitas Sumatera Utara.

(Eppendorf), neraca kasar (Ohanus), neraca analitik (Mettler AE 200), oven

(Gallenkamp), penangas air, pencadang kertas, pH meter (Eco Testr), pinset,